Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Endothelin-1-induceret mellem-cerebral arterieokklusion Model for iskæmisk slagtilfælde med laser-doppler-flowmetri Vejledning i Rat

Published: February 16, 2013 doi: 10.3791/50014
Automatic Translation
1, 2, 1, 3, 4, 4, 1, 3
1Department of Neurosurgery, University of Florida, 2Department of Anatomical Sciences, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran, 3Department of Physiology and Functional Genomics, University of Florida, 4Department of Neurology, University of Florida

Summary

Adskillige dyremodeller for cerebral iskæmi er blevet udviklet til at simulere den menneskelige tilstand af slagtilfælde. Denne protokol beskrives endothelin-1 (ET-1) inducerede mellem-cerebral arterieokklusion (MCAO) model for iskæmisk slagtilfælde i rotter. Desuden er vigtige overvejelser, fordele og ulemper ved denne diskuteret.

Abstract

Slagtilfælde er den største årsag til invaliditet og tredje hyppigste dødsårsag i verden, koster en anslået 70 milliarder dollar i USA i 2009 1, 2. Mange modeller af cerebral iskæmi er blevet udviklet til at efterligne den menneskelige tilstand af slagtilfælde. Det er blevet foreslået, at op til 80% af alle slagtilfælde skyldes iskæmisk skade i den midterste cerebrale arterie (MCA) område 3. I begyndelsen af 1990'erne, 4 endothelin-1 (ET-1) blev anvendt til at inducere iskæmi ved at anvende det direkte op til overfladen af MCA efter kraniotomi. Senere blev denne model modificeret 5 ved anvendelse af en stereotaksisk injektion af ET-1 ved siden af MCA at producere fokal cerebral iskæmi. Hovedfordelene ved denne model omfatter evnen til at udføre proceduren hurtigt, evnen til at kontrollere arterie konstriktion ved at ændre dosis af ET-1 afgivet, ikke nødvendigt at bearbejde de ekstrakraniale kar, der forsyner blod til hjernen og gradvis reperfusiom satser der i højere grad efterligner reperfusion hos mennesker 5-7. På den anden side har den ET-1 model ulemper, der omfatter behovet for en kraniotomi, samt højere variation i slagvolumen 8. Denne variabilitet kan reduceres ved anvendelse af laser-doppler-flowmetri (LDF) at kontrollere, cerebral iskæmi under ET-1 infusion. Faktorer, der påvirker slagtilfælde variabilitet omfatter præcision af infusion og det parti af ET-1 brugt 6. En anden vigtig overvejelse er, at selv om reperfusion er en almindelig forekomst i humant slagtilfælde, kan varigheden af okklusionen for ET-1-induceret MCAO ikke nøje efterligner den for humant slagtilfælde, hvor mange patienter har partiel reperfusion i løbet af timer til dage efter okklusion 9, 10. Denne protokol vil beskrive i detaljer ET-1-induceret MCAO model for iskæmisk slagtilfælde hos rotter. Det vil også henlede opmærksomheden på særlige hensyn og potentielle ulemper hele proceduren.

Protocol

Denne protokol blev godkendt af Institutional Animal Care og Use Committee (IACUC) ved University of Florida og er i overensstemmelse med "Vejledning for Pleje og anvendelse af forsøgsdyr" (ottende udgave, National Academy of Sciences, 2011).

Materialer

  1. Dyr: Otte uger gamle, Sprague Dawley hanrotter (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA), som vejede 250-300 g på tidspunktet for kirurgi.
  2. Anæstesi
    1. Inhalationsanæstesi system (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA)
    2. Isofluran bedøvelsesmiddel (Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA)
  3. Stereotaktisk system (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA)
    1. Små dyr stereotaktisk-system
    2. Ikke-brud øre stænger for rotter
    3. Gas anæstesi hoved holder til rotter
  4. Temperatur regulering
    1. BAT-12 mikrosonde termometer (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA)
    2. T / PUMP, TP600 Termisk tæppe (Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA)
  5. Kirurgiske instrumenter
    1. Skalpel håndtag og # 11 klinge, iris pincet, Graefe pincet, bulldog clamp retraktorer, skruetrækker, 10 ul sprøjte med 26 gauge skrå nål (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA)
    2. Mikromotorer boremaskine og stereotaktisk holder, Quintessential stereotaktisk Injector (Stoelting, Wood Dale, IL, USA)
    3. 1,0 mm runde bore bur, 1,0 mm omvendt kegle drill bur (Roboz Surgical Instrument Co, Inc., Gaithersburg, MD, USA)
  6. Kirurgiske Supplies
    1. Monteringsskruer 0-80 x 3/32 med 2,4 mm stav, 21-gauge guide kanyle [4mm lang under soklen] og kanyle dummy (Plast én, Roanoke, VA, USA)
    2. Jet protese acryl-og væske (Lang Dental Manufacturing Co, Inc., Wheeling, IL, USA)
    3. 3,0 nylonsutur (Oasis, Mettawa, IL, USA)
    4. Vatpinde, Puralube øjensalve (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA)
    5. Elektriske hårklippere (Oster, Providence, RI, USA)
  7. Kemikalier
    1. Endothelin-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA)
    2. Chlorhexidin 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, USA)
    3. Buprenorphin HCI (Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA)
  8. Visualisering Udstyr
    1. Kirurgisk mikroskop (Seiler Instrument and Manufacturing, St. Louis, MO, USA)
    2. Fiber Optic illuminator (TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA)
  9. Laser Doppler flowmetry system (ADInstruments, Inc., Colorado Springs, CO, USA)
    1. Standard Pencil Probe
    2. Probeholderen
    3. Blood Flowmeter
    4. Powerlab 4/30 med LabChart 7
  10. Måling af infarktvolumen
    1. Rottehjerne matrix (Zivic-Miller Lab. Inc., Allison Park, PA, USA)
    2. 2,3,5-triphenyltetrazoliumchlorid (Sigma-Aldrich Co, St Louis, MO, USA) fortyndet til 0,05% i PBS
    3. Flatbed scanner (Epson Perfection V30, Epson America, Inc., Long Beach, CA, USA)
    4. Billede J software (ImageJ 1.42q software, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA)

1. Prækirurgiske Steps

  1. Før kirurgi blev rotterne anbragt under en 12:12 lys / mørke-cyklus med fri adgang til vand og gnaverfoder.
  2. Anæstesi induceres med 4% isofluran i 100% O 2 gasblanding i en induktion kammer indtil rotten ikke længere udbetalinger til bagpote knivspids.
  3. Aseptisk teknik bør opretholdes under denne procedure, herunder brug af sterile handsker, sterile kirurgiske instrumenter og en steril kirurgisk drapere 11.
  4. Kronen af ​​hovedet er barberet med elektriske hårklippere.
  5. Rotten anbringes i liggende stilling på en absorberende pude liggende på en temperaturstyret drift overflade (termisk tæppe).
  6. Hovedet anbringes i det stereotaktiske apparat, der begynder med placering af gassen anæstetiske ansigtsmaske.
  7. Dernæst øre stænger indsat og strammet.
  8. Under proceduren anæstesi opretholdes med 2% isofluran i 100% O2 gasblanding.
  9. Smøremiddel ophthalmisk salve påføres på begge øjne, og øjenlågene er lukket for at forhindre udtørring øjet under det kirurgiske indgreb.
  10. Rektal Temperatursonden indsættes at opretholde en konstant dyre-kernetemperatur på 37 ± 0,5 ° C.
  11. Med hovedet holdt fast i stereotaksiskeenhed, det kirurgiske område er renset med skiftevis 2% chlorhexidin og saltvand tre gange.

2. Kirurgiske trin

  1. Under anvendelse af en skalpel, er en midtlinjeincision foretaget på huden ligger over calvarium fra de kaudale aspekter af øjnene (nasion) og mellem ørerne (superior nakke linie).
  2. Huden trækkes derefter tilbage lateralt med 3 bulldog klemmer.
  3. Bindevæv fjernes fra kraniet ved tørre vatsvabere så flere strukturer kan ses tydeligt. Disse omfatter bregma, den koronale sutur, og den højre laterale kraniet højderyg. Vatpinde anvendes til at fjerne blod fra det kirurgiske område.
  4. Ved hjælp af kirurgisk mikroskop, er bregma placeret, og de stereotaksisk manipulatorer justeres, indtil 1,0 mm runde bore bur nulstilles ved bregma.
  5. Boret bur bevæges derefter til 1,6 mm anterior og 5,2 mm lateralt for bregma.
  6. En boret hul, der trænger ind i kraniet er boret for Cannula placering (fig. 1). Overskydende rester og blod løbende ryddet bruger vatpinde.

På dette tidspunkt, kan en vejledning kanyle indsættes (trin 7) eller en direkte ET-1 injektion gennem boret hul kan udføres (fortsætte direkte til trin 16).

  1. Dernæst bur huller til tre fastgørelsesskruer er boret gennem delvis tykkelse af kraniet under anvendelse af en 1,0 mm omvendt kegle drill bur (fig. 1). Et hul bores i hver forreste ben 1-2 mm anteriort for den koronale sutur og 1-2 mm lateralt til den sagittale sutur. Et hul bores i parietal knogle omkring 2-3 mm posteriort for den koronale sutur og 2-3 mm lateralt til den sagittale sutur ipsilateralt til guide kanyle boret hul. Tre 0-80 x 3/32 monteringsskruer er placeret i disse bur huller og vil yde støtte til cement holder i kanylen. Skruerne skal kun være avanceret 2 eller 3 omgange for ikke at beskadige dura sagen. The guide kanyle placeres i stereotaksiske kanyle holder og bregma er beliggende.
  2. De stereotaktiske manipulatorer justeres indtil guide kanyle nulstilles ved bregma. Kanylen flyttes til boret hul placeret 1,6 mm anterior og 5,2 mm lateralt for bregma.
  3. Endelig er styret kanyle sænkes ned i boret hul med den sidste spids position på 4,5 mm ventralt til bregma.
  4. Laser Doppler flow probe placering (valgfrit)
    1. For at overvåge cerebral blodstrøm ved hjælp LDF, kan en probe holder anbringes i position før påføring af guide kanyle med dentalcement.
    2. Probeholderen basen trimmes flugter med soklen bortset fra små kileformede fane.
    3. Probeholderen placeres derefter posteriort for vejledning kanyle og lige medialt for den laterale kraniet ridge med tappen orienteret medialt (figur 1).
    4. Sonden indehaveren og gVEJLEDNING kanyle er fastgjort sammen ved hjælp af dentalcement.
  5. Dentalcement anvendes derefter til at fastgøre kanylen på plads. Cementen er i kontakt med alle tre skruer og omgiver hele bunden af ​​kanylen.
  6. Cementen er helt tør før fjernelse af kanylen holderen. Det tager ca 5 min.

Efter disse trin, kan det kirurgiske snit lukkes og kanylen attrappen kan skrues ind i føringen kanyle. Alternativt kan ET-1-induceret MCAO udføres på rotter efter en periode med genopretning fra kanylen implantering. Til denne metode, skal trin 19 udføres næste og trin 14 til 18 kan udføres på et senere tidspunkt. For at udføre guide kanyle implantation og ET-1 injektion under den samme operation, bør trin 14 udføres næste.

  1. Infusionen sprøjte er fyldt med ET-1 (fortyndet til 80 uM i PBS) og derefter monteret i stereotaksiske injektoren.
  2. Denstereotaktiske manipulatorer justeres, indtil nålespidsen nulstilles ved kanten af ​​føringen kanyle.
  3. Nålespidsen sænkes gennem guide kanyle til en position på 17,2 mm ventralt til kanten af ​​føringen kanyle. Hvis et styr kanyle ikke anvendes, nålespidsen nulstilles ved bregma og sænkes gennem boret hul til en position 8,7 mm ventral for bregma.
  4. 3 pi på 80 uM ET1 infunderes med en hastighed på 1 pi per min.
  5. Sprøjten er efterladt på stedet i 3 minutter efter at infusionen er gennemført og derefter langsomt fjernet.
  6. Incisionen lukkes med 3,0 nylonsutur og kanylen dummy er skruet ind i kanylen.
  7. En dosis på passende smertestillende (dvs. buprenorphin ved 0,05-0,1 mg / kg) bør anvendes efter operationen for at minimere smerte og ubehag under tilbagebetalingsperioden.
  8. Rotten fjernes fra det kirurgiske suite og anbringes i et varmt, tørt recovery område for at forhindre hypotermi, med fri og nem adgang til blød mad og vand.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

1. Post-Op neurologisk evaluering

Efter at dyret kommer til bevidsthed, kan en lang række metoder anvendes til at evaluere neurologiske defekter, herunder balance, gribestyrke, paw placering, postural asymmetri og trappe klatring. Den solsikkefrø opgave er en grov vurdering af motorisk og sensorisk funktion, der har signifikant sammenhæng med infarktvolumen 7, 12. I løbet af denne opgave, er rotter timet under åbning og forbruge 5 solsikkefrø. De fem frø anbringes i et hjørne af en tom, tør, plast bur og den tid manipulere frøene registreres. Desuden er antallet af tomme stykker i buret efter at alle frøene er åbnet og forbrugt registreres. Rotter med større neurologisk underskud vil tage længere tid at åbne og forbruge frøene og vil bryde skallerne i flere stykker. Selvom det ikke er en formel del af denne opgave, er det let at observere hyppig mishandling og slippe af solsikkefrøs ved rotter efter eksperimentel slagtilfælde. Dette omfatter brug af primært én forpote, og ineffektiv bide af råtanken under forsøg på at åbne.

2. Farvning og kvantitativ måling af hjernen infarktvolumen

Efter okklusion og reperfusion af MCA at indføre transient cerebral iskæmi, er dyr aflivet, og deres coronally tværsnit hjerner farves med 2,3,5-triphenyltetrazoliumchlorid (TTC) at evaluere infarktvolumen (fig. 2) som diskuteret i vore tidligere publikationer 7, 13.

Figur 1
Figur 1. Dorsale billede af rotte kraniet viser hardware placering. Denne dorsale visning af rotte kraniet med anterior orienteret til venstre viser placeringen af bregma og lambda med hensyn til de suturer, der kan visualiseres efter udbedring connectivevæv fra kraniet overflade. Den laterale kraniet højderyg, guide kanyle, LDF probeholderen, og forankring skruer også vist på tegningen med relative relationer til kraniet jord varemærker og hinanden.

Figur 2
Figur 2. TTC-farvede serielle coronale hjernesnit (2 mm) fra rotte udsættes for ET-1-induceret MCAO. En repræsentativ hjernen fra en rotte efter ET-1-induceret MCAO er vist. Denne Hjernen blev fjernet og skyllet i iskoldt PBS før sektionsopdelt coronally i 2 mm tykke snit startende netop kaudalt i de olfaktoriske pærer. Skiverne blev derefter inkuberet i 0,05% TTC fortyndet i PBS ved 37 ° C før den blev standset i PBS og fikseres derefter kortvarigt i formalin. Væv farves røde efter udsættelse for TTC repræsenterer levedygtig grå substans. Den levedygtige grå substans i halvkugle ipsilateralt til ET-1 injektion kan sammenlignes med den grå mAtter i den kontralaterale halvdel til at beregne arealet af cerebral infarkt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

ET-1-induceret MCAO er en etableret model for eksperimentel iskæmisk slagtilfælde, der anvendes regelmæssigt i flere rottestammer. Mange variable, såsom rotte-stamme, dyrenes alder, kropstemperatur, anæstesi fremgangsmåde, og operatøren ekspertise kan føre til øget variabilitet i infarktvolumener ved brug af denne model 5, 14. Imidlertid har adskillige forskere påvist, at fordelene ved denne model indbefatter den relativt ikke-invasiv metode, dosisrespons af cerebral blodstrøm til ET-1, og evnen til at undgå anæstesi helt ved infusion af ET-1 hos rotter ved bevidsthed 14, 15. Det er bemærkelsesværdigt, at der er store forskelle i rotte-stamme og alder anvendes i hele litteraturen, og det er ikke overraskende, at forskellige stereotaksisk koordinater er angivet afhængigt af disse variabler. De koordinater, der anvendes i vores protokol er optimeret til 8 uger gamle Sprague Dawley-hanrotter. Enhver afvigelse fra denne stamme, køn eller alder vil sandsynligvis kræve intracerebral injicereion af farvestof efterfulgt af obduktion for at identificere gyldige koordinater for denne procedure. Desuden ET-1-induceret reduktion i cerebral blodstrøm er dosisafhængig. Dosis anvendelse i denne fremgangsmåde medfører en infarkt omtrent 30-40% af den grå substans i halvkugle ipsilateralt til injektion med en standardafvigelse på middelværdien af omkring 4-5% inden for et eksperiment 7, 16. Direkte visualisering af proximale dele af MCA afslører en luminal diameter, der går til 0% af basislinien inden for 3 minutter og vender tilbage til basislinien ved cirka 30 min 7. Ved hjælp af LDF blev maksimalt flow vist sig at falde til omkring 10% af baseline flow i 5-7 min med gradvis tilbagevenden til 60% af baseline efter 1 time, hvorpå overvågningen blev afbrudt 16.

Andre specifikke tekniske detaljer, der berettiger omtale er anført nedenfor:

  1. Korrekt lokalisering og nulstilling af stereotaktisk udstyr på bregma (under mikroskopisk vejledning) er afgørende for inducing et vellykket slagtilfælde. Den stereotaktisk koordinater for ET-1 infusion bør kontrolleres for den specifikke eksperimentelt udstyr og rottestamme før eksperimenteren. Det er sandsynligt, at ingen læsion vil forekomme, hvis infusionen ikke ligger inden for 0,5 mm af MCA 6.
  2. Pas på ikke at beskadige hjernen, når der bores det oprindelige bur hul til guide kanylen. Det anbefales, at en langsom borehastighed anvendes til at starte boret hul og igen mod slutningen for at minimere chancerne for at trænge ind i hjernen.
  3. Ved boring bur huller til monteringsskruerne, skal du bruge omvendt kegle bore boret for at skabe en burre hul, der kun delvist trænger kraniet. Kun bore dybt nok, så skruerne er stabile.
  4. Når cementering kanylen på plads skal du sørge for at holde cement fri af huden samt den stereotaxiske arm. Cementen kan manipuleres før tørring ved hjælp af en vatpind.
  5. Vær sikker på cementen er helt dry og kanylen er stabil forud for fjernelse af kanylen holderen. Det er kritisk, at kanylen ikke bevæger sig forud for ET-1 injektion.
  6. Det er vores erfaring, har den ET-1 stroke model en cirka 20% dødelighed som følge af den kirurgiske procedure. Det er vigtigt at sammenligne dødeligheden mellem behandlingsgrupper og planlægger også eksperimenter, således at tilstrækkelige stikprøvestørrelser bruges til neurologiske og histologiske effektmål.
  7. Retningslinjer for prækliniske undersøgelser af akut slagtilfælde terapi anbefaler cerebral blodstrøm overvågning og fysiologiske monitorering af blodtryk, temperatur, glucose og blodgasser at reducere variabilitet ved forsøg 17. LDF er en metode, der kan anvendes til tidstro overvågning af blodgennemstrømning i forskellige anatomiske områder at kontrollere en forudbestemt tærskel for reduktion af strømningen er opnået.
  8. Vær sikker på at rense infusionen sprøjte og nål med ethanol og saltvand mellem injektioner, og ethanol føropbevaring. Denne procedure vil give konsekvent tilbagetrækning og injektion af ET-1without luftbobler eller blokeringer under drift.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklæret.

Acknowledgments

Dette arbejde blev støttet af tilskud fra American Heart Association Greater Southeast Affiliate (09GRNT2060421), American Medical Association, og fra University of Florida klinisk og translationel Science Institute. Adam Mekka er et NIH / NINDS, NRSA predoctoral fyr (F30 NS-060.335). Robert Regenhardt fik predoctoral stipendium støtte fra University of Florida Multidisciplinary Training Program i Hypertension (T32 HL-083.810).

Materials

  1. Animals: Eight-week-old, male, Sprague Dawley rats (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA) weighing 250-300 g at the time of surgery.
  2. Anesthesia:
    1. Inhalation anesthesia system (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA)
    2. Isoflurane anesthetic (Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA)
  3. Stereotaxic system (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA):
    1. Small animal stereotaxic system
    2. Non-rupture ear bars for rats
    3. Gas anesthesia head holder for rats
  4. Temperature regulation:
    1. BAT-12 microprobe thermometer (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA)
    2. T/PUMP, TP600 Thermal blanket (Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA)
  5. Surgical instruments
    1. Scalpel handle and #11 blade, iris forceps, Graefe forceps, bulldog clamp retractors, screwdriver, 10 μl syringe with 26 gauge beveled needle (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA)
    2. Micromotor drill and stereotaxic holder, Quintessential Stereotaxic Injector (St–lting, Wood Dale, IL, USA)
    3. 1.0 mm round drill bur, 1.0 mm inverted cone drill bur (Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, USA)
  6. Surgical Supplies
    1. Mounting screws 0-80 X 3/32 with 2.4 mm shaft length, 21-gauge guide cannula [4mm long below the pedestal] and cannula dummy (Plastics one, Roanoke, VA, USA)
    2. Jet denture acrylic and liquid (Lang Dental Manufacturing Co., Inc., Wheeling, IL, USA)
    3. 3.0 nylon suture (Oasis, Mettawa, IL, USA)
    4. Cotton swabs, Puralube eye ointment (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA)
    5. Electric hair clippers (Oster, Providence, RI, USA)
  7. Chemicals:
    1. Endothelin-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA)
    2. Chlorhexidine 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, USA)
    3. Buprenorphine HCl (Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA)
  8. Visualization Equipment
    1. Surgical microscope (Seiler Instrument and Manufacturing; St. Louis, MO, USA)
    2. Fiber Optic illuminator (TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA)
  9. Laser Doppler flowmetry system (ADInstruments, Inc., Colorado Springs, CO, USA)
    1. Standard Pencil Probe
    2. Probe holder
    3. Blood FlowMeter
    4. Powerlab 4/30 with LabChart 7
  10. Measurement of infarct volume:
    1. Rat brain matrix (Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, USA)
    2. 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, USA) diluted to 0.05% in PBS
    3. Flatbed scanner (Epson Perfection V30, Epson America, Inc., Long Beach, CA, USA)
    4. Image J software (ImageJ 1.42q software, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Stroke--1989. Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke. 20, 1407-1431 (1989).
  2. Lloyd-Jones, D., et al. Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 119, 480-486 (2009).
  3. Mohr, J. P., Gautier, J. C., Hier, D., Stein, R. W. Stroke: pathophysiology, diagnosis, and management. Barnett, H. J. M., Stein, B. M., Mohr, J. P., Yatsu, F. M. , Churchill Livingstone. New York. 377-450 (1986).
  4. Robinson, M. J., Macrae, I. M., Todd, M., Reid, J. L., McCulloch, J. Reduction of local cerebral blood flow to pathological levels by endothelin-1 applied to the middle cerebral artery in the rat. Neurosci. Lett. 118, 269-272 (1990).
  5. Sharkey, J., Ritchie, I. M., Kelly, P. A. Perivascular microapplication of endothelin-1: a new model of focal cerebral ischaemia in the rat. J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 865-871 (1993).
  6. O'Neill, M. J., Clemens, J. A. Rodent models of focal cerebral ischemia. Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9 (Unit 9), (2001).
  7. Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion. Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).
  8. Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems. Exp. Transl. Stroke Med. 1, 8 (2009).
  9. Tomsick, T. A. Intravenous thrombolysis for acute ischemic stroke. J. Vasc. Interv. Radiol. 15, 67-76 (2004).
  10. Olsen, T. S., Lassen, N. A. A dynamic concept of middle cerebral artery occlusion and cerebral infarction in the acute state based on interpreting severe hyperemia as a sign of embolic migration. Stroke. 15, 458-468 (1984).
  11. Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. J. Vis. Exp. (47), e2586 (2011).
  12. Gonzalez, C. L., Kolb, B. A comparison of different models of stroke on behaviour and brain morphology. Eur. J. Neurosci. 18, 1950-1962 (2003).
  13. Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice. J. Vis. Exp. (51), e2879 (2011).
  14. Sharkey, J., Butcher, S. P. Characterisation of an experimental model of stroke produced by intracerebral microinjection of endothelin-1 adjacent to the rat middle cerebral artery. J. Neurosci. Methods. 60, 125-131 (1995).
  15. Macrae, I. M., Robinson, M. J., Graham, D. I., Reid, J. L., McCulloch, J. Endothelin-1-induced reductions in cerebral blood flow: dose dependency, time course, and neuropathological consequences. J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 276-284 (1993).
  16. Mecca, A. P., et al. Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke. Exp. Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).
  17. Fisher, M., et al. Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations. Stroke. 40, 2244-2250 (2009).

Tags

Medicin Neuroscience Neurobiology Biomedical Engineering Kirurgi anatomi fysiologi sygdomme i nervesystemet iskæmisk slagtilfælde Endothelin-1 cerebrovaskulære hjerne arterie slagtilfælde okklusion laser doppley flowmetri rotte dyremodel
Endothelin-1-induceret mellem-cerebral arterieokklusion Model for iskæmisk slagtilfælde med laser-doppler-flowmetri Vejledning i Rat
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ansari, S., Azari, H., Caldwell, K.… More

Ansari, S., Azari, H., Caldwell, K. J., Regenhardt, R. W., Hedna, V. S., Waters, M. F., Hoh, B. L., Mecca, A. P. Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat. J. Vis. Exp. (72), e50014, doi:10.3791/50014 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter