Summary
Этот протокол детали по результатам анализа предназначен для измерения человеческого хемотаксис нейтрофилов из одной капли цельной крови с надежной воспроизводимости. Такой подход позволяет обойти необходимость разделения нейтрофилов и требует всего несколько минут для анализа времени на подготовку. Микрожидкостных чип позволяет повторное меру хемотаксис нейтрофилов в течение долгого времени у младенцев или мелких млекопитающих, где объем образца ограничено.
Abstract
Нейтрофилы играют существенную роль в защите от инфекций и их номера в крови часто измеряется в клинике. Более высокие нейтрофилов в крови, как правило, является показателем текущих инфекций, в то время как низкие показатели нейтрофилов являются предупреждающий знак для более высоких рисков для инфекций. Для выполнения своих функций, нейтрофилы также должны быть в состоянии эффективно перейти от крови, где они проводят большую часть своей жизни, в ткани, где происходят инфекции. Следовательно, любые дефекты в способности нейтрофилов мигрировать может увеличить риск для инфекций, даже когда нейтрофилы присутствуют в соответствующих количествах в крови. Тем не менее, измерения миграции нейтрофилов способности в клинике является сложной задачей, которая требует много времени, требуется большой объем крови, и экспертные знания. Чтобы преодолеть эти ограничения, мы разработали надежные микрофлюидных анализов для миграции нейтрофилов, которая требует единого капельку необработанной крови, обстоятельствоотверстия необходимость разделения нейтрофилов и легко количественно на простом микроскопом. В этом анализе нейтрофилы мигрируют непосредственно от капли крови, через небольшие каналы, по направлению к источнику хемоаттрактанта. Для предотвращения гранулированный поток эритроцитов по тем же каналам, мы внедрили механические фильтры с прямым углом поворачивает, что выборочно блокировать продвижение красных кровяных клеток. Мы подтвердили анализа путем сравнения миграцию нейтрофилов из капель крови, собранных от пальца, и венозной крови. Мы также сравнили эти цельной крови (ВБ) источников с миграцию нейтрофилов из образцов очищенных нейтрофилов и нашел постоянную скорость и направленность между тремя источниками. Это микрофлюидных платформа позволит изучение миграции нейтрофилов человека в клинике и установке исследования, чтобы помочь продвинуть наше понимание нейтрофилов функций в норме и патологии.
Introduction
Торговля нейтрофилов играет важную роль в определении прогресса и решение многих воспалительных заболеваний, в том числе атеросклероза 1, бактериальной инфекции или сепсиса 2 и ожогов 3. Для их большой вклад в здоровье и болезни условиях, количество нейтрофилов является частью стандартного анализа крови часто считается в клинических и научно-исследовательских лабораторий. Тем не менее, несмотря на то, один из самых распространенных испытаний, значение количества нейтрофилов в диагностике инфекции и сепсиса неоднократно сомнение 4. Например, одно исследование нейтрофилов в ожоговых больных показали, что число нейтрофилов и число нейтрофилов функция миграции не коррелируют; означающее рассчитывать уже о том нейтрофилов не является точным показателем иммунного статуса 3. Хотя более трудно измерить, нейтрофилов функциональные компетенции был предложен в качестве более ценными в широком диапазоне условий.
т "> Важно отметить, что многие из нейтрофилов дефектов являются временными и не вызывают постоянных генетических дефектов, различие, которое не в значительной степени игнорируется в клинике до недавнего времени. В контексте ожогов, миграцию нейтрофилов может контролироваться в ходе Лечение пациента в качестве индикатора воспалительного статуса или инфекции 3. Традиционные анализы миграции в настоящее время используются в лаборатории (Бойден камера, Данн камера, микропипетка анализа) не могут быть переведены в клинических условиях, так как они требуют больших объемов крови и громоздким времени методы изоляции нейтрофилов (табл. 1). Эти анализы также не может быть использован для мониторинга переходных изменений в хемотаксис нейтрофилов в мелких лабораторных животных, таких как мыши, так как объем крови, необходимый для выделения нейтрофилов позволяет только один образец, а часто и требуется объединение кровь из нескольких животных для одного анализа. Например, исследование с участием мultiple условия и процедуры на нескольких временных точках потенциально может потребовать тысячи мышей с использованием текущих хемотаксиса. Это ограничивает основную биологические исследования, что можно сделать, чтобы понять сложную динамику иммунной функции в контексте травмы, инфекции или записать часто изучаются в мышиных моделях 5.Чтобы удовлетворить потребность в нейтрофилов функциональном анализе, что является быстрым, надежным, но требует минимальный объем крови, мы разработали микрофлюидных устройство, которое измеряет хемотаксис нейтрофилов непосредственно из небольшого капли цельной крови. Известно, что многие факторы в цельной крови, в том числе сыворотки 6 и 7 тромбоцитов, влияет на функцию нейтрофилов. Поэтому выгодно, что весь Микрожидкостных кровь для анализа минимизирует пример обработки для поддержания микросреду в естественных условиях нейтрофилов при измерении изменения в хемотаксиса с помощью анализа ин витро 8. Этот подходсокращает время от сбора крови для миграции нейтрофилов анализов от часов, используя традиционные методы, чтобы всего за несколько минут (табл. 1). Весь микрофлюидных крови платформа дает устойчивую линейную хемоаттрактантных градиент для длины эксперимента, не имеет движущихся частей, и не требует внешнего источника давления (т.е. шприц насоса). Ключевой особенностью в дизайне всей микрофлюидных крови устройства является включение эритроцита (РБК) фильтрации гребень, что механически фильтрует эритроциты от входа в миграционную канал устройства. Правые повороты этой фильтрации гребень предотвратить необходимость фильтрации гель, который, вероятно, будет забит эритроцитов и, следовательно, блокировать хемоаттрактантных градиент от достижения активно мигрирующих нейтрофилов в ВБ. Включение всей микрофлюидный крови устройства в 12 или в 24-луночный планшет облегчает скрининг нескольких медиаторов человека или мышиного хемотаксиса нейтрофилов сименно.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Микрофлюидных Изготовление устройства
- Использование стандартных методов фотолитографии, изготовить мастер-формы пластины в класс 1000 чистой комнате. Образец первый 3-мкм-тонкий отрицательный слой фоторезиста на основе эпоксидной смолы, чтобы определить миграционные каналы в соответствии с инструкциями производителя. План второй 50-мкм-толстый слой определить клеток-погрузочные и хемокинов камеры.
- Используйте рисунком пластины, чтобы бросить полидиметилсилоксана (PDMS) устройств. Энергично перемешайте PDMS (20 г) с инициатором (2 г) в течение 5 мин с использованием пластиковой вилкой в большой поднос весом пластиковой.
- Осторожно залейте PDMS на пресс-форме.
- Дегазации PDMS путем размещения формы с выливают PDMS в вакуумном эксикаторе в течение 1 часа.
- Выпекать и вылечить PDMS микрожидкостных устройств для по крайней мере 3 часа в печь, установленную на 65 ° С
- Выбивать центральные WBLCs используя перфоратор с диаметром кончика 1,5 мм.
- Удар целые форме пончика устройств с использованием puncее с диаметром кончика 5,0 мм.
- Удаления частиц из пончика устройств с помощью клейкой ленты.
- Промыть 12-луночный планшет с деионизированной водой и затем сушат азотом. Поместите пластину в 60 ° С духовке в течение 5 мин.
- Кислород плазменной лечить пластину 12-луночных дважды; один раз в одиночестве 35 сек, а затем снова с пончика устройств для другого 35 сек.
- Аккуратно положите устройств в лунки планшета с помощью пинцета.
- Выпекать пластина с таможенных устройств на горячей плите, установленной до 80 ° С в течение 10 мин.
2. Микрофлюидных Анализ Подготовка
- Первичные микрожидкостных устройств сразу же после плазменной обработки кислородом, когда устройство является гидрофильным и капиллярные эффекты могут способствовать примирование малых каналов в устройстве.
- Создание хемоаттрактантных решение путем смешивания 5 мкл FMLP [исходный раствор 10 мкм] с 5 мкл фибронектин [раствор 1 мг / мл] и 490 мкл HBSS.
- Медленно пипетка & #160; хемоаттрактант решение в WBLC, используя гель загрузки наконечник (рис. 1А). Пипеткой еще 20 мкл хемоаттрактанта вокруг внешней части устройства.
- Поместите пластину в эксикаторе в течение 15 мин. В вакууме с устройством, раствор закапывают в боковых каналах устройства и смещенного воздуха рассеянного наружу через PDMS.
- Удалить пластину с эксикаторе и подтвердите смачивание канале прибора под микроскопом. Смотреть, как пузырь становится меньше, хемоаттрактант раствор поступает в камеру. Ни один пузырь не должен присутствовать в устройстве после вакуумной обработки.
- Вымойте WBLC и снаружи устройства полностью, чтобы удалить излишки раствора хемоаттрактантных. Этот шаг создает градиент хемоаттрактанта от каждой из целевых хемотаксических камер (FCCS) к центру устройства.
- Заполните 1-мл шприц с PBS, добавить тупым кончиком иглы 30 G, чтобы шприц. Аккуратно вставьте кончик шприца в иглув центре отверстие пончика. Аккуратно нажмите 100 мкл PBS в отверстие так, чтобы капли PBS форм на верхней части устройства.
- Tilt пластины и пипеткой 1 мл PBS вокруг устройства таким образом, что жидкость собирается в нижней части скважины. Аспирируйте жидкость и повторите процесс для общей сложности 3 раза, используя свежий буферный раствор (использование средств массовой информации, а не буфером, если разделенные нейтрофилы будет загружен в СМИ) 9.
- Заполните каждую лунку со средствами массовой информации до верхушки устройств не погружена под жидкости. Пусть устройства сидеть в течение 15 мин, чтобы позволить градиент стабилизироваться. Экспериментальные результаты и теоретические данные из конечных моделирования элементов показывают, что градиенты в этих устройствах стабильны до 24 часов для малых молекул (например, FMLP) и до нескольких дней для увеличения молекулярной массы (например, IL8).
- Использование советы гель загрузки, медленно пипетки 2 мкл крови (или отдельные нейтрофилы) в каждой всей лоа кровидинь камера (WBLC) (рис. 1А).
3. Подготовка образца
Нейтрофилов человека из капиллярной крови
- Сбор капиллярной крови из пальца, здорового добровольца, который находится в не иммунодепрессантов. Все образцы пациентов были получены с письменного информированного согласия, и в соответствии с процедурами, утвержденными MGH и Shriners Институциональные советов.
- Для палец укола сбора крови, мыть руки водой с мылом и высушить кожу. Подготовка anti-coagulant/stain маточного раствора путем добавления 1 мл HBSS + 0,2% HSA и 10 мкл Hoechst пятно (32,4 мкм) до гепарин пробирку для сбора крови (1,65 USP/50 мкл крови). Уколите палец с помощью предохранительный SurgiLance ланцет (2.2-мм глубина, 22 г), вытереть первую каплю крови и собрать 50 мкл крови в пробирку Эппендорф, содержащий фондовый антикоагулянт и Hoechst решение флуоресцентным красителем (10 мкл) и осторожно перемешать.
Нейтрофилов человека из венозной крови
- Ничья 10 мл периферической, венозной крови в пробирки, содержащие 33 USP гепарина.
- Добавить 50 мкл венозной крови в средствах массовой информации и Hoechst пятна, как описано выше. Инкубировать кровь и Hoechst пятно в течение 10 мин, чтобы обеспечить ядра флуоресцентного окрашивания. Запустите образец в течение 1 часа сбора крови.
Нейтрофилов Разделение из цельной крови - Положительный контроль
- Чтобы отделить нейтрофилы, используют стерильные методы, чтобы изолировать нейтрофилов с 10 мл венозной образца цельной крови с использованием Hetastarch (6% вес / объем) в градиенте плотности с последующим негативной селекции магнитный шарик изоляции набора в соответствии с протоколом производителя.
- Ресуспендировали окончательный аликвоты нейтрофилов в концданию 4000 клеток / мкл 1X в HBSS + 0,2% сывороточный альбумин человека. Держать клетки при 37 ° С до готовности запустить эксперимент.
4. Микроскопия и анализ изображений для хемотаксиса нейтрофилов измерений
- Настройка температуры biochamber до 37 ° С, влажность при 80% и СО 2 на уровне 5%.
- Начните с изображениями сразу с помощью покадровой обработки изображений на микроскопе (10X или выше увеличения).
5. Статистический анализ
- Вручную отслеживать по крайней мере 50 нейтрофилов у каждого образца.
- Граф клеток, входящие в FCC с течением времени (рис. 2).
- Рассчитать нейтрофилов скорости в канале между WBLC и FCC, используя ImageJ (NIH) (рис. 2).
- Количественная направленность нейтрофилов путем подсчета количества клеток, которые проходят до развилки и расчете соотношения между числом клеток, которые превращаются в сторону FCC и клеток, которые выхода йе устройство. Клетки, которые не направленная не следуют хемотактическую градиент и поэтому мигрируют в равном количестве по отношению к ФКС и выходном канале (рис. 2).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Весь в крови (ВБ) нейтрофилов хемотаксис анализа была подтверждена путем измерения накопления нейтрофилов к градиентом FMLP (фильм S1). Результаты подтверждают, что эритроциты захватываются фильтрации гребень в то время как нейтрофилы (синие) способны активно мигрировать из цельной крови (рис. 3А и фильм S1). Стабильная линейный градиент хемоаттрактант (зеленый), сформированный на всей микрофлюидный крови устройства была подтверждена с использованием FITC-меченого декстрана (фиг. 3A вставка) и измерили уровни флуоресценции с течением времени. Градиенты, полученные в этих устройств были стабильны до 24 часов для малых молекул и до недели для увеличения молекулярной массы. Эффективность протокола стиральной была проверена визуализации локализованное флуоресцентного сигнала в FCC при отсутствии сигнала в WBLC или вокруг устройства. Устройства были рядом используется для оценки различий в миграции нейтрофилов из разных блисточники OOD.
Результаты, полученные с использованием нового WB хемотаксис платформу показывают, что нейтрофилы из пальца укола капли ВБ, от венозной ВБ, или выделены из венозной крови мигрируют с последовательным скорости (20 ± 2 мм / мин, синяя линия) и с аналогичными общего перелетных клеток ( 38 ± 10 клеток / час, затененные полосы) из всех источников крови (рис. 3В). Мы также смогли количественно оценить направленность или способность нейтрофилов правильно следовать хемотаксическую градиент. Бифуркации включены в проект устройства в целом крови позволил нам количественно нейтрофилы, что перенесенные направленно вдоль хемоаттрактанта градиента к FCC по сравнению с нейтрофилов, которые мигрировали случайно под хемокинез и возбужденных устройство. Нейтрофилы мигрируют из всех трех источников крови мигрировали с индексом направленности 0,9 (9 клеток по отношению к FCC для каждой клетки, что возбужденное устройство).
Рисунок 1. Схема форме пончика устройства. А) хемоаттрактант грунтуется в устройство и градиент формируется вдоль канала миграции к координационных хемотаксиса камер (FCCS). Шестнадцать FCCs окружают каждый WBLC. После промывки хемоаттрактант остается только в FCC, и линейный градиент формируется вдоль миграционного канала. Красных кровяных клеток (РБК) фильтрации гребень предотвращает эритроциты от засорения канала и блокирование нейтрофилов активную миграцию. Смотреть фильм S1. B) Нейтрофилы активно мигрируют из цельной крови и накапливаются в FCC, и их скорость, направленность и числа могут быть точно количественно. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть больше версия этой фигуры.
Рисунок 2. Схема и обзор подсчета клеток схемы устройства ВБ. Нейтрофилы активно мигрировать из 2 мкл цельной крови (ВБ), загруженного в целом нагрузки в крови камеру (WBLC) мимо красной гребень фильтрации клеток крови и на вход устройства. Направленность клетки измеряется на основании решения клетки в бифуркации. Направленные нейтрофилы будет следовать хемотактическую градиент ведущую к координационных хемотаксис камерных и ненаправленных клеток не будет следовать градиент и будет случайным образом мигрируют либо в сторону выходного канала или FCC с равным распределением. Окончательный подсчет клеток вычисляется в каждый момент времени путем подсчета клеток в FCC.files/ftp_upload/51215/51215fig2highres.jpg "целевых =" _blank "> Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3. Измерение хемотаксис нейтрофилов от капли цельной крови (ВБ). A) WB (1 мкл) загружают в целом нагрузки в крови камеру (WBLC). Нейтрофилы (синие) мигрируют вдоль FMLP хемотаксического градиента, образованного в канале миграции по направлению к ФКС. B) нейтрофилов из пальца, капли ВБ, от венозной ВБ, или изолированы от венозной крови мигрируют с последовательными номерами (баров) и скорости (синий линия). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Таблица 1. Сравнение протоколов для хемотаксиса нейтрофилов, используя весь микрофлюидных крови платформу против бокового канала микрожидкостных устройств и традиционной Бойдена камеры. Количество времени и реагентов для выполнения каждого шага протокола сравниваются между различными методами для измерения хемотаксис нейтрофилов. Весь микрофлюидных крови платформа сокращает общее время, необходимое для запуска анализа на 95% и необходимый объем крови> 99%.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
В этой работе, мы разработали микрофлюидных платформу для измерения хемотаксис нейтрофилов от капли крови (2 мкл). Механическая фильтрация на-чипе эритроцитов из активно мигрируют нейтрофилы обходит необходимость в громоздких методов разделения клеток, таких как градиенты плотности 10, позитивной селекции 11, или негативной селекции 12, склонных ввести артефакты, активизируя нейтрофилы. Механическая фильтрация эритроцитов отличает нашу технологию от других микрожидкостных чипов для зондирования миграцию нейтрофилов. Например, предыдущие работы из нашей лаборатории 13 и Beebe и соавт. 8 используемые селектины на чипе, для разделения нейтрофилов из образца цельной крови, до начала анализа хемотаксиса. После разделения на селектина поверхностей, миграцию нейтрофилов происходило в буферном растворе. В этих условиях любой эффект сыворотки на хемотаксиса нейтрофилов была удалена. Кроме того, селектины известныактивировать клетки путем привлечения специфические рецепторы и поэтому может изменить в измерениях пробирке хемотаксиса. Механическое разделение с помощью фильтрации гребень РБК в нашем устройстве не изменяет состояние нейтрофилов, измеренных нашего устройства. Наше устройство облегчает надежные измерения скорости и числа клеток накопления, а также клеток направленности.
В этом исследовании мы показали, что нейтрофилы здоровых добровольцев, переходящие с капиллярной цельной крови, капля венозной крови, и отделена от венозной крови мигрируют с аналогичной скорости и направленности 14. Измерение нейтрофилов направленности играет важную роль в воспалительных состояний, таких как ожоги 3, 15 и 16 травмой, где направленность, как известно, быть нарушена. Нарушение и более стимулировало нейтрофилы могут мигрировать от места повреждения и потенциально привести к травмам здоровых тканей. Ограничением настоящего устройстваред в данной работе является то, что обогащение клеток на устройстве невозможно, и поэтому количество клеток зависят от пропорции, что они находятся в родном цельной крови. Это может вызвать проблемы в получении хемотаксиса измерений от значительного числа клеток в условиях, таких как нейтропения, где число нейтрофилов является низким. Еще одна потенциальная проблема в нашем устройства является пространственное затруднение из мигрирующих клеток по эритроцитов или других клеток, мигрирующих одновременно. В наших экспериментах, нейтрофилы могут сжать мимо эритроциты в ловушке витками фильтрации гребень РБК без изменения их скорость миграции. Кроме того, концентрация хемоаттрактант и потенции является чрезвычайно важным в индуцировать клеточную миграцию. Для устранения анализа с другими условиями может быть важно для запуска кривые доза-реакция с разной величины хемоаттрактанта. Обработка и обработка более нестабильные хемоаттрактанты, таких как липидные медиаторы также имеет решающее значение, так важно простых устройствнепосредственно перед ВБ нагрузки. Наконец, важно также, что цельная кровь не сгусток перед воспламенением устройство WB. Если это не возможно, чтобы сразу запустить анализа, следующего за сбор крови в крови должны храниться на качалку в гепарина. Загрузка образца должно быть сделано медленно, с осторожностью, поскольку не вводить избыточное давление в устройство ВБ.
В будущем, наше устройство может быть использовано для измерения возмущения в функции нейтрофилов в ожога или травматологических больных, не снимая нейтрофилов из родного сыворотке пациента, который, вероятно, играет ключевую роль в нейтрофилов дисфункции 17. Это устройство также может быть использовано в будущем для скрининга потенциальных терапевтических про-разрешением, чтобы восстановить нормальную функцию нейтрофилов у этих пациентов. И, наконец, это устройство может быть дополнительно разработаны для измерения хемотаксис от других мигрирующих клеток, таких как моноциты, макрофаги и Т-клеток.
В заключение, мы разработали новьел Способ измерения хемотаксис нейтрофилов непосредственно из капли цельной крови. Включение всей микрофлюидный крови устройства в 12 или в 24-луночный планшет облегчает скрининг нескольких условий одновременно. Это устройство будет способствовать развитию медиаторов резолюции воспаления для лечения ожогов и других воспалительных заболеваний. В будущем, это устройство будет использоваться для измерения возмущения в нейтрофилов хемотаксического функции с течением времени в образцах пациента и мышиных моделях, где объем образца ограничено.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Там нет конфликта интересов раскрывать.
Acknowledgments
Поддержка от Национальных Институтов Здоровья (предоставляет GM092804, DE019938) и Shriners Burns больницы.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Device Fabrication | |||
| SU-8 | Microchem | Y131273 | |
| Polydimethylsiloxane (PDMS) | Ellsworth Adhesives | Sylgard 184 1.1 lb. Kit | |
| Standard glass slides | Fisher Scientific | 125495 | 1 X 3 inches |
| Glass-bottom plate | MatTek | P12G-1.5-14-F | |
| Harris Uni-Core, Tip Diameter 5.0 mm | Ted Pella, Inc. | 15081 | |
| Harris Uni-Core, Tip Diameter 1.5 mm | Ted Pella, Inc. | 15072 | |
| Microfluidic Assay Preparation and Analysis | |||
| Gel-loading pipet tip | Fisher Scientific | 02-707-139 | |
| Syringe | Fisher Scientfic | 309602 | |
| Blunt tip needle, 30 G ½ in. | Brico Medical Supply | BN3005 | |
| Vacutainer, Heparin | Becton Dickinson | ||
| HBSS | Sigma-Aldrich | ||
| Human serum albumin | Sigma-Aldrich | A5843-5G | 0.2% final concentration in HBSS |
| Fibronectin | Sigma-Aldrich | F0895-1MG | |
| fMLP | Sigma-Aldrich | F3506-10MG | |
| SurgiLance safety lancet, 2.2-mm depth, 22 G | SLN240 | ||
| Hoescht stain | Life Technologies | H3570 | |
| Positive Control | |||
| HetaSep | STEMCELL Technologies Inc. | 7906 | |
| EasySep Human Neutrophil Enrichment Kit | STEMCELL Technologies Inc. | 19257 | |
| Plasma Asher | March Instruments | P-250 | |
| Lindberg/Blue M Oven | Thermo Scientific | 13-258-30C | |
| Stainless Steel Precision Tweezers | Techni Tool | 758TW458 | |
| Bel-Art Scienceware Chemical-Resistant Vacuum Desiccator | Fisher Scientific | 08-594-15A | |
| Dataplate Digital Hot Plate | Alpha Multiservices | PMC 720 | |
| Nikon TiE inverted microscope | Nikon - Micro Video Instruments Inc. | MEA53100 | |
| CFI Plan Fluor DL 10X NA 15.2 wd Objective | Nikon - Micro Video Instruments Inc. | MRH20101 | |
| Lumen 200 with 2 Meter Light Guide for Nikon | Nikon - Micro Video Instruments Inc. | 500-L200NI2 | |
| DAPI/Hoechst/AMCA Narrow Band 32-mm Exciters - 25-mm Emitters | Chroma - Micro Video Instruments Inc. | 31013v2 | |
| Retiga R 2000 cooled CCD Camera 1,600 x 1,200 pixels | Qimaging - Micro Video Instruments Inc. | RET-2000R-F-M-12-C | |
References
- Hansson, G. K., Robertson, A. K., Soderberg-Naucler, C.
- Phillipson, M., Kubes, P.
- Butler, K. L., et al. Burn injury reduces neutrophil directional migration speed in microfluidic devices. PloS one. 5, (2010).
- Lavrentieva, A., et al. Inflammatory markers in patients with severe burn injury. What is the best indicator of sepsis. Burns : journal of the International Society for Burn Injuries. 33, 189-194 (2007).
- De Filippo, K., et al. Mast cell and macrophage chemokines CXCL1/CXCL2 control the early stage of neutrophil recruitment during tissue inflammation. Blood. 121, 4930-4937 (2013).
- Mankovich, A. R., Lee, C. Y., Heinrich, V. Differential effects of serum heat treatment on chemotaxis and phagocytosis by human neutrophils. PloS one. 8, (2013).
- Palabrica, T., et al. Leukocyte accumulation promoting fibrin deposition is mediated in vivo by P-selectin on adherent platelets. Nature. 359, 848-851 (1992).
- Sackmann, E. K., et al. Microfluidic kit-on-a-lid: a versatile platform for neutrophil chemotaxis assays. Blood. 120, (2012).
- Jones, C. N., et al. Microfluidic chambers for monitoring leukocyte trafficking and humanized nano-proresolving medicines interactions. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 20560-20565 (2012).
- Nauseef, W. M. Isolation of human neutrophils from venous blood. Methods Mol Biol. 412, 15-20 (2007).
- Lyons, P. A., et al. Microarray analysis of human leucocyte subsets: the advantages of positive selection and rapid purification. BMC genomics. 8, (2007).
- Hasenberg, M., et al. Rapid immunomagnetic negative enrichment of neutrophil granulocytes from murine bone marrow for functional studies in vitro and in vivo. PloS one. 6, (2011).
- Agrawal, N., Toner, M., Irimia, D. Neutrophil migration assay from a drop of blood. Lab on a chip. 8, 2054-2061 (2008).
- Hoang, A. N., et al. Measuring neutrophil speed and directionality during chemotaxis, directly from a droplet of whole blood. Technology. 0, 1-9 (2013).
- Kurihara, T., et al. Resolvin D2 restores neutrophil directionality and improves survival after burns. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. , (2013).
- Buffone, V., Meakins, J. L., Christou, N. V. Neutrophil function in surgical patients. Relationship to adequate bacterial defenses. Arch Surg. 119, 39-43 (1984).
- Malawista, S. E., de Boisfleury Chevance, A., van Damme, J., Serhan, C. N. Tonic inhibition of chemotaxis in human plasma. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 17949-17954 (2008).
