Костного мозга, полученных макрофагов производства
Summary
Макрофаги уже давно признаны как ключевой компонент врожденной и адаптивной иммунной реакции. Недавний взрыв знаний по проблемам эволюционной, генетических и биохимических аспектов взаимодействия между макрофагами и микробов возобновил научную внимание макрофагов. Эта статья описывает способ дифференцироваться макрофаги из костного мозга мыши.
Abstract
Макрофаги являются важнейшими компонентами врожденной и адаптивной иммунных реакций, и они являются первой линией обороны против иноземных захватчиков из-за их мощных бактерицидных деятельности. Макрофаги широко распространены по всему телу и присутствуют в лимфоидных органах, печени, легких, желудочно-кишечного тракта, центральной нервной системы, костей, и кожа. Из-за их передела, они участвуют в широком диапазоне физиологических и патологических процессах. Макрофаги очень универсальный клетки, которые способны распознавать микросреды изменения и поддерживать тканевого гомеостаза. Многочисленные патогены развивались механизмы использовать макрофаги как троянские кони, чтобы выжить, размножаться в, и заразить людей и животных и пропагандировать по всему телу. Недавний взрыв интереса к эволюционных, генетических и биохимических аспектов хост-патогенных взаимодействий возобновил научную внимание относительно макрофагов. Здесь мы описываемПроцедура, чтобы изолировать и культивировать макрофаги от мышиного костного мозга, который будет обеспечивать большое количество макрофагов для изучения хост-патогенных взаимодействий, а также другие процессы.
Introduction
Существенным аспектом функции макрофагов их роль в врожденного и адаптивного иммунитета. Из-за их способности фагоцитируют инертные частицы, бактерии или паразиты, макрофаги являются первой линией обороны против иноземных захватчиков. После того, как усвоены, микробы разлагаются в фаголизосомах. Макрофаги также отправить по подбору сигналы для и представить антигены других иммунных клеток, таких как Т-лимфоцитов. Макрофаги получены из моноцитов. Моноциты возникают в костном мозге из миелоидных стволовых клеток и мигрируют в периферической крови и различных тканях, где они дифференцируются в макрофаги. Считается, что здоровый взрослый мыши содержит около 10 8 макрофаги, которые распространяются по всему телу в различных органах и тканях (табл. 1) 1,2. Макрофаги проявляют большую фенотипические и функциональное разнообразие из-за их способности адаптироваться к их микросреды 3,4. Наиболее важным macropХадж свойство их бактерицидная активность, которая определяется их способностью фагоцитируют микробы и уничтожить их. Фагоцитарной ответ определяется активации сложных сетей сигнализации, которые стимулируются микробной контакта, таким образом, макрофаги модулировать экспрессию генов соответствующим образом в ответ на различные стимулы. После фагоцитоза, микробы будут устранены в структуре, называемой фаголизосом, однако многие болезнетворные микробы разработали стратегии, чтобы подорвать функцию микробицидную макрофагов 5. Разнообразие механизмов подрывной, которые используются различными видов микроорганизмов является свидетельством сложности процесса фагоцитоза 6 и фаголизосомы биогенеза. Инфекционные болезни являются главной проблемы со здоровьем человека, а также многочисленные механизмы и молекулы участвуют в макрофагов антимикробных деятельности. Кроме того, мишенями бактерицидных свойств, которые угнанных микробами остаются неизвестными, таким образом, существует еXplosion интереса к эволюционных, генетических и биохимических аспектов хозяин-патоген взаимодействий, которые возобновил научную внимание относительно макрофагов. В настоящее время большинство исследований в области делается на макрофагах клеточных линий, которые отличаются от первичных макрофагов в фагоцитарной активности, производство цитокинов и регуляции окислительного всплеска. Кроме того, они менее пригодны для микроскопии. Исследовать взаимодействие макрофагов-патогенные рекомендуется использовать первичные макрофаги, таких как костный мозг, полученных макрофагов (BMDMs), которые проявляют более физиологические особенности. Кроме того, можно работать на генетически модифицированных BMDMs, потому что эти макрофаги могут быть выделены непосредственно из трансгенных мышей и, при наличии новых технологий, таких как лентивирусов трансфекции их профиль экспрессии генов может быть изменена путем генной экспрессией или РНК-интерференции. Здесь мы описываем процедуру дифференцировать мышиный кости мстрелка в макрофаги, которые обеспечат большое количество макрофагов в 7 дней для различных функциональных анализов, таких как протеомики 7, транскриптомику 8, внутриклеточный торговля изучает 9, динамические исследования 10, генетические экранов (RNAi) и наркотики 11.
Protocol
Representative Results
Discussion
Протокол, описанный здесь подробно способ получения большого количества BMDMs. BMDM первичные клетки и обладают биологической функцией и свойства макрофагов дифференцированных из моноцитов, потому что есть зрелый, в отличие от макрофагов клеточных линий, которые незрелыми. BMDMs могут быть …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана CNRS (фото 2012-2014 в EG) и грантом Regione Кампании (LR n.5, 28.03.2002 в Джованна Моттола). Филиппо Конти является членом Научного Сотрудничества Foundation'' Infectiopole Sud.'' Никола Boucherit является членом французского министерства по исследованиям и технологиям. Источники финансирования не было никакой роли в дизайн исследования, сбор данных, анализ данных, решение о публикации или печатных работ.
Materials
| Name of Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| DMEM | Gibco Life Technologies | 21969-035 | |
| Fetal Calf Serum | Gibco Life Technologies | 10270 | |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco Life Technologies | 15070 | |
| Glutamine | Gibco Life Technologies | 25030-024 | |
| PBS (10x) | Lonza | BEM515F | |
| Red Blood Cell Lysis buffer | Sigma | R7757 | |
| Cell strainer 70 μm Nylon | BD Falcon | 352350 | |
| Cell strainer 40 μm Nylon | BD Falcon | 352340 | |
| 50 ml tubes | any supplier | n/a | |
| 15 ml tubes | any supplier | n/a | |
| Petri dishes (100/20 mm) | any supplier | n/a | culture treated |
| Petri dishes (35/10 mm) | any supplier | n/a |
References
- Rutherford, M. S., Witsell, A., Schook, L. B. Mechanisms generating functionally heterogeneous macrophages: chaos revisited. J. Leukocyte Biol. 53, 602-618 (1993).
- Van Furth, R., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. . Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).
- Adams, D., Halmiton, T., Gallin, J. I., Goldstein, I. M., Snyderman, R. . Inflammation: Basic Principles and Clinical Correlates. 112, 325-336 (1992).
- Morris, L., Graham, C. F., Gordon, S. Macrophages in haemopoietic and other tissues of the developing mouse detected by the monoclonal antibody F4/80. Development. 112, 517-526 (1991).
- Haas, A. The phagosome: compartment with a license to kill. Traffic. 8, 311-330 (2007).
- Underhill, D. M., Ozinsky, A. Phagocytosis of microbes: complexity in action. Annu. Rev. Immunol. 20, 825-852 (2002).
- Castagna, A., Polati, R., Bossi, A. M., Girelli, D. Monocyte/macrophage proteomics: recent findings and biomedical applications. Expert Rev. Proteomics. 9, 201-215 (2012).
- Benoit, M., Desnues, B., Mege, J. L. Macrophage polarization in bacterial infections. J. Immunol. 181, 3733-3739 (2008).
- Barry, A. O., et al. Impaired stimulation of p38alpha-MAPK/Vps41-HOPS by LPS from pathogenic Coxiella burnetii prevents trafficking to microbicidal phagolysosomes. Cell Host Microbe. 12, 751-763 (2012).
- Henry, R. M., Hoppe, A. D., Joshi, N., Swanson, J. A. The uniformity of phagosome maturation in macrophages. J. Cell Biol. 164, 185-194 (2004).
- Sundaramurthy, V., et al. Integration of Chemical and RNAi Multiparametric Profiles Identifies Triggers of Intracellular Mycobacterial Killing. Cell Host Microbe. 13, 129-142 (2013).
- Boltz-Nitulescu, G., et al. Differentiation of rat bone marrow cells into macrophages under the influence of mouse L929 cell supernatant. J. Leukocyte Biol. 41, 83-91 (1987).
