שיטה של הדמיה וכימות המבנה 3-הממדי של וריד עכבר כבד פורטל או צינור מרת intrahepatic מתוארת. טכניקת יציקת שרף זה יכול להיות מיושם גם למערכות ductal או כלי דם אחרות ומאפשרת<em> באתר</em> הדמיה או כימות של ארכיטקטורת התקשורת התקינה של מערכת.
באיברים, הארכיטקטורה הנכונה של מבנים וסקולריים וductal היא הכרחית לתפקוד פיסיולוגי תקין, ואת ההיווצרות והתחזוקה של מבנים אלה היא תהליך מוסדר מאוד. הניתוח של מבנים אלה מורכבים, 3-ממדיים שתלוי במידה רבה בשתי הבדיקות 2-הממדיות בסעיף או על מחקרי הזרקת צבע. טכניקות אלה, עם זאת, אינן מסוגלות לספק ייצוג מלא וכימות של מבני ductal או כלי דם שנועדו להבהיר. לחלופין, את הטבע של יציקות שרף פלסטיק 3-ממדיות יוצר תמונת מצב קבועה של המערכת והוא רומן וטכניקה שימושית נרחב המאפשרים הדמיה וכימות מבנים 3-ממדיים ורשתות.
יתרון מכריע של מערכת יציקת השרף הוא היכולת לקבוע, המבנה השלם ומחובר, או תקשורת של כלי דם או דביקה. המבנה של כלי דם ודוקרשתות טל הן חיוניות לתפקוד איברים, וטכניקה זו יש את הפוטנציאל לסייע למחקר של רשתות כלי דם וductal בכמה דרכים. ליהוק שרף יכול לשמש כדי לנתח מורפולוגיה נורמלית ואדריכלות פונקציונלית של מבנה luminal, לזהות שינויים התפתחותיים המוךפו"גנטי, ולחשוף הבדלים מורפולוגיים באדריכלות רקמות בין מדינות נורמליות ומחלה. עבודה קודמת ניצלה שרף ליהוק ללמוד, למשל, פגמים ארכיטקטוניים ופונקציונליים במערכת עכבר מרת intrahepatic הדביקה שלא באים לידי ביטוי בניתוח 2-ממדי של 1,2 המבנה, שינויים בכלי דם במוח של עכבר מודל מחלת אלצהיימר 3 , מומי וריד שער בעכברים עם יתר לחץ דם ופורטל צירוטיים 4, שלבים התפתחותיים בהתבגרות הלימפה עכברוש בין ריאות לא בשלות ובוגרים 5, שינויים מיידיים כלי דם בכבד החולדה, הלבלב והכליות בתגובה לפגיעה בחומר כימי6.
כאן אנו מציגים שיטה ליצירת גבס שרף 3-ממדי של עכבר רשת כלי דם או ductal, מתמקד במיוחד בוריד השער וצינור מרת intrahepatic. יציקות אלו ניתן דמיינו ידי ניקוי או קצוץ את הרקמה ולאחר מכן ניתן לנתח אותו. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת כמעט בכל מערכת כלי דם או ductal ויהיה ישים ישירות לכל מחקר אל התפתחות, תפקוד, תחזוקה, או פגיעתו של מבנה ductal או כלי דם 3-ממדי.
כבר תארנו דוגמאות ספציפיות לאיך וריד שער ומערכות צינור מרת intrahepatic של הכבד יכולים להיות יצוקים, אך טכניקה זו יכולה להיות מיושמת על כמעט כל מערכת ductal או כלי דם אחרת בעיבודים קלים. עבודה קודמת הוכיחה את ההיתכנות של טכניקה זו במינים רבים, כולל עכבר 1,2,7-9, הברווזון 1…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמוסד הלאומי לבריאות (NIH) לSSH (R01-DK078640), מהווארד יוז הרפואי במכון (HHMI) דרך תכנית אישורי אוניברסיטת HHMI / נדרבילט ברפואה המולקולרית לTJW (GRDOT56006779), נדרבילט סוכרת מחקר ומרכז הדרכה (P30-DK020593) ועיכול מחלות מרכז המחקר ונדרבילט (P30-DK058404) מתן שירותי ליבה.
Name of reagent | Company | Catalog number | Comments |
PE10 polyethylene tubing | Fisher Scientific | 1417012P | |
5-0 surgical black braided silk | Roboz Surgical | SUT-15-1 | |
Steriject 32 G x 13 mm needle | Air-tite | TSK3213 | |
Spring scissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
Number 5 forceps | Fine Science Tools | 91150-20 | |
Mercox II kit | Ladd Research | 21247 | |
Benzyl alcohol | Fisher Scientific | 1816-04 | Only required for BABB-clearing |
Benzyl benzoate | MP Biomedicals, LLC | 154839 | Only required for BABB-clearing |
Phosphate-buffered saline (PBS) | |||
Modeling clay | |||
Scale | |||
Laboratory scissors | |||
15 ml cap polypropylene tubes | |||
4% paraformaldahyde | |||
15% potassium hydroxide (KOH) | Only required for maceration | ||
Razor blade | |||
100% methanol | |||
3 ml luer lock syringe |