Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Endotelin-1 Induced Middle Cerebral arterieokklusjon Modell for iskemisk slag med laser Doppler Flowmetry Veiledning i Rat

Published: February 16, 2013 doi: 10.3791/50014
Automatic Translation
1, 2, 1, 3, 4, 4, 1, 3
1Department of Neurosurgery, University of Florida, 2Department of Anatomical Sciences, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran, 3Department of Physiology and Functional Genomics, University of Florida, 4Department of Neurology, University of Florida

Summary

Flere dyremodeller av cerebral ischemi er utviklet for å simulere den menneskelige tilstand av hjerneslag. Denne protokollen beskriver endotelin-1 (ET-1) indusert midtre cerebralarterie okklusjon (MCAO) modell for hjerneinfarkt hos rotter. I tillegg, er viktige hensyn, fordeler, og mangler ved denne modellen diskutert.

Abstract

Hjerneslag er nummer én årsak til uførhet og tredje største dødsårsaken i verden, koster anslagsvis $ 70 milliarder i USA i 2009 1, 2. Flere modeller av cerebral iskemi har blitt utviklet for å etterligne den menneskelige tilstand av hjerneslag. Det har vært antydet at opp til 80% av alle slag resultat fra iskemisk skade i den midtre cerebralarterie (MCA) området 3. I begynnelsen av 1990, endotelin-1 (ET-1) 4 ble brukt for å indusere iskemi ved å anvende det direkte ved siden av overflaten av MCA etter kraniotomi. Senere ble denne modellen modifisert ved å bruke 5 en stereotaksisk injeksjon av ET-1 ved siden av MCA å produsere fokal cerebral iskemi. De viktigste fordelene med denne modellen inkluderer evnen til å utføre prosedyren raskt, evnen til å kontrollere arterie innsnevring ved å endre dosen av ET-1 levert, uten å måtte manipulere ekstrakraniale tilførselsårer blod til hjernen samt gradvis reperfusipå priser som mer etterligner reperfusjon hos mennesker 5-7. På den annen side, har de ET-1 modellen ulemper som inkluderer behovet for en kraniotomi, samt høyere variasjon i slagvolum 8. Denne variasjonen kan reduseres med bruk av laser Doppler flowmetry (LDF) å verifisere cerebral ischemi under ET-1 infusjon. Faktorer som påvirker hjerneslag variasjon inkluderer presisjon infusjon og batch av ET-1 brukt 6. Et annet viktig hensyn er at selv reperfusjon er en vanlig forekomst i menneskelig slaget, kan varigheten av okklusjon for ET-1-fremkalt MCAO ikke nøye etterligner av menneskehår hjerneslag der mange pasienter har partiell reperfusjon over en periode på timer til dager etter okklusjon 9, 10. Denne protokollen vil beskrive i detalj den ET-1 indusert MCAO modell for hjerneinfarkt hos rotter. Det vil også gjøre oppmerksom på spesielle hensyn og potensielle ulemper gjennom hele prosedyren.

Protocol

Denne protokollen ble godkjent av Institutional Animal Care og bruk komité (IACUC) ved University of Florida, og er i samsvar med "Guide for omsorg og bruk av forsøksdyr" (åttende utgave, National Academy of Sciences, 2011).

Materialer

  1. Dyr: Åtte uker gamle, hann, Sprague Dawley rotter (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA) som veier 250-300 g ved tidspunktet for kirurgi.
  2. Anestesi
    1. Innånding anestesi system (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA)
    2. Isofluran bedøvelse (Baxter Farmasi, Deerfield, IL, USA)
  3. Stereotaksiske system (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA)
    1. Små dyr stereotaksiske system
    2. Non-ruptur øret barer for rotter
    3. Gassanestesi hodet holder for rotter
  4. Temperaturregulering
    1. BAT-12 mikrosonde termometer (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, Florida, USA)
    2. T / PUMP, TP600 varmeteppe (Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA)
  5. Kirurgiske instrumenter
    1. Skalpell håndtak og # 11 blad, iris tang, Graefe tang, klypen retractors, skrutrekker, 10 ul sprøyte med 26 gauge skrå nål (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, Florida, USA)
    2. Micromotor drill og stereotaksiske holder, Quintessential stereotaksiske Injector (Stoelting, Wood Dale, IL, USA)
    3. 1,0 mm runde drill bur, 1,0 mm omvendt kjegle drill bur (Roboz Surgical Instrument Co, Inc., Gaithersburg, MD, USA)
  6. Kirurgiske forsyninger
    1. Monteringsskruer 0-80 x 3/32 med 2,4 mm aksel lengde, 21-gauge guide kanyle [4mm lang under sokkelen] og kanyle dummy (Plast en, Roanoke, VA, USA)
    2. Jet protese akryl og væske (Lang Dental Manufacturing Co, Inc., Wheeling, IL, USA)
    3. 3,0 nylon sutur (Oasis, Mettawa, IL, USA)
    4. Bomullspinner, Puralube øyesalve (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA)
    5. Elektriske hårklippere (Oster, Providence, RI, USA)
  7. Kjemikalier
    1. Endotelin-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA)
    2. Klorheksidin 2% (Agrilabs, St. Joseph, Missouri, USA)
    3. Buprenorfin HCl (Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA)
  8. Visualisering Utstyr
    1. Kirurgisk mikroskop (Seiler Instrument og produksjon, St. Louis, MO, USA)
    2. Fiberoptisk lys (TechniQuip Corp, Livermore, CA, USA)
  9. Laser Doppler flowmetry system (ADInstruments, Inc., Colorado Springs, CO, USA)
    1. StAndard Pencil Probe
    2. Probe holder
    3. Blood Flowmeter
    4. Powerlab 4/30 med LabChart 7
  10. Måling av infarktvolum
    1. Rottehjernen matrise (Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, USA)
    2. 2,3,5-triphenyltetrazolium klorid (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) fortynnet til 0,05% i PBS
    3. Planskanner (Epson Perfection V30, Epson America, Inc., Long Beach, California, USA)
    4. Bilde J-programvaren (ImageJ 1.42q programvare, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA)

1. Pre-kirurgiske Steps

  1. Før operasjonen, er rotter plassert under en 12:12 lys / mørke syklus med fri tilgang til vann og gnager chow.
  2. Anestesi indusert med 4% isofluran i 100% O 2 gassblanding i induksjonsovn vannkammeret til rotte ikke lenger uttak til bakre pote klype.
  3. Aseptisk teknikk bør opprettholdes under denne prosedyren inkludert bruk av sterile hansker, sterile kirurgiske instrumenter, og en steril kirurgisk drapere 11.
  4. Kronen av hodet er barbert med elektriske hårklippere.
  5. Rotten plasseres i liggende stilling på en absorberende pute som ligger på en temperatur-kontrollert betjeningsflate (varmeteppe).
  6. Hodet er plassert i stereotaktisk anordningen starter med plassering av gassen bedøvelse ansiktsmaske.
  7. Deretter blir øret barer satt inn og strammet.
  8. Under prosedyren anestesi opprettholdes med 2% isofluran i 100% O 2 gassblanding.
  9. Smøremiddel oftalmisk salve påføres på begge øyne, og øyelokkene er lukket for å hindre øye uttørring under den kirurgiske prosedyren.
  10. En rektal temperaturprobe settes for å opprettholde en konstant dyr kjernetemperatur 37 ± 0,5 ° C.
  11. Med hodet holdes fast i stereotaksiskeenhet, er det kirurgiske området renset med alternerende 2% klorheksidin og saltvann tre ganger.

2. Kirurgiske Steps

  1. Ved hjelp av en skalpell, en midtlinjesnitt gjort på huden overliggende calvarium fra de mest caudal aspekter av øynene (nasion) til mellom ørene (superior nuchal linje).
  2. Huden blir deretter trukket sideveis med tre bulldog klemmer.
  3. Bindevev fjernes fra skallen hjelp tørr bomullspinner slik at flere strukturer kan sees tydelig. Disse inkluderer bregma, koronale sutur, og rett lateral skallen ryggen. Bomullspinner benyttes til å fjerne blod fra det kirurgiske felt.
  4. Bruke kirurgisk mikroskop, er bregma plassert, og de stereotaksiske manipulatorer justeres inntil 1,0 mm rund drill bur er satt til null ved bregma.
  5. Drillen bur blir deretter flyttet til 1,6 mm anterior og 5,2 mm lateralt for bregma.
  6. En bur hull som penetrerer skallen er boret for CannUla plassering (Figur 1). Overflødig rusk og blod er stadig ryddet ved hjelp bomullspinner.

På dette punktet, kan en guide kanylen settes (trinn 7), eller en direkte ET-1 injeksjon gjennom Bur hullet kan utføres (gå direkte til trinn 16).

  1. Neste, bur hull for tre monteringsskruer bores gjennom delvis tykkelsen av skallen med en 1,0 mm omvendt kjegle drill bur (figur 1). Ett hull er boret i hver pannebenet 1-2 mm anterior til koronale sutur og 1-2 mm lateralt for sagittal sutur. Ett hull er boret i issebeinet ca 2-3 mm posteriort for koronale sutur og 2-3 mm lateralt for sagittal sutur ipsilaterale til guiden kanylen bur hull. Tre 0-80 x 3/32 skruer er plassert i disse bur hull og vil gi støtte til sementen som holder i kanylen. Skruene bør bare bli avansert 2 eller 3 omdreininger for ikke å skade dura saken. Guiden kanyle plasseres i stereotaksiske kanyleholderen og bregma ligger.
  2. De stereotaksiske manipulatorer justeres inntil guiden kanylen er satt til null ved bregma. Kanylen er flyttet til bur hullet 1,6 mm anterior og 5,2 mm lateralt for bregma.
  3. Endelig er guiden kanyle senket ned i bur hullet med den siste spissen posisjonen av 4,5 mm ventral til bregma.
  4. Laser Doppler flow probe plassering (valgfritt)
    1. For å kunne overvåke cerebral blodstrøm hjelp LDF, kan en sonde holderen plasseres i posisjon før anbringelse guiden kanyle med dental sement.
    2. Sonden holder basen er trimmet i flukt med pidestall unntatt for lite kileformet kategorien.
    3. Sonden holderen anbringes deretter posterior til guiden kanylen og bare mediale til laterale skallen ridge med tappen orientert medialt (Figur 1).
    4. Sonden holder og guide kanyle er festet sammen ved hjelp av dental sement.
  5. Dental sement blir deretter brukt for å sikre at kanylen på plass. Sementen er i kontakt med alle tre skruer og omgir hele basen av kanylen.
  6. Sementen bør være helt tørt før fjerning av kanyleholderen. Dette tar ca 5 min.

Etter denne fremgangsmåten kan det kirurgiske innsnitt lukkes og kanylen dummy kan skrus inn i guiden kanylen. Alternativt, kan ET-1-fremkalt MCAO utføres på rotte etter en periode med utvinning fra kanylen implantering kirurgi. For denne metode, bør trinnet 19 utføres neste og trinn 14-18 kan utføres på et senere tidspunkt. Å utføre bruksanvisning kanyle implantasjon og ET-1 injeksjon i løpet av samme operasjon, bør trinnet 14 utføres neste.

  1. Infusjonen sprøyten er lastet med ET-1 (fortynnet til 80 uM i PBS) og deretter montert i stereotaksiske injektoren.
  2. Denstereotaksiske manipulatorer justeres inntil nålespissen er satt til null ved kanten av guiden kanylen.
  3. Nålespissen senkes gjennom veiledningen kanyle til en stilling på 17,2 mm ventral til randen av guiden kanylen. Hvis en guide kanyle ikke brukes, blir satt til null ved nålespissen bregma og senket gjennom bur hullet til en posisjon 8,7 mm ventralt for bregma.
  4. 3 pl av 80 pM ET1 er infusert med en hastighet på 1 ul per min.
  5. Sprøyten er igjen på plass i 3 min etter avsluttet infusjon og deretter langsomt fjernet.
  6. Snittet er lukket med 3,0 nylon sutur og kanylen dummy er skrudd inn i kanylen.
  7. En dose på riktig smertestillende (dvs. buprenorfin på 0.05 til 0.1 mg / kg) bør brukes etter operasjonen for å redusere smerte og ubehag under utvinning perioden.
  8. Rotten blir fjernet fra det kirurgiske suite og plassert i et varmt, tørt utvinning området for å hindre nedkjøling, med fri, lett tilgang til myk mat og vann.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

1. Post-Op nevrologisk utredning

Etter at dyret gjenvinner bevisstheten, kan et bredt utvalg av tester kan brukes for å evaluere nevrologiske underskudd inkludert balanse, gripestyrke, labben plassering, postural asymmetri og trapp klatring. Den solsikkefrø oppgave er en grov vurdering av motorisk og sensorisk funksjon som har signifikant korrelasjon med infarktvolum 7, 12. I løpet av denne oppgaven, er rotter tidsbestemt under åpning og forbruker 5 solsikkefrø. De fem frø er plassert i et hjørne av en tom, tørr, plast bur og tidsbruk manipulere frøene er registrert. I tillegg er antallet skall stykker i buret etter at alle frø har blitt åpnet og forbrukes registrert. Rotter med større nevrologiske underskudd vil ta lengre tid å åpne og konsumere frøene og vil bryte skjell i flere biter. Selv om ikke en formell del av denne oppgave, er det lett å observere hyppige mishandling og dropping av solsikkefrøs av rotter etter eksperimentell slag. Dette inkluderer bruk av primært en forlabben og ineffektive biting av skallet under forsøk på å åpne.

2. Flekker og kvantitativ måling av hjernen infarktvolum

Etter okklusjon og reperfusjon av MCA å etablere forbigående cerebral ischemi, dyr avlives og deres coronally sectioned hjerner er farget med 2,3,5-triphenyltetrazolium klorid (TTC) for å evaluere infarktvolum (figur 2) som diskutert i våre tidligere publikasjoner 7, 13.

Figur 1
Figur 1. Dorsal visning av rotte skallen skildrer maskinvare plassering. Denne dorsal visning av rotte skallen med fremre orientert til venstre viser plasseringen av bregma og lambda med hensyn til suturene som kan visualiseres etter avregning connectivevev fra skallen overflaten. Den laterale skull ryggen, guide kanyle, LDF probe holder, og forankring skruer er også vist i diagrammet med relative forhold til skallen land merkene og hverandre.

Figur 2
Figur 2. TTC-beiset serielle koronale hjernen seksjoner (2 mm) fra rotte underkastet ET-1-fremkalt MCAO. Et representativt hjerne fra en rotte etter ET-1-fremkalt MCAO vises. Dette hjerne ble fjernet og skylt i iskaldt PBS før du blir delt coronally i 2 mm tykke seksjoner starter bare Caudal til olfactory pærer. Sektorene ble deretter inkubert i 0,05% TTC fortynnet i PBS ved 37 ° C før den blir bråkjølt i PBS og deretter fast kort i formalin. Tissue farget rødt etter eksponering for TTC representerer levedyktig grå materie. Den levedyktig grå materie i halvkule ipsilaterale til ET-1 injeksjon kan sammenlignes med den grå mAtter av kontralaterale halvkule for å beregne arealet av cerebral infarkt.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

ET-1 induserte MCAO er en etablert modell av eksperimentell hjerneinfarkt som brukes regelmessig i flere rotter stammer. Mange variabler, slik som rotte belastning, dyr alder, kroppstemperatur, anestesi metoden, og operatør ekspertise kan føre til økt variasjon i infarkt volumer når bruke denne modellen 5, 14. Imidlertid har flere etterforskere vist at fordelene ved denne modellen inkluderer relativt ikke-invasiv tilnærming, doserespons av cerebral blodstrøm til ET-1, og evne til å unngå anestesi helt ved infusjon av ET-1 i bevisste rotter 14, 15. Det er bemerkelsesverdig at det er mange forskjeller i rotte belastning og alder brukes i hele litteraturen, og det er ikke overraskende at ulike stereotaksiske koordinater rapporteres avhengig disse variablene. Koordinatene brukt i protokoll vår er optimalisert for 8 uker gamle hann Sprague Dawley rotter. Eventuelle avvik fra denne belastningen, kjønn eller alder vil trolig kreve intracerebral injisereion av fargestoff etterfulgt av obduksjon for å identifisere gyldige koordinater for denne prosedyren. I tillegg, er ET-1 indusert reduksjon i cerebral blodstrøm doseavhengig. Dosen bruk i denne metoden fører til en infarkt av ca 30-40% av den grå materie i halvkulen ipsilaterale til injeksjon med en standard feil av gjennomsnittet av 4-5% i et eksperiment 7, 16. Direkte visualisering av proksimale deler av MCA avslører en luminal diameter som går til 0% av baseline innen 3 minutter og går tilbake til baseline på ca 30 min 7. Bruke LDF ble maksimal flyt vist seg å redusere til ca 10% av baseline flyt i 5-7 minutter med gradvis tilbakevending til 60% av baseline etter 1 time som overvåking ble avviklet 16.

Andre spesifikke tekniske detaljer som garanterer omtale er listet opp nedenfor:

  1. Riktig lokalisering og nullstille stereotaksiske utstyr på bregma (under mikroskopisk veiledning) er avgjørende for å inducing en vellykket slag. Den stereotaksiske koordinatene til ET-1 infusjon bør verifiseres for den spesifikke eksperimentelt utstyr og rotte belastning før eksperimentering. Det er sannsynlig at ingen lesjonen vil oppstå hvis infusjonen er ikke innenfor 0,5 mm fra MCA 6.
  2. Pass på å ikke forårsake skade på hjernen når du borer den første bur hull for guiden kanyle. Det anbefales at en langsom borehastighet bli brukt til å starte bur hullet og igjen mot slutten for derved å minske sjansene for å trenge inn i hjernen.
  3. Ved boring bur hull for festeskruene, bruker omvendt kjegle drill bur for å lage en bur hull som bare delvis penetrerer skallen. Bare bore dypt nok slik at skruene er stabile.
  4. Når sementere kanylen på plass være sikker på å holde sementen klar av huden samt stereotaksiske arm. Sementen kan manipuleres før tørking med en bomullspinne.
  5. Vær sikker på at sementen er helt dry og kanylen er stabil før fjerning av kanyleholderen. Det er kritisk at kanylen ikke flytte før ET-1 injeksjon.
  6. I vår erfaring har ET-1 firetaktsmotor en ca 20% dødelighet på grunn av den kirurgiske prosedyren. Det er viktig å sammenligne dødeligheten mellom behandlingsgruppene og planlegger også eksperimenter slik at tilstrekkelig utvalgsstørrelser brukes for nevrologiske og histologiske endepunkter.
  7. Retningslinjer for prekliniske studier for akutt hjerneslag terapi anbefaler cerebral blodstrøm overvåking og fysiologiske overvåking av blodtrykk, temperatur, glukose og blod gasser for å redusere variasjon under eksperimenter 17. LDF er en metode som kan brukes for sanntids overvåkning av blodstrømmen i forskjellige anatomiske regioner å verifisere en forutbestemt terskel for reduksjon i strømning er oppnådd.
  8. Sørg for å rengjøre infusjon sprøyten med etanol og saltvann mellom injeksjoner, og etanol førlagring. Denne prosedyren vil gi konsistent tilbaketrekking og injeksjon av ET-1without luftbobler eller blokkeringer i drift.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Ingen interessekonflikter erklært.

Acknowledgments

Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra American Heart Association Greater Sørøst Affiliate (09GRNT2060421), American Medical Association, og fra University of Florida klinisk og translasjonsforskning Science Institute. Adam Mekka er en NIH / NINDS, NRSA predoctoral kar (F30 NS-060335). Robert Regenhardt fikk predoctoral fellesskap støtte fra University of Florida Tverrfaglig Training Program i Hypertension (T32 HL-083810).

Materials

  1. Animals: Eight-week-old, male, Sprague Dawley rats (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA) weighing 250-300 g at the time of surgery.
  2. Anesthesia:
    1. Inhalation anesthesia system (VetEquip Inc., Pleasanton, CA, USA)
    2. Isoflurane anesthetic (Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL, USA)
  3. Stereotaxic system (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA):
    1. Small animal stereotaxic system
    2. Non-rupture ear bars for rats
    3. Gas anesthesia head holder for rats
  4. Temperature regulation:
    1. BAT-12 microprobe thermometer (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA)
    2. T/PUMP, TP600 Thermal blanket (Gaymar Industries, Inc., Orchard Park, NY, USA)
  5. Surgical instruments
    1. Scalpel handle and #11 blade, iris forceps, Graefe forceps, bulldog clamp retractors, screwdriver, 10 μl syringe with 26 gauge beveled needle (World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA)
    2. Micromotor drill and stereotaxic holder, Quintessential Stereotaxic Injector (St–lting, Wood Dale, IL, USA)
    3. 1.0 mm round drill bur, 1.0 mm inverted cone drill bur (Roboz Surgical Instrument Co., Inc., Gaithersburg, MD, USA)
  6. Surgical Supplies
    1. Mounting screws 0-80 X 3/32 with 2.4 mm shaft length, 21-gauge guide cannula [4mm long below the pedestal] and cannula dummy (Plastics one, Roanoke, VA, USA)
    2. Jet denture acrylic and liquid (Lang Dental Manufacturing Co., Inc., Wheeling, IL, USA)
    3. 3.0 nylon suture (Oasis, Mettawa, IL, USA)
    4. Cotton swabs, Puralube eye ointment (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA)
    5. Electric hair clippers (Oster, Providence, RI, USA)
  7. Chemicals:
    1. Endothelin-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA)
    2. Chlorhexidine 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, USA)
    3. Buprenorphine HCl (Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA)
  8. Visualization Equipment
    1. Surgical microscope (Seiler Instrument and Manufacturing; St. Louis, MO, USA)
    2. Fiber Optic illuminator (TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA)
  9. Laser Doppler flowmetry system (ADInstruments, Inc., Colorado Springs, CO, USA)
    1. Standard Pencil Probe
    2. Probe holder
    3. Blood FlowMeter
    4. Powerlab 4/30 with LabChart 7
  10. Measurement of infarct volume:
    1. Rat brain matrix (Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, USA)
    2. 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, USA) diluted to 0.05% in PBS
    3. Flatbed scanner (Epson Perfection V30, Epson America, Inc., Long Beach, CA, USA)
    4. Image J software (ImageJ 1.42q software, U.S. National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Stroke--1989. Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke. 20, 1407-1431 (1989).
  2. Lloyd-Jones, D., et al. Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 119, 480-486 (2009).
  3. Mohr, J. P., Gautier, J. C., Hier, D., Stein, R. W. Stroke: pathophysiology, diagnosis, and management. Barnett, H. J. M., Stein, B. M., Mohr, J. P., Yatsu, F. M. , Churchill Livingstone. New York. 377-450 (1986).
  4. Robinson, M. J., Macrae, I. M., Todd, M., Reid, J. L., McCulloch, J. Reduction of local cerebral blood flow to pathological levels by endothelin-1 applied to the middle cerebral artery in the rat. Neurosci. Lett. 118, 269-272 (1990).
  5. Sharkey, J., Ritchie, I. M., Kelly, P. A. Perivascular microapplication of endothelin-1: a new model of focal cerebral ischaemia in the rat. J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 865-871 (1993).
  6. O'Neill, M. J., Clemens, J. A. Rodent models of focal cerebral ischemia. Curr. Protoc. Neurosci. Chapter 9 (Unit 9), (2001).
  7. Mecca, A. P., O'Connor, T. E., Katovich, M. J., Sumners, C. Candesartan pretreatment is cerebroprotective in a rat model of endothelin-1-induced middle cerebral artery occlusion. Exp. Physiol. 94, 937-946 (2009).
  8. Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems. Exp. Transl. Stroke Med. 1, 8 (2009).
  9. Tomsick, T. A. Intravenous thrombolysis for acute ischemic stroke. J. Vasc. Interv. Radiol. 15, 67-76 (2004).
  10. Olsen, T. S., Lassen, N. A. A dynamic concept of middle cerebral artery occlusion and cerebral infarction in the acute state based on interpreting severe hyperemia as a sign of embolic migration. Stroke. 15, 458-468 (1984).
  11. Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. J. Vis. Exp. (47), e2586 (2011).
  12. Gonzalez, C. L., Kolb, B. A comparison of different models of stroke on behaviour and brain morphology. Eur. J. Neurosci. 18, 1950-1962 (2003).
  13. Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice. J. Vis. Exp. (51), e2879 (2011).
  14. Sharkey, J., Butcher, S. P. Characterisation of an experimental model of stroke produced by intracerebral microinjection of endothelin-1 adjacent to the rat middle cerebral artery. J. Neurosci. Methods. 60, 125-131 (1995).
  15. Macrae, I. M., Robinson, M. J., Graham, D. I., Reid, J. L., McCulloch, J. Endothelin-1-induced reductions in cerebral blood flow: dose dependency, time course, and neuropathological consequences. J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 276-284 (1993).
  16. Mecca, A. P., et al. Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke. Exp. Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).
  17. Fisher, M., et al. Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations. Stroke. 40, 2244-2250 (2009).

Tags

Medisin nevrovitenskap nevrobiologi Biomedical Engineering kirurgi anatomi fysiologi Nevrologiske sykdommer hjerneinfarkt Endotelin-1 Cerebrovaskulær hjerne lunge hjerneslag okklusjon laser doppley flowmetry rotte dyremodell
Endotelin-1 Induced Middle Cerebral arterieokklusjon Modell for iskemisk slag med laser Doppler Flowmetry Veiledning i Rat
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Ansari, S., Azari, H., Caldwell, K.… More

Ansari, S., Azari, H., Caldwell, K. J., Regenhardt, R. W., Hedna, V. S., Waters, M. F., Hoh, B. L., Mecca, A. P. Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat. J. Vis. Exp. (72), e50014, doi:10.3791/50014 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter