Summary
פרוטוקול זה מתאר תחזוקה וטיפול קבוע כדי לשמור על תנאים אופטימליים לגידול בעלי דג זברה. הסרטון מדגים את הפרוטוקול לתחזוקת מערכת, דיור רגיל, הזנה, רבייה, וגידול של זחלי דג זברה.
Abstract
פרוטוקול זה מתאר טיפול ותחזוקה שוטף של מעבדת דג זברה. דג זברה עכשיו צובר פופולרי בגנטיקה, מחקר תרופתי והתנהגותי. כחוליות, דמיון דג זברת חלק ניכר גנטי רצף עם בני אדם ונמצא בשימוש כמודל חיה לתנאי מחלה אנושי שונה. היתרונות של דג זברה בהשוואה לדגמי החולייתנים נפוצים אחרים כוללים פוריות גבוהה, עלות תחזוקה נמוכה, עוברים שקופים, והתפתחות מהירה. בשל ההחלטה של עניין במחקר דג זברה, בצורך להקים ולתחזק מתקן דיור דג זברה פורה הוא גם גדל. למרות שהספרות זמינה עבור התחזוקה של מעבדת דג זברה, פרוטוקול וידאו מתומצת חסר. סרטון זה מדגים את הפרוטוקול לדיור קבוע, האכלה, ריבוי וגידול של זחלי דג זברה. תהליך זה יסייע לחוקרים להבין את התנאים אופטימליים והתנהגות הטבעית של zebrafisח גידול בעלי ומכאן לפתור בעיות ניסיוניות שמקורן בתנאי הגידול בעלי הדגים. פרוטוקול זה יהיה לעזר עצום לחוקרים מתכננים להקים מעבדת דג זברה, וגם לתלמידים תארים מתקדמים המתעתדים להשתמש בדג זברה כמודל חיה.
Protocol
1. תחזוקת מערכת
- דג זברה נשמר במערכת כי ברציפות במחזור מסננים וaerates מערכת המים כדי לשמור על איכות המים הנדרשת לסביבה מימית בריאה. המערכה המחזורית גם עוזרת לסנן עודפי מזון וצואת דגים. חברות שונות מספקות מערכות דג זברה אבל אנחנו משתמשים במערכות מבתי גידול מימיים, ארה"ב במעבדה שלנו. טמפרטורת החדר או טמפרטורת הטנק נשמרת בדרך כלל בין 26-28.5 מעלות צלזיוס ותנאי התאורה הן 14:10 לשעה (אור: כהה). מערכת דג זברה מבתי גידול מימיים (לדוגמה, מערכת Benchtop) עלויות ~ 9,000 דולר. מערכת benchtop זה עם שני מדפים יכולה להחזיק 10-6 ליטר, 12 3-ליטר, או 20 טנקים 1.5-ליטר על כל מדף. שורות מרובות של דגים (למשל, סוג מהונדס, מוטציה, פרא) יכולות גם להיות מאוחסן באותה המערכת.
- קבוצה של סוגים שונים של מסננים נמצאים בשימוש במערכת. במערכת שלנו, מים מכל טנקי האב 'sses באמצעות 120-מיקרון מסנן בלוק, מכל מסנן מסנן 50-מיקרון, ביולוגי, מסנן פחם פעיל ספיגת מסנן UV וחיטוי לפני שהופץ בחזרה לתוך הטנק. מי De-chlorinated/aged משמשים במערכת דג הזברה. מים יכולים להיות דה כלור על ידי הזדקנות לפחות 48 שעות. בתנאים אידיאליים, מים צריכים להישמר במאגר עם משאבה במחזור המים כדי לשמור אותו חם, ומזרזים את דה כלורינציה.
- ה-pH של מי המערכת יש לבדוק מדי יום ונשמרה בין 6.8 ו -7.5. בעת צורך, סודה לשתייה יש להשתמש כדי להגדיל את רמת החומציות.
- טנקי דגים יש לנקות באופן קבוע. כדי לנקות האקווריום, לסגור את זרימת המים למכל הזה, ניקוז מים עודפים על ידי הטיית הטנק לאחור ולהסיר את המכל בזהירות מהמערכת. צמיחת לכלוך ואצות תהיה ברורה על תחתית והדפנות של הטנק.
- הנח לבלבל לתוך מכל נקי, וממלא במים עם כלור דה-(aka המערכה water). בזהירות להעביר את הדגים למכל הזה עם רשת דייגים. סגור את המכסה ולהעביר את תג השם של הטנק. זהירות למקם את המכל הנקי למערכת ולהפעיל את אספקת המים.
- כדי לטהר את רשת דגים, התרסיס עם אתנול 70%, יש לשטוף במים, ולתת לו להתייבש לפני השימוש מחדש. הסרת המחיצה מהמכל המלוכלך ולרסס את שני חלקים עם אתנול 70%. לשטוף היטב במים ברז ולאפשר לטנק ולבלבל לייבוש מלא לפני השימוש מחדש.
- מסנן את המערכה במחזור יש לבדוק ולשנות באופן קבוע על מנת להבטיח התפקוד התקין שלהם. מסננים אלה צריכים להיות שונים באופן קבוע, כדי להבטיח אספקת מים תקינה ונקיה לכל טנקי דגים.
- משטח המסנן 120-מיקרון בדרך כלל מיקומו או להחלפה יומית; למקם כיוון זרימת המים כדי להשתמש בו לחלוטין לפני חזרת עם אחד חדש.
- מסנן הקופסה צריך להיות מוחלף מדי שבוע. כדי לשנות את מסנן המכל, הסר את יחידת המסנן על ידי סיבוב נמלהiclockwise עם ברגים או ידות. הנח סדין או מגבת למטה כדי למנוע או לספוג דליפת מים מפלסטיק. החלף את מסנן המכל עם אחד חדש ולהתאים את יחידת המסנן חזרה לתוך המערכת, להדק היטב עם ידות וברגים במידת צורך.
- מסנן הפחם צריך להיות שונה דו שבועי (אחת לשבועות). כדי לשנות את מסנן הפחם, הוצא את יחידת מסנן הפחם בזהירות עם מפתח ברגים. השלך את הפחם הפעיל בשימוש ולהחליף אותו בפחם פעיל חדש. להתאים מחדש את מחזיק הפחם והנח אותו חזרה ליחידת מסנן. Fit חזרה יחידת המסנן למערכת. הפעל את המערכת ולבדוק את המים שזורמים למסנן. במידת צורך, לשטוף קצת מים בצינורות לניקוי לכלוך בצינורות לפני התקנת המסנן למערכת.
- פילטר הביולוגי יש לנקות כל שישה חודשים. הפילטר ביולוגי ממוקם בדרך כלל בין המכל ומסנן פחם במערכת המחזורית. כדי לשנות את המסנן הביולוגי, remאובת יחידת המסנן מהמערכת. לשחרר את הלחץ מהמסנן על ידי לחיצה על לחצן שחרור לחץ. הברג החוצה את המסנן עם מפתח ברגים. באופן כללי שני אנשים נדרשים לצעד זה. הסר את המכסה של יחידת המסנן. רוקן את התוכן של המסנן למכל מנופה להפריד siporax מהמים. הערה: Siporax היא מדיה נקבובית קנס יו סינון שיש לו את היכולת לבצע הן ניטריפיקציה ודה ניטריפיקציה.
- אם siporax מלוכלך מאוד להחליף אותו עם חדש. מלא את יחידת המסנן במי מערכת (דה כלור במים), לסגור את המכסה, להחזיר את יחידת המסנן למערכת והפעל את אספקת המים. הערה: באקווריום התאקלם, siporax יהיה ביתם של כמה חיידקי nitrifying. מיקרואורגניזמים אלה הם קריטיים לשמירה על מחזור החנקן באקווריום, והסרה של הדיור העיקרי לפילטר הביולוגי (siporax המלוכלך) עלול לגרום לעלייה חדה אמוניה רצינית, ואחרי ספייק ניטריט ואילו new הביולוגי מסנן (עם siporax החדש) הוא הקמה מחדש-. שני אלה מצבי הביניים של מחזור החנקן עשויים להיות רעילים לאורגניזמים ימיים, ועלולים להרוג את דג זברה אם לא הגיבו לכראוי. לכן, חשוב לי פילטר ביולוגי משני מקום אחר במערכת דיור דג הזברה (לדוגמה, במכל האיסוף במערכת בתי גידול מימית) כדי לאפשר אכלוס מהיר של מיקרואורגניזמים החשובים אלה בsiporax החדש.
- מסנני UV המשמשים לבקרת מזהמים ביולוגיים של מערכת (כגון חיידקים) ויש להחליף כל 9-10 חודשים. יש לציין כי שיעור מינון UV מסנן חיטוי הוא ~ 110 mJ / 2 סנטימטר בתחילת חיי המנורה ושיעור המינון יורד במשך הזמן, ולכן יש צורך להחליף את העולם גם כשזה נראה שהוא עדיין פונקציונלי.
2. האכלה
- דג זברה יכול להיות מוזן במזון יבש (גודל 100 מיקרון מזון לזחלים לאo 300/400 מיקרון לדגים בוגרים) או מזון חי (שרימפס מלח). בריין שרימפס (הארטמיה sp.) ביצים זמינות בחנויות לחיות מחמד מקומיות וניתן בקעו במעבדה על ידי ביצוע הפעולות הפשוטות מתוארות להלן.
- לפזר מלח ים אדום במים מיושנים על ידי נחת כוס במלח בstirrer מגנטי למסיסות טובה יותר. לחלופין, מלח יכול להיות מומס במים על ידי הגזת אותו עם צינור האוורור. מלח אוקיינוס מיידי יכול לשמש גם כפתרון בקיעה אם מלח הים האדום אינו זמין. שרימפס מלח יכול לסבול מגוון רחב של מליחויות, אך אנו בקיעת ארטמיה (10-15 גרם) במי 30-35 ג'/ ליטר אדום מלח ים. הערה: במקרה ביצי ארטמיה אינן זמינות בחנויות לחיות המחמד המקומיות אז שרימפס תמלחות מארז יכול לשמש גם לאחר "decapping" אותם בקבוצות לפני שמוסיף אותם למדגרת השרימפס. זה עשוי גם להימנע מביקורים תכופים בחנות לחיות המחמד.
- מלא האצ' ארטמיה עם saמי הליטר ולהוסיף את ביצי שרימפס בריכוז של 1.2 כפות / ליטר. לאוורר את האצ' נמרץ עם משאבת אוויר ומשאיר את ביצי ארטמיה לבקוע ל~ 48 שעות.
הערה: יש לציין שארטמיה בלתי מועשרת תאבד ערך תזונתי כל שעה שלאחר בקיעה. לכן, זה יכול להיות מתאים לכל אחד הפתח שמעל 24 שעות או 48 שעתי העשרה על מנת לקבל את הערך התזונתי מקסימאלי מארטמיה. - שפכים ממערכת הבקיעה מתווספים לפסולת הסגר חייב לחטא באקונומיקה ונפטרו מאוחר יותר.
- כדי לאסוף את שרימפס המלח, להסיר את צינור האוויר ולאפשר התרבות להסתפק בדקות 4-5 אך לא יותר מ 10 דקות. את שרימפס המלח בקע לאסוף בתחתית האצ'.
- איסוף שרימפס תמלחות באמצעות ברז בתחתית האצ'. השלך את הזרימה הראשונית אשר מורכבת מביצי ארטמיה בלתי בקע.
- הפרד את שרימפס המלח מהמים המלוחים, באמצעות נטו אוסף ארטמיה (~ 350 רשת ניילון מיקרון). שוטף את שרימפס המלח מהרשת למכל מים באמצעות מערכת.
- את שרימפס המלח שנאסף בדרך כלל מצוי בריכוז גבוה בתחתית המכל נותן לו צבע ולא כתום.
- להאכיל את שרימפס המלח לדג הזברה באמצעות פיפטה או בקבוק מזלף / squeezy. כמות המזון שחלק תלוי בגודל האוכלוסייה של טנקים בודדים. היחס המקובל לדג הזברה הוא לקבל 4% ממשקל גוף במזון ליום. דג הזברה לא צריך להיות יתר על מידה כמו זה עלול להגביר את רמת ההחנקות במים, ואולי להשפיע על הרבייה שלהם, או הכדאיות, כמו כמה דגים עלולים למות כתוצאה מאכילת יתר.
- לאחר הזרקת מזון לתוךמי דגים, רעבים לשחות כדי לתפוס את שרימפס המלח.
- האכלה יבשה יכולה להתבצע באמצעות מערכת אקולוגית מתקן אוכל פשוט האביב מבוסס דגים של Aquatic / בתי גידול מימיים. לחלופין, האכלה יבשה יכולה גם להתבצע באמצעות כפית פשוטה או על ידי חיתוך מזלף פלסטיק אלכסון במספריים כדי לתת לו מראה של כפית קטנה.
3. רבייה
- דג זברה ליזום רבייה בתחילת האור. ביצים מופרות ניתן לקבל גם באמצעות רבייה בטנקים או רביית pairwise. בעוד גידול בטנקים הוא יותר עבודה יעילה ומיושם לאוסף עובר רגיל במעבדה שלנו, רביית pairwise עדיף כאשר גנים או מוטציות הם להיות מוקרנים מדג בודד.
- לרבייה בטנקים, להרכיב את המגדל בטנקים ושחרר לאט לתוך האקווריום לאחר ההופעה של אור. לחלופין, בטנקי רביית הגדרה ניתן להשאיר בלילה באקווריום.
- Lגגו המגדל בטנקים לכ 15 דקות על מנת לאפשר לדגים לזדווג לפני הסרת המגדל מהמכל ואוסף את הביצים.
- רביית Pairwise בדרך כלל להגדיר את שעתי אחר הצהריים מאוחרים לאחר ההאכלה.
- הרכב את מכל הרבייה ולמלא אותו במי מערכת מיושנים.
- להעביר נקבה אחת וזכר אחד לשני צדי מתרס של מכל הרבייה. נקבות ניתן להבחין בין זכרים בגלל הבטן הגדולה שלהם. גברים גם ניתן להבדיל בין נקבות כי הם יותר דקים וצבע כהים יותר מאשר נקבות. יתר על כן, לזכרים יש colouration צהוב יותר בסנפיר האנאלי בהשוואה לנשים (ראה תרשים 1). כאשר במבט ספק לצינור ההטלה בדג זברת נקבה (ראה איור 4).
- הסרת המחיצה למחרת בבוקר זמן קצר לאחר תחילתו של אור. לאפשר הזדווגות להתרחש באין מפריעים במשך 20 דקות או עד שכמות מספקת של עוברים מונחות בחלק התחתון של הטנק.
- לאחר הרבייה,להחזיר את הדגים לטנקים. לאסוף את הביצים באמצעות מסננת.
- שטוף את העוברים ביסודיות במים במערכת.
- להעביר את העוברים לצלחת פטרי על ידי שטיפה עם המסננת בינונית עובר; aka EM3 (NaCl, 13.7 מ"מ; KCl, 0.54 מ"מ; MgSO 4, 1.0 מ"מ; CaCl 2, 1.3 מ"מ; Na 2 HPO 4, 0.025 מ"מ; KH 2 ת.ד. 4, 0.044 מ"מ; 3 NaHCO, 4.2 מ"מ).
- עוברים ניתן לראות מתחת למיקרוסקופ. ביצים מופרות אז מופרדות מן הביצים המופרות באמצעות מחט ופיפטה (ראה איור 3).
4. גיוס של זחלים
- ביציות מופרות נשמרות באינקובטור (~ 28.5 מעלות צלזיוס) במשך 72 שעות עד שהם בקעו הזחלים.
- עכשיו הזחלים מחוץ לסיסיים וחייה בחופשיות הם מוכנים להעביר לאקווריום ראשי. זחלים צריכים להיות מוזנים מ5 ימים לאחר ההפריה (DPF) ונשמרים במדיום עובר (רכב מתואר בחלק 3, 10) או מים במערכת. זחלים יכולים להיות כל זמן במאכלים עגולים עם ~ 50% או יותר של מים השתנו בה על בסיס יומי. החלפת המים צריכה לכלול הסרת זחלים מתים או חולים וכל פסולת אחרת.
- להעביר את הזחלים בעדינות לתוך טנק המכיל מחיצה בגודל קטנה (של כ 300-400 מיקרון). זחלים מתים וחולים יש להסיר וכמה מיליליטרים של מים יש להוסיף באיטיות על בסיס יומי.
- לאחר 14 ימים, טנקי זחלים יכולים להיות נגנזו למערכת, ומסופקים עם זרם קטן של מים על אופניים (1-2 טיפין לשנייה). כזחלים לגדול, זרימת מים יכולה להיות מוגברת. גדלים שונים של מחסומים ניתן להשתמש בהתאם לגודל של הזחלים (למשל גודל לבלבל 300-400, 500, 700-750, ו1000 מיקרון) ולבלבל פלסטיק רגיל יש להשתמש לדגים הבוגרים.
- בדרך כלל זה לוקח 3 חודשים לעוברים להתפתח למבוגר לבגרות מינית.
Representative Results
דיור ואחזקת דג זברה הוא קל יותר וזול יותר ממודלים מכרסמים מסורתיים. דג זברה כמה אלף יכול להיות מאוחסן במעבדה קטנה. כתוצאה מפרוטוקול זה, חוקרים יוכלו לנהל מתקן דג זברה, אשר יספק תנאים בריאים לדג הזברה. בנוסף, האיורים הבאים יעזרו ביצים מופרות לזהות, דג זברה בוגר, ומזונם. איור של דג זברת זכר (איור 1 א) ודג זברת נקבה (האיור 1B & 1C) מוצג כדי לסייע לחוקרים להבחין בין זכר ונקבת דג זברה לרביית מטרת איור 2 מתאר נוף מיקרוסקופי של;. שרימפס מלח ב12X (איור 2A), שרימפס במי מלח אחת 90X (איור 2 ב '), וביצה מופרה בארטמיה 90X (האיור 2C). זה יעזור בהבנת ההבדל בין שרימפס תמלחות מופרת ומופרה לאבזרמטרות האכלת ER. ביצים מופרות ומופרות מוצגות באיור 3. האיור 3A ממחיש מבט מיקרוסקופי של עוברים מופרים ומופרים. עוברים מופרים הם בדרך כלל אטומים ו / או בתא מהקרע (הים) בתוך סיסי (חץ שחור) בעוד עוברים מופרים נראה שלם וגדל למדינת חלוקת התא הבאה (לקריאה מפורטת של שלבים שונים של עוברי דג זברה ראה 1). נוף גבוה יותר גדלה של מופרה וביצה מופרה מוצגת באיור 3B ו3C בהתאמה. איור 4 ממחיש צינור ההטלה של דג זברת נקבה כדי לסייע לחוקרים להבחין בין זכר ונקבת דג זברה.
מספר בעיות קריטיות שעלולות להתרחש במעבדת דג זברה כוללות חסימה של אספקת מים לאדם / כל הטנקים במערכת הדיור, איכות מים ירודה, וזליגה בצנרת או מאגר של המערכה המחזורית. בנוסף,בעיות בהשגת עוברים מגידול יכולות להיות מקור נוסף לדאגה. פתרון בעיות בנושאים אלה נדון בהמשך.
איור 1. איור של דג זברת זכר () ונקבת דג זברה (B, C).
איור 2. מבט מיקרוסקופי של שרימפס במלח 12X (), שרימפס במי מלח אחת 90X (ב '), וביצה מופרה בארטמיה 90X (C).
איור 3. מבט מיקרוסקופי (16X) של ביצים מופרות ומופרות, שבו רק שתי ביצים מופרות, את הביצים המופרות מצוינים עם חצים שחורים (). גבוהה יותר גדלהתצוגה (90X) של מופרה (B) וביצה מופרה (C).
איור 4. צינור ההטלה של דג זברה נקבה (מסומן בחץ שחור) האיור.
| פרמטר | טווח אופטימלי |
| האלקליניות | 50-150 מ"ג / ליטר CaCO 3 |
| pH | 6.8-7.5 (6.0-8.5 נסבלים) |
| טמפרטורה | 26-28.5 מעלות צלזיוס |
| קשיות | 50-100 מ"ג / ליטר CaCO 3 |
| אמוניה בלתי מיוננת | <0.02 מ"ג / ליטר |
| ניטראט (NO 3 -) | <50 מ"ג / ליטר |
| ניטריט (NO 2 -) | <0.1 מ"ג / ליטר |
| חמצן מומס | > 6.0 מ"ג / ליטר |
| מליחות | 0.5-1 גר '/ ל' |
| מוליכות | 300 -1,500 μS |
טבלה 2. פרמטרים של מים איכותיים. פרמטרי איכות מים. טווח אופטימלי של פרמטרים סביבתיים בדג הזברה 11 אקווריום.
Discussion
דג זברת מקורן נהר הגנגס בצפון הודו והופכים פופולריים במחקר בשניהם בוגרים ושלבי זחל 2, נסקר על ידי ספנס et al. 3. דג זברה יש מספר יתרונות על פני מודלים של בעלי חיים אחרים כגון פוריות גבוהה, קלות התחזוקה, פינוי אופטי של עוברים, התפתחות עוברית מהירה, ועלות תחזוקה נמוכה. הם ניתנים למניפולציה גנטית 6 ומתאימים לסריקת תרופות תפוקה גבוהה 4,5. ההפריה שלהם היא חיצונית וזה יתרון עבור השימוש בם על ידי ביולוגים התפתחותיים. בשל תכונותיו החיוביות אלה, דג הזברה צובר פופולרי ב7 גנטיקה, תרופתי 8, ומחקר התנהגותי 9,10. יש מספר האתגרים לשמירה על מתקן דג זברה וגידול בעלי דג זברה להשיג עוברים. בזאת, אנו מתארים חוויות וההמלצות שלנו בהתמודדות עם אתגרים אלה וoutline פרוטוקול לתחזוקת מערכת, האכלה, ריבוי וגידול של הזחלים.
תחזוקת מערכת
כדי לשמור על דג זברה במצב בריא, חשוב לספק להם סביבה נקיה במערכת האקווריום מתפקד כראוי. חלק חשוב בזה משתנה מסנני מערכת באופן קבוע, כך שכל הטנקים יקבלו זרימת מים תקינות ומים נקיים. זה חיוני כדי למנוע כשל באספקת מי הרכיבה על האופניים לכל טנק עקב צינורות מערכת חסומה. הצינורות ניתן לנקות באמצעות לחץ מים גבוהה מרגיל וזרימה אם חסימה מתרחשת. באופן אידיאלי, בסביבות 10% מהמים של המערכת צריכים להיות מוחלפים מדי יום כדי לשמור על איכות מים טובה. לחלופין, ניתן להחליף מים בעת החלפת המכל או מסנן פחם. הדבר מבטיח כי הלכלוך הופקד בצינורות המחברים מסננים אלה הוסר. איכות מים צריכה להיבדק על בסיס קבוע. פרמטרים כגון האלקליניות, pH, temperatיור, קשיות, אמוניה, חמצן מומס, מליחות, ומוליכות צריך להיחשב כגורמים חשובים בייצוג איכות מי המערכת (ראה טבלה 2 לפרטים נוספים). בחנק הפחות, pH וטמפרטורה צריכה להיות במעקב על בסיס קבוע על מנת להבטיח את איכות מים טובה לדג זברת דיור. האידיאלי ניטראט (NO 3 -) רמות <50 מ"ג / 11 ליטר, ואם אלה הרמות גבוהות יכולות להיות מופחתות על ידי החלפת המים במערכת מסתובבת עם מערכת מים הטריים. לעתים, מסננים לא מתאימים היטב ולדלוף ולכן מומלץ לבדוק כל דליפות לאחר שינוי מסנן. אם זרימת המים מהמאגר הראשי חסומה גם לאחר שינוי משאבת מים או שינוי מסנן, זרימת המים יכולה להיות משוחזרת על ידי מי מהתרופפות או סר של המסנן לכמה שניות כדי לשחרר את כל ואקום שנוצר בצינורות. הזמן הדרוש כדי לשנות מסננים יכול להשתנות בהתאם לגורמים שונים כגון סך העומס o הביולוגיתn המערכת, הניקיון של מסננים אחרים, והלכלוך שהופקדו בצינורות. לפיכך, מסננים צריכים מייד להיות שונים אם הם מופיעים מלוכלכים או אם כל הטנקים לא מקבלים אספקת המים הנכונה. מומלץ גם שרשת הדגים לנקות עם אתנול 70%, ונשטפה במים כדי לטהר אותו, ולהתייבש לפני שימוש מחדש. ייבוש מבטיח אידוי של אתנול שאחרת הוא רעיל לדגים.
רוב מערכות דג הזברה להשתמש דה כלור מים ברז, ואולם, חלק ממערכות משתמשות במי deionized. זה חשוב לשמור על המוליכות של מי המערכה בין 300 ל ~ 1,500 μS כזה מקטין את אנרגית הדגים צריכים לשמור על מלחים בגוף. לכן, דג זברה לא יכול להיות כל זמן במים, אלא אם כן deionised מלחים נוספים כדי לשמור על רמת המוליכות האופטימלית. קיים סיכון של ריכוזי נחושת גבוהים אפשריים במי המערכת אם מי ברז משמש כי מסנן הפחם אינו מסיר את הנחושת. לכן, uSERS צריך לבדוק לריכוזי נחושת ולהימנע מנחושת הצנרת במידת ההאפשר.
האכלה
דג הזברה לא צריך להיות יתר על מידה כמו זה עלול להגביר את רמת ההחנקות במים, ואולי להשפיע על הרבייה שלהם 11, או הכדאיות, כמו כמה דגים עלולים למות כתוצאה מאכילת יתר. אנו ממליצים לא לספק יותר מזון במהלך כל האכלה מטנק של דגים יכולים לסיים תוך 10 דקות. חשוב מאוד להסיר מלח משרימפס המלח לפני שהאכיל אותם לדג הזברה כריכוז עודף מלח גורם למוות. אם יותר ביצי דג זברה נדרשות, דגים ניתן לאכול שלוש פעמים ביום. ניקוי מכלי דגי המגדל יומי גם משפר את רמות ייצור ביצים.
כאשר האכלה על מערכות בתי גידול המימיות אנחנו בדרך כלל לכבות את משאבת מים ומשאבת אוויר כדי לאפשר לדגים לאכול את האוכל למשך 10 דקות. זה מקטין את כמות המזון שנשטפה למסננים. עם זאת, משתמשים חייבים להיות זהירים כדי remגחלת להפעיל משאבות אלה שוב לאחר מכן.
רבייה
דג זברה הוא בדרך כלל בתנאי הרבייה אופטימלי בין ~ 3 וגיל 18 חודשים. רביית Pairwise לא צריכה להתבצע במשך 11 ימים רצופים, אולם גידול בטנקים ניתן לבצע מדי יום כטנק יכול להחזיק דגים רבים המקטינים את הסיכויים של אותו הזוג של דגים שגדלו במשך ימים ברציפות. גידול צריך להתבצע במרווחי זמן קבועים, גם אם ביצים אינן נדרשות. תהליך זה יבטיח את מחזור הרבייה של הדג נשמר. מומלץ כי יש יותר נשים מאשר גברים ברביית הגדרה. דג זברת זכר לשנות בנות זוגם על בסיס יומי 12 נוספים אשר תומכות בהמלצה זו. יתר על כן, בתוך המעבדה שלנו אנחנו בתחילה חווינו בעיות עם רבייה, לעומת זאת, משתמשים יותר נקבות מזכרים ברביית הגדרה עזרה לפתור את הבעיה. יתר על כן, האכלה עם חלבון גבוהה קונטהnt דיאטה וארטמיה 2-3 פעמים ביום, דגי ערבוב מטנקים שונים (מהורים שונים), שמירה על הטמפרטורה של רביית הגדרה בין 27 ל 28 מעלות צלזיוס, ולוחץ את הבטן של נקבות עם צינורות שחלה חסומה באמצעות עיסוי עדין השתפר ייצור ביצים נוספות. אנו ממליצים לשמור על שיא של קווי דגים / מקורות, כדי למנוע ברבייה בין אחים. עוד דבר זה משפר את ייצור עובר. שמירה על שיא של מספר העוברים שנקבעו על ידי דגים מכל טנק גם מומלץ. זה מסייע בשמירה על מסלול של טנקי דגים הטובים הרבייה ונקיטת אמצעים לשיפור רבייה בדגים לא יטילו ביצים.
גיוס של זחלים
האכלה של זחלים צריכה להתחיל מ 5 DPF (ימי הפרית הודעה). זחלים צעירים ניתן להאכיל במזון יבש של ~ 100 מיקרון בגודל (למשל, ZM100) או מזון חי כגון הסנדלית וrotifers (אשר ממריץ צמיחה). גודל האוכל לאט ניתן להגדילל200 מיקרון (למשל ZM200) או מיקרון 300/400 (למשל ZM300). אוכלוסייה של דגים בוגרים צריכה להיות בסביבות 6-7 דגים לליטר מים. תרגול זה מומלץ לתחזוקה טובה יותר של BOD (צריכת חמצן ביולוגית) לטנקים.
Disclosures
אין ניגודי האינטרסים הכריזו.
Acknowledgments
המחברים מבקשים להודות לתמי Esmaili על סיועה בניהול של חומרים מתכלה במעבדה. AA הוא מקבל מלגת דוקטורט מהמרכז למצוינות לחקר מחלת אלצהיימר והטיפוח, בית הספר למדעי רפואה, אוניברסיטת אדית קוואן. MC מקבל תמיכה במימון תואר דוקטור ממועדון רוטרי, פרת'. בבוקר, GV, KT, וRNM ממומנים על ידי קרן המחקר של McCusker אלצהיימר.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zebrafish circulating system | Aquatic Habitats, USA | AHAB stand-alone, bench-top systems | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma Aldrich | S6297 | |
| Fish food dispenser/Dry food feeder | Aquatic Habitats, USA | AH19 | |
| Microscope | Olympus | SZX12 | |
| Dry Food | ZM Fish food, UK | ZM100, ZM200, ZM300 | |
| Brine shrimp eggs | Salt Creek, Inc., USA | Premium Grade | |
| In-tank breeders | Aquatic Habitats, USA | ITSTS-A | |
| Activated carbon | Penn-Plax Pro-crab, USA | PBC3MF | |
| Breeding tanks | Aquatic Habitats, USA | SBTANK (1L) Breeder Tank-2 (2L) |
|
| Red sea salt | Red sea salt, USA | Local pet store/ www.redseafish.com |
|
| Filters (Canister, filter pads, and UV) | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
| Siporax Media | Aquatic Habitats, USA | BF 820 | |
| Brine shrimp net | Aquatic Habitats, USA | BSN 1 | |
| Brine shrimp hatcher | Aquatic Habitats, USA | BS252 | |
| Baffles | Aquatic Habitats, USA | aquatichabitats.com | |
| Table 1. Table of specific reagents and equipment used in this protocol. | |||
References
- Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. Stages of embryonic development of the zebrafish. Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).
- Avdesh, A., et al. Evaluation of color preference in zebrafish for learning and memory. J. Alzheimers Dis. 28, 459-469 (2012).
- Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio. Biol. Rev. Camb. Philos. Soc. 83, 13-34 (2008).
- Best, J. D., et al. Non-associative learning in larval zebrafish. Neuropsychopharmacology. 33, 1206-1215 (2008).
- Wolman, M. A., Jain, R. A., Liss, L., Granato, M. Chemical modulation of memory formation in larval zebrafish. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15468-15473 (2011).
- Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function. J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).
- Gerlai, R. Zebra fish: an uncharted behavior genetic model. Behav. Genet. 33, 461-468 (2003).
- Eddins, D., Petro, A., Williams, P., Cerutti, D. T., Levin, E. D. Nicotine effects on learning in zebrafish: the role of dopaminergic systems. Psychopharmacology. (Berl). 202, 103-109 (2009).
- Colwill, R. M., Raymond, M. P., Ferreira, L., Escudero, H. Visual discrimination learning in zebrafish (Danio rerio. Behav. Processes. 70, 19-31 (2005).
- Blaser, R. E., Chadwick, L., McGinnis, G. C. Behavioral measures of anxiety in zebrafish (Danio rerio). Behav. Brain Res. 208, 56-62 (2010).
- Westerfield, M. A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). THE ZEBRAFISH BOOK. , 5th, University of Oregon Press. Eugene. (2007).
- Delaney, M., et al. Social interaction and distribution of female zebrafish (Danio rerio) in a large aquarium. Biol. Bull. 203, 240-241 (2002).
