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Artigo de método

Largo-campo microscopia de fluorescência e citometria de fluxo fluorescente de imagens em um telefone celular

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DOI:

10.3791/50451

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11 de abril de 2013

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Neste artigo

Resumo

Analisamos nossos resultados recentes sobre a integração de microscopia de fluorescência e ferramentas de imagem de citometria de fluxo em um telefone celular usando compactos e de baixo custo opto-fluídicos anexos. Estes celular baseado micro-dispositivos de análise pode ser útil para a análise citométrica, como a realização de tarefas de contagem de células diferentes, bem como para rastreio de alto rendimento de amostras, por exemplo, água em ambientes com recursos limitados.

Resumo

Microscopia de fluorescência e citometria de fluxo são amplamente utilizadas ferramentas na pesquisa biomédica e diagnóstico clínico. No entanto, estes dispositivos são, em geral, relativamente volumosos e dispendiosos, tornando-as menos eficazes para os ambientes com recursos limitados. Para potencialmente resolver estas limitações, que recentemente demonstraram a integração do grande campo de microscopia de fluorescência e ferramentas de imagem de citometria de fluxo em telefones celulares usando compacto, leve, e de custo-benefício opto-fluídicos anexos. Na nossa concepção de citometria de fluxo, as células marcadas por fluorescência são lavadas por meio de um canal microfluídico que está posicionado por cima da unidade de câmara existente telemóvel. Alimentados por bateria diodos emissores de luz (LEDs) são butt-acoplada ao lado do chip de microfluidos, que actua efectivamente como um guia de ondas multi-modo de laje, onde a luz de excitação é guiada para excitar uniformemente os alvos fluorescentes. A câmera de celular grava um filme lapso de tempo de as células fluorescentes que fluem atravéso canal microfluídico, onde os quadros digital deste filme são processados ​​para contar o número de células marcadas dentro de solução alvo de interesse. Usando um projeto opto-fluídico semelhante, também podemos imagem dessas células marcadas com fluorescência no modo estático, por exemplo, imprensando as partículas fluorescentes entre duas lâminas de vidro e capturar suas imagens fluorescentes usando a câmera de telefone celular, que podem atingir uma resolução espacial de ex ~ 10 m ao longo de um grande campo de visão de ~ 81 mm 2. Este celular baseado citometria de fluxo fluorescente imagem e plataforma de microscopia pode ser útil especialmente em ambientes com recursos limitados, por exemplo, para a contagem de células T CD4 + em direção acompanhamento de pacientes HIV + ou para a detecção de parasitas transmitidas pela água em água potável.

Introdução

Microscopia e citometria de fluxo são amplamente utilizadas técnicas de 1-12 em pesquisa biomédica e científica, bem como o diagnóstico clínico para a contagem e caracterização de vários tipos celulares. No entanto, os microscópios convencionais e de citometria de fluxo-instrumentos são relativamente complexos e caros, o que limita a sua utilização para principalmente bem estabelecidas laboratórios centrais. Recentemente, temos desenvolvido uma citometria de imagem compacto e leve fluorescente e dispositivo microscopia integrados em um telefone celular, que mostra 13,14 promessa de custo-benefício traduzir microscopia de fluorescência, citometri....

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Protocolo

Nesta seção, apresentamos os protocolos experimentais para o nosso telefone celular baseado microscopia de fluorescência de campo largo 13 e opto-fluídico plataforma de citometria de imagem 14. Nós vamos usar partículas fluorescentes e fluorescente etiquetado células brancas do sangue para testar essas plataformas de imagem.

A. Preparação do telemóvel Baseado Largo-campo microscópio de fluorescência e Opto-fluídico citômetro de fluxo de imagem

O telemóvel baseado microscópio de campo amplo fluorescente ou citômetro de fluxo consiste de duas partes principais: um celular com câmera e um compa....

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Resultados

Com o nosso opto-fluídica bombagem / excitação esquema (Figuras 1C e 1D), as células marcadas com fluorescência pode ser continuamente fornecido para dentro do canal microfluídico utilizando uma bomba de seringa, enquanto a câmara celular grava um lapso de tempo de filme microscópico fluorescente das células de fluxo. Estes filmes fluorescentes pode depois ser rapidamente analisados ​​usando detecção de contorno e de algoritmos de rastreamento 14,15 para determinar automatica.......

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Discussão

Nós apresentamos nossos resultados recentes sobre celular baseado de campo amplo de microscopia fluorescente e opto-fluídico citometria de fluxo de imagens usando leve e compacto opto-fluídicos anexos para câmeras de telefones celulares. Utilizando esta tecnologia de plataforma que imaged objectos fluorescentes incluindo as micro-partículas e rotulados glóbulos brancos em amostras de sangue total. Portanto, este compacto e de baixo custo de telefone celular conjunto de ferramentas de imagem baseada fluorescente pode ser.......

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Divulgações

Dr. Ozcan é o fundador de uma empresa start-up que pretende comercializar imagem computacional e ferramentas de microscopia.

Agradecimentos

A. Ozcan agradece o apoio do Prémio Carreira presidencial antecipada para Cientistas e Engenheiros (PECASE), Army Research Office (ARO) Young Investigator Award, National Science Foundation (NSF) Prémio Carreira, o Office of Naval Research (ONR) Young Investigator Award e National Institutes of Health (NIH) Prêmio Diretor Innovator Nova DP2OD006427 do Escritório do Diretor, National Institutes of Health.

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Materiais

Lista de materiais utilizados neste artigo
NomeEmpresaNúmero de catálogoComentários
Celular:SonySony Ericsson Aino
, lente plano-convexa,Edmund Optics# NT45-302
Lente asféricaThorlab# C230TME-A
FilterEdmund Optics#NT54-46
Blue LEDDigikey#365-1201-ND
BateriaDigikey#P032-ND
Tubo de poliestirenoFisher Scientific#05-408-129
Tampão de lise de glóbulos vermelhosSigma AldrichR7757
SYLGARD 184 KIT DE ELASTÔMERO DE SILICONEDow Corning
Contas fluorescentes vermelhas (10 μ m)Life Technologies#F8834
Contas fluorescentes verdes (10 μ m)Life Technologies#F8836
Rotulagem fluorescente de ácido nucleico SYTO16Life Technologies# S7578
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Referências

  1. Sklar, L. A. Flow Cytometry for BioTechnology. , Oxford University Press Inc. (2005).
  2. Nunez, R. Flow cytometry for research scientists: principle and applications. , Horizon Press. Wymondham, UK. (2001).
  3. Mertz, J.

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Reimpressões e permissões

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