Summary
Ce protocole décrit entretien régulier et des soins afin de maintenir des conditions optimales pour le poisson-zèbre élevage. La vidéo illustre le protocole pour la maintenance du système, le logement, l'alimentation, la reproduction, et l'élevage de larves de poisson zèbre.
Abstract
Ce protocole décrit les soins et l'entretien régulier d'un laboratoire de poisson zèbre. Le poisson zèbre sont en train de gagner en popularité dans la génétique, la recherche pharmacologique et comportementale. Comme un vertébré, la part de poisson zèbre grande similarité de séquences génétiques avec les humains et sont utilisés comme modèle animal pour diverses pathologies humaines. Les avantages de poisson zèbre par rapport à d'autres modèles vertébrés communs incluent une fécondité élevée, faible coût d'entretien, les embryons transparents, et le développement rapide. En raison de l'éperon d'intérêt dans la recherche du poisson zèbre, la nécessité d'établir et de maintenir une installation de production du poisson zèbre logement est également en augmentation. Bien que la littérature est disponible pour l'entretien d'un laboratoire de poisson zèbre, un protocole vidéo concise fait défaut. Cette vidéo illustre le protocole pour le logement, l'alimentation, la reproduction et l'élevage des larves de poisson zèbre. Ce processus aidera les chercheurs à comprendre les comportements naturels et des conditions optimales de zebrafish élevage et donc de résoudre les problèmes expérimentaux qui proviennent des conditions d'élevage de poissons. Ce protocole sera d'un grand secours pour les chercheurs envisagent de créer un laboratoire de poisson-zèbre, et aussi à des étudiants diplômés qui ont l'intention d'utiliser le poisson zèbre comme modèle animal.
Protocol
1. Maintenance du système
- Le poisson zèbre sont conservés dans un système de circulation que les filtres en continu et aère l'eau du système pour maintenir la qualité de l'eau requise pour un environnement aquatique sain. Le système de circulation permet également de filtrer l'excès de nourriture et les excréments des poissons. Différentes entreprises de fournir des systèmes de poisson zèbre, mais nous utilisons des systèmes d'habitats aquatiques, USA, notre laboratoire. La température ambiante ou la température du réservoir est généralement maintenue entre 26 à 28,5 ° C et les conditions d'éclairage sont 14:10 h (lumière: obscurité). Un système de poisson-zèbre habitats aquatiques (par exemple, le système de table) Frais de ~ 9.000 USD. Ce système de table avec deux étagères peut contenir six 10 litres, douze de 3 litres, soit vingt de 1,5 litres réservoirs sur chaque étagère. Plusieurs lignes de poissons (par exemple, transgénique, mutant, type sauvage) peuvent également être hébergés sur le même système.
- Un ensemble de différents types de filtres sont utilisés dans le système. Dans notre système, l'eau de tous les réservoirs passes par un 120-microns tampon filtrant, 50-micron Cartouche de filtre, filtre biologique, l'absorption du carbone actif désinfection UV et filtre filtre avant d'être remis en circulation dans le réservoir. De-chlorinated/aged eau est utilisée dans le système de poisson-zèbre. L'eau peut être dé-chlorée par le vieillissement pendant au moins 48 heures. Dans des conditions idéales, l'eau doit être conservée dans un réservoir avec une pompe de circulation de l'eau pour le garder chaud, et d'accélérer le dé-chloration.
- Le pH de l'eau du système doivent être contrôlés quotidiennement et maintenu entre 6,8 et 7,5. Le cas échéant, de bicarbonate de sodium doit être utilisé pour augmenter le pH.
- Réservoirs de poissons doivent être nettoyés régulièrement. Pour nettoyer un réservoir de poissons, fermer le débit d'eau dans ce réservoir, vider l'excès d'eau en inclinant le réservoir vers l'arrière et retirez soigneusement le réservoir du système. La croissance des algues et la saleté sera apparent sur le fond et les côtés de la cuve.
- Placez le déflecteur dans un réservoir propre, et remplir avec de l'eau chlorée de (aka Système water). Transférer délicatement le poisson dans ce réservoir avec un filet de pêche. Fermer le couvercle et transférer le nom de tag dans le réservoir. Placez soigneusement le réservoir propre dans le système et de l'alimentation en eau.
- Pour décontaminer le filet de pêche, spray avec de l'éthanol à 70%, rincer à l'eau et laisser sécher avant de la réutiliser. Retirez le déflecteur du réservoir sale et pulvériser les deux parties avec de l'éthanol à 70%. Rincer abondamment avec de l'eau du robinet et laisser le réservoir et le déflecteur sécher complètement avant de la réutiliser.
- Les filtres du système de circulation doivent être vérifiés et changés régulièrement pour s'assurer de leur bon fonctionnement. Ces filtres doivent être changés régulièrement pour assurer un approvisionnement adéquat de l'eau propre et à tous les aquariums.
- Le pavé de 120 microns est généralement déplacés ou remplacés tous les jours; repositionner vers l'écoulement de l'eau pour l'utiliser complètement avant de le remplacer par un nouveau.
- Le filtre Canister doit être changé chaque semaine. Pour changer le filtre à cartouche, retirez le filtre en le tournant fourmiiclockwise avec une clé ou les mains. Placez une feuille de plastique ou une serviette en dessous pour éviter ou absorber les déversements d'eau. Remplacez le filtre à cartouche par une neuve puis remonter le filtre à l'unité dans le système, serrez soigneusement les mains et une clé si nécessaire.
- Le filtre à charbon doit être remplacé tous les quinze jours (toutes les deux semaines). Pour changer le filtre à charbon, retirez l'unité de filtre à charbon soigneusement avec une clé. Jeter le carbone actif utilisé et le remplacer par du charbon actif neuf. Remonter le porte-balai et le placer dans l'unité de filtration. Remettre le filtre à l'unité dans le système. Allumez le système et vérifiez que l'eau coule dans le filtre. Si nécessaire, rincer un peu d'eau dans les tuyaux pour nettoyer la saleté dans les tuyaux avant de reposer le filtre dans le système.
- Le filtre biologique doit être nettoyé tous les six mois. Un filtre biologique est généralement située entre le réservoir et le filtre de carbone dans le système de circulation. Pour changer le filtre biologique, remove l'unité de filtration à partir du système. Relâchez la pression du filtre en appuyant sur le bouton de dégagement de pression. Dévisser le filtre avec une clé. En général, deux personnes sont nécessaires pour cette étape. Retirez le couvercle de l'unité filtre. Vider le contenu du filtre dans un récipient tamisée pour séparer la siporax de l'eau. Remarque: siporax est une amende pores bio-filtre des médias qui a la capacité de réaliser la nitrification et la dénitrification.
- Si le siporax est très sale, le remplacer par une nouvelle. Remplir le filtre avec de l'eau du système (de l'eau chlorée), fermer le couvercle, retourner l'appareil au système de filtre et mettez l'approvisionnement en eau. Remarque: Dans un aquarium acclimaté, le siporax sera le foyer de plusieurs bactéries nitrifiantes. Ces micro-organismes sont essentiels pour le maintien du cycle de l'azote dans l'aquarium, et retirer le boîtier principal pour le filtre biologique (le siporax sale) pourrait entraîner un pic d'ammoniaque grave, suivie d'un pic de nitrite alors que le new filtre biologique (avec siporax nouveau) est le rétablissement. Ces deux états intermédiaires du cycle de l'azote peut être toxique pour les organismes aquatiques, et peut tuer les poissons zèbres s'il n'est pas répondu de façon appropriée. Par conséquent, il est important d'avoir un filtre biologique secondaire ailleurs dans le système de logement poisson zèbre (par exemple, dans le réservoir de collecte dans le système habitats aquatiques) afin de permettre le repeuplement rapide de ces micro-organismes importants sur le siporax nouvelle.
- Les filtres UV sont utilisés pour contrôler les contaminants biologiques système (comme les bactéries) et doit être remplacé tous les mois neuf à dix. Il convient de noter que le taux filtre UV dose de désinfection est ~ 110 mJ / cm 2 au début de la vie de la lampe et le débit de dose diminue au cours du temps, il est donc nécessaire de remplacer le monde même quand il semble être encore en fonctionnelle.
2. Alimentation
- Le poisson zèbre peut être alimenté avec des aliments secs (taille de 100 microns alimentaire pour les larves to 300/400 microns pour les poissons adultes) ou des aliments vivants (crevettes de saumure). Saumure de crevettes (Artemia sp.) Œufs sont disponibles dans les animaleries locales et peuvent éclore dans le laboratoire en suivant les étapes simples décrites ci-dessous.
- Dissoudre le sel dans l'eau de mer rouge vieilli en plaçant le becher avec du sel sur un agitateur magnétique pour une meilleure solubilité. En variante, le sel peut être dissous dans l'eau en l'aérant avec le tube d'aération. Sel marin instantanée peut également être utilisé comme une solution d'incubation si le rouge sel de mer n'est pas disponible. Crevettes de saumure peut tolérer une large gamme de salinité, mais nous éclosent notre crevette de saumure (10-15 g) dans 30-35 g / L d'eau rouge sel marin. Remarque: En cas oeufs d'artémias sont pas facilement disponibles dans les magasins d'animaux locaux, puis les crevettes de saumure encapsulées peuvent également être utilisés après "décapsuler" les en lots avant de les ajouter à l'écloserie de crevettes. Cela pourrait aussi éviter de fréquents voyages à l'animalerie.
- Remplissez le éclosoir crevette de saumure avec salt d'eau et ajouter les oeufs de crevettes à une concentration de 1,2 cuillères à soupe / litre. Aérer l'éclosoir vigoureusement avec une pompe à air et laisser les oeufs d'artémias à éclore pour ~ 48 h.
Remarque: Il convient de noter que non enrichi la crevette de saumure perdre de la valeur nutritive toutes les heures après l'éclosion. Par conséquent, il peut être approprié de trappe, soit plus de 24 heures ou d'enrichir pendant 48 h afin d'obtenir la valeur maximale nutritionnel de la crevette de saumure. - Les eaux usées provenant du système d'incubation est ajouté à la quarantaine des déchets à désinfecter l'eau de Javel et éliminés par la suite.
- Pour collecter les crevettes de saumure, retirez le tuyau d'air et permettre à la culture de se contenter de 4-5 min, mais pas plus de 10 min. Les crevettes de saumure éclos arriver au bas de l'Hatcher.
- Recueillir les crevettes de saumure à l'aide du robinet au bas de l'éclosoir. Jeter l'effluent initial qui consiste non éclos des oeufs d'artémias.
- Séparez les crevettes de saumure de l'eau salée, avec un filet collection artémia (~ 350 mesh nylon micron). Rincez les crevettes de saumure sur le net dans un récipient avec de l'eau du système.
- Les crevettes de saumure recueillies sont généralement présents en concentration élevée dans le bas du récipient en lui donnant une couleur plutôt orange.
- Nourrissez les crevettes de saumure de poisson zèbre à l'aide d'une pipette ou d'un flacon compte-gouttes / squeezy. La quantité de nourriture distribuée dépend de la taille de la population de réservoirs individuels. Le ratio communément admis pour le poisson zèbre est de recevoir 4% du poids corporel en nourriture par jour. Le poisson zèbre ne doit jamais être suralimenté car cela peut augmenter le niveau de nitrates dans l'eau, qui pourrait affecter leur reproduction, ou la viabilité, comme certains poissons peuvent mourir en raison de la suralimentation.
- Lors de l'injection de la nourriture dans lel'eau, les poissons affamés nager pour attraper les crevettes de saumure.
- Alimentation sèche peut être réalisée en utilisant un Aquatic Eco-System / habitats aquatiques simples à base de ressort distributeur de nourriture pour poissons. Alternativement, l'alimentation sèche peut également être effectuée à l'aide d'une cuillère simple ou en coupant un compte-gouttes en plastique en diagonale avec des ciseaux pour lui donner l'apparence d'une petite cuillère.
3. Élevage
- Poisson-zèbre lancer la reproduction à l'apparition de la lumière. Les œufs fécondés peut être obtenue soit par en-bac d'élevage ou de reproduction par paires. Alors que dans le réservoir d'élevage est plus de travail efficace et est mis en œuvre pour la collecte des embryons régulière dans notre laboratoire, la sélection par paires est préférable lorsque les gènes ou mutations seront projetés sur chaque poisson.
- Pour en bac d'élevage, l'éleveur monter dans le réservoir et descendre lentement dans le réservoir de poissons après l'apparition de la lumière. Alternativement, dans le réservoir d'élevage set-up peut être laissé toute la nuit dans l'aquarium.
- Lavant-toit de l'éleveur dans le réservoir pendant environ 15 minutes pour permettre aux poissons de s'accoupler avant de retirer le sélectionneur de la cuve et la collecte des œufs.
- Élevage paire est généralement mis en place à la fin de l'après-midi après le repas.
- Assemblez le réservoir d'élevage et de le remplir avec de l'eau du système vieilli.
- Transfert d'une femelle et un mâle sur les côtés opposés de l'aquarium de reproduction. Les femelles se distinguent des mâles en raison de leur plus grand ventre. Les mâles peuvent aussi être distingués des femelles parce qu'ils sont plus minces et de couleur plus foncée que les femelles. En outre, les mâles ont une coloration plus jaune dans la nageoire anale chez les femmes (voir figure 1). En cas de doute regard de l'ovipositeur femelle chez le poisson zèbre (voir Figure 4).
- Enlevez le séparateur, le lendemain matin, peu après l'apparition de la lumière. Permettre l'accouplement de se produire au repos pendant 20 minutes, ou jusqu'à un nombre suffisant d'embryons sont fixées au fond de la cuve.
- Après l'accouplement,retourner le poisson à leurs chars. Ramassez les oeufs à l'aide d'une passoire.
- Laver les embryons abondamment à l'eau du système.
- Transférer les embryons dans une boîte de Pétri par rinçage du filtre avec un milieu embryon; autre titre EM3 (NaCl, 13,7 mM; KCl, 0,54 mM; MgSO 4, 1,0 mM; CaCl 2, 1,3 mM, Na 2 HPO 4, 0,025 mM; KH 2 PO 4, 0,044 mM; NaHCO 3, 4,2 mM).
- Les embryons peuvent être observées sous un microscope. Les œufs fécondés sont ensuite séparés des œufs non fécondés à l'aide d'une aiguille et d'une pipette (voir figure 3).
4. Élevage de larves
- Les œufs fécondés sont maintenus dans un incubateur (~ 28,5 ° C) pendant 72 heures jusqu'à ce que les larves éclosent.
- Maintenant, les larves sont hors du chorion et la natation librement, ils sont prêts à transférer à un aquarium principal. Les larves ont besoin d'être nourris de 5 jours post-fécondation (dpf) et sont conservés dans le milieu de l'embryon (composition décrite dansLa pièce 3, 10) ou de l'eau du système. Les larves peuvent être conservés dans des boîtes rondes avec environ 50% d'eau ou plus y changer sur une base quotidienne. Le changement d'eau devraient inclure la suppression des larves mortes ou malades et tout autre débris.
- Transférer les larves doucement dans une cuve contenant un déflecteur de petite taille (de l'ordre de 300-400 microns). Larves mortes ou malades doivent être enlevés et quelques millilitres d'eau doit être ajoutée lentement sur une base quotidienne.
- Après 14 jours, les réservoirs de larves peuvent être rangés dans le système, et fourni avec un petit jet d'eau à vélo (1-2 gouttes par seconde). Que les larves grandissent, le débit d'eau peut être augmentée. Différentes tailles de chicanes peuvent être utilisés en fonction de la taille des larves (taille chicane par exemple, 300-400, 500, 700-750, et 1000 microns) et un déflecteur en plastique normale doit être utilisée pour les poissons adultes.
- Il faut généralement 3 mois pour les embryons de se développer en adulte sexuellement mature.
Representative Results
Logements poisson zèbre et l'entretien est plus facile et moins cher que les modèles de rongeurs traditionnels. Plusieurs milliers poisson zèbre peut être logé dans un petit laboratoire. À la suite de ce protocole, les chercheurs seront en mesure de gérer une installation poisson zèbre qui offrira des conditions saines pour le poisson-zèbre. En outre, les illustrations suivantes vous aideront à identifier les œufs fécondés, poisson zèbre adulte, et leur nourriture. Une illustration d'un poisson zèbre mâle (figure 1A) et le poisson-zèbre femelle (figure 1B et 1C) est indiqué pour aider les chercheurs distinction entre un mâle et une femelle pour la reproduction du poisson zèbre objectif figure 2 représente une vue microscopique de;. Crevettes de saumure à 12X (figure 2A), une crevette de saumure unique à 90X (figure 2B), et d'un ovule non fécondé la saumure de crevettes à 90X (figure 2C). Cela vous aidera à comprendre la différence entre les crevettes de saumure non fertilisés et fertilisés pour propfins d'alimentation er. Les œufs fécondés et non fécondés sont présentés dans la figure 3. Figure 3A illustre une vue microscopique des embryons fécondés et non fécondés. Embryons non fécondés sont généralement opaques et / ou avec la cellule de rupture (s) à l'intérieur du chorion (flèche noire), tandis que les embryons fécondés semble intact et de plus en plus à l'état de division cellulaire suivant (pour la lecture détaillée des différentes étapes du embryons de poisson zèbre voir 1). Vue d'un plus fort grossissement Figure fécondé et un ovule non fécondé est montré sur la figure 3B et 3C, respectivement. 4 illustre un poisson zèbre ovipositeur femelle pour aider les chercheurs à établir une distinction entre un mâle et une femelle zèbre.
Plusieurs problèmes critiques qui pourraient se produire dans un laboratoire de poisson zèbre comprennent le blocage de l'approvisionnement en eau à l'individu / tous les réservoirs du système de logement, la qualité médiocre de l'eau, et les fuites dans les tuyaux ou réservoirs du système de circulation. En outre,difficultés à obtenir des embryons de l'élevage pourrait être une autre préoccupation. Dépannage de ces questions est traitée ci-dessous.
Figure 1. Une illustration d'un poisson zèbre mâle (A) et femelle poisson zèbre (B, C).
Figure 2. Vue microscopique de crevettes de saumure à 12X (A), une crevette de saumure unique à 90X (B), et d'un ovule non fécondé la saumure de crevettes à 90X (C).
Figure 3. Vue microscopique (16X) d'œufs fécondés et non fécondés, où seuls deux œufs non fécondés sont, les œufs non fécondés sont indiqués par des flèches noires (A). Plus fort grossissementVue (90X) d'un. fécondé (B) et un oeuf non fécondé (C)
Figure 4. Un poisson zèbre femelle ovipositeur (indiqué par la flèche noire) illustration.
| Paramètre | Plage optimale |
| Alcalinité | 50-150 mg / L CaCO 3 |
| pH | 06.08 à 07.05 (6.0 à 8.5 toléré) |
| Température | 26 à 28,5 ° C |
| Dureté | 50-100 mg / L CaCO 3 |
| Ammoniac non ionisé | <0,02 mg / L |
| Nitrate (NO 3 -) | <50 mg / L |
| Nitrite (NO 2 -) | <0,1 mg / L |
| L'oxygène dissous | > 6,0 mg / L |
| Salinité | 0,5-1 g / L |
| Conductivité | 300 -1 500 uS |
Tableau 2. Paramètres de qualité de l'eau. Paramètres de qualité de l'eau. Domaine d'utilisation optimal des paramètres environnementaux dans l'aquarium poisson zèbre 11.
Discussion
Poisson-zèbre proviennent du Gange dans le nord de l'Inde et gagnent en popularité dans la recherche, tant dans leur stades adultes et larvaires 2, examiné par Spence et al. 3. Le poisson zèbre possède plusieurs avantages par rapport aux modèles d'autres animaux tels que les taux de fécondité élevé, facilité d'entretien, la clairance optique d'embryons, rapide développement de l'embryon, et faible coût d'entretien. Ils se prêtent à la manipulation génétique 6 et approprié pour le dépistage des drogues à haut débit 4,5. Leur fécondation est externe qui est avantageux pour leur utilisation par les biologistes du développement. En raison de ces caractéristiques favorables, le poisson zèbre gagnent en popularité en génétique 7, pharmacologique 8, et la recherche comportementale 9,10. Il ya un certain nombre de défis au maintien d'un centre d'élevage de poisson zèbre et le poisson-zèbre d'obtenir des embryons. Ici, nous décrivons nos expériences et recommandations pour relever ces défis et oPERÇU un protocole pour la maintenance du système, l'alimentation, reproduction et l'élevage des larves.
La maintenance du système
Pour maintenir le poisson-zèbre en bonne santé, il est important de leur fournir un environnement propre aquarium dans un système qui fonctionne correctement. Une partie importante de ce système est de changer les filtres régulièrement afin que tous les réservoirs reçoivent écoulement de l'eau et de l'eau propre. Il est essentiel d'éviter l'échec du cycle d'approvisionnement en eau dans chaque réservoir en raison de conduites du système bloqués. Les tuyaux peuvent être nettoyées avec un débit supérieur à la pression d'eau normale et si le blocage se produit. Idéalement, environ 10% de l'eau du système doivent être remplacés tous les jours pour maintenir la qualité de l'eau. Sinon, l'eau peut être remplacée lors du changement de la cuve du filtre ou de carbone. Cela garantit que la saleté déposée dans les tuyaux de raccordement de ces filtres est retiré. La qualité de l'eau doivent être vérifiés sur une base régulière. Des paramètres tels que l'alcalinité, le pH, tempéraure, de la dureté, de l'ammoniac, l'oxygène dissous, la salinité et la conductivité doit être considéré comme des facteurs importants dans la représentation de la qualité de l'eau du système (voir le tableau 2 pour plus de détails). Au moins, nitrate, pH et la température doit être surveillée sur une base régulière afin d'assurer une bonne qualité de l'eau pour le poisson zèbre logement. Nitrate idéal (NO 3 -) sont les niveaux de <50 mg / l 11, et si ces niveaux élevé peut être réduit en remplaçant l'eau circulant dans le système avec de l'eau fraîche système. De temps en temps, les filtres ne cadrent pas bien et fuir il est donc recommandé de vérifier la présence de fuites après un changement de filtre. Si le débit d'eau à partir du réservoir principal est bloquée après avoir changé supporte la pompe à eau ou un changement de filtre, le débit d'eau peut être rétablie en supporte le desserrage ou le retrait du filtre pendant quelques secondes afin de supprimer toute vide est généré dans les tuyaux. Le temps nécessaire pour changer les filtres peut varier en fonction de divers facteurs tels que la charge totale biologiques on le système, la propreté des filtres autres, et la saleté déposée dans les tuyaux. Par conséquent, les filtres doivent être changés immédiatement si elles sont sales ou si tous les réservoirs ne reçoivent pas l'alimentation en eau correcte. Il est également recommandé que le filet de poisson être nettoyé avec 70% d'éthanol, et on le rince à l'eau pour le décontaminer, et les laisser sécher avant d'être réutilisés. Le séchage permet l'évaporation de l'éthanol qui est par ailleurs toxique pour les poissons.
La plupart des systèmes de poisson zèbre utiliser de l'eau chlorée du robinet, mais certains systèmes utilisent de l'eau déminéralisée. Il est important de garder la conductivité de l'eau du système entre 300 et 1.500 ~ uS car cela réduit l'énergie le poisson a besoin pour maintenir sels de corps. Par conséquent, le poisson zèbre peut pas être conservés dans de l'eau déminéralisée à moins que les sels sont ajoutées pour maintenir les niveaux de conductivité optimale. Il ya un risque de possibles concentrations élevées de cuivre dans l'eau du système si l'eau du robinet est utilisée parce que le filtre à charbon ne pas retirer le cuivre. Par conséquent, ul faut vérifier les concentrations de cuivre et d'éviter la tuyauterie en cuivre si possible.
Alimentation
Le poisson zèbre ne doit jamais être suralimenté car cela peut augmenter le niveau de nitrates dans l'eau, qui pourrait affecter leur reproduction 11, ou de la viabilité, comme certains poissons peuvent mourir en raison de la suralimentation. Nous recommandons de fournir plus de nourriture durant toute une que l'alimentation d'un réservoir de poissons peut finir dans les 10 min. Il est très important d'enlever le sel des crevettes de saumure avant de les introduire dans le poisson zèbre comme la concentration de sel en excès provoque la mort. Si œufs de poisson zèbre de plus sont nécessaires, les poissons peuvent être nourris trois fois par jour. Nettoyage des réservoirs de poissons reproducteurs jour améliore également les niveaux de la production d'œufs.
Lors de l'alimentation sur les systèmes d'habitats aquatiques nous avons l'habitude éteindre la pompe à eau et la pompe à air pour permettre aux poissons de manger la nourriture pendant 10 min. Cela diminue la quantité de nourriture qui est lavé dans les filtres. Toutefois, les utilisateurs doivent faire attention à rembraise pour allumer ces pompes par la suite.
Élevage
Le poisson zèbre sont généralement à condition d'élevage optimal entre ~ 3 et 18 mois d'âge. Élevage paire ne doit pas être effectué pendant deux jours consécutifs 11, mais en aquarium de reproduction peut être effectuée quotidiennement comme un réservoir peut contenir de nombreux poissons qui réduit les risques de la même paire de poissons sont élevés pendant deux jours dans une rangée. La sélection doit être effectuée à intervalles réguliers, même si les œufs ne sont pas nécessaires. Ce processus permettra d'assurer le cycle de reproduction des poissons est maintenue. Il est recommandé qu'il ya plus de femmes que d'hommes dans un élevage de set-up. Le poisson-zèbre mâle changer leurs partenaires féminines sur une base de 12 jours qui vient appuyer davantage cette recommandation. Par ailleurs, au sein de notre laboratoire, nous avons d'abord eu des problèmes avec l'élevage, cependant, l'utilisation de plus de femmes que d'hommes dans un élevage set-up a aidé à résoudre le problème. En outre, une alimentation avec une haute teneur en protéines content alimentation et des artémias deux à trois fois par jour, à mélanger le poisson de différentes cuves (de parents différents), le maintien de la température de l'élevage set-up entre 27 et 28 ° C, et en serrant le ventre des femelles avec des tubes ovaires bloqués à l'aide massage doux encore amélioré la production d'œufs. Nous vous recommandons de conserver une trace de lignées de poissons / origines pour éviter la consanguinité entre frères et sœurs. Cela améliore la production d'embryons. Tenir un registre du nombre d'embryons pondus par les poissons de chaque citerne est également recommandée. Cela aide à garder une trace des meilleurs réservoirs de poissons d'élevage et de prendre des mesures pour améliorer la reproduction chez les poissons pondent pas.
Élevage de larves
L'alimentation des larves devrait commencer à partir de 5 dpf (après la fécondation jours). Les jeunes larves peuvent être nourris avec des aliments secs de ~ 100 microns (par exemple, ZM100) ou des aliments vivants tels que les paramécies et les rotifères (qui stimule la croissance). La taille des aliments peut être augmentée lentementà 200 microns (par exemple ZM200) ou 300/400 microns (par exemple ZM300). Une population de poissons adultes devrait être environ 6-7 poissons par litre d'eau. Cette pratique est recommandée pour un meilleur entretien de la DBO (demande biologique en oxygène) dans les réservoirs.
Disclosures
Aucun conflit d'intérêt déclaré.
Acknowledgments
Les auteurs tiennent à remercier Tammy Esmaili pour son aide dans la gestion des consommables de laboratoire. AA est le récipiendaire d'une bourse de doctorat du Centre d'excellence pour la recherche sur les maladies d'Alzheimer et de soins, École des sciences médicales, Université Edith Cowan. MC reçoit doctorat soutien financier du Rotary Club, Perth. AM, GV, KT, et RNM sont financés par la Fondation de recherche de la maladie d'Alzheimer McCusker l'.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
| Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
| Microscope | Olympus | SZX12 | |
| Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
| Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
| In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
| Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
| Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
|
| Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
|
| Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
| Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
| Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
| Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
| Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
| Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. | |||
References
- Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).
- Avdesh, A., et al. Evaluation of color preference in zebrafish for learning and memory. J. Alzheimers Dis. 28, 459-469 (2012).
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 83, 13-34 (2008).
- Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
- Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15468-15473 (2011).
- Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function. J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).
- Gerlai, R. Zebra fish: an uncharted behavior genetic model. Behav. Genet. 33, 461-468 (2003).
- Eddins, D., Petro, A., Williams, P., Cerutti, D. T., Levin, E. D. Nicotine effects on learning in zebrafish: the role of dopaminergic systems. Psychopharmacology. (Berl). 202, 103-109 (2009).
- Colwill, R. M., Raymond, M. P., Ferreira, L., Escudero, H. Visual discrimination learning in zebrafish (Danio rerio. Behav. Processes. 70, 19-31 (2005).
- Blaser, R. E., Chadwick, L., McGinnis, G. C. Behavioral measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio). Behav. Brain Res. 208, 56-62 (2010).
- Westerfield, M. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). THE ZEBRAFISH BOOK. , 5th, University of Oregon Press. Eugene. (2007).
- Delaney, M., et al. Social interaction and distribution of female zebrafish (Danio rerio) in a large aquarium. Biol. Bull. 203, 240-241 (2002).
