Génération de sous-cutanée et intra-hépatique droits de carcinome hépatocellulaire xénogreffes chez la souris immunodéficientes

Sharif U. Ahmed; Murtuza Zair; Kui Chen; Matthew Iu; Feng He; Oyedele Adeyi; Sean P. Cleary; Anand Ghanekar

doi:10.3791/50544

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Article de méthode

Génération de sous-cutanée et intra-hépatique droits de carcinome hépatocellulaire xénogreffes chez la souris immunodéficientes

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DOI :

10.3791/50544

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25 septembre 2013

Sharif U. Ahmed¹ , Murtuza Zair¹ , Kui Chen¹ , Matthew Iu¹ , Feng He¹ , Oyedele Adeyi² , Sean P. Cleary³ , Anand Ghanekar¹^,³

¹Toronto General Research Institute, University Health Network, ²Department of Pathology, University Health Network, ³Division of General Surgery, University Health Network

Dans cet article

Résumé

Xénogreffes de tumeurs humaines dans des souris immunodéficientes sont des outils précieux pour étudier la biologie du cancer. Des protocoles spécifiques pour générer des xénogreffes sous-cutanées et intra-hépatiques à partir de cellules humaines de carcinome hépatocellulaire ou des fragments de tumeur sont décrits. La régénération du foie induite par une hépatectomie partielle dans les souris receveuses sont présentées en tant que stratégie pour faciliter la prise de greffe intrahépatique.

Résumé

In vivo sur des modèles expérimentaux de carcinome hépatocellulaire (HCC) qui récapitulent la maladie humaine fournissent une plate-forme précieuse pour la recherche dans la physiopathologie de la maladie et pour l'évaluation préclinique de nouvelles thérapies. Nous présentons une variété de méthodes pour générer des sous-cutanée ou orthotopique xénogreffes de HCC humain dans des souris immunodéficientes qui pourrait être utilisé dans une variété d'applications de recherche. En mettant l'accent sur l'utilisation de tissu de tumeur primaire provenant de patients subissant une résection chirurgicale en tant que point de départ, nous décrivons la préparation de suspensions de cellules ou fragments de tumeurs de xénogreffes. Nous décrivons des techniques spécifiques pour ces tissus xénogreffe i) par voie sous cutanée, ou ii) intrahepatically, soit par implantation directe des cellules tumorales ou des fragments dans le foie, ou indirectement par l'injection des cellules dans la rate de la souris. Nous décrivons également l'utilisation d'une résection partielle du foie de la souris native au moment de la xénogreffe comme stratégie pourinduire un état de régénération active du foie chez la souris de destinataire qui peut faciliter la prise de greffe intrahépatique de cellules primaires de tumeurs humaines. Les résultats attendus de ces techniques sont illustrées. Les protocoles décrits ont été validées avec des droits primaire échantillons et les xénogreffes HCC, qui effectuent généralement moins robuste que les lignées de cellules HCC humain bien établies qui sont largement utilisés et souvent citées dans la littérature. En comparaison avec des lignées cellulaires, nous discutons des facteurs qui peuvent contribuer à la relativement faible chance de greffe de HCC primaire dans les modèles de xénotransplantation et de commenter sur les questions techniques qui peuvent influencer la cinétique de la croissance de xénogreffes. Nous proposons également des méthodes qui devraient être appliquées pour s'assurer que les xénogreffes obtenus ressemblent précisément tissus HCC mères.

Introduction

Le carcinome hépatocellulaire (CHC) est le cinquième cancer le plus répandu dans le monde et la cause la plus rapidement croissante de décès par cancer en Amérique du Nord. Le facteur de risque le plus répandu pour le HCC est la cirrhose du foie, survenant le plus souvent due à l'hépatite virale chronique, l'abus d'alcool, maladie auto-immune, ou de troubles métaboliques héréditaires ^1.

En dépit de la lourde charge de morbidité imposé par HCC sur les populations à travers le monde, la physiopathologie de la HCC est relativement mal compris par rapport à d'autres cancers communs tels que colorectal, du sein ou le....