Метод визуализации и количественной оценки 3-мерной структуры мышь печеночной воротной вены или канал внутрипеченочных желчных описано. Эта техника литой изоляцией могут быть применены и к другим протоков или сосудистой системы и позволяет<em> На месте</em> Визуализации или количественного нетронутыми общения архитектуры системы.
В органах, правильная архитектура сосудистой и протоковой структур является необходимым для надлежащего физиологические функции, а формирование и поддержание этих структур является строго регулируется процесс. Анализ этих сложных, 3-мерные структуры в значительной степени зависела от любой 2-мерной экспертизы в разделе, или на красителях исследований инъекции. Эти методы, однако, не в состоянии обеспечить полное и количественной представленности протоков или сосудистых структур, они предназначены для выяснения. Кроме того, природа 3-мерных пластиковых отливок смолы создает постоянную снимок системы и является новым и широко полезный метод для визуализации и количественной 3-мерной структуры и сети.
Важным преимуществом системы литья смол является возможность определения нетронутыми и подключены, или общения, структура кровеносных сосудов или протоков. Структура сосудистой и герцогаТаль сети имеют решающее значение для функции органа, и этот метод имеет потенциал, чтобы помочь изучению сосудистой и протоковой сети несколькими способами. Смола литья могут быть использованы для анализа нормальной морфологии и функциональной архитектуры просвета структуру, определить развитие морфогенетических изменений, и выявить морфологические различия в архитектуре ткани между нормальным и болезненных состояний. Предыдущая работа использованы смолы литья для изучения, например, архитектурных и функциональных дефектов в желчных внутрипеченочных мыши системе воздуховодов, которые не были отражены в 2-мерном анализе структуры 1,2, изменениями в мозге сосудистой болезни Альцгеймера мыши модель 3 , портал нарушения вены портал гипертонической и циррозом мышей 4, шаги в развитии крыс созревания лимфатических между незрелых и взрослых легких 5, непосредственные микрососудистых изменений в печени крыс, поджелудочной железы, почек и в ответ в химической травмы6.
Здесь мы представляем способ создания 3-мерного литой изоляцией из мыши или протоковой сосудистой сети, с особым акцентом на воротной вены и внутрипеченочных желчных проток. Эти слепки могут быть визуализированы, сняв или размягчения тканей и затем могут быть проанализированы. Эта техника может быть применена практически к любому сосудистой или протоковой системе и будет непосредственно применимы к любому исследованию, расследовавшей развития, функции, обслуживание или повреждение 3-мерное протоков или сосудистые структуры.
Мы описали конкретные примеры того, как воротной вены и внутрипеченочных желчных протоков системы печени может быть приведен, но эта техника может быть применена практически к любой другой протоков или сосудистая система с небольшими изменениями. Предыдущие исследования продемонстр…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана грантами от Национального института здоровья (NIH) для SSH (R01-DK078640), из Медицинского института Говарда Хьюза (HHMI) через HHMI / Vanderbilt University Программа Сертификата в области молекулярной медицины в TJW (GRDOT56006779), Vanderbilt диабета исследовательский и учебный центр (P30-DK020593) и пищеварительной Vanderbilt болезни исследовательский центр (P30-DK058404) предоставление основных услуг.
Name of reagent | Company | Catalog number | Comments |
PE10 polyethylene tubing | Fisher Scientific | 1417012P | |
5-0 surgical black braided silk | Roboz Surgical | SUT-15-1 | |
Steriject 32 G x 13 mm needle | Air-tite | TSK3213 | |
Spring scissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
Number 5 forceps | Fine Science Tools | 91150-20 | |
Mercox II kit | Ladd Research | 21247 | |
Benzyl alcohol | Fisher Scientific | 1816-04 | Only required for BABB-clearing |
Benzyl benzoate | MP Biomedicals, LLC | 154839 | Only required for BABB-clearing |
Phosphate-buffered saline (PBS) | |||
Modeling clay | |||
Scale | |||
Laboratory scissors | |||
15 ml cap polypropylene tubes | |||
4% paraformaldahyde | |||
15% potassium hydroxide (KOH) | Only required for maceration | ||
Razor blade | |||
100% methanol | |||
3 ml luer lock syringe |