Summary
الزبالين لديها القدرة على نقل من المعدية التي تنتقل البريونات اعتلال الدماغ الإسفنجي في فضلاتها إلى مناطق خالية من المرض. نحن أساليب التفاصيل المستخدمة لتحديد ما إذا تبقى البريونات سكرابي الماوس تكييفها المعدية بعد مرور الرغم من أن الجهاز الهضمي من الغربان الأمريكية (غراب brachyrhynchos)، مستهلكا شيوعا من الحيوانات النافقة.
Abstract
ومن المرجح بريون المعدية (بي ار بي الدقة) مادة سبب قاتلة، الاعصاب المعدية اعتلال الدماغ الإسفنجي (TSE) الأمراض 1. انتقال الأمراض بورصة طوكيو، مثل مرض الهزال المزمن (CWD)، يفترض أن يكون من الحيوان الى الحيوان 2،3 وكذلك من المصادر البيئية 4-6. الزبالين والحيوانات آكلة اللحوم لديها القدرة على نقل من مادة بي ار بي الدقة من خلال الاستهلاك وإفراز الملوثة CWD الجيف. وقد وثقت العمل مؤخرا بمرور المواد بي ار بي الدقة عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان الأمريكية (غراب brachyrhynchos)، زبال أمريكا الشمالية المشتركة 7.
نحن تصف الإجراءات المستخدمة لتوثيق مرور المواد بي ار بي الدقة من خلال الغربان الأمريكية. تم gavaged الغربان مع RML سلالة تتكيف مع الماوس سكرابي وتم جمع فضلاتها 4 آخر ساعة تسمين. والبراز الغراب ثم تجميع وحقن الغشاء البريتونى فيC57BL / 6 الفئران. تم رصد الفئران يوميا حتى أعربوا عن علامات سريرية للماوس سكرابي والموت الرحيم كانت بعد ذلك. تم رصد الفئران أعراض حتى 365 يوما بعد التلقيح. أجري تحليل لطخة غربية لتأكيد حالة المرض. وكشفت النتائج أن البريونات المعدية تبقى بعد السفر عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان وموجودة في البراز، مما تسبب المرض في الفئران الاختبار.
Introduction
الاعتلال الدماغي الاسفنجي المعدية (TSE) هي الاضطرابات المعدية القاتلة الاعصاب التي تؤثر على الحياة البرية، والحيوانات الأليفة، والبشر. وكيل المعدية الأمراض بورصة طوكيو يبدو أن تتجمع الأشكال الإسوية أو الممرضة (بي ار بي الدقة) من بروتينات بريون 1. وتشمل الأمراض الحيوانية بورصة طوكيو مرض الهزال المزمن (CWD) في الغزلان بغل (Odocoileus hemionus)، الأيل الأبيض الذيل (Odocoileus virginianus)، الأيائل (Cervus elaphus)، وحيوان الموظ (alces Alces)؛ سكرابي في الأغنام والماعز؛ اعتلال الدماغ الإسفنجي البقري ( مرض جنون البقر) في الأبقار المحلية؛ المعدية التهاب الدماغ المنك المنك في المزارع؛ اعتلال الدماغ الاسفنجي في القطط القطط؛ الغريبة الاعتلال الدماغي الإسفنجي ذوات الحوافر في حديقة الحيوانات الغريبة يجتر من الأبقار الأسرة، واعتلال الدماغ الإسفنجي في الرئيسيات غير البشرية 8. المرض بورصة طوكيو بشرية واحدة، والبديل مرض كروتزفيلد جاكوب، أمر نادر الحدوث ويعتقد أن الحصول عليها عن طريق استهلاك بي ار بي الدقة-كونتامانالغذاء ated 9. وبالمثل، يمكن أن تصيب البشر إذا مرض جنون البقر ويستهلك لحوم البقر الملوثة 10. من جميع الأمراض بورصة طوكيو، سكرابي وCWD هما فقط مع الأوبئة ومصادر للعدوى الاكتفاء الذاتي يفترض أن يكون من الحيوان الى الحيوان 2،3،11 وكذلك من المصادر البيئية 4-6. تشير البحوث إلى أن معظم الأمراض بورصة طوكيو تتطلب فترات حضانة طويلة ملحوظ من الأحداث التعرض للمواد الطبيعية بي ار بي الدقة لمظهر من مظاهر علامات سريرية 2-4،6،8 والحواجز الأنواع الظاهر تقليل، ولكن لا تقضي على إمكانات، انتقال بين الأنواع 12-14 .
تحديد آليات لانتشار بريون المعدية (بي ار بي الدقة) المواد من المهم للغاية للرد على الأسئلة حول كيفية نقل الأمراض بورصة طوكيو عبر المناظر الطبيعية. وأشارت التحقيقات التجريبية التي الحشرات 15،16 والدواجن والخنازير 17، والغربان الأمريكية (غراب براكhyrhynchos) 7،18 ناقلة أو المشتتات السلبي من مادة بي ار بي الدقة. وقد تم مؤخرا توثيق مرور المواد بي ار بي الدقة عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان، مما يدل على الدور الذي قد تلعبه في تشتيت الأمراض بورصة طوكيو 7. هذه النتائج تجعل من المعقول أن الغربان، زبال، يمكن أن تواجهها، تستهلك، ونقل المواد المعدية عن طريق البراز الترسيب، إلى مناطق خالية من المرض.
واستخدمت الإجراءات علينا أن نظهر هنا لتوثيق مرور المواد بي ار بي الدقة من خلال نظام الهضم من الغربان وسوف يسهل كثيرا تطبيق هذه الأساليب لزبال الأخرى ونماذج أكلة اللحوم أنواع محددة في البحوث المستقبلية ذات الصلة. في هذه الدراسة تم استخدام الأساليب التقليدية للتحقيق وسيلة غير تقليدية لتهريب المواد بي ار بي الدقة، والتي يمكن أن تسهم في انتشار والعبء الإجمالي للمادة بي ار بي الدقة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
ويتم تكييف بروتوكول لدينا من احد نشرنا سابقا 7. تمت الموافقة على جميع الإجراءات التي تنطوي على الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام وزارة الزراعة في الولايات المتحدة (USDA)، الحيوان ودائرة التفتيش الصحة النباتية (APHIS)، خدمات الحياة البرية (WS)، المركز القومي للبحوث الحياة البرية (NWRC).
1. الغراب Gavaging
- تقدير مرور الوقت 'المواد الدماغ الزائفة "من خلال القناة الهضمية من الغربان الأمريكية.
- خلط 5 مل من طهي وتدافعت البيض كله مع صبغة زرقاء والتغذية الأنبوبية 1 الغراب باستخدام 2 في التغذية الأنبوبية إبرة (الشكل 1).
- تحقق الغراب كل 30 دقيقة حتى أزرق / أخضر البراز الملطخة لم تعد تفرز يجري.
- الحصول RML (سلالة تشاندلر) المصابة C57BL / 6 أدمغة فئران مصابة بمرض عضال و.
- توليد 20٪ بالوزن / المجلد العادي والمصابة جناسة الماوس في الدماغ في الخالط رصاصة خلاط مع 1Xالفوسفات مخزنة المالحة (PBS) والخرز الزجاجي، ثم الطرد المركزي في 3000 x ج لمدة 1 دقيقة لإزالة الجسيمات الأكبر حجما. إزالة طاف وتمييع مع حجم مساو من برنامج تلفزيوني 1X لتوليد 10٪ بالوزن / المجلد في برنامج تلفزيوني العقيمة. تجميد في -80 درجة مئوية لحين الحاجة إليها.
- 17 ساعة قبل إزالة للتسمين الطعام، ولكن ليس الماء، من الأقلام الغراب.
- تخصيص عشوائيا الغربان لمجموعات العلاج والتغذية الأنبوبية شفويا كل الغراب مع 5 مل من إما طبيعية أو المصابة جناسة الماوس الدماغ باستخدام إبرة 2 في أنبوب تغذية.
- نقل الغربان إلى أقفاص الفردية وجمع وتجميع جميع البراز داخل كل قفص لمدة 4 آخر ساعة التغذية الأنبوبية (الشكل 2).
- التجانس البراز المجمعة لكل الغراب في الخالط رصاصة الخلاط مع الخرز الزجاجي حتى يتم التوصل إلى نسيج موحد. * البراز السائل كرو هي في معظمها ويمكن أن تكون مختلطة بسهولة.
- لكل الغراب، وتمييع 500 ميكرولتر من جناسة البراز إلى 9.5 مل برنامج تلفزيوني 1X لإجمالي حجم 10 مل.
- أجهزة الطرد المركزي في homogena برازيالشركة المصرية للاتصالات لمدة 15 دقيقة في 1،400 x ج واستخراج طاف.
- لتقليل خطر حدوث العدوى الميكروبية الثانوية، وعلاج طاف مع 1 ميكرولتر من 100 وحدة / مل البنسلين و 100 ميكروغرام / مل الستربتوميسين (إينفيتروجن، NY) لكل 100 ميكرولتر من جناسة ثم ضع تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة للحد من خطر التلوث الفيروسية والبكتيرية. بعد التعرض للأشعة فوق البنفسجية، وعينات يصوتن في 3000 النائب sonicator إلى وضع 70 لمدة 30 ثانية لعرقلة غشاء من أي الميكروبات المتبقية.
2. الماوس التلقيح
- عشوائيا تخصيص الفئران إلى مجموعات العلاج التالي (الجدول 1):
- مجموعة 1 - الفئران المعالجة الإيجابية تلقيح الغشاء البريتونى (IP) مع 1 مل من البراز جناسة من الغربان gavaged شفويا مع 5ML أدمغة فئران مصابة.
- مجموعة 2 - السلبية الفئران المعالجة تلقيح IP مع 1 مل من البراز جناسة من الغربان gavaged شفويا مع 5ML أدمغة الفأر العادي.
- تمييع بالعدوىد وطبيعية جناسة الماوس الدماغ للمجموعات 3 و 4 إلى 1:100 ث / ت في برنامج تلفزيوني 1X.
- المجموعة 3 - السيطرة على الفئران الملقحة إيجابي IP مع 1 مل من المصابة جناسة الماوس في الدماغ.
- مجموعة 4 - السلبية السيطرة على الفئران الملقحة IP مع 1 مل من الطبيعي جناسة الماوس في الدماغ.
| المجموعة المعاملة | عدد من الحيوانات | |
| مجموعة 1 | سكرابي + كرو البراز | 100 |
| مجموعة 2 | سكرابي - كرو البراز | 25 |
| مجموعة 3 | سكرابي + ماوس الدماغ | 10 |
| مجموعة 4 | سكرابي - ماوس الدماغ | 5 |
. الجدول 1 حالة سكرابي من اللقاح (+ إيجابية أو سلبية -) وعدد من الحيوانات المستخدمة 7.
- الغشاء البريتونى تطعيم الماوس:
- القفا الماوس عن طريق الظهرية الفراء الرقبة مع الإبهام والسبابة وبلطف تدوير لفضح الجانب البطني.
- رفع نهاية الخلفي من الماوس حتى الرأس هو أقل قليلا.
- إدراج 25 G الإبرة من خلال الجلد 1 سم، 1 سم الوحشي من خط الوسط، و 1-2 سم الأمامي إلى المفصل العجزي الحرقفي باستخدام حقنة تأمين إبرة.
- 1 مل حقن تطعيم ببطء في الجسم تجويف الفأرة.
3. رصد الماوس
- رصد الفئران يوميا حتى أنها تعبير عن علامات سريرية للماوس سكرابي. ويمكن أن تشمل العلامات السريرية: حداب، وترنح، وذيل شديدة، وعدم الاستمالة، والهزال، والخمول.
- يسجل الفئران لكل من العلامات السريرية 6 عندما علامات واضحة جلية، حيث 0 = لا شيء مرئي، 1 = معتدلة، و 2 = شديد.
- الموت ببطء الفئران عندما مجموع الدرجات يوميا لتصل إلى كل علامة ≥ 8 ل1 يوم، 6 ≥ مستمر لمدة 3 أيام، أو على 365 يوما بعد التلقيح (نقطة في البوصة).
- أدمغة الحصاد euthan التالية مباشرةآسيا وتخزينها في -70 درجة مئوية.
- لتأكيد تشخيص سكرابي، هضم عينات الدماغ مع 3 ميكرولتر من 50 ميكروغرام / مل من بروتين-K الحل (PK) المخفف على النحو التالي: 3.1. ميكرولتر PK، 12.5 ميكرولتر من 500 ملي EDTA، ودرجة الحموضة 8، 109.39 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني 1X لمدة 30 دقيقة عند 45 درجة مئوية، ثم إبطال نشاط PK بإضافة 8 ميكرولتر العازلة التحميل واحتضان العينات في 95 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. عينات الحمل على 12٪ هلام SDS-PAGE، electrophorese ونقل إلى Immobilon PVDF غشاء وكتلة مع 5٪ الحليب الخالي في 0.2٪ توين 20 في برنامج تلفزيوني لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. ثم بحث مع Bar224 المضادة للبي ار بي الأضداد وحيدة النسيلة مترافق إلى البيروكسيديز الفجل، مخففة في Superblock، لمدة 1 ساعة في درجة حرارة الغرفة. شطف الغشاء لمدة 1 ساعة مع PBS-0.2٪ توين 20. لتصور، واحتضان الغربية وصمة عار 5 دقائق مع الركيزة chemiluminescent وصورة على G-مربع نظام التوثيق هلام.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
شرح الإجراءات المستخدمة أن الجهاز الهضمي من الغربان لا يلغي بي ار بي الدقة العدوى 4 ساعة بعد بالتزقيم عن طريق الفم من جناسة سكرابي الدماغ 7. كل عشرين الغربان التي تم gavaged مع المواد بي ار بي الدقة تنتقل لاحقا مادة بي ار بي الدقة عبر البراز إلى الفئران. وقد تم تحديد الفئران المريضة التي كتبها مظهر من مظاهر علامات الفأر سكرابي السريرية واكتمل تأكيد المرض عن طريق تحليل لطخة غربية.
التحقيق في الوقت الاحتفاظ المواد تناولها من قبل الغربان كشفت وقت المرور عبر القناة الهضمية لغراب gavaged أن تكون 4 ساعات، على أساس وجود الصبغة في البراز (الشكل 1). جمعت كل البراز مع ماصات القابل للتصرف وتجميع لكل الغراب (الشكل 2). السمية الحادة من البراز الغراب غير المعالجة وقعت عندما تم حقن طاف البراز الخام الملكية الفكرية في الاختبار التجريبي الفئران. عن طريق علاج تلقيح البراز مع البنسلين وتعزيز بنية الشعptomycin، وعلى ضوء الأشعة فوق البنفسجية، ونحن صوتنة التخفيف من حدة هذه المشكلة.
كل الفئران الملقحة إما مع سكرابي إيجابية مخ الفأر (9/9) أو البراز من الغربان-تلقيح سكرابي (66 * / 84) وضعت علامات سريرية واختبارها إيجابية من خلال تحليل لطخة غربية (الشكل 3)، وتبين أن سكرابي مرت بسهولة من خلال الجهاز الهضمي من الغربان والأمراض الناجمة. * توفي ثمانية عشر الفئران خلال 3 أيام من التلقيح، على الأرجح بسبب السمية. ولكن كل واحد (1/23)، سكرابي السلبية الفئران الملقحة السلبية من خلال تحليل لطخة غربية. نحن نفترض أن هذا الفأر كان تلقيح عن غير قصد مع البراز الغراب-سكرابي إيجابية بدلا من البراز من الغراب-سكرابي سلبية.
الشكل 1. الغراب ضبط النفس يدويا وgavaged شفويا مع 5 مل من البيض كله مختلطة مع الصبغة الزرقاء (أ) و (ب)LUE / البراز الأخضر الملون 4 آخر ساعة التغذية الأنبوبية (B). اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
الشكل 2. جمع البراز الغراب مع ماصة قبل التجانس. اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
الرقم 3. . SDS-الصفحة طخة غربية ممثل مخ الفأر من الأحيائي NBH المعتاد جناسة الماوس الدماغ، سكرابي، السلبية، TX القفص 4 - الدماغ من الماوس تلقيح مع البراز من الغراب-تلقيح سكرابي. مع (+) وwithouر (-). PK (بروتين K) الهضم اضغط هنا لمشاهدة صورة بشكل اكبر .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
نحن يبرهن على وجود إجراءات لتوثيق مرور المواد بي ار بي الدقة عن طريق الجهاز الهضمي من الغربان. استخدمنا الطرق التقليدية لتحديد ما إذا الغربان لديها القدرة على نقل من مادة بي ار بي الدقة إلى مناطق جغرافية خالية من الأمراض. وقد قيمت الآخرين مقاومة بي ار بي الدقة لالمجترة 19-21 والقوارض 22،23 سوائل الجهاز الهضمي، وكلاهما فشل في القضاء عليه. ينبغي أن تطبق تطبيقها في المستقبل من هذه التقنيات إلى الحيوانات آكلة اللحوم الأخرى 24 كما يمكن أيضا يحتمل أن تواجه المواد بي ار بي الدقة في الجيف ونقل هذه المواد عبر المشهد تسهيل انتشار الأمراض بريون.
واضاف نحن أزرق تلوين الطعام لدينا البيض المخفوق 'الزائفة الدماغ' المواد، وتوفير وسيلة بسيطة لتقييم الوقت التقريبي للمرور المتجانس مخ الفأر من خلال القناة الهضمية من الغربان. ونحن ننصح الآخرين النظر هذه التقنية لأول الإضافيةPECT لون البراز من الحيوانات الموجودة الدراسة ومن ثم استخدام تلوين الطعام التي هي الأكثر المتناقضة. وهذا سوف يسمح لسهولة تحديد المواد الملون لون الطعام الذي مر خلال الحيوانات الدراسة. اخترنا لاستخدام تلوين الطعام لتقدير الوقت مرور، ولكن البعض الآخر قد استخدمت صبغة الفلورسنت 25، 26 أكسيد الحديديك، علامات بلاستيكية ملونة 27، ورقائق معدنية ملونة (أي بريق) 28.
التقليل من خطر العدوى الميكروبية الثانوية من البراز الغراب وتحصين الفئران بشكل صحيح هي نقطة الانطلاق الرئيسية للدراسات الماوس بريون التي تتطلب فترات حضانة طويلة. إذا ما انتهكت أي من هذه الاعتبارات، ومن المرجح أن يؤدي فيات الماوس في وقت مبكر.
آخر أداة ممكنة لتحقيق المسلسل هو البروتين misfolding التضخيم دوري أو sPMCA لتقييم عينات البراز الغراب مع مرور الوقت لتحديد كيفية طويلة بعد الغربان أنبوب تغذية عن طريق الفم تمرير المواد المعدية، معإلى الحاجة لالأحيائي الماوس. التطورات الحديثة في تحليل البراز PMCA بواسطة بولفورد، وآخرون. تشير إلى أن التضخيم من مستويات دقيقة من البريونات يمكن الكشف عنها في البراز الثدييات 29، مما يشير إلى PMCA قد تكون أيضا أداة مفيدة لتقييم البراز الطيور. يمكن استخدام الماوس الأحيائي ونهج sPMCA لتقييم العدوى المتبقية في البراز من الغربان gavaged مع المواد المصابة CWD. سوف تكون هناك حاجة لخط الماوس المعدلة وراثيا cervidized وداخل المخ مقابل التلقيح داخل الصفاق من شأنه أن يعطي نتائج أسرع.
الزبالين الطيور مثل الغربان، النسور، النسور و، يمكن أن تلعب دورا في انتشار الأمراض بورصة طوكيو، وهي CWD في أمريكا الشمالية. هذه الأنواع يمكن أن تستهلك الأنسجة CWD إيجابية من الذبائح المريضة أو أحشاء (في حالة cervids قتلت صياد) ونقل من المواد المعدية في فضلاتها إلى مناطق خالية من السكان أو CWD من cervids. كما ممارسة تغذية الحبوب لcervids، في البرية أو الأسيرةالإعدادات، يجذب الغربان التي يمكن التبرز على مصدر الغذاء وأن تستهلك دون قصد من قبل cervids، وبالتالي ممارسة ذات المخاطر العالية (فركوترن الملاحظة الشخصية). علاوة على ذلك، على الرغم من أن احتمالات الحيوانات خالية من المواد CWD تواجه بي ار بي الدقة من خلال البراز عشوائي ترسب قد تكون منخفضة، والمناطق التي تتركز فيها الغربان، وبالتالي فضلاتها، مثل أدناه مواقع تجثم عليها الوطاويط الطائفي، يمكن أن تصبح من المناطق المعرضة للخطر لانتقال المرض منذ البريونات هي مستمرة حتى في البيئة 30،31.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
أعلن عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
نود أن نشكر S. فيرنر لتوفير الغربان المستخدمة في هذه الدراسة وزارة الزراعة الأميركية، APHIS، WS، NWRC موظفي الرعاية الحيوانية لرعاية الحيوان والرصد. أذكر أو استخدام منتج لا يعني تأييد وزارة الزراعة الأميركية. تم توفير التمويل لهذه الدراسة من قبل وزارة الزراعة الأميركية، APHIS، الخدمات البيطرية.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RML Chandler strain mouse-adapted scrapie | Rocky Mountain Laboratories | ||
| RC57BL/6 mice | Hilltop Lab Animals | ||
| American crows | wild captured | ||
| Pen/Strep | Invitrogen | 15140-122 | |
| Phosphate buffered Saline | Invitrogen | 70011-044 | |
| Sonicator | Misonix | ||
| Proteinase-K solution | Roche | 3115887001 | |
| Loading buffer | Invitrogen | NP0007 and 0009 | |
| Bis-tris SDS PAGE 12% gel | Invitrogen | NP0342 | |
| Immobilon PVDF membrane | Millipore | 1SEQ00010 | |
| Tween 20 | Sigma Aldrich | P2287 | |
| Bullet blender homogenizer | Braintree Scientific | BBX24B | |
| 2.3 mm Zirconia/silica beads | BioSpec Products | 11079125Z | |
| Bar224 anti-PrP monoclonal antibody | Cayman Chemical | 10009035 | |
| Superblock | Thermo Scientific | 37517 | |
| chemiluminescent substrate | Millipore | WBKLS0500 | |
| G-box gel documentation system | Syngene |
References
- Prusiner, S. B. Novel proteinaceous infectious particles cause scrapie. Science. 216 (4542), 136-144 (1982).
- Miller, M. W., Williams, E. S., et al. Epizootiology of chronic wasting disease in free-ranging cervids in Colorado and Wyoming. Journal of Wildlife Diseases. 36 (4), 676-690 (2000).
- Miller, M. W., Williams, E. S. Horizontal prion transmission in mule deer. Nature. 425 (6953), 35-36 (2003).
- Sigurdson, C. J., Adriano, A.
- Miller, M. W., Williams, E. S., Hobbs, N. T., Wolfe, L. L. Environmental sources of prion transmission in mule deer. Emerging Infectious Diseases. 10 (6), 1003-1006 (2004).
- Mathiason, C. K., Hays, S. A., et al. Infectious prions in pre-clinical deer and transmission of chronic wasting disease solely by environmental exposure. PLoS ONE. 4 (6), e5916 (2009).
- VerCauteren, K. C., Pilon, J. L., Nash, P. B., Phillips, G. E., Fischer, J. W. Prion remains infectious after passage through digestive system of American crows (Corvus crachyrhunchos). PLoS ONE. 7 (10), e45774 (2012).
- Imran, M., Mahmood, S. An overview of animal prion diseases. Virology Journal. 8 (493), (2011).
- Watts, J. C., Balachandran, A., Westaway, D. The expanding universe of prion disease. PLoS PATHOGENS. 2 (3), e26 (2006).
- Bruce, M. E., et al. Transmissions to mice indicate that 'new variant' CJD is caused by the BSE agent. Nature. 389 (6650), 498-501 (1997).
- Ryder, S., Dexter, G., Bellworty, S., Tongue, S. Demonstration of lateral transmission of scrapie between sheep kept under natural conditions using lymphoid tissue biopsy. Research in Veterinary Science. 76 (2004), 211-217 (2004).
- Collinge, J.
- Beringue, V., Vilotte, J. L., Laude, H. Prion agent diversity and species barrier. Veterinary Research. 39 (47), (2008).
- Harrington, R. D., Baszler, T., et al. A species barrier limits transmission of chronic wasting disease to mink (Mustela vison). The Journal of General Virology. 89 (4), 1086-1096 (2008).
- Wisniewski, H. M., Sigurdarson, S., Rubenstein, R., Kascsak, R. J., Carp, R. I. Mites as vectors for scrapie. Lancet. 347 (9008), 1114 (1996).
- Post, K., Riesner, D., Walldorf, V., Mehlhorn, H. Fly larvae and pupae as vectors for scrapie. Lancet. 354 (9194), 1969-1970 (1999).
- Matthews, D., Cooke, B. C. The potential for transmissible spongiform encephalopathies in non-ruminant livestock and fish. Revue Scientifique Et Technique-Office International Des Epizooties. 22 (1), 283-296 (2003).
- Jennelle, C. S., Samuel, M. D., Nolden, C. A., Berkley EA, Deer carcass decomposition and potential scavenger exposure to chronic wasting disease. Journal of Wildlife Management. 73 (5), 655-662 (2009).
- Scherbel, C., Pichner, R., et al. Degradation of scrapie associated prion protein (PrPSc) by the gastrointestinal microbiota of cattle. Veterinary Research. 37 (5), 695-703 (2006).
- Jeffrey, M., Gonzaález, L., et al. Transportation of prion protein across the intestinal mucosa of scrapie susceptible and scrapie-resistant sheep. Journal of Pathology. 209 (1), 4-14 (2006).
- Nicholson, E. M., Richt, J. A., Rasmussen, M. A., Hamir, A. N., Lebepe-Mazur, S., Horst, R. L. Exposure of sheep scrapie brain homogenate to rumen-simulating conditions does not result in a reduction of PrP(Sc) levels. Letters in Applied Microbiology. 44 (6), 631-636 (2007).
- Motes C, M. aluquerde, Grassi, J., et al. Excretion of BSE and scrapie prions in stools from murine models. Veterinary Microbiology. 131 (1-2), 205-211 (2008).
- Kruger, D., Thomzig, A., Lenz, G., Kampf, K., McBride, P., Beekes, M. Faecal shedding, alimentary clearance and intestinal spread of prions in hamsters fed with scrapie. Veterinary Research. 40 (1), 4 (2009).
- Mathiason, C. K., Nalls, A. V., et al. Susceptibility of domestic cats to chronic wasting disease. Journal of Virology. 87 (4), 1947-1956 (2013).
- Bjorndal, K. A. Flexibility of digestive responses in two generalist herbivores, the tortoises Geochelone carbonaria and Geochelone denticulate. Oecologia. 78 (3), 317-321 (1989).
- Clark, R. G., Gentle, G. C. Estimates of grain passage time in captive mallards. Canadian Journal of Zoology. 68 (11), 2275-2279 (1990).
- Dierenfeld, E. S., Koontz, F. W. Feed intake, digestion and passage of proboscis monkey (Nasalis larvatus) in captivity. Primates. 33 (3), 399-405 (1992).
- Thompson, A. K., Samuel, M. D., Van Deelen, T. R. Alternative feeding strategies and potential disease transmission in Wisconsin white-tailed deer. Journal of Wildlife Management. 72 (2), 416-421 (2008).
- Pulford, B., Spraker, T. A., et al. Detection of PrPCWD in feces from naturally exposed Rocky Mountain elk (Cervus elaphus nelsoni) using protein misfolding cyclic amplification. Journal of Wildlife Diseases. 48 (2), 425-433 (2012).
- Hicks, R. E. Guano deposition in an Oklahoma crow roost. Condor. 81 (3), 247-250 (1979).
- Aldous, S. E.
