يصف هذا البروتوكول كيفية تشريح premigratory قمة العصبية القحفية (NC) من القيطم neurulas المورق. هذه إإكسبلنتس يمكن مطلي على فبرونيكتين وتربيتها في المختبر، أو المطعمة مرة أخرى إلى الأجنة المضيفة. هذه التقنية تسمح بدراسة آليات NC ظهارة إلى اللحمة المتوسطة التي تمر بمرحلة انتقالية، والهجرة، والتمايز.
قمة العصبية (NC) هو السكان الخلية الظهرية الأنبوب العصبي عابرة أن يخضع لظهارة الانتقالية إلى اللحمة المتوسطة (EMT) في نهاية تكون العصيبة، على نطاق واسع يهاجر نحو مختلف الأجهزة، ويميز في العديد من أنواع المشتقات (الخلايا العصبية، الدبقية، الغضاريف والعظام، والخلايا الصباغية والغدد الصماء). في هذا البروتوكول، ونحن تصف كيفية تشريح الجمجمة NC premigratory من الأجنة القيطم المورق، من أجل دراسة تطوير NC في الجسم الحي في المختبر. نموذج الضفدع توفر العديد من المزايا لدراسة التطور المبكر؛ هي دفعات وفيرة والأجنة تتطور بسرعة، في الجسم الحي الربح والخسارة من وظيفة تسمح استراتيجيات التلاعب في التعبير الجيني قبل NC في تشريح المانحة و / أو الأجنة المضيفة. لل explants NC يمكن مطلي على فبرونيكتين وتستخدم لفي الدراسات المختبرية. أنها يمكن تربيتها لعدة أيام في وسط المصل خالية محددة. نحن أيضا تصف كيفية الكسب غير المشروع إإكسبلنتس NC العودةفي الأجنة المضيفة لدراسة الهجرة NC والتمايز في الجسم الحي.
قمة العصبية (NC) هي الخلايا الجنينية عابرة السكان أن يخرج من الأنبوب العصبي في نهاية تكون العصيبة في أجنة الفقاريات. الأحداث إشارات والوراثية التي تتحكم في مواصفات NC تبدأ في وقت مبكر تكون المعيدة. يتم تحديد NC على الحدود بين العصبية والأديم الظاهر غير العصبية التي كتبها إشارات من الأنسجة المحيطة الظهرية. في نهاية تكون العصيبة، والخلايا NC الخضوع لظهارة الانتقال إلى اللحمة المتوسطة (EMT) والهجرة على نطاق واسع في الجنين التالية الطرق النمطية من خلال الاستجابة لتوجيه العظة المحيطة. بمجرد أن وصلت إلى وجهتها النهائية، فإنها تفرق في مجموعة واسعة من المشتقات، مثل الخلايا العصبية، الدبقية والعظام والغضاريف، والخلايا الصباغية 1-5. بسبب مساهمتها في العديد من أنواع الخلايا والأنسجة الجنينية، والعيوب في أي خطوة من تطوير خلايا NC، من الحث على التمايز النهائي، يمكن أن يسبب أعراض الخلقية اسمه neurocristopathies 6. Eالتلاعب xperimental من NC النامية في مراحل مختلفة – مواصفات، EMT، والهجرة، والتمايز – من شأنها تحسين فهمنا للneurocristopathies والسماح تصميم الاستراتيجيات العلاجية المحتملة.
والمورق القيطم الجنين هو نموذج من خيار لدراسة تطوير NC. أعداد كبيرة من الأجنة من السهل الحصول عليها، والإخصاب الخارجي يتيح الوصول إلى الخطوات الأولى من التنمية. العديد من الأدوات المتاحة لمعالجة تجريبيا اكس. المورق التطور الجنيني. مكسب من وظيفة وضربة قاضية الجينات هي سهلة لأداء microinjecting بواسطة الخلايا الفردية من blastulas في وقت مبكر. ويمكن خفض الأنسجة الجنينية في المختبر لإعادة الترابط 7-11 أو ترقيع العودة المقايسات 12،13.
في هذا البروتوكول، ونحن تصف كيفية تشريح خارج premigratory NC في الجمجمة X. المورق neurulas في وقت متأخر، قبل الهجرة. يمكن تربيتها هذه إإكسبلنتس على فبرونيكتين-coateلوحات د لدراسة الهجرة وتمايز في التحكم في ظروف تجريبية المختبر. ويمكن أيضا أن المطعمة إإكسبلنتس NC في الأجنة المضيفة العادي أو التلاعب بها لدراسة هجرتها والتمايز في الجسم الحي.
يصف هذا البروتوكول تقنية سهلة لازدراع premigratory الجمجمة NC في اكس الأجنة المورق. الأجنة المستخدمة في مثل هذه التجارب تحتاج إلى أن تكون قوية وتلتئم بشكل جيد. تجاهل أي دفعة من الأجنة غير صحية. بالإضافة إلى ذلك، تنمو الأجنة في درجات حرارة مختلفة (من 12 إلى 18-20 درجة مئ…
The authors have nothing to disclose.
المؤلفين أشكر أدلين دوللي للصور من يزدرع على فبرونيكتين، اريك Theveneau لإجراء مناقشات مفيدة ومرفق الحيوان من معهد كوري. CM هو زميل ما بعد الدكتوراه لمنطقة إيل دي فرانس (دومين من أجل المصلحة فيل الجذعية القطب)، جامعة باري سود (الملحق Temporaire كوت ENSEIGNEMENT آخرون للبحوث)، والوكالة الوطنية للبحوث لا. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل جامعة باري سود (Attractivite 2011)، والمركز الوطني للبحوث العلميه (برنامج العمل Thematique آخرون Incitative سور)، والرابطة من أجل لا مناهضة بحوث السرطان جنيه منحة SFI20101201882، الدوري الفرنسي الدرجة مناهضة جنيه للسرطان، والوكالة الوطنية دي لا بحوث (الوكالة الوطنية للبحوث برنامج لا بلان).
Fibronectin from bovine plasma | Sigma | F4759-1MG | |
Bovine Serum Albumine. Fraction V | Euromedex | 04-100-811-C | Lower quality grade may be suitable for this application |
Stainless Steel Insect Pins. Size 000 | FST | 26001 | |
Dumont #5 forceps 0.05 mm x 0.02 mm | FST | 11252-20 |