يتم وصف استعمار البلعوم الأنفي المورين مع الالتهاب الرئوي العقدي والاستخراج اللاحق للخلايا الملتصقة أو المجندة. تتضمن هذه التقنية مسح البلعوم الأنفي وجمع السائل من خلال nares وهي قابلة للتكيف مع قراءات مختلفة ، بما في ذلك تحديد كمية الخلايا التفاضلية وتحليل تعبير مرنا في الموقع.
استعمار البلعوم الأنفي بواسطة المكورات العقدية الرئوية هو شرط أساسي لغزو الرئتين أو مجرى الدم1. هذا الكائن قادر على استعمار السطح المخاطي للناسوبهارين ، حيث يمكن أن يقيم ويتكاثر ويتغلب في نهاية المطاف على الدفاعات المضيفة لغزو الأنسجة الأخرى للمضيف. يؤدي إنشاء عدوى في الجهاز التنفسي السفلي عادة إلى الالتهاب الرئوي. بدلا من ذلك ، يمكن للبكتيريا أن تنتشر في مجرى الدم مما يسبب البكتيريا ، والتي ترتبط بارتفاع معدلات الوفيات2، أو تؤدي مباشرة إلى تطور التهاب السحايا الرئوي. فهم الحركية ، والاستجابات المناعية للاستعمار البلعومي الأنفي هو جانب مهم من نماذج العدوى الالتهاب الرئوي S.
نموذج الماوس لدينا من الاستعمار داخل الجهاز العصبي مقتبس من النماذج البشرية3 وقد استخدمت من قبل مجموعات بحثية متعددة في دراسة استجابات مسببات الأمراض المضيفة في البلعومالأنفي 4-7. في الجزء الأول من النموذج ، نستخدم عزلا سريريا للالتهاب الرئوي S. لإنشاء استعمار بكتيري ذاتي الحد يشبه أحداث النقل في البالغين البشريين. الإجراء المفصل هنا ينطوي على إعداد inoculum البكتيرية، تليها إنشاء حدث الاستعمار من خلال تسليم inoculum عبر طريق داخل الجهاز الداخلي للإدارة. الضامة المقيمة هي نوع الخلية السائد في البلعوم الأنفي خلال الحالة الثابتة. عادة، هناك عدد قليل من الخلايا الليمفاوية الموجودة في الفئران غير المصابة8،ولكن الاستعمار المخاطي سيؤدي إلى التهاب منخفض إلى عالي الجودة (اعتمادا على ضراوة الأنواع البكتيرية والإجهاد) التي من شأنها أن تؤدي إلى استجابة مناعية وتجنيد الخلايا المناعية المضيفة في وقت لاحق. يمكن عزل هذه الخلايا عن طريق مرحاض محتويات القصبة الهوائية من خلال nares ، وترتبط بكثافة البكتيريا الاستعمارية لفهم حركة العدوى بشكل أفضل.
في هذه الدراسة قدمنا أساليب مفصلة للاستعمار داخل الجهاز الداخلي للفئران باستخدام سلالة عزل سريرية من الالتهاب الرئوي العقدي والعزلة اللاحقة وتوصيف الخلايا المناعية المجندة إلى البلعوم الأنفي استجابة للبكتيريا. لقد أظهرنا كيف يمكن زراعة inoculum البكتيرية في وسائل الإعلام الغنية بالم?…
The authors have nothing to disclose.
الكتاب أود أن أشكر الدكتور جيفري ويزر من جامعة بنسلفانيا لهديته من سلالات السريرية من المكورات العقدية الالتهاب الرئوي. وتم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الكندية للبحوث الصحية. تم تمويل السيرة الذاتية من زمالة M. G. DeGroote وزمالة من الجمعية الكندية للصدر. وقد مولت هذا العمل رابطة أونتاريو للرئة والمعاهد الكندية للبحوث الصحية. ويدعم العمل في مختبر بوديش جزئيا من قبل مركز مايكل G. DeGroote لأبحاث الأمراض المعدية ومركز أبحاث المناعة ماكماستر.
Name of Reagent/Material | Company | Catalog Number | |
Anti-Mouse Ly6C FITC | BD Pharmingen | 553104 | |
Anti-Mouse Ly6G PE | BD Pharmingen | ||
Anti-Mouse CD45.1 eFluor 450 | eBioscience | 48-0453-82 | |
Anti-Mouse F4/80 Antigen APC | eBioscience | 17-4801-82 | |
Anti-Mouse CD11c PerCP-Cy5.5 | eBioscience | 45-0114-82 | |
Anti-Mouse CD11b PE-Cy7 | eBioscience | 25-0112-82 | |
Anti-Mouse CD3 Alexa Fluor 700 | eBioscience | 56-0032-82 | |
Anti-Mouse CD4 eFluor 605NC | eBioscience | 93-0041-42 | |
Intramedic Polyethylene Tubing – PE20 | Becton Dickinson | 427406 | |
BD 1ml Syringe | Becton Dickinson | 309659 | |
BD 26G3/8 Intradermal Bevel | Becton Dickinson | 305110 | |
Buffer RLT Lysis Buffer | Qiagen | 79216 | |
Difco Tryptic Soy Agar | Becton Dickinson | 236950 | |
Defibrinated Sheep Blood | PML Microbiologicals | A0404 | |
RNAqueous-Micro Kit | Ambion | AM1931 | |
M-MuLV Reverse Transcriptase | New England Biolabs | M0253L | |
GoTaq qPCR Master Mix | Promega | A6001 |