Summary
Hippocampal circuitry के लिए कार्यात्मक परिवर्तनों की जांच करने के लिए एक बहुआयामी दृष्टिकोण समझाया गया है. Electrophysiological तकनीकों के साथ चोट प्रोटोकॉल, व्यवहार परीक्षण और क्षेत्रीय विच्छेदन विधि के साथ वर्णित हैं. इन तकनीकों के संयोजन अन्य मस्तिष्क क्षेत्रों और वैज्ञानिक सवाल के लिए इसी तरह फैशन में लागू किया जा सकता है.
Protocol
1. पार्श्व द्रव टक्कर चोट
- Ketamine और xylazine दिया intraperitoneally का एक मिश्रण का उपयोग माउस संज्ञाहीन करना. फिर एक आयोडीन रगडें का उपयोग चीरा के लिए माउस सिर तैयार.
- सही पार्श्विका मिमी 3 (व्यास के बाहर) ईस यंत्र के व्दारा शल्यक्रिया करना का उपयोग क्षेत्र के ऊपर एक कपालोच्छेदन प्रदर्शन.
- सुरक्षित Luer नियंत्रण रेखा cyanoarylate और दंत ऐक्रेलिक का उपयोग कपालोच्छेदन पर सुई हब (3 मिमी व्यास के अंदर).
- 24 घंटे बाद, isoflurane साँस लेना के माध्यम का उपयोग माउस संज्ञाहीन करना.
- एक बार सामान्य श्वास शुरू, लेकिन पहले माउस उत्तेजना के प्रति संवेदनशील हो जाता है, तरल पदार्थ टक्कर चोट डिवाइस के माध्यम से खोपड़ी में नमक की 20 मिसे नाड़ी देने.
- तत्काल चोट के बाद केंद्र को निकालने के लिए, isoflurane का उपयोग कर माउस reanaesthetize, और सिवनी खोपड़ी बंद कर दिया.
दिखावा संचालित नियंत्रण छोड़े गए 1.5 कदम के साथ एक समान प्रक्रिया में प्राप्त होगा.
2. व्यवहार विश्लेषण - वातानुकूलित डर Response
- लगातार दो दिनों पर चूहों वातानुकूलित डर प्रतिक्रिया (सीएफआर) के प्रशिक्षण के लिए पहले संभाल लेना.
- 2 सेकंड के लिए 1.5 मा मंजिल सदमे प्रशासन से पहले 3 मिनट के लिए कंडीशनिंग कक्ष में जगह माउस. कक्ष में एक अतिरिक्त 30 सेकंड के लिए माउस छोड़ दें.
- देरी (आमतौर पर 24 घंटे) की अवधि के बाद, 5 मिनट के लिए कंडीशनिंग कक्ष के लिए माउस को वापस. 5 सेकंड के अंतराल पर ठंड का आकलन करें.
विश्लेषण दो आबादी में समय ठंड के रिश्तेदार राशि की तुलना में हमारे मामले में चूहों के मस्तिष्क घायल और दिखावा संचालित नियंत्रण में होते हैं. लोअर ठंड दर (नियंत्रित करने के लिए की तुलना में) संदर्भ और फर्श सदमा, स्मृति हानि और संज्ञानात्मक रोग के एक संकेत के बीच सहयोग को बनाए रखने की अक्षमता का संकेत मिलता है.
3. तीव्र hippocampal स्लाइस की तैयारी
* ध्यान दें: एक बेल जार का उपयोग Anesthetization केवल टर्मिनल प्रक्रियाओं (में मस्तिष्क यहाँ बताया विच्छेदन) के लिए लागू किया जा सकता है.
- 7 दिनों के बादचोट, कृत्रिम मस्तिष्क रीढ़ की हड्डी (aCSF) द्रव और 250 मिलीलीटर sucrose काटने समाधान के 1 एल.
- बर्फ उदारतापूर्वक का प्रयोग करने के लिए सुनिश्चित करें कि सभी उपकरणों और समाधान मस्तिष्क टुकड़ा तैयारी के दौरान इस्तेमाल किया बर्फ का ठंडा कर रहे हैं.
- माउस संज्ञाहीन करना isoflurane का उपयोग कर. जल्दी और धीरे sucrose में माउस और जगह से मस्तिष्क को हटा दें.
- Superglue की एक बूंद पर एक अगर ब्लॉक के सामने में काटने की सतह पर छाँटो और मस्तिष्क जगह.
- 350 सुक्ष्ममापी मोटी राज्याभिषेक के स्लाइस काटें, आप बरकरार hippocampal सर्किट के साथ 4 या 5 स्लाइस को प्राप्त करने में सक्षम होना चाहिए.
- 37 में कम से कम 1 घंटा के लिए स्लाइस सेते डिग्री सेल्सियस
4. कोशिकी फील्ड संभावित रिकॉर्डिंग
- Borosilicate ग्लास इलेक्ट्रोड 2-5 ऊर्ध्वाधर डांड़ी का उपयोग MΩs खींचो.
- कक्ष में और इलेक्ट्रोड धारक पर डालने इलेक्ट्रोड प्लेस टुकड़ा.
- Perforant पथ या Schaffer collaterals के रूप में इस तरह के एक axonal पथ में टुकड़ा में उत्तेजक इलेक्ट्रोड कम. लोअर रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोडमें स्थिति है, जबकि उत्पादन निशान की निगरानी सुनिश्चित करने के लिए कि इलेक्ट्रोड एक ही z स्तर (गहराई) में हैं. जब एक अधिक से अधिक प्रतिक्रिया हासिल की है, उत्तेजना वर्तमान स्तर लगातार पकड़े, इलेक्ट्रोड ही z-स्तर पर कर रहे हैं.
- presynaptic फाइबर वॉली, क्षेत्र कोशिकी पोस्टअन्तर्ग्रथनी संभावित (fEPSP), और postsynaptic जनसंख्या कील: परिणामी ट्रेस तीन घटक होते हैं. घटक अस्थायी कुछ तैयारी में ओवरलैप करते हैं, विश्लेषण और अधिक कठिन बना सकता है. अगर वहाँ कि प्रतिक्रियाओं presynaptic या postsynaptic बीच अस्पष्टता है, APV और CNQX स्नान उत्तेजक संचरण को ब्लॉक करने के लिए जोड़ा जा सकता है, और शेष सभी संकेतों presynaptic मूल का हो जाएगा.
- इनपुट / आउटपुट घटता रखा पल्स रिकॉर्डिंग, और लंबी अवधि के plasticity प्रयोगों: उत्तेजना प्रोटोकॉल के लिए तीन अलग - अलग प्रकार के प्रयोग का उत्पादन बदलती हैं.
विश्लेषण आम तौर पर दोनों मस्तिष्क घायल चूहों और नकली में भर में fEPSP की ढलान की तुलना माप के होते हैंनियंत्रण संचालित है, फाइबर वॉली को मापने के द्वारा इनपुट शक्ति को नियंत्रित करने के लिए.
5. Visualized पैच दबाना रिकॉर्डिंग
- स्लाइस, इलेक्ट्रोड, और योजना तैयार करने के लिए रिकॉर्ड के रूप में पहले से ऊपर वर्णित करने के लिए 4.2 कदम.
- केवल सतह करीब कोशिकाओं के रूप में ऊतक कोशिकाओं में से 80 गहरे सुक्ष्ममापी पर विचार के लिए मर चुका है और / या कनेक्टिविटी है कम हो जाएगा. इलेक्ट्रोड पर सकारात्मक दबाव है कि यह सुनिश्चित करने भरा हो नहीं करता है, क्योंकि यह ऊतकों के माध्यम से नीचे कदम के साथ एक सेल दृष्टिकोण. जब इलेक्ट्रोड धीरे छू लेती है सेल नकारात्मक दबाव लागू करने में इलेक्ट्रोड और प्लाज्मा झिल्ली के बीच एक 'gigaseal' बनाने.
- नकारात्मक दबाव की कमी फटने लागू क्रम में टूटना Plama झिल्ली इलेक्ट्रोड के तहत और पूरे सेल विन्यास हासिल.
- समाई एम्पलीफायर का उपयोग कर यात्रियों को हटा दें और श्रृंखला प्रतिरोध के लिए क्षतिपूर्ति. सेल की श्रृंखला के प्रतिरोध के लिए compensating के लिए एक सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक हैमाप ccurate.
- एकल कक्ष रिकॉर्डिंग के दो तरीके से किया जा सकता है: वर्तमान (मापने झिल्ली वोल्टेज) क्लंप और वोल्टेज क्लंप (झिल्ली में आयन चैनल के माध्यम से वर्तमान गुजर मापने).
विश्लेषण के संभव प्रकार के कई हैं, लेकिन हमारे मामले में ज्यादातर biophysical दर और दोनों मस्तिष्क घायल चूहों और दिखावा संचालित नियंत्रण में सहज synaptic धाराओं के आकार बढ़ाता विश्लेषण से मिलकर बनता है.
6. वोल्टेज संवेदनशील डाई इमेजिंग (VSD)
- स्लाइस और योजना तैयार करने के लिए रिकॉर्ड के रूप में पहले से ऊपर वर्णित करने के लिए 4.2 कदम.
- 50 μl इथेनॉल में 1 di-3-ANEPPDHQ मिलीग्राम मिश्रण से डाई स्टॉक तैयार पन्नी लिपटे ट्यूब, -20 डिग्री सेल्सियस पर दुकान में 2 μl aliquots बांटना डाई समाधान दैनिक काम aCSF में 1:200 कमजोर द्वारा.
- सेते aCSF पर टुकड़ा फिल्टर पेपर सिक्त और 16 मिनट के लिए 90 μl डाई के साथ दाग, और इंटरफ़ेस रिकॉर्डिंग कक्ष में aCSF जगह से कुल्ला.
- प्रकाश stimulatio समायोजितप्रतिक्रिया जब तक n तीव्रता कैमरे की सीमा के बीच में केंद्रित है. छवियाँ आम तौर पर से 500-1,000 फ्रेम प्रति सेकंड की दर पर हासिल कर रहे हैं.
- बिजली के प्रारंभिक तेजी photobleaching को स्थिर करने के लिए की अनुमति उत्तेजना से पहले प्रकाश उत्तेजना 200 मिसे के लिए उत्प्रेरक शटर. विद्युत के बीच वैकल्पिक अधिग्रहण परीक्षणों को प्रेरित और गैर विद्युत प्रेरित, बाद में गैर उत्तेजित पृष्ठभूमि के घटाव की अनुमति. रिकार्ड आराम कर रही प्रकाश शटर खोलने के लिए पहले तीव्रता (शटर बंद के साथ प्रतिदीप्ति पढ़ने). प्रत्येक VSD परीक्षण y पिक्सल द्वारा एक एक्स पिक्सल समय "फिल्म" प्रतिदीप्ति रीडिंग के द्वारा किया जाएगा. 10 रिकार्ड प्रत्येक परीक्षण हालत में 12 VSD परीक्षणों.
- Df / एफ, जो के रूप में गणना की है, सभी मापन अंतर पिक्सेल पूर्व बिजली प्रोत्साहन सामान्यीकृत प्रतिदीप्ति परिवर्तन पर प्रदर्शन कर रहे हैं इस प्रकार है:
VSD कच्चे अर्जित परीक्षण से आराम प्रकाश तीव्रता घटाएँ. प्रत्येक परीक्षण में प्रत्येक पिक्सेल के लिए, पूर्व प्रोत्साहन बिजली उस के लिए मतलब मूल्य के अनुसार मानक के अनुसारपरीक्षण, परीक्षण और एकता subtracting. दोनों विद्युत प्रेरित और गैर विद्युत प्रेरित परीक्षण के लिए यह मत करो. एक गैर विद्युत प्रेरित परीक्षणों से औसत "पृष्ठभूमि प्रतिदीप्ति" परीक्षण बनाएँ, और विद्युत प्रेरित परीक्षणों से इस पृष्ठभूमि परीक्षण घटाना. 12 ऐसे परीक्षण है, जो भी कर रहे हैं आमतौर पर अंतरिक्ष और समय में शोर अनुपात करने के लिए संकेत सुधार फ़िल्टर आगे के विश्लेषण से आम तौर पर 10 के औसत पर किया जाता है.
7. बायोकेमिकल विश्लेषण के लिए क्षेत्रीय dissections
- माउस के रूप में पहले से वर्णित से मस्तिष्क निकालें.
- स्लाइस की ऊतक हेलिकॉप्टर का उपयोग तैयार.
- अनुभाग फ्लैट करना, क्षेत्र CA1 और महानिदेशक microdissect.
- तुरंत lysis बफर युक्त protease अवरोध में विसर्जित कर दिया. -80 में तरल नाइट्रोजन और दुकान में रुक ° सी.
8. प्रतिनिधि परिणाम
हमारे प्रयोगों आम तौर पर व्यवहार डेटा के साथ शुरू करने की उम्मीद है की पुष्टिएड संज्ञानात्मक घाटे है कि मस्तिष्क में मौजूद घायल चूहों. हम प्रासंगिक वातानुकूलित डर प्रतिक्रिया परीक्षण को रोजगार के रूप में यह एक hippocampal निर्भर व्यवहार है कि विश्वसनीय है और केवल एक प्रशिक्षण सत्र और एक परीक्षण सत्र की आवश्यकता है. चित्रा 2 में दिखाया गया डेटा व्यवहार अग्रगामी स्मृति को मापने के लिए परीक्षण का प्रतिनिधित्व करता है, तथापि, परीक्षण भी प्रतिगामी स्मृति को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है अगर प्रशिक्षण सत्र की चोट से पहले किया जाता है.
फील्ड उत्तेजक postsynaptic क्षमता (fEPSPs) कोशिकाओं की एक बड़ी आबादी (चित्रा 3A) के शुद्ध synaptic प्रभावकारिता निर्धारित मापा जाता है. हम आमतौर पर उत्तेजना के पैटर्न के तीन अलग अलग प्रकार, प्रत्येक अपने स्वयं के परिणाम और निष्कर्ष affording रोजगार. सबसे पहले कदम की एक श्रृंखला के माध्यम से उत्तेजना की तीव्रता में वृद्धि, हम एक वक्र इनपुट / आउटपुट (चित्रा 3B / सी) बनाते हैं.
अगला, द्वारा ही अलग तीव्रता के दो stimulations वितरितइसके अतिरिक्त, हम अक्सर लंबे समय तक potentiation (LTP) प्रयोग करते हैं, एक संक्षिप्त देरी (आमतौर पर 50 मिसे) हम synaptic पुटिका रिहाई संभावना में संभावित परिवर्तन की जांच के द्वारा घ. उसी तीव्रता में एक आधारभूत प्रतिक्रिया, संक्षिप्त उच्च आवृत्ति उत्तेजना (आमतौर पर 100Hz) की स्थापना के बाद दिया है, एक intracellular झरना है कि एक potentiated synaptic प्रतिक्रिया की ओर जाता है जब सामान्य उत्तेजना फिर से शुरू किया जाता है के कारण.
पूरे सेल से विद्युत गतिविधि पैच clamped कोशिकाओं दो मोड में दर्ज किया जा सकता है. वोल्टेज क्लैंप मोड में, experimenter एम्पलीफायर के साथ जुड़े कंप्यूटर सॉफ्टवेयर के माध्यम से स्नान करने के लिए संदर्भ में पैच clamped सेल की झिल्ली वोल्टेज को नियंत्रित करता है. इस मामले में postsynaptic घटनाओं mediating धाराओं दर्ज की गई है, presynaptic रिलीज की आवृत्ति के बारे में postsynaptic सक्रिय रिसेप्टर्स और vesicular neurotransmitter एकाग्रता (4A चित्रा) की, जानकारी संख्या प्रदान कर रहे हैं. वर्तमान क्लैंप मोड experimenter मेंmanipulates वर्तमान इंजेक्शन और वोल्टेज प्रतिक्रिया उपाय. इस कार्रवाई संभावित कार्रवाई संभावित सीमा और अर्ध - चौड़ाई के रूप में विशेषताओं का निर्धारण करने के लिए उपयोगी हो सकता है. इन विशेषताओं के उत्तेजक या निरोधात्मक के आधार पर अपनी कार्रवाई संभावित फायरिंग पैटर्न (4B चित्रा) के रूप में न्यूरॉन्स की कार्यात्मक वर्गीकरण के लिए अनुमति देते हैं. आदेश में सेलुलर पहचान सत्यापित करने के लिए हम लूसिफ़ेर पीला और रिकॉर्डिंग के बाद वृक्ष के समान spines की उपस्थिति या अनुपस्थिति से नेत्रहीन पहचान की पुष्टि के साथ कोशिकाओं को भरने की सलाह देते हैं. (चित्रा 4C, डी).
एक वोल्टेज संवेदनशील डाई का उपयोग झिल्ली वोल्टेज में परिवर्तन को मापने के प्रयोग से परिणाम का एक उदाहरण चित्रा 5 में दिखाया गया है. इस मामले में, एक उत्तेजक इलेक्ट्रोड Schaffer संपार्श्विक मार्ग में रखा गया है और जिसके परिणामस्वरूप CA1 क्षेत्र में neuronal गतिविधि का विश्लेषण किया जाता है. वोल्ट संवेदनशील डाई झिल्ली वोल्टेज के निरपेक्ष मूल्यों को रिपोर्ट करने के लिए, नहीं बल्कि टीवह उत्तेजना के बिना एक आधारभूत हालत से वोल्टेज में बदल जाते हैं. हालांकि, दो स्थितियों (जैसे दिखावा संचालित बनाम मस्तिष्क घायल) की तुलना विश्लेषण करने के लिए शारीरिक परिवर्तन है कि fEPSPs या पूरे सेल पैच - दबाना रिकॉर्डिंग का उपयोग नहीं मापा जा सकता spatiotemporal मापदंडों का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
चित्रा 1. Hippocampal सर्किट आरेख. हिप्पोकैम्पस के माध्यम से एक क्षैतिज खंड. हिप्पोकैम्पस के माध्यम से प्रमुख रास्ते पीले रंग में दिखाया जाता है. दांतेदार गाइरस दांतेदार गाइरस ग्रेन्युल कोशिकाओं के द्रुमाश्मों के साथ synapses के गठन में perforant मार्ग के माध्यम से entorhinal प्रांतस्था परियोजना में न्यूरॉन्स से axons. काई से भरा फाइबर CA3 जहां वे CA3 न्यूरॉन्स की dendrites साथ synapses रूप मार्ग के माध्यम से ग्रेन्युल सेल axons परियोजना. dendrit पर Schaffer संपार्श्विक मार्ग के माध्यम से CA3 न्यूरॉन्स परियोजना के axonsतों CA1 पिरामिड कोशिकाओं की. CA1 पिरामिड कोशिकाओं के axons हिप्पोकैम्पस के बाहर subiculum के माध्यम से परियोजना. नोट: इसके अलावा दर्शाया CA3 पिरामिड सेल अक्षतंतु झल्लरी माध्यम contralateral हिप्पोकैम्पस पेश collaterals. (CA1: श्रृंग Ammonis 1, सीए 2: में श्रृंग 2 Ammonis, CA3: में श्रृंग 3 Ammonis, महानिदेशक: दांतेदार गाइरस, धराशायी लाइन सेल शरीर परत को इंगित करता है, ठोस लाइन संरचनात्मक सीमाओं को इंगित करता है.)
चित्रा 2. प्रतिनिधि व्यवहार डेटा: व्यवहार मस्तिष्क घायल (FPI) चूहों और नियंत्रण वातानुकूलित डर प्रतिक्रिया प्रतिमान में दिखावा संचालित (नकली) के बीच ठंड की दरों में अंतर का चित्रण डेटा. प्रशिक्षण 6 वें दिन चोट के बाद पर परीक्षण 24 घंटे बाद होने वाली अवधि के साथ हुई. (पी ** अर्थ <.01.)
चित्रा 3. प्रतिनिधि बाह्य डेटा रिकॉर्डिंग: एक क्षेत्र उत्तेजक बाद synaptic (fEPSP) संभावित CA1 क्षेत्र में रिकॉर्डिंग का एक उदाहरण है. 1 नीचे विक्षेपन उत्तेजना artifact, presynaptic फाइबर वॉली और अंत fEPSP द्वारा पीछा किया है. बी: इनपुट / आउटपुट से घटता CA1 निम्न द्रव टक्कर चोट (FPI) में शुद्ध synaptic प्रभावकारिता में कमी चित्रण. C: इनपुट / आउटपुट घटता दांतेदार गाइरस में शुद्ध synaptic प्रभावकारिता में वृद्धि FPI (डीजी) चित्रण. (* अर्थ पी <.05.) बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .
चित्रा 4. प्रतिनिधि पूरे सेल पैच - दबाना डेटा: एक सहज उदाहरणपोस्टअन्तर्ग्रथनी वर्तमान (sEPSC) एक CA1 पिरामिड सेल से उत्तेजक. बी: एक CA1 पिरामिड (ऊपरी ट्रेस) सेल और एक तेजी से spiking CA1 interneuron (कम ट्रेस) से कार्रवाई संभावित गाड़ियों के उदाहरण. C: लूसिफ़ेर पीला का उदाहरण CA1 निरोधात्मक interneuron भरा. नोट वृक्ष के समान spines (ऊपरी पैनल) का अभाव है. डी: लूसिफ़ेर पीला उदाहरण CA1 पिरामिड न्यूरॉन भरा. वृक्ष के समान spines (ऊपरी पैनल) की उपस्थिति पर ध्यान दें. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .
चित्रा 5. प्रतिनिधि वोल्टेज संवेदनशील डाई इमेजिंग डेटा: माउस राज्याभिषेक hippocampal टुकड़ा शरीर रचना दिखाते. (डीजी: दांतेदार गाइरस, CA1: श्रृंग Ammonis 1) बी: लाल पिक्सल अभिवाही Schaffer संपार्श्विक उत्तेजना के बाद CA1 14 मिसे क्षेत्र में उत्तेजक गतिविधि का प्रतिनिधित्व करने के लिए पीला. में लालअधिक विध्रुवण dicates जबकि पीला एक कम है, लेकिन अभी भी महत्वपूर्ण विध्रुवण इंगित करता है. C: ब्लू CA1 क्षेत्र में निरोधात्मक गतिविधि की साइटों का प्रतिनिधित्व पिक्सल 56 मिसे वही अभिवाही Schaffer संपार्श्विक बी गहरे नीले में दिखाया उत्तेजना के बाद अधिक hyperpolarization इंगित करता है.
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Discussion
प्रत्येक ऊपर उल्लिखित तकनीक अंतर्निहित मनाया व्यवहार घाटे के कारण तंत्र का अधिक से अधिक समझ के लिए योगदान देता है. अद्वितीय प्रत्येक विधि से प्राप्त जानकारी के संयोजन से हम अधिक परिशुद्धता के साथ जैविक तंत्र की जांच करने में सक्षम हैं.
मापने fEPSPs न्यूरॉन्स की बड़ी, spatially परिभाषित क्षेत्रों का शुद्ध synaptic प्रभावकारिता बढ़ाता के लिए उपयोगी है. Synaptic plasticity से गुजरना कोशिकाओं का एक समूह की क्षमता के बारे में भी जानकारी प्रदान कर सकते हैं, एक तंत्रिका सीखने और स्मृति के सहसंबंधी. यह electrophysiological विश्लेषण का एक उपयोगी पहला बिंदु के रूप में यह तकनीकी रूप से सरल है और सर्किट समारोह के व्यापक उपायों पर जानकारी प्रदान करता है.
FEPSPs के विपरीत, पूरे सेल पैच - दबाना रिकॉर्डिंग एक एकल कोशिका के electrophysiological मानकों के बारे में विस्तृत जानकारी प्रदान करता है. यह कई अलग अलग मानकों और typ के रूप में एक बहुत ही विविध तकनीक हैअन्तर्ग्रथन आगतों का तों रिकॉर्डिंग शर्तों (विंदुक या स्नान में औषधीय एजेंटों, वोल्टेज पकड़े हुए, रिकॉर्डिंग मोड, आदि) के आधार पर मापा जा सकता है. उदाहरण के लिए, पूरे सेल रिकॉर्डिंग पैच - दबाना शुद्ध synaptic प्रभावकारिता में मनाया अंतर उत्तेजक और निरोधात्मक synaptic प्रसारण के रिश्तेदार योगदान अंतर रूप में fEPSPs द्वारा वर्णित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
वोल्टेज संवेदनशील डाई इमेजिंग प्रयोगों अधिक परंपरागत electrophysiological circuitry परिवर्तन की spatiotemporal गतिशीलता के बारे में जानकारी उपलब्ध कराने के द्वारा ऊपर वर्णित तकनीकों के द्वारा प्राप्त ज्ञान को बढ़ाने के लिए. किसी भी परिवर्तन के spatiotemporal प्रोफ़ाइल संभावित कोशिका प्रकार है कि पैदा सर्किट रोग, है जो फिर पूरे सेल पैच clamping की तरह अधिक लक्षित दृष्टिकोण के माध्यम से विश्लेषण किया जा सकता है में शामिल किया जा सकता है के बारे में hypotheses उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.
हमारे मामले में, हम और दूसरों को पहले subregi का प्रदर्शन किया हैशुद्ध synaptic 7-9 प्रभावकारिता, जो 10 TBI के बाद CA1 में LTP उत्पन्न असमर्थता निस्र्पक नेतृत्व में विशिष्ट परिवर्तन पर. आगे के अध्ययन के आणविक जीव विज्ञान तकनीक और इलेक्ट्रोफिजियोलॉजी / उत्तेजक निरोधात्मक synaptic संचरण 11 के मनाया असंतुलन के पीछे तंत्र की जांच का एक मिश्रण कार्यरत हैं. महत्वपूर्ण बात, इन अध्ययनों व्यवहार नियोजित न केवल प्रदर्शित करने के लिए एक संज्ञानात्मक हानि के बाद TBI, लेकिन यह भी आहार उपचार हमारे मिश्रित दृष्टिकोण का उपयोग कर से प्राप्त परिणामों से निकाली गई रणनीति की प्रभावशीलता की पुष्टि.
इस बहुआयामी प्रणाली के बारे में कुछ भी नहीं TBI के क्षेत्र या हिप्पोकैम्पस के लिए ब्याज की अपने क्षेत्र के लिए आवेदन प्रतिबंधित. दरअसल, उपकरणों के इस सेट के संयोजन स्नायविक रोगों के एक नंबर में व्यवहार में मनाया मतभेद की biomechanistic वर्णन करने के लिए नेतृत्व की संभावना है.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
लेखकों के लिए अपने तकनीकी सहायता के लिए पूंजीपति इलियट धन्यवाद करना चाहते हैं. यह काम स्वास्थ्य R01HD059288 और R01NS069629 अनुदान के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा वित्त पोषित किया गया था.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Axopatch 200B amplifier | Molecular Devices | AXOPATCH 200B | Patch-clamp rig |
| Digidata 1322A digitizer | Molecular Devices | Patch-clamp rig | |
| MP-225 micromanipulator | Sutter | MP-225 | Patch-clamp rig |
| DMLFSA microscope | Leica | Patch-clamp rig | |
| Multiclamp 700B amplifier | Molecular Devices | MULTICLAMP 700B | Multipurpose (field) rig |
| Digidata 1440 digitizer | Molecular Devices | Multipurpos (field) rig | |
| MPC-200 micromanipulator | Sutter | MPC-200 | Multipurpose (field) rig |
| BX51WI microscope | Olympus | BX51WI | Multipurpose (field) rig |
| Axoclamp 900A amplifier | Molecular Devices | AXOCLAMP 900A | VSD rig |
| Digidata 1322 digitizer | Molecular Devices | VSD rig | |
| Redshirt CCD-SMQ camera | Redshirt | NCS01 | VSD rig |
| VT 1200S Vibratome | Leica | 14048142066 | |
| P-30 Electrode puller | Sutter | P-30/P | |
| cOmplete protease inhibitor | Roche | 11697498001 |
References
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