Summary
نقدم الإجراء لتجميع البذور الفراش معطف مقايسة (SCBA) من بذور نبات الأرابيدوبسيس thaliana. وقد أظهرت SCBA أن تكون أداة قوية لاستكشاف وراثيا في المختبر وكيفية إنبات البذور الضوابط السويداء في البذور نائمة واستجابة لمنبهات الضوء. وSCBA هو من حيث المبدأ المعمول بها تحت أي الحالة التي يشتبه السويداء على التأثير في النمو الجنيني.
Abstract
يتكون السويداء نبات الأرابيدوبسيس من طبقة وحيدة الخلية المحيطة الجنين ناضجة ويلعب دورا أساسيا لمنع إنبات البذور نائمة أو أن البذور nondormant المشع من قبل الحمراء بعيدة (FR) نبض الضوء. من أجل مزيد من التبصر في الآليات الوراثية الجزيئية الكامنة وراء النشاط القمعية الإنبات بواسطة السويداء المبذولة، وقد وضعت "البذور الفراش معطف" مقايسة (SCBA). وSCBA هو إجراء تشريح فصل جسديا معاطف البذور والأجنة من البذور، والتي تسمح بمراقبة نمو الأجنة على طبقة الأساسية من المعاطف البذور. بشكل ملحوظ، وSCBA reconstitutes الأنشطة القمعية إنبات البذور معطف في سياق سكون البذور والسيطرة FR-تعتمد على إنبات البذور. منذ SCBA يسمح باستخدام اندماجي من سبات، وnondormant المعدلة وراثيا معطف البذور والمواد الجنينية، مسارات الجينية السيطرة على الإنبات وتحديدا المرجعيمكن تشريح بتوليد في السويداء والجنين. نحن هنا التفاصيل الإجراء لتجميع SCBA.
Introduction
في نبات الأرابيدوبسيس البذور الناضجة، ويتكون غلاف البذرة من تيستا، وهي الطبقة الخارجية من النسيج الميت من أصل الأمهات، والسويداء، وطبقة وحيدة الخلية من الأنسجة الحية التي تحيط مباشرة الجنين 1. وتستمد السويداء والجنين من الأحداث الإخصاب منفصلين: السويداء هو نسيج ثلاثي الصيغة الصبغية مع اثنين من الأم والأب واحد الجينوم في حين أن الجنين هو نسيج مضاعفا مع الأمهات واحدة واحدة الجينوم الأب 2.
وتتمثل المهمة الرئيسية المسندة تقليديا إلى السويداء هو أن الأنسجة الغذائية. ومع ذلك، أصبح من الواضح بشكل متزايد أن السويداء أيضا يلعب دورا مركزيا للسيطرة على إنبات البذور. أصبحت هذه الفكرة على ما يبدو لأول مرة في حالة السكون، وهي سمة التي أظهرتها البذور المنتجة حديثا. تفشل البذور لتنبت في سبات عميق رغم وجود ظروف إنبات مواتية. البذور تفقد السكون بهم بعد فترة النضوج وأصبحت nondormanر، أي أنها سوف تنبت عندما تتعرض لظروف إنبات مواتية. في كثير من الأنواع النباتية، بما في ذلك النباتات نبات الأرابيدوبسيس النموذج، يلزم معطف البذور على الاطلاق لمنع إنبات البذور نائمة منذ إزالة غلاف البذرة يؤدي النمو الجنيني وتخضير 3،4. في نبات الأرابيدوبسيس، بثك وآخرون. احظت أن الإنبات ظلت مكبوتة بعد إزالة تيستا مع الحفاظ على السويداء المحيطة السويداء 5. وأشارت هذه الملاحظات بشدة أن السويداء هو الأنسجة داخل غلاف البذرة تمارس النشاط القمعية على الجنين. ومع ذلك، وبذور التجارب إزالة معطف لا تساعد بالضرورة توضيح طبيعة النشاط القمعية التي تقدمها إنبات البذور معطف ولا تحديد الجينات التي تنفيذه.
قدمنا مؤخرا فحص البذور الفراش معطف (SCBA) حيث يتم فصل المعاطف البذور والأجنة جسديا لكنها أبقت في الدنو وثيقميتي بحيث يتم الحفاظ على النشاط القمعية الإنبات التي تقدمها السويداء 6. وSCBA يسمح باستخدام اندماجي من سبات، nondormant، والبذور المعدلة وراثيا معطف والمواد الجنينية. ونتيجة لذلك، فإن مسارات الوراثية السيطرة على الإنبات وتعمل تحديدا في السويداء والجنين يمكن تشريح. تم استخدام SCBA في سياق السكون لإظهار أن السويداء تطلق حمض الأبسيسيك هرمون نباتي (ABA) نحو الجنين لقمع نموها 6. وعلاوة على ذلك يمكن أن نستخدمها في SCBA لتحديد مسارات الإشارات التي تعمل في السويداء والأنسجة الجنينية لتعزيز السكون.
وتم تعزيز دور السويداء للسيطرة على إنبات المزيد من خلال النظر في حالة البذور nondormant تتعرض لنبض أحمر بكثير (FR) الخفيفة. في وقت مبكر عند تشرب البذور يعرف نبضة الضوء FR لمنع إنبات 7،8. عندما أزيلت المعاطف البذور من بذور نبضة الضوء FRلم يستطع أن يمنع إنبات، يشير بقوة إلى أن السويداء ويمكن أيضا قمع إنبات البذور nondormant 9. بشكل ملحوظ، ويمكن أيضا أن تستخدم SCBA أن ألخص التي تعتمد على تثبيط إنبات FR. يسمح هذا لإظهار أن ذلك يعتمد-FR تثبيط إنبات البذور هو أيضا عملية تنطوي على الإفراج ABA من السويداء 9. وعلاوة على ذلك، سمحت SCBA تحديد مسارات مختلفة ضوء يشير الحكومية العاملة في السويداء والجنين للسيطرة على إنبات البذور nondormant استجابة لمنبهات ضوء 9،10.
وبالتالي فإن SCBA يبدو أن تقنية موثوقة لاستكشاف وظيفة السويداء في سياق السيطرة على إنبات البذور. بل هو أيضا أداة قوية لتقييم ما إذا كانت الجينات في المختبر يشتبه في السيطرة على إنبات تعمل في السويداء، والجنين أو كليهما الأنسجة. نحن هنا بالتفصيل الخطوات المختلفة اللازمة لتجميع SCBA.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
مرة واحدة يتم تجميعها في SCBA، ويتم رصد نمو الأجنة على مدى عدة أيام. لذلك، قبل إجراء تشريح البذور والتجمع من SCBA، ويحتاج المرء لتعقيم البذور لتجنب التلوث المستقبلية التي يمكن أن تحول دون التقييم السليم لتأثير المواد معطف البذور على النمو الجنيني.
1. تعقيم البذور
- صب 50-60 ميكرولتر من البذور نبات الأرابيدوبسيس ناضجة وجافة في أنبوب microcentrifuge 1.5 مل وإعداد محلول الإيثانول 70٪.
- إضافة 1 مل من الايثانول 70٪ الحل في أنبوب microcentrifuge التي تحتوي على البذور ويهز في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة في 1،200 دورة في الدقيقة في vortexer.
- الطرد المركزي أنبوب microcentrifuge لمدة 3 ثانية في 4000 x ج لتركيز البذور في الجزء السفلي من الأنبوب.
- نضح الحل الايثانول 70٪ باستخدام فراغ شفط غيض ترك بعناية البذور في الجزء السفلي من أنبوب microcentrifuge.
- إضافة 1 مل من الماء المقطر المعقم لر وقال انه لا يزال أنبوب microcentrifuge التي تحتوي على البذور.
- هزة في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة في 1،200 دورة في الدقيقة.
- الطرد المركزي أنبوب microcentrifuge لمدة 3 ثانية في 4000 x ج لتركيز البذور في الجزء السفلي من الأنبوب. نضح طاف المياه باستخدام فراغ شفط غيض ترك بعناية البذور في الجزء السفلي من الأنبوب.
- إضافة 1 مل من الماء المقطر الماء المعقم إلى أنبوب microcentrifuge لا تزال تحتوي على البذور. ضمان تدفق المياه تعلق متجانس البذور داخل الأنبوب. والهدف هنا هو لتجنب المزيد من الهز وذلك للحفاظ على سلامة البذور.
- لندع البذور يستقر عن طريق الجاذبية في الجزء السفلي من الأنبوب من خلال ترك الأنبوب لا يزال لمدة 30 ثانية. نضح طاف المياه باستخدام فراغ شفط غيض ترك بعناية البذور في الجزء السفلي من الأنبوب.
- كرر الخطوات من أربع مرات 1،8-1،9. عموما إجراء التعقيم يستغرق حوالي 30 دقيقة.
2. البذور تصفيح
ontent "> يتم تنفيذ جميع الخطوات اللاحقة داخل مجلس الوزراء تدفق الصفحي للحفاظ على ظروف معقمة.- إعداد لوحة طبق بتري (100 مم، 20 مم الارتفاع) تحتوي على 30 مل من الإنبات المتوسطة بواسطة التعقيم محلول يحتوي على 4.3 غرام / لتر Murashige وسكوغ المتوسطة في 2.5 ملم 2 إعداد - (N-morpholino) حمض ethanesulfonic (MES-KOH ؛ درجة الحموضة 5.7) و 0.8 غرام / لتر أجار. السماح للحل يبرد في حمام مائي 50 ° C قبل صب على لوحة طبق بتري.
- إضافة 200 ميكرولتر من الماء المقطر المعقم إلى الأنبوب الذي يحتوي على البذور. resuspend والبذور ونقلها على سطح متوسطة الإنبات باستخدام ماصة القياسية مع تلميح 1 مل.
- إزالة المياه المحيطة البذور على سطح متوسطة الإنبات باستخدام تلميح شفط فراغ.
- مغادرة طبق بتري تحتوي البذور دون غطاء لها داخل مجلس الوزراء تدفق الصفحي لمدة 2 ساعة لمزيد من التجفيف. إغلاق طبق بتري مع غطاء والسماح لها الوقوف تحت الصفحيتتدفق مجلس الوزراء لمدة 90 دقيقة بحيث مرت حوالي 4 ساعة منذ الشروع في إجراء التعقيم البذور (الخطوة 1.2).
3. تشريح البذور
الخطوات التالية تتطلب العمل مع stereomicroscope وضعت داخل مجلس الوزراء غطاء تدفق الصفحي. A دومون ملقط # 5 مع اقتطاع (أي حادة) نصائح يسهل كثيرا التعامل مع بذور (الشكل 1A).
- إعداد طبق بيتري لوحة جديدة تحتوي على 30 مل من الإنبات المتوسطة. مكان على سطح المتوسطة اثنين جنبا إلى جنب العقيمة أوراق WHATMAN 3MM مستطيلة (1.5 سم × 1.0 سم؛ 1B الشكل، الخطوة 1). يتم تعقيمها WHATMAN 3MM رقة في الأوتوكلاف.
- نقل البذور على أوراق WHATMAN 3MM باستخدام ملقط معقم (1B الشكل، الخطوة 2).
- عقد البذور الفردية ضد الصحيفة WHATMAN 3MM عن طريق الضغط بلطف البذور باستخدام النصائح حادة جنبا إلى جنب من ملقط اقتطاع (
- قطع غلاف البذرة (تيستا والسويداء) من البذور باستخدام إبرة حقنة (مثل U100 الأنسولين حقنة + 1 مل حقنة، 0.33 ملم (29 G) × 12.7 مم) (الشكل 1B، الخطوة 4). شكل بذور نبات الأرابيدوبسيس هو بيضاوي وينصح لخفض معطف البذور على طول أطول محور شبه الرئيسي أقرب ما يمكن إلى المكان حيث انضم إلى النبتات الجذير (أي بعيدا عن الطرف المتطرف). وهذا يساعد على إطلاق سراح آمن للجنين في الخطوة التالية من إجراء تشريح.
- دفع البذور ضد الصحيفة WHATMAN 3MM باستخدام النصائح حادة جنبا إلى جنب من ملقط اقتطاع (1B الشكل، الخطوة 5). هذه الخطوة يطلق الجنين من معطف البذور من خلال افتتاح بإنشائه في الخطوة 3.4 (1B الشكل، الخطوة 6). فمن المستحسن لتطبيق الضغط على البذور حيث غيض من النبتات هي في الأقرب إلى غيض من الجذير (أي بعيدا الابام افتتاح).
4. التجمع من معطف البذور الفراش الفحص (SCBA)
انظر المناقشة لاختيار المناسب من عدد من المعاطف البذور والأجنة.
- إعداد طبق بيتري لوحة جديدة تحتوي على 30 مل من الإنبات المتوسطة. مكان على سطح المتوسطة قطعة مستطيلة معقم (3.5 سم × 5.0 سم) من شبكة نايلون (الشكل 2، الخطوة 1).
- لتجنب الضرر والأجنة والمعاطف البذور يمكن نقلها إلى سطح حواف معدنية من ملقط من قبل دفعهم برفق باستخدام إبرة حقنة (الشكل 2، الخطوة 2). نقل الأجنة والمعاطف البذور على شبكة نايلون (الشكل 2، الخطوة 3).
- تجميع طبقة دائرية واحدة من المعاطف البذور باستخدام ملقط اضعافها والإبرة التأكد من أن البذور المعاطف هي في القرب كما أقرب وقت ممكن (الشكل 2، الخطوة 4). محاولة لكشف أكبر قدر ممكن من افتتاح معطف البذور الناتجة عنإبرة صعودا. لم يختبر هذه الخطوة بشكل منهجي. ومع ذلك، فإنه يمكن أن تزيد من كفاءة SCBA منذ يتوقع أن ينتشر مباشرة من نحو الجنين بدلا من ذلك بعيدا عن المواد إنتشاري تثبيط نمو الجنين.
- وضع الأجنة كما طبقة واحدة دائرية في وسط السرير معطف البذور تجميعها في الخطوة 4.3 (الشكل 2، الخطوة 5). ضمان أن الأجنة في القرب كما أقرب وقت ممكن.
- احتضان SCBAs تحت ضوء مستمر (40 ميكرومول / م 2 ق EC) في 20-21 درجة مئوية. في حالة حيث يتم استخدام نبضة FR لاعتقال إنبات، تجميع SCBA تحت الضوء الطبيعي، وتطبيق نبض FR كما هو موضح 9 وترك طبق بتري في الظلام.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وأظهرت الأعمال السابقة أن بذور متحولة غير قادر على تجميع GA كانوا غير قادرين على الإنبات نتيجة لتراكم عالية ABA في البذور 11،12. ومع ذلك، وعدم القدرة على الإنبات يتطلب معطف البذور منذ زواله يؤدي النمو الجنيني 13. هذا وأشارت بقوة إلى أن السويداء من البذور غير قادر على تجميع GA هو الافراج ABA لمنع النمو الجنيني. وبالتالي فإننا نتوقع البذور المعاطف غير قادر على تجميع GA لمنع نمو الأجنة في SCBA عكس المعاطف البذور غير قادر على تجميع وGA ABA. نحن هنا استخدام GA1-21 (سالك خط الإدراج Salk_109115) بذور متحولة تحمل الإدراج T-DNA تعطيل الجين GA1 (الانضمام AT4G02780) ترميز والأنف والحنجرة-copalyl ثنائي فسفات سينسيز، وهو أمر ضروري لGA الحيوي 14 (SALK_109115 خط الإدراج في GA1 (العقيد تتم الإشارة نوع إيكولوجي) في قاعدة البيانات سالك إشارة 15 ( http://signal.salk. ايدو /).
يتفق مع النتائج السابقة 13، يمكن GA1-21 البذور لا تنبت متحولة 80 ساعة بعد تشرب البذور (الشكل 3، لوحة 1). في المقابل وكذلك بما يتفق مع النتائج السابقة 13، أثار إزالة غلاف البذرة GA1-21 نمو الجنين (الشكل 3، لوحة 2) إلا إذا كان ABA الحاضر في المتوسط (الشكل 3، لوحة 3).
وقد اتخذ لوحة 4 في الشكل 3 80 ساعة بعد تشرب البذور ويظهر SCBA مع GA1-21 الأجنة على سرير من 80 GA1-21 المعاطف البذور. متسقة مع فرضية لدينا، ومنعت GA1-21 المعاطف البذور متحولة نمو الأجنة GA1-21.
وأظهرت الأعمال السابقة التي في البذور نائمة غلاف البذرة يجمع والنشرات ABA نحو الجنين نتيجة التعبير التأسيسية للGA-استجابة عامل DELLA RGL2، وهو ما يعزز تراكم ABA في تشربوابذور 6،11. في ظل الظروف حيث يتم حظر GA التوليف عامل DELLA في RGL2 يتراكم جوهري ويعزز تراكم ABA 11. وبالتالي من المتوقع أن تسمح بنمو GA1-21 الأجنة في SCBA غياب RGL2 والتوليف ABA في GA1-21 المعاطف البذور. لاختبار هذه الفرضية استخدمنا أليل aba2-1 متحولة (العقيد نوع إيكولوجي)، نقص في تخليق ABA نتيجة للطفرة نقطة في ترميز الجين Xanthosin نازعة (AT1G52340) وخط الإدراج rgl2-14 T-DNA (Salk_027654، عمود نوع إيكولوجي) 16.
الشكل 1. إجراء تشريح البذور. أ) رسم تخطيطي يصف كيفية جعل ملقط اقتطاع لتشريح البذور. ملقط يمكن اقتطاع باستخدام مقص أو كماشة. عندما يتم إغلاق ملقط جنبا إلى جنب نصائح اقتطاع شو. غطاء سطح دينار عن حجم بذرة B) الخطوة 1: وضعت اثنين جنبا إلى جنب مستطيلة العقيمة أوراق WHATMAN 3MM على طبق طبق بتري تحتوي MS المتوسطة الصلبة. الخطوة 2: يتم نقل البذور على سطح الأوراق WHATMAN 4 ساعة بعد تشرب. الخطوة 3: إجراء تشريح يتطلب عقد البذور ضد الصحيفة WHATMAN باستخدام ملقط مبتورا. الخطوة 4: يتم استخدام إبرة حقنة لخفض معطف البذور كما هو مبين. الخطوات 5 و 6: وتستخدم جنبا إلى جنب نصائح من ملقط مغلقة لدفع بلطف الجنين للخروج من معطف البذور من خلال موقع الخفض.
الشكل 2. . الإجراء لتجميع فحص البذور الفراش معطف الخطوة 1: وضعت قطعة مستطيلة من شبكة نايلون على طبق طبق بتري تحتوي MS المتوسطة الصلبة. الخطوة 2 و 3: تشريح الأجنة والمعاطف البذور هي بلطفانتقل إلى حواف ملقط باستخدام إبرة حقنة قبل نقلها على شبكة نايلون. الخطوة 4 و 5: تجميع طبقة دائرية واحدة من المعاطف البذور والتخلص من الأجنة كما طبقة واحدة دائرية في وسط السرير معطف البذور تجميعها.
الرقم 3. نتائج ممثلة مع المواد البذور غير قادر على تجميع GA. البذور معطف المقايسات الفراش باستخدام المعاطف وأجنة البذور تشريح GA1 من البذور (GA1-21) متحولة، غير قادر على تجميع GA. تظهر لوحات المواد النباتية كما هو موضح في الشكل 80 ساعة بعد تشرب البذور.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
البذور الفراش معطف مقايسة (SCBA) الإجراء الموضح هنا هو من حيث المبدأ ينطبق على أي ظرف من الظروف حيث يتم حظر إنبات البذور نبات الأرابيدوبسيس (أو تأخر) والتي يشتبه السويداء لتنفيذ هذا الاعتقال. هذا الأخير يمكن أن يتضح من إزالة غلاف البذرة (تيستا والسويداء) وملاحظا أن عائدات النمو الجنيني أسرع بالنسبة لتلك التي لوحظت عند محاصرون الأجنة عن طريق غلاف البذرة. قد يتم حظر إنبات ردا على وجه الخصوص المعلمات المادية البيئية (مثل الماء أو المحتملة ونوعية الضوء) أو في خلفيات وراثية محددة (على سبيل المثال غياب GA التوليف كما في المسوخ GA1، انظر الشكل 3).
لا توجد قواعد عامة بشأن عدد من المعاطف البذور والأجنة لاستخدامها لSCBA. هذا يعتمد على الدفعة البذور (وعلى وجه الخصوص نضارة) ونوع التجربة التي يتعين القيام بها. لذلك من المهم أن adjusر كمية المواد تشريح لكل حالة معينة من خلال رصد النمو على الأجنة على السرير من المعاطف البذور على أساس يومي. ومع ذلك، وعادة بضعة المعاطف البذور ضرورية عندما تستخدم الطرز البيئية نبات الأرابيدوبسيس نائمة للغاية. المبينة أدناه هي كميات نموذجية من المعاطف البذور والأجنة التي تم استخدامها بنجاح عند تجميع SCBAs:
SCBA مع المواد البذور نائمة 6:
* المقطوع حديثا (أي نائمة) الرأس الأخضر جزيرة نوع إيكولوجي (السيدا): استخدام الأجنة 10 و 20 المعاطف البذور.
* المقطوع حديثا ندسبرغ (لير) البذور: استخدام الأجنة 10 و 80 المعاطف البذور.
SCBA في غياب جيبريلين (GA) الحيوي (الشكل 3):
* بذور GA1 متحولة (كولومبيا - العقيد - نوع إيكولوجي): استخدام الأجنة 10 و 80 المعاطف البذور.
* نوع البذور البرية العقيد مع 10 ميكرومتر paclobutrazol (مثبط لGA الحيوي) في متوسطة الإنبات: استخدام 10 الجنينق و 100 المعاطف البذور. إضافة Paclobutrazol عندما يتم تبريد المتوسطة وصولا الى 50 درجة مئوية قبل صب في طبق بتري.
SCBA بعد نبض أحمر بكثير (FR) الضوء 9:
* استخدام الأجنة 12 و 100 المعاطف البذور.
والقيد الوحيد لهذه التقنية SCBA هو أنه يتطلب الصبر والبراعة وذلك لتجميع المواد بسرعة البذور تشريح بينما لا قتل الأجنة. باحث ذوي الخبرة يمكن تشريح 100 البذور في غضون 20-30 دقيقة. ومع ذلك، يمكن للمستخدمين الأقل خبرة في حاجة 1 ساعة، ونتوقع الضرر الجنينية. على حد علمنا هناك حتى الآن أي تقنيات بديلة لاستكشاف دور السويداء من أجل السيطرة على إنبات البذور.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
يعلن الكتاب أنه ليس لديهم مصالح مالية المتنافسة.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية ودولة جنيف.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Thermomixer Comfort | Eppendorf AG | 5355 000.011 | Eppendorf AG, Hamburg, Germany |
| Vacusafe Comfort | INTEGRA Biosciences AG | 158 310 | Integra Biosciences AG, Zizers, Switzerland |
| Petri dish plate (100 mm x 20 mm) | Greiner Bio-One GmbH | 664 102 | Greiner Bio-One GmbH, Frickenhausen, Germany |
| Murashige and Skoog | Sigma-Aldrich | M5524 | Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA |
| MES | Sigma-Aldrich | M3671 | Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA |
| Agar (plant agar) | Duchefa Biochemie B.V. | P1001 | Duchefa Biochemie, Haarlem, Netherlands |
| Dumont forceps #5 | Fine Science Tools GmbH | 11251-10 | Fine Science Tools GmbH, Heidelberg Germany |
| Syringe needle | BD Micro-Fine | 324827 | BD, Franklin Lakes, NJ USA |
| Nylon mesh (SEFAR NYTEX) | SEFAR AG | 03-50/31 | Sefar AG, Heiden, Switzerland |
| Growth chamber | CLF Plant Climatics | Percival I-30BLLX | CLF plant Climatics, Wertingen, Germany |
| Paclobutrazol | Sigma-Aldrich | 46046 | Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA |
References
- Debeaujon, I., Leon-Kloosterziel, K. M., Koornneef, M. Influence of the testa on seed dormancy, germination, and longevity in Arabidopsis. Plant Physiol. 122, 403-414 (2000).
- Baroux, C., Spillane, C., Grossniklaus, U. Evolutionary origins of the endosperm in flowering plants. Genome Biol. 3, reviews1026 (2002).
- Debeaujon, I., Lepiniec, L., Pourcel, L., Routaboul, J. -M. Seed development, dormancy and germination. , Blackwell Publishing. 25-43 (2007).
- Finch-Savage, W. E., Leubner-Metzger, G. Seed dormancy and the control of germination. New Phytol. 171, 501-523 (2006).
- Bethke, P. C., et al. The Arabidopsis aleurone layer responds to nitric oxide, gibberellin, and abscisic acid and is sufficient and necessary for seed dormancy. Plant Physiol. 143, 1173-1188 (2007).
- Lee, K. P., Piskurewicz, U., Tureckova, V., Strnad, M., Lopez-Molina, L. A seed coat bedding assay shows that RGL2-dependent release of abscisic acid by the endosperm controls embryo growth in Arabidopsis dormant seeds. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 19108-19113 (2010).
- Reed, J. W., Nagatani, A., Elich, T. D., Fagan, M., Chory, J. Phytochrome A and Phytochrome B Have Overlapping but Distinct Functions in Arabidopsis Development. Plant Physiol. 104, 1139-1149 (1994).
- Shinomura, T., et al. Action spectra for phytochrome A- and B-specific photoinduction of seed germination in Arabidopsis thaliana. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93, 8129-8133 (1996).
- Lee, K. P., et al. Spatially and genetically distinct control of seed germination by phytochromes A and B. Genes Dev. 26, 1984-1996 (2012).
- Lee, K. P., Lopez-Molina, L. Control of seed germination in the shade. Cell Cycle. 11, 4489-4490 (2012).
- Piskurewicz, U., et al. The gibberellic acid signaling repressor RGL2 inhibits Arabidopsis seed germination by stimulating abscisic acid synthesis and ABI5 activity. Plant Cell. 20, 2729-2745 (2008).
- Piskurewicz, U., Tureckova, V., Lacombe, E., Lopez-Molina, L. Far-red light inhibits germination through DELLA-dependent stimulation of ABA synthesis and ABI3 activity. EMBO J. 28, 2259-2271 (2009).
- Debeaujon, I., Koornneef, M. Gibberellin requirement for Arabidopsis seed germination is determined both by testa characteristics and embryonic abscisic acid. Plant Physiol. 122, 415-424 (2000).
- Sun, T. P., Kamiya, Y. The Arabidopsis GA1 locus encodes the cyclase ent-kaurene synthetase A of gibberellin biosynthesis. Plant Cell. 6, 1509-1518 (1994).
- Alonso, J. M., et al. Genome-wide insertional mutagenesis of Arabidopsis thaliana. Science. 301, 653-657 (2003).
- Rook, F., et al. Impaired sucrose-induction mutants reveal the modulation of sugar-induced starch biosynthetic gene expression by abscisic acid signalling. Plant J. 26, 421-433 (2001).
