Fremgangsmåte for visualisering og kvantifisere den 3-dimensjonale struktur av mus hepatisk portvenen eller intrahepatisk gallekanalen er beskrevet. Denne harpiks støpt teknikken kan også anvendes for andre duktale eller vaskulær systemer og tillater<em> In situ</em> Visualisering eller kvantifisering av et systems intakt kommuniserer arkitektur.
Med organer, er den riktige arkitekturen av vaskulære og ductal strukturer uunnværlig for riktig fysiologisk funksjon, og dannelsen og opprettholdelsen av disse strukturene er godt regulert prosess. Analysen av disse komplekse, 3-dimensjonale strukturer har sterkt avhengig enten 2-dimensjonal undersøkelse i avsnitt eller på fargestoff injeksjon studier. Disse teknikkene, men er ikke i stand til å tilby en komplett og kvantifiserbare representasjon av duktale eller vaskulær strukturer de er ment å belyse. Alternativt, genererer naturen av 3-dimensjonale plast harpiks avstøpninger permanent øyeblikksbilde av systemet og er en ny og allment nyttig teknikk for å visualisere og kvantifisere 3-dimensjonale strukturer og nettverk.
En avgjørende fordel av harpiksen avstøpning systemet er evnen til å bestemme den intakte og koblet til, eller kommunisere, struktur av et blodkar eller kanal. Strukturen av vaskulær og ductal nettverk er avgjørende for organfunksjon, og denne teknikken har potensial for å hjelpe studie av vaskulære og ductal nettverk på flere måter. Harpiks avstøpning kan brukes til å analysere normal morfologi og funksjonell arkitektur en luminal struktur, identifisere utviklingsmessige morfogenetisk endringer, og avdekke morfologiske forskjeller i vevsarkitektur mellom normale og sykdomstilstander. Tidligere arbeid har utnyttet harpiks støping å studere for eksempel arkitektoniske og funksjonelle defekter innenfor musen intrahepatiske kanalsystem som ikke ble reflektert i 2-dimensjonal analyse av strukturen 1,2, endringer i hjernens blodkar en Alzheimer musemodell 3 , portvenen unormalt i portalen hypertensive og cirrhose mus 4, utviklingsmessige trinn i rotte lymphatic modning mellom umodne og voksne lungene 5, umiddelbare mikrovaskulære endringer i rotte lever, bukspyttkjertel og nyrer som svar i til kjemisk skade6.
Her presenterer vi en metode for å generere en 3-dimensjonal harpiks kastet av en mus vaskulær eller duktale nettverk, med fokus spesielt på portvenen og intrahepatisk gallegang. Disse kaster kan visualiseres ved å fjerne eller maserere vev og kan deretter bli analysert. Denne teknikken kan brukes til nesten enhver vaskulær eller duktalt system og ville være direkte anvendelig til enhver studie enquiring i utviklingen, funksjon, vedlikehold eller skade av en 3-dimensjonal duktale eller vaskulær struktur.
Vi har beskrevet konkrete eksempler for hvordan portvenen og intrahepatiske kanalsystem i leveren kan støpes, men denne teknikk kan brukes til praktisk talt alle andre duktale eller karsystemet med små tilpasninger. Tidligere arbeid har vist gjennomførbarheten av denne teknikken i flere arter, inkludert mus, 1,2,7-9 andungen 10,11, 12,13 kanin, hund 14, og gris 15, og i mange organer, inkludert nasal kjertel 14, hjerte 16, blære 12,13, og <…
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra National Institutes of Health (NIH) til SSH (R01-DK078640), fra Howard Hughes Medical Institute (HHMI) gjennom HHMI / Vanderbilt University Certificate Program i molekylærmedisin til TJW (GRDOT56006779), den Vanderbilt Diabetes Research og Training Center (P30-DK020593) og Vanderbilt Digestive Disease Research Center (P30-DK058404) gir Core Services.
Name of reagent | Company | Catalog number | Comments |
PE10 polyethylene tubing | Fisher Scientific | 1417012P | |
5-0 surgical black braided silk | Roboz Surgical | SUT-15-1 | |
Steriject 32 G x 13 mm needle | Air-tite | TSK3213 | |
Spring scissors | Fine Science Tools | 15000-08 | |
Number 5 forceps | Fine Science Tools | 91150-20 | |
Mercox II kit | Ladd Research | 21247 | |
Benzyl alcohol | Fisher Scientific | 1816-04 | Only required for BABB-clearing |
Benzyl benzoate | MP Biomedicals, LLC | 154839 | Only required for BABB-clearing |
Phosphate-buffered saline (PBS) | |||
Modeling clay | |||
Scale | |||
Laboratory scissors | |||
15 ml cap polypropylene tubes | |||
4% paraformaldahyde | |||
15% potassium hydroxide (KOH) | Only required for maceration | ||
Razor blade | |||
100% methanol | |||
3 ml luer lock syringe |