preadipocytes הלבן העיקרי שבודד מרקמות שומן לבנות בעכברים יכול להיות מובחן לתאים בז'ים / brite. מוצג כאן הוא מודל למערכת סלולרית אמינה ללמוד רגולציה המולקולרית של "השחמה" של שומן לבן.
adipocytes בראון יש את היכולת להפריד בין שרשרת הנשימה במיטוכונדריה, ולפזר את האנרגיה כימית בצורה חומה. פיתוח adipocytes החום UCP1 החיובי ברקמות שומן לבנות (כך נקרא תאי צבע בז'ים או brite) מושרה מאוד על ידי מגוון של רמזים סביבתיים כמו חשיפה לקור כרונית או על ידי אגוניסטים PPARγ, ולכן, סוג תא זה יש פוטנציאל כמטרה טיפולית עבור טיפול בהשמנה. למרות קווי adipocyte רוב הנציחו לא יכולים לסכם את התהליך "ההשחמה" של שומן לבן בתרבות, adipocytes העיקרי מבודד משבריר כלי דם סטרומה ברקמת שומן לבן תת עורית (WAT) לספק רשת סלולרית אמינה ללמוד בקרה המולקולרית של התפתחות תא בז' / brite . כאן אנו מתארים פרוטוקול לבידוד יעיל של preadipocytes היסודי וגרימת התמיינות לתאים בז'ים / brite בתרבות. אפקט ההשחמה יכול להיות מוערך על ידי הביטוי של מארק בראון שומן סלקטיביתהתעמלות כגון UCP1.
השמנת יתר היא להגדיל באופן משמעותי בעולם וכיום הוא נחשב לאחד מהחששות הכבדים ביותר לבריאות ציבור 1. מצב זה קשור לmisbalance בצריכת אנרגיה ביחס להוצאות ותוצאות בעודף אנרגיה מאוחסנת כשומן ברקמת שומן לבנה (WAT). WAT המוגדל קשור למסת גוף מוגבר ומשקל, בעוד שרקמת שומן חום יש את היכולת לפזר אנרגיה עודפת כדי לייצר חום. לפיכך BAT יכול לתפקד כהגנה מפני קור והן השמנת 2,3. זו מושגת על ידי תרה של מעבר האלקטרונים במיטוכונדריה ידי מתיר חלבון 1 (UCP1). חלבון זה נחשב סימן היכר לnonshivering התרמוגנזה בBAT 3. מספר מחקרים בשנים האחרונות גילו כי בני אדם בוגרים יש 4-8 BAT פונקציונליים וכתוצאה מכך, מניפולציה של BAT בבני אדם יכולה להיות התערבות טיפולית פוטנציאלית במאבק נגד השמנת יתר והמחלות הקשורות בו.
jove_content "> ראיות נוכחיות מצביע על כך ששני סוגים של adipocytes החום קיימים במכרסמים;" קלסי "או" קיים מראש "שומן החום מתפתח בשלב טרום הלידה ומהווה מחסני שומן חומים ייעודיים באזור interscapular ורקמות היקפיות אחרות מצד השני. , טופס "מושרה" של שומן חום (כך נקרא תאי Brite או בז'ים) מתפתח בשלב שלאחר הלידה וביניהם מופיע ברקמות שומן לבנות. שני הסוגים של adipocytes החום גם הם מופרדים על ידי מקורות התפתחותיים שונים. אמנם קיים מראש adipocytes החום נובע מmyoblastsic הדמוי Myf5 מבשרים, את התאים המושרים Brite / בז'ים שזורים בWAT לנבוע משושלת הלא Myf5 9,10. בנוסף, מסלולים רגולטוריים של סוג תא זה עשויים להיות שונה מהחום המופק מMyf5 adipocytes 11. ההתפתחות של תאים בצבע הבז'ים (כלומר "השחמה" של שמן ולבן) ניתן להפעיל בתגובה לחשיפה לקור כרונית וכדיβ3-adrenoceptor-אגוניסטים או אגוניסטים PPARγ במבוגרים 12-14. התאים הבז'ים / brite עשויים להיות מטרה טיפולית מבטיחה עבור מניפולציה של מאזן אנרגיה כוללת ובאופן פוטנציאלי יכולים להיות חלק מטיפול בהשמנה, ולכן, חשוב להבין מנגנונים מולקולריים מדויקים ומסלולי איתות שבו רמזים סביבתיים שולטים פיתוח בז' תאים.כדי להבין את השליטה המולקולרית של ההשחמה של שמן ולבן, בניסויים במבחנה הם מתאימים ביותר כבידול של preadipocytes מתרחש ולא באופן אסינכרוני, וקשה לזהות את התאים באתר 15. למרות שמחקרים על התפתחות adipocyte שעד כה בוצעו בעיקר על שורות תאים כגון-L1 3T3, 3T3-F442A או HIB1, שורות תאים אלה נראות חסרי החתימה המולקולרית של תאים בצבע בז'ים. מצד השני, adipocytes העיקרי שבודד מתת עורית WAT הוא סיכוי טוב ביותר לסכם על procesהים של השחמה של שומן לבן בצורה אוטונומית תא. כאן אנו מספקים פרוטוקול לבידוד יעיל של שבריר סטרומה וכלי דם מרקמות שומן וגרימת ההשחמה של שומן לבן בתגובה לאגוניסטים PPARγ. Rosiglitazone הוכח להיות מתווך יעיל במיוחד של השחמה בתאים אלה. כפי שהציע בעבר 16, רשת סלולרית זה יכול לשמש כדי לשרת את המערכת סלולרית אמינה ללמוד על התפתחות תאים בז'ים / brite.
כאן אנו מציגים מערכת סלולרית אמינה ללמוד על התפתחות תאים בז'ים / brite בadipocytes תרבית הראשוני בעכברים. בהשוואה לכמה שורות תאים הנציחו זמינות, מערכת זו היא צפויה להציע רלוונטית משופרת להשחמה של לבן שומן בגוף חי.
למרות שהמחקר של ad…
The authors have nothing to disclose.
אנו מודים Haruya אונו, Kosaku ינודה, לואיס ארפ, אמי Tomoda, ולורן רואיז לדיון, עזרה טכנית וסיוע בעריכת כתב היד. עבודה זו נתמכה על ידי מענקים מהמכון הלאומי לבריאות (DK087853), מהתכנית למחקר ביו פריצת הדרך ומAsubio פארם בע"מ לSKULA היה נתמך על ידי מלגות מנית דוקטורט מאוניברסיטת קופנהגן והאיחוד האירופי FP7 פרויקט DIABAT (בריאות-F2 -2,011-278,373) לליז מדסן וקרסטן Kristiansen. אנחנו גם מכירים DERC מרכז המענק (NIH P30 DK063720).
Reagent | |||
Collaginase D | Roche | 11088874103 | |
Dispase II | Roche | 04942078001 | |
CaCl2 | |||
DMEM medium | Fisher | 10017-CV | With 2,5 g/l glucose & L-glutamine without sodium pyruvate |
Insulin | |||
T3 (3,3′,5-Triiodo-L-thyronine) | Sigma | T-2877 | |
Indomethacin | Sigma | I-7378 | |
Dexamethasone | Sigma | D-1756 | |
IBMX | Sigma | I-5879 | |
Rosiglitazone | Sigma | R-2408 | |
Equipment | |||
Collagen coated dishes | BD | 354450 | 10 cm plates |
70 μm filter | BD Falcon | 352350 | Cell strainer,70 μm nylon 1/ea |