Summary
この記事では、マウスの脳にウイルスベクターを顕微注入すると、その後買収、絶滅と回復期を含む条件付け場所嗜好パラダイムでテストする方法を説明します。
Abstract
興味のある選択的にノックアウト遺伝子に異なるマウス脳領域にCreリコンビナーゼを発現する組換えアデノ随伴ウイルス（rAAVの）ベクトルをマイクロインジェクションすると、既存の方法に比べ、遺伝子欠失の強化された時間的及び地域固有の制御を可能にします。条件付き欠失はまた、loxPにはさまれた遺伝子を有するマウスと特異的遺伝子プロモーターの制御下でマウスを発現するCreリコンビナーゼを交配することによって達成することができるが、定位マイクロインジェクションは、関心のある実験的に決定時点で離散的な脳の領域の標的を可能にする。コカイン条件付け場所嗜好のコンテキスト、および撤退、消滅、および/または復職段階を含むことができるような自己管理や精神運動感など他のコカイン行動のパラダイムでは、この手法では、これらの個別に標的遺伝子のユニークな貢献を探索に特に有用であるコカイン誘発性可塑性のビヘイビア·モデルの位相。具体的には、この手法は、時間を越え行動への貢献をテストするための行動の離散段階で標的遺伝子の選択的切除が可能になります。最終的には、このような理解は、中毒性の行動の各段階の間に自分自身を提示する最も強力なリスク要因に対処する最善のことができる、よりターゲットを絞った治療を可能にします。
Introduction
コカインは非常に強化精神刺激薬である。反復暴露に続いて、いくつかの分子や細胞適応が強迫的になると考えられている報酬関連脳回路で発生する薬物探索重大な臨床的問題1ポーズ再発率の高さを促し、行動を。コカインは、遺伝子発現を調節することによって、これらの長期的な行動効果を発揮する。慢性コカインの使用から生じる適応を研究するために、前臨床げっ歯類モデルは、広く使用されている。そのようなモデルは、条件付け場所嗜好（CPP）パラダイムである。このモデルは、以前に中立的な環境とコカインのやりがいの特性と学び関連の開発が含まれます。特定の室とコカインのいくつかのペアリング後、動物を自由にコカインペアと非コカインペア環境を探索するために許可されていると、彼らは薬物ペアコンパートメントを好む場合は、それらは、コカイン誘発性のプラクを取得していると言われています電子好み。また、絶滅の訓練期間の後、このパラダイムはコカイン探索行動のコンテキスト固有の復職を研究するために使用することができます。
より正確に中毒性の模倣するように考えられているような長期的なコカイン誘発行動と分子可塑2,3と自己管理（SA）を研究するために使用されている精神感、などの中毒性のような行動、他のビヘイビア·モデルに比べのような人間に見られる行動、CPPパラダイムは、コカイン文脈学習4を勉強するための簡単な手順です。 CPPプロトコルは便利に薬物渇望のメカニズムと再発5-7との調査を可能にSA、同様に、絶滅と復職段階を含むように拡張することができ、人間の薬物探索行動と薬物で発生するものの側面を要約すると考えられている-とキュー誘発再発8-10。
その根底に一つのメカニズム買収、絶滅、そして復職など、CPPの異なる相のそれぞれの特徴であるコカイン誘発性行動の可塑性、異なる脳領域内の遺伝子発現のユニークな署名の活性化である。直接コカイン誘発性の行動変化を仲介報酬関連脳領域内のどの遺伝子テストするには、それは、地域固有の方法で選択的にそれらを操作できるようにすると便利です。これを達成する1つの方法は明白CreリコンビナーゼはloxP部位（loxPにはさまれたマウス）に挟まれた標的遺伝子を有するマウスの脳の異なる領域に、定位手術を使用している組換えアデノ随伴ウイルス（rAAVの）ベクターを顕微注入することである。この方法では、いつ、どこで遺伝子が11-13免疫応答を誘発することなく、両方の分割および非分割ニューロンにおいて、アブレーションさにわたって非常に正確な時間的·地域的に制御できます。このレベルの制御は、loxP導入マウスのw繁殖の伝統的なCRE-のLoxP技術上の重要な利点を表しという点で、内因性遺伝子プロモーターの制御下でCreリコンビナーゼを発現するマウスは、i番目のタイミングおよび遺伝子欠失の分布をより強固に規制することができる。また、ウイルスベクター媒介遺伝子ノックアウトは、伝統的なノックアウト戦略を使用して発生する可能性のある潜在的な発達代償効果を回避。
ここに記載されているコカインCPPに加えて、特定の遺伝子の役割を評価するためのloxPにはさまれたマウスの脳内のrAAV-Creのマイクロインジェクションは、自己投与及び精神運動感作を含む別々の相を含む行動のパラダイムに遍在的に適用することができる。例えば、我々の研究室では、コカイン精神運動感14中のCa V 1.2 L型Ca 2 +チャネルの役割を研究するためのrAAV-Creの技術を利用しています。具体的には、するrAAV-Creをを実証するためにコードする遺伝子のCa V 1.2 loxP導入によるマウスの側坐核（NAC）にマイクロインジェクションしたことのCa V 14,15の発現位相を演技。精神感中のCa V 1.3 L型Ca 2 +チャネルの役割を評価する際に、目的のloxP導入遺伝子を持つマウスが存在しない場合は、するrAAV-Creの戦略を使用することができない、などの私たちの経験であった。条件付きマウスは、関心のある特定の遺伝子のために存在しない場合、したがって、のrAAV-Creリコンビナーゼを用いた制限は、それ自身を示す。しかし、我々はカルシウムバージョン 1.3チャンネル14,15の役割を調べるために行ったように明白なsiRNAは、ノックダウンの標的遺伝子に使用することができることrAAVs。
loxP導入マウスの離散的な脳領域にするrAAV-Creををマイクロインジェクションした後、CPPパラダイムでそれらをテストする中毒性のような行動の様々な段階を媒介し、彼らが行動している特定の遺伝子の調査を可能にします。このパラダイムを使用するには、本質的に繰り返しコカイン投与がBrをハイジャックする方法についての我々の理解で支援しているAINSの報酬回路は中毒状態1,16,17につながることを分子シグナル伝達経路と遺伝子発現の不適応な変化を引き起こす。
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Protocol
すべての手順は、ワイルコーネル医科大学制度動物実験委員会の規則に従って行われている。
1。ウイルスベクターの定位配信のための準備とセットアップ
- 楽器、滅菌綿棒、または滅菌手袋を着用して手が非滅菌表面に接触し、破棄するかホットビーズ滅菌器を使用して再滅菌する器具によって汚染されている場合は、新しい滅菌手袋に綿棒または変更を破棄します。
- 術後の回復のために温めるヒートブロックで寝具とマウスのケージを置きます。
- 頭皮を殺菌するために頭とエタノールとヨウ素を剃るための電気かみそりを設定します。
- 70％エタノールでstereotaxの耳のバーや口のホールドを拭う。
- 5μlのハミルトンシリンジを用いて、ウイルスベクター（1×10 6ウイルス粒子/μl）を5μlのを策定し、stereotaxにシリンジホルダーに設置した。
- マイクロ波加熱パッドまたは上の電気パッドを回すstereotax上番目の場所。火傷のリスクを軽減するために、クリーン吸収パッドでカバーしています。モニタ、マウス体温（97から99.5°Fの間に）頻繁に手順全体。
- ケタミン（100 mg / kg体重）およびキシラジン（20 mg / kg体重）の混合物でマウス（22〜35グラムの間で計量）を注入。マウスを麻酔したら、マウスの反射神経をチェックして、マウスが十分に麻酔であることを保証するために、任意の動きや反応を注意するの尾先端をつまむ。
- 耳と目の間に頭を剃る。
- エタノールとヨウ素滅菌綿アプリケーターを交互に坊主頭を清掃します。
- stereotax上の加熱パッドにマウスを転送します。
2。ウイルスベクターの定位マイクロインジェクション
- 手術全体に滅菌手袋を着用してください。手袋非滅菌表面に触れることにより、任意の時点で汚染されている場合は、手袋を変更してください。
- ゼロの歯バーと耳のバースケール。
- 歯バーに歯をセットします。
- 銃口のネジ。揺らすまたはウィスカ移動した場合リーメントはいつでも注目される、ケタミン（100 mg / kg体重）およびキシラジン（20 mg / kg体重）の混合物の腹腔内ブースター用量（0.05〜cc）で管理する。
- 耳バーのネジ。
- PuraLubeで目に注油。
- メスでただ後ろに耳に開いて頭皮をカットします。
- 皮膚剥がれ頭蓋骨から頭皮の角の上に置いてブルドッグクリップ。ブレグマとラムダが簡単に表示されるはずです。
- ブレグマからラムダへの縫合糸がまっすぐに整列していることを確認してください。縫合糸は、頭部の曲がっ再調整ポジショニングである場合。
- stereotax上のすべての設定がゼロにされていることを確認してください。
- ブレグマで所定の位置に針先を入れてください。
- ブレグマとラムダの両方のすべての座標を測定します。これは、腹側/背内側/横と前方/後方の座標が含まれています。
- ブレグマとラムダのために腹座標が互いに0.02 mm以内になるまで頭を調整します。
- 一度内側/横（M / L）座標に内側に出かけるブレグマから、整列。ことを確認してください左右両側が互いに0.02 mm以内に整列される。
- ブレグマ上で、そこから再センター針の先端は、目的の前方/後方の座標に（/ P）前方/後方方向に移動する。
- 必要に応じて、角度一方向に針とstereotaxがロックされていることを確認してください。 （ - 1.52 + / - ）左M / Lの座標に出て行く
- ボーリング孔を掘削した後にリファレンスとして使用するために頭蓋骨の上部の腹の位置を測定します。
- 希望の座標に無菌のドリルビットを使用して掘削孔を開けます。針が頭蓋骨を通して中断なく入力することができますことを確認します。
- 希望の腹側の座標に針を下ろし。
- 一度座標はディップ0.015ミリメートルはウイルスベクターのための小さなポケットを作成するために〜10秒以下、到達する。
- 〜0.1μL/分の速度でウイルスベクターの所望の体積を注入する。完全に拡散するウイルスベクターのために3分待ちます。針先0.015ミリメートルを上げ、さらに2分待つ。
- 反対方向に針を（斜め注射を行う場合）を浸します。繰り返しになりますが、頭蓋骨の上部の基準として腹位置を記録。
- （二国間の注射をしている場合）の反対側にウイルスベクターを注入する第一の側と同じ手順を繰り返します。
- 滅菌綿棒先端の木製の終わりを使用してそれらを密封するために、両方の穴に骨ワックスを適用します。
- 頭皮を縫合。
- 負傷者の領域に神経ブロックを適用します。
- 45分間回復するためのヒートブロック上で温めケージにstereotaxから、マウスと場所を削除します。
- 含む痛みの兆候を監視します、全体的な活動や落ち着きのなさを減少させた食品や水の消費または増大発声を減少させた。ブプレノルフィン（0.05から0.2 mg / kg体重）は、痛みのため、必要に応じて一週間、毎日二回投与することもできる。許容可能な選択肢が含まれます：メペリジン（20-60 mg / kg）を、ペンタゾシン（10 mg / kg）を、ナルブフィン（4-8 mg / kg）を。
3。条件付け場所の人種：Acquisitionは、絶滅、そして復活
- ギロチンドアが60秒の馴化期間の3室の場所嗜好装置（メッドアソシエーツ社、セントオールバンズ、VT、USA）の中央の室へ場所マウスは閉じた。
- 馴化後、オープンギロチンドアやMedPC IVソフトウェア（メッドアソシエイツ社）を用いて記録されている各チャンバーに費やされる時間と1200のためのすべての3室のマウス自由探査秒、許す。
- プレテストの間に彼らのパフォーマンスに基づいて空調室にマウスを割り当てます。ベースラインの事前テスト中に最も好まれたコンパートメントとのその後の3日間、バイアス設計、ペア薬物投与を使用。
- 午前中のセッション中に、注射の直後1200秒、割り当てられた部屋でそれらを閉じ込める、次の3のコンディショニング日の間に、コカイン（IP 10 mg / kg体重）をマウスに注入する。セッションの後に自分のホームケージにマウスを返します。 4時間後、生理食塩水（0.01ミリリットル/ gのマウスに注入する体重）と1,200秒午後のセッションのために反対室にそれらを閉じ込める。
- 取得のためにテストするには、ギロチンドアと中央のチャンバー内の場所のマウスは60秒の馴化期間のため閉鎖。オープンギロチンドアやMedPC IVソフトウェア（メッドアソシエイツ社）によって記録されたすべての室で過ごした時間を1,200秒のための無料の探査を可能にします。コカインペア室に費やされる時間の量から生理食塩水対のチャンバ内で費やされた時間を減算することにより優先順位を計算する。
- 同一装置で毎日無料探査の2 20分のセッションにマウスを公開、場所嗜好を消すためには、買収のためのテスト後24時間を開始し、少なくとも2時間で区切られています。すべてのチャンバに費やされた時間は再度記録し、初期CPPの大きさがそれぞれ消光セッションのそれと比較されるべきである。
- マウスはPAR用かどうかの好みを評価することによって、薬剤誘発性の好みを消滅しているかどうかを判断する二つの連続消光日にわたるticular室は、取得嗜好に比べて著しく低い。
- コカインのプライミング用量（5または10 mg / kg体重、腹腔内）でマウスを元に戻すと無料探査を許可装置に再公開し、各区画にかかった時間を記録します。
- Euthasol安楽死溶液（150 mg / kg）を管理します。 Transcardially 4％パラホルムアルデヒド（PFA）をマウスに灌流し、正しいマイクロインジェクションの配置を検証するための組織学的検査を行う。
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Representative Results
CPP
マイクロインジェクションマウスでCPPを実行した後、一方は制御注入のコホート（のrAAV-GFP）マウスは、通常の薬物ペアリング室（ 図1A、1B）の優先順位を取得していることを確認する必要があります。マウスは、コカインの好み（生理食塩水ペアリング室で過ごしたコカインペア室マイナス時間で費やされた時間）がベースライン嗜好（ 図1B、対B）に比べて有意に高いときに、特定のチャンバーの優先順位を取得していると考えられている。コホートとして、コントロールを注射したマウスは、コカインペア室のための優先順位を表示したり、嫌悪感を示していない、場合は、配置は組織学（rAAVの注射の項を参照）、誤った配置を持つマウスを介してすぐに確認してくださいは破棄されるべきである。
設定が正常に制御注入コホートに買収されている場合、人はその後（ 図1A開始絶滅によってパラダイムを拡張することができます図1B、E3、E4、E5対 ）に比べて著しく低いとき、特にチャンバー用薬剤誘発性の好みを消滅したと考えられる。この時、一つの薬剤素数（ 図1A、1B）に回復することができる。薬剤プライムの投与後嗜好が取得時とは統計的に区別できない場合、そのコホートは薬剤ペア室（ 図1B、R対A）のための薬剤誘発好みを復活したと言われています。
rAAVのマイクロインジェクション
以前は一つのrAAV-Creを実際に定量PCR（ 図1C）、および/ またはウェスタンブロットや免疫組織化学的分析18によってマイクロインジェクションマウスで目的の遺伝子をノックアウトしたことを確認する必要があります任意の行動のパラダイム内のrAAV-Creを実験的な戦略を追求する</>（商標）。例えば、L型カルシウムチャネルアイソフォームのCa V 1.2 loxP導入していたマウスの坐へのrAAV-CRE-GFPのマイクロインジェクション後に、するrAAV-Creを注入されたパンチは、遺伝子発現の有意な減少（ 図1C）を示す。さらに、我々はのrAAV-Creをマウスの脳に18でノックアウトのCa V 1.2のタンパク質をできることを免疫組織化学的分析によって示されている。全ての行動の分析に続いて、マウスをtranscardially 4％パラホルムアルデヒドおよび蛍光免疫組織化学で灌流されるべきである緑色蛍光タンパク質（GFP）のために行われるべきである。二国間の構造が対象とされた場合、適切な二国間の配置は、蛍光免疫組織化学染色（ 図1D、のNACターゲティング代表者）によって検証されるべきである。正しい面積が実際にターゲットにされている場合は、染色は意図された地域で独占的に可視化することが、その外ではありません。注射剤の一方または両方がオフターゲットである場合、マウスは遡及なければならないLYはCPPデータセットから除外。ウイルスベクターに感染した脳領域および生化学的解析のための感染地域のその後の解剖の対象に正確なの可視化のためのもう一つの戦略は、Liと狼（2011）19に記載されているようにGFP-照明懐中電灯を使用して達成することができる。
図1A。のrAAV-Creをマイクロインジェクションと条件付け場所嗜好獲得、絶滅と復職相の実験的なタイムライン。のrAAV-Creのは行動試験の開始まで2〜3週間前に関心のある領域にマイクロインジェクションされます。条件付け場所嗜好は、コカイン（10 mg / kg体重、腹腔内）でコンディショニングの3日に続いて任意の初期バイアスを、確かめるためにプレテストから始まります。各コカインコンディショニングセッション4時間後に、マウス生理食塩水で処理し、反対側の室に閉じ込められる。翌日マウスはCPPの獲得のためにテストされます。絶滅のトレーニングは、24時間後に開始され、装置全体への自由なアクセスを可能にする少なくとも2時間で区切られている2毎日セッションを伴う。一度マウスは絶滅基準に達している、彼らはコカインのプライミング注射（10 mg / kg体重、腹腔内）を投与し、その時間は、装置の全室で過ごしているが、コカインを求める行動を図1Bの復職のためにテストするために評価される。代表的なベースライン、取得、消光訓練の結果、および回復。WT C57BL/6Jマウスをコンディショニング日2、図3及び図4中にコカインで処理した。マウスは、買収、絶滅とコカイン誘発性の回復を（10 mg / kgを腹腔内コカインプライム）出展。 *** P <0.001対ベースライン（B）、＃P <0.05対買収（）。ベースライン、B;買収;絶滅、E;復職、R. 図1C。 StereotaxのCa V 1.2 loxP導入マウスの坐へのrAAV-CRE-GFPのICの配信はかなりのCa V 1.2のmRNAの減少となりました。ホモ接合体のCa V 1.2 loxP導入マウスは、ウイルスベクターは、コントロール（のrAAV-GFP）または実験（のrAAV-CRE-GFP）を顕微注入した。最大のCre活性化後に、マウスを屠殺し、mRNAを単離し、相対的な発現レベルはCaを1.2 V特異的プライマーを用いた定量的ポリメラーゼ連鎖反応を介して調べた。のCa V 1.2 loxP導入マウスの坐へのrAAV-CRE-GFPの定位配信が大幅にAAV-GFPを注射したマウスに比べ、カルシウムV 1.2 mRNAレベルを減少させた。 ††P <0.001対するrAAV-GFP。 図1D。ニューロンはマウス坐でのrAAV-GFPとマイクロインジェクション。ホモ接合のCa V 1.2 loxP導入マウスは坐で適切な二国間の配置を確認するためのrAAV-GFPを顕微注入した。マウスは、PFAおよび免疫組織化学を行った4％で灌流した。 GFP染色デモンストレーションのNAC適切な二国間のターゲティングをTES。 より大きい数字を表示するには、ここをクリックしてください 。
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Discussion
絶滅と復職段階を含むCPPと組み合わせてウイルスベクターの定位マイクロインジェクション経由地域と時間的に特異的な遺伝子アブレーションは中毒性のような行動の3つの異なる段階に遺伝子の特定の貢献の調査を可能にします。伝統的なCRE-のLoxPシステムを利用して達成され、条件付きノックアウトは空間、時間的制限遺伝子アブレーションに提供していますが、定位loxP導入マウスの離散的な脳領域にCRE-リコンビナーゼをマイクロインジェクションすると、いつ、どこで遺伝子がノックアウトされているのであっても厳密に制御することができます。また、これは時々ノックアウトマウスで観察された限られた表現型変異を占める現像中に発生する代償変化の可能性を回避する。また、行動時の様々な時点で微量注入したマウスのコホートを使用して、遺伝子発現の変化や行動の変化との間に作られるべき因果関係を可能にすることができる。 IMPOrtantly、この技術は自己投与及び精神運動感作を含むいくつかの異なるコカインの行動パラダイムに適用することができる。
これは、Creリコンビナーゼの最大活性が20を発生したことを確実にするために手術後少なくとも10-14日待つことが重要です。これに先立って行動試験を開始すると解釈する行動の調査結果は、困難、準最大のCre発現の未知の量でマウスの使用中に発生する可能性があります。遺伝子の完全ノックアウトにおけるCreの結果の最大活性があるが、これは、実際に感染した細胞内で起こる。体積およびウイルスベクターの力価に応じて、細胞の約50〜70％がいくらかの残留遺伝子発現（ 図1C）につながる可能性のmRNAおよびタンパク質のノックアウト相当する量で得られた所定の領域のために感染している。しかし、我々は、ノックアウトこのタイプの50〜60％のmRNAが発現を変化させるのに十分であることが実証されている精神感14。また、この方法はCreの活性化は、生体内で発生した後に、より長い行動パラダイムのために理想的であり、その発現とそれに対応する遺伝子ノックアウトは、少なくとも6ヶ月間21持続します。
一方しかし、時間の複数の別個の期間にわたって遺伝子の役割を調べることに興味がある場合、それはこの特定の方法では不可能である。短期発現させるために、ヘルペスウイルス単純（HSV）ベクトルが優先的にニューロン22を感染されて、使用することができます。彼らは日間インビボで発現プロモーターとしては、 インビボで 23日間または数週間後に沈黙されないので、長期間持続するCreリコンビナーゼの発現のrAAVと比較して、HSVベクターが一過性発現のために好ましい。 HSVベクターは、彼らが幅広い導入効率を発揮するという点でも有利で あると、そのヘルパーウイルスフリー株が22存在する。また、HSVベクターはまた、Creの視聴を表現することができombinaseと文化およびin vivoの両方で 24フロックスシーケンスの切除を仲介。しかしながら、時折細胞毒性が見出された。
脳内のほぼすべての領域がこのマイクロインジェクション法を用いて標的とすることができる。より大きな領域内で小さいサブ領域をターゲットにしようとすると、1は、使用されるウイルスベクターの量を最適化する必要があるかもしれません。例えば、我々は坐と腹側被蓋野（VTA）14をターゲットにするrAAV-CRE-GFPの0.5μLをマイクロインジェクションし、そのような海馬や大脳皮質などの大きな構造をターゲットとした場合、一方、アーメドおよび同僚20のrAAV-Creを0.8μLを使用していました。あるいは、各差動普及と感染のプロパティ（参照崔ら （2005）レビューのために25）より小さく、より定義された領域を標的とするのを助けることができる持っている様々な血清型のオプションを模索。大きな領域をターゲットにしようとする場合には逆に、1はマイクロインジェクションウイルスベクターの量を増やすことができます。このI彼らはおそらく22に感染全細胞数の増加とは対照的に、セルごとに追加の感染症をもたらすように、より高いベクトル価を活用しよりのより有効。さらに、1つは、より効果的に広い面積26に感染することが 、地域内、または複数の領域を越え、複数の注射を行うことができます。
脳機能や病気の検査に使用される他のウイルスベクターと比較した場合のrAAVベクターの使用も有利である。具体的には、従来のアデノウイルスベクターは、レトロウイルスやレンチウイルスなどの他のベクターは、挿入突然変異の問題を伴うことができますが、それらが、重度の炎症反応を誘導した問題が判明した。のrAAVは良性パルボウイルスで、のrAAV感染に関連する既知の病気はありません。さらに、他のウイルスベクターとは異なり、rAAVの持つ形質導入はあまり関心のある標的細胞上の二次的影響を作り、天然のAAVウイルスタンパク質27の発現なしに起こる。のrAAVベクターは高力価で生産することができ、非常に空間的に局所的21,28の脳内の有糸分裂後ニューロンを形質導入することができる。また、のrAAVベクトルは今やマウス脳内のニューロン29とCRE-依存のrAAV発現系にも（レビューのためZhang ら （2010）30を参照）、より広く使用されるようになっている特定のサブタイプをターゲットにすることができますが生成されています。
要約すると、コカインCPPはコカイン文脈買収に関連する学習、絶滅、そしてコカイン探索行動の復活を研究するためにシンプルで有益な行動のツールとして機能します。 CPPとloxP導入対立遺伝子を持つマウスにCreリコンビナーゼを表現するrAAVを利用の組み合わせはコカイン探索行動を媒介する特定の脳領域における標的遺伝子の役割を探索するための強力な戦略を提供します。
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Disclosures
著者らは、開示することは何もありません。
Acknowledgments
著者は、拡張された条件付け場所嗜好プロトコルを確立する彼らの助けのためにアンニリーとモーリーンバーンに感謝したいと思います。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Conditioned place preference activity chambers | Med Associates, Inc., St. Albans, VT, USA | MED-CPP-MS | |
| Stereotaxic alignment system for mouse | David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA | model 900 | |
| Hamilton syringes | Hamilton Company, Reno, Nevada, USA | 7634-01 | |
| rAAV2-Cre-GFP | Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA | 7016 | |
| rAAV2-GFP | Vector BioLabs, Philadelphia, PA, USA | 7004 |
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