Summary
Denne protokollen detaljer en assay utviklet for å måle human neutrofil kjemotakse av en dråpe av helblod med robust reproduserbarhet. Denne tilnærmingen omgår behovet for nøytrofile separasjon og krever bare noen få minutter av analysen forberedelsestid. Den microfluidic brikken gjør det mulig for den gjentatte mål på nøytrofil-kjemotakse over tid hos spedbarn og små pattedyr, hvor prøvevolum er begrenset.
Abstract
Nøytrofiler spiller en vesentlig rolle i beskyttelse mot infeksjoner og deres antall i blodet blir ofte målt i klinikken. Høyere nøytrofile granulocytter i blodet er vanligvis en indikator på pågående infeksjoner, mens lavt antall nøytrofile granulocytter er et faresignal for høyere risiko for infeksjoner. For å oppnå sine funksjoner, nøytrofile må også være i stand til å bevege seg effektivt fra blodet, hvor de tilbringer mesteparten av sitt liv, i vev, der infeksjoner oppstår. Følgelig kan enhver defekt i evnen til neutrofiler til å migrere øke risikoen for infeksjoner, selv når nøytrofile celler er til stede i passende antall i blodet. Men måling nøytrofile migrasjon evne i klinikken er en utfordrende oppgave, som er tidkrevende, krever stor mengde blod, og ekspertkunnskap. For å møte disse begrensningene, utviklet vi en robust microfluidic analyser for nøytrofile migrasjon, noe som krever en eneste dråpe med ubehandlet blod, circumventiler behovet for nøytrofil-separasjon, og er lett å kvantifisere på en enkel mikroskop. I dette assay, neutrofiler vandrer direkte fra bloddråpen, gjennom små kanaler, mot kilden chemoattractant. For å hindre at det granulære strømmen av røde blodlegemer gjennom de samme kanaler, gjennomførte vi mekaniske filtre med rett vinkel svinger som selektivt blokkerer forkant av røde blodceller. Vi bekreftet analysen ved å sammenligne nøytrofil migrering fra bloddråper som samles fra finger stikk-og veneblod. Vi har også sammenlignet disse fullblod (WB) kilder med nøytrofile migrasjon fra prøver av renset nøytrofile og funnet konsistent hastighet og retningen mellom de tre kildene. Dette microfluidic plattformen vil gjøre studiet av menneskelige nøytrofile migrasjon i klinikken og forskningen innstillingen for å hjelpe fremme vår forståelse av nøytrofile funksjoner i helse og sykdom.
Introduction
Nøytrofile trafficking spiller en avgjørende rolle i å bestemme fremdriften og oppløsning av mange inflammatoriske tilstander, inkludert aterosklerose 1, bakteriell infeksjon eller sepsis to, og brannskader tre. For sitt store bidrag til helse-og sykdomstilstander, er nøytrofile granulocytter del av standardblodanalyse ofte sett i kliniske og forskningslaboratorier. Men, til tross for å være en av de mest utbredte tester, verdien av nøytrofile granulocytter i diagnostikk av infeksjon og sepsis har vært hyppig avhørt fire. For eksempel, en studie av nøytrofile i brannskadepasienter viste at antall nøytrofile og nøytrofile migrasjon funksjon ikke korrelerer; som betyr at de nøytrofile alene er ikke en nøyaktig indikator på immunstatus tre. Selv om mer vanskelig å måle, har nøytrofile funksjonell kompetanse blitt foreslått som mer verdifulle i et bredt spekter av betingelser.
t "> Viktigere, mange av nøytrofile defekter er forbigående og er ikke utløst av permanente genetiske defekter, en utmerkelse som har vært i stor grad oversett i klinikken inntil nylig. I sammenheng med brannskader, kunne nøytrofile migrasjon overvåkes i løpet av en pasients behandlings som en indikator på inflammatorisk status eller infeksjoner 3. vanlige vandrings assays som brukes i laboratoriet (Boyden kammer, Dunn kammer, mikropipette assay) ikke kan oversettes til en klinisk setting, fordi de krever store mengder blod og tungvint tidkrevende nøytrofil isolasjonsteknikker (tabell 1). disse assays kan heller ikke brukes til å overvåke transiente forandringer i nøytrofil-kjemotakse i små laboratoriedyr, for eksempel mus, fordi volumet av blod som er nødvendig for nøytrofil isolasjon gjør det mulig for bare én prøve, og ofte til og med krever kontinuitets blod fra flere dyr, for en enkelt analyse. For eksempel, en studie som involverte multiple tilstander og behandlinger over flere tidspoeng potensielt kan kreve tusenvis av mus med dagens chemotaxis analyser. Dette begrenser den grunnleggende biologiske undersøkelser som kan gjøres for å forstå de komplekse dynamikken til immunfunksjon i sammenheng med skade, infeksjon eller brennes ofte er studert i murine modeller 5.For å møte behovet for en nøytrofil funksjonelt assay som er rask og robust, samtidig som den krever minimal blodvolum, har vi utviklet en mikrofluidteknisk enhet som måler nøytrofil kjemotakse direkte fra en liten dråpe av helblod. Det er kjent at mange faktorer i fullblod, inkludert serum 6 og blodplater 7, påvirke nøytrofil-funksjon. Det er derfor fordelaktig at hele blodmikrofluid assay minimerer prøvebehandling for å opprettholde in vivo mikromiljøet av nøytrofile ved måling av variasjoner i chemotaxis med et in vitro assay 8. Denne tilnærmingenreduserer tiden fra blodprøvetaking til nøytrofile migrasjon essay fra timer ved hjelp av tradisjonelle teknikker, til bare noen minutter (Tabell 1). Hele blod microfluidic plattformen produserer en stabil lineær gradient kjemoattraktant for lengden av forsøket, har ingen bevegelige deler og krever ikke en ekstern trykkilde (dvs. sprøytepumpe). Det sentrale trekk i utformingen av helblod microfluidic enhet er inkorporering av en rød blodcelle (RBC) filtrering kam som mekanisk filter RBCs fra å komme inn i kanalen migrering av enheten. De riktige svinger av denne filtrerings kam hindre behovet for størrelse utelukkelse filtrering, noe som trolig ville bli tilstoppet av RBC og dermed blokkere kjemoattraktant gradient fra å nå aktivt migrere nøytrofile i WB. Inkorporering av helblod microfluidic enhet i en 12 eller 24 brønns plate letter screening av flere mediatorer for human eller murin neutrofil kjemotakse SImultaneously.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
En. Microfluidic Device Fabrication
- Ved hjelp av standard fotolitografiske teknikker, og lag master formskive i et klasse 1000 rent rom. Mønster den første 3-mikrometer tynne epoxy-basert negative fotoresistsjiktet å definere migrasjonskanaler i henhold til instruksjonene fra produsenten. Mønster den andre 50-mikrometer tykt lag for å definere celle-lasting og chemokine kamre.
- Bruk mønstrede wafer å kaste polydimethylsiloxane (PDMS) enheter. Kraft bland PDMS (20 g) med initiator (2 g) i 5 min ved bruk av plast-gaffel i store plast-veie skuffen.
- Hell forsiktig PDMS på mold.
- Avgasse PDMS ved å lage en form med helles PDMS i en vakuum-eksikkator i 1 time.
- Bake og kurere PDMS microfluidic enheter i minst tre timer i en ovn satt til 65 ° C.
- Punch ut de sentrale WBLCs ved hjelp av en puncher med et tips diameter på 1,5 mm.
- Punch ut hele donut-formede enheter ved hjelp av en punkthenne med et tips diameter på 5,0 mm.
- Fjern partikler fra donut enheter ved hjelp av teip.
- Skyll en 12-brønns plate med avionisert vann og tørk med nitrogen. Plasser plate i 60 ° C ovn i 5 min.
- Oksygen plasma behandle 12-brønns plate to ganger; en gang alene for 35 sek og så igjen med donut enheter for en annen 35 sek.
- Nøye plassere enheter i brønnene på plate ved hjelp av pinsett.
- Bake plate med limte enheter på en varm plate innstilt på 80 ° C i 10 min.
2. Microfluidic analysen Forberedelse
- Prime microfluidic enheter umiddelbart etter oksygen plasma behandling, når enheten er hydrofile og kapillær effekter kan fremme grunning av de små kanalene i enheten.
- Lag kjemotiltrekkende løsning ved å blande 5 pl fMLP [stamløsning 10 uM] med 5 pl fibronektin [stamløsning 1 mg / ml] og 490 pl HBSS.
- Sakte pipette & #160; kjemotiltrekkende oppløsning inn WBLC, ved hjelp av en gel laste spissen (figur 1A). Pipetter en ytterligere 20 pl av den chemoattractant rundt utsiden av apparatet.
- Plasser plate i en eksikator i 15 min. Ved å bruke en støvsuger til enheten, er løsningen innpodet i sidekanaler i enheten og de fordrevne luft diffust ut gjennom PDMS.
- Fjern plate fra eksikkator og bekrefte fukting av enhet kanalen under mikroskop. Sjekk som boble blir mindre som kjemoattraktant løsning kommer inn i kammeret. Ingen boble bør være til stede i apparatet etter vakuumbehandling.
- Vask WBLC og utsiden av anordningen grundig for å fjerne overskudd av kjemotiltrekkende løsning. Dette trinnet genererer en gradient av chemoattractant fra hver av de fokale kjemotaktiske kamre (FCCs) til enheten senteret.
- Fyll en 1 ml sprøyte med PBS, legger en 30 G sløv nålespissen å sprøyte. Forsiktig, stikk nålen tuppen av sprøyten itil midten av hjulhullet. Trykk forsiktig 100 ul PBS i hullet, slik at en dråpe med PBS former på toppen av enheten.
- Tilt plate og pipette 1 ml PBS rundt enheten slik at væsken samler seg i bunnen av brønnen. Aspirer væske og gjenta prosessen for totalt 3x med ferske bufferløsning (bruk media i stedet for buffer hvis de separerte nøytrofile vil bli lastet i media) 9.
- Fyll hver brønn med media før de topper på enhetene senkes under væske. La enhetene sitte i 15 min å tillate gradient å stabilisere seg. Eksperimentelle resultater og teoretiske data fra elementSimuleringer viser at gradienter i disse enhetene er stabil opp til 24 timer for små molekyler (f.eks, fMLP) og opp til en flere dager for større molekylvekt (f.eks IL8).
- Ved hjelp av gel lasting tips, sakte pipette 2 mL av blod (eller isolerte nøytrofile) inn i hver fullblod loading kammer (WBLC) (figur 1A).
Tre. Prøvepreparering
Menneskelige nøytrofile granulocytter fra kapillærblod
- Samle kapillærblod fra fingeren stikk av friske frivillige, som er på ingen immundempende. Alle pasientprøver ble innhentet skriftlig informert samtykke, og gjennom prosedyrer godkjent av MGH og Shriners Institutional Review Boards.
- For finger drittsekk blod samling, vaske hendene med vann og såpe og tørke ut huden. Forbered anti-coagulant/stain lager løsning ved å tilsette 1 ml HBSS + 0,2% HSA og 10 mL Hoechst flekken (32,4 mm) til heparin blodprøverøret (1,65 USP/50 mL blod). Prikk fingeren ved hjelp av en SurgiLance Sikkerhetslansetten (2,2 mm dyp, 22 G), tørke bort første dråpe blod og samle 50 mL blod i Eppendorf rør som inneholder aksje antikoagulerende og Hoechst fluorescerende flekken løsning (10 mL) og forsiktig mix.
Menneskelige nøytrofile granulocytter fra venøs
- Tegn 10 ml perifert, venøst blod inn i rør som inneholder 33 USP heparin.
- Tilsett 50 pl av venøst blod til media og Hoechst beis som beskrevet tidligere. Inkuber blodet og Hoechst flekk i 10 min for å tillate kjernen fluorescent farging. Kjør prøven innen en time av blodprøvetaking.
Nøytrofile separasjon fra Whole Blood - Positiv kontroll
- For å skille neutrofiler, bruk sterile teknikker for å isolere neutrofiler fra 10 ml venøst fullblod ved å bruke Hetastarch (6% vekt / volum) densitet gradient etterfulgt av en negativ seleksjon magnetiske kuler isolert sensoren ved å følge produsentens protokoll.
- Resuspendert endelig delmengde av nøytrofile på et konsentrasjonerasjon på 4000 celler / mL i HBSS 1X + 0,2% humant serumalbumin. Hold celler ved 37 ° C til den er klar til å kjøre eksperimentet.
4. Mikroskopi og bildeanalyse for Neutrofil Chemotaxis Målinger
- Sett opp biochamber temperatur til 37 ° C, fuktighet ved 80%, og CO 2 på 5%.
- Begynn bildebehandling umiddelbart ved hjelp av tidsinnstilte avbildning av et mikroskop (10x eller høyere forstørrelse).
5. Statistisk analyse
- Manuelt spore minst 50 neutrofiler i hver prøve.
- Telle celler inn i FCC seg over tid (figur 2).
- Beregn nøytrofile hastigheter i kanalen mellom WBLC og FCC hjelp ImageJ (NIH) (figur 2).
- Kvantifisere retningen av nøytrofile ved å telle antall celler som passerer bifurcation og beregne forholdet mellom antall celler som slår mot FCC og celler som exit the-enhet. Celler som ikke er retnings ikke følger kjemotaktisk gradient og derfor vandrer i like tall mot FCC og avkjøringen kanal (figur 2).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hele blod (WB) nøytrofile kjemotaxis analysen ble validert ved å måle akkumulering av nøytrofile mot en fMLP gradient (Movie S1). Resultatene bekrefter at RBC-fanges av filtrering kammen mens nøytrofiler (blå) er i stand til å migrere aktivt av helt blod (fig. 3A og film S1). Den stabile lineær kjemotiltrekkende gradient (grønn) som er dannet av helt blod microfluidic enhet ble bekreftet ved bruk av FITC-merket dekstran (figur 3A innfelt) og målte fluorescens nivåer over tid. De gradienter fremstilt på disse enheter var stabile opp til 24 timer for små molekyler, og opp til en uke for større molekylvekt. Effektiviteten av vaske protokollen ble bekreftet av tenkelig lokaliserte fluorescerende signal i FCC med ikke noe signal i WBLC eller rundt anordningen. Enhetene ble neste ansatt for å vurdere forskjellene i nøytrofile migrasjon fra ulike blood kilder.
Resultatene som er oppnådd ved hjelp av romanen WB kjemotaksis plattform avslører at nøytrofile fra en finger drittsekk dråpe med WB, fra venøs WB, eller isolert fra veneblod migrere med konsistent hastighet (20 ± 2 mm / min, blå linje) og med tilsvarende sum trekkende celler ( 38 ± 10 celler / time, fargede søylene) fra alle blod kilder (Figur 3B). Vi var også i stand til å kvantifisere direksjonalitet eller evne til nøytrofile til fullstendig å følge den kjemotaktiske gradient. Den bifurcation innlemmet i utformingen av hele blod enhet tillatt oss å kvantifisere nøytrofile som migrerte retnings sammen kjemoattraktant gradient mot FCC sammenlignet med nøytrofile som migrerte tilfeldig henhold chemokinesis og ute av enheten. Nøytrofile migrerer fra alle tre blod kilder migrert med en retningsindeks på 0,9 (9 celler mot FCC for hver celle som ute av enheten).
Figur 1. Skjematisk av smultring-formet enhet. A) kjemoattraktant er primet inn i enheten og en gradient er dannet langs migrasjonskanal mot brenn kjemotaxis kamre (FCCs). Seksten FCCs omgir hver WBLC. Etter vasking, gjenstår bare en kjemoattraktant i FCC, og en lineær gradient er dannet langs migrasjons kanalen. Den røde blodceller (RBC) filtrering kam hindrer RBC tetter kanalen og blokkerer nøytrofile aktiv migrasjon. Se Movie S1. B) Nøytrofile vandrer aktivt ut av fullblod og akkumuleres i FCC, og deres hastighet, retningen og tallene kan være nøyaktig kvantifiseres. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Skjematisk og oversikt over celletelling ordning for WB-enhet. Nøytrofile migrere aktivt ut av 2 mL fullblod (WB) lastet inn i fullblod lasterommet (WBLC) forbi den røde blodlegemer filtrering kam og inn inngangen av enheten. Direksjonalitet av cellen blir målt basert på cellens beslutning til bifurkasjonen. Retnings nøytrofile vil følge kjemotaktisk gradient som fører mot de brenn kjemotaxis kammer og ikke-retningsceller vil ikke følge gradient og vil tilfeldig migrere enten mot utgangen kanal eller FCC med en lik fordeling. Endelig celletall er beregnet på hvert tidspunkt ved å telle cellene i FCC.files/ftp_upload/51215/51215fig2highres.jpg "target =" _blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Måle nøytrofile chemotaxis fra en dråpe fullblod (WB). A) WB (1 mL) er lastet inn i fullblod lasterommet (WBLC). Nøytrofile (blå) vandrer langs fMLP kjemotaktisk gradient dannet i migrasjon kanal mot FCC. B) Nøytrofile fra en finger drittsekk dråpe med WB, fra venøs WB, eller isolert fra veneblod migrere med konsistente tall (barer) og hastighet (blå linje). Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Tabell 1 Sammenligning av protokoller for nøytrofil kjemotakse ved hjelp av fullblod mikrofluid plattform g. en side-kanal microfluidic enhet og den tradisjonelle Boyden kammer.. Mengden av tid og reagenser for å gjennomføre hver protokoll trinn blir sammenlignet for forskjellige metoder for å måle nøytrofil kjemotakse. Hele blod microfluidic plattform reduserer den totale tid som kreves for å kjøre assay med 95% og den nødvendige mengde blod> 99%.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I dette arbeidet har vi utviklet en microfluidic plattform for å måle nøytrofile chemotaxis fra en dråpe med blod (2 mL). De on-chip mekanisk filtrering av RBCs fra aktivt migrere nøytrofiler omgår behovet for tungvinte celleseparasjonsmetoder slik som tetthetsgradienter 10, positiv utvelgelse 11, eller negativ seleksjon 12, som er tilbøyelige til å innføre artifakter ved å aktivere neutrofiler. Den mekanisk filtrering av RBC skiller vår teknologi fra andre microfluidic chips for sondering nøytrofile migrasjon. For eksempel, tidligere arbeider fra vårt laboratorium 13 og Beebe et al. Åtte benyttet selectins på brikken, for separering av nøytrofiler fra den fullblodprøve, forut for kjemotaksis-analyse. Etter separasjonen på selektinantistoffer overflater, skjedde nøytrofile migrasjon i bufferløsning. I disse forholdene, ble noen effekt av serum på nøytrofile chemotaxis fjernet. Videre er selectins kjentfor å aktivere cellene ved å engasjere spesifikke reseptorer og kan derfor forandre in vitro chemotaxis målinger. Den mekaniske separasjon ved RBC filtrering kam i vår enhet endrer ikke tilstanden av nøytrofile målt ved vår enhet. Vår enhet forenkler robuste målinger av hastighet og celle opphopning nummer samt celle retningen.
I denne studien har vi vist at nøytrofile fra friske frivillige migrere fra kapillært fullblod, en dråpe av venøs blod, og atskilt fra veneblod migrere med lignende hastighet og retnings 14. Målingen av nøytrofile retningen er viktig i inflammatoriske tilstander, som for eksempel brannskader 3, 15 og traumer 16, der retningen er kjent for å være svekket. Svekket og overstimulert nøytrofile kan migrere bort fra stedet av skader og potensielt forårsake skade på friskt vev. En begrensning av enheten til stedeed i denne utredningen er at mobil berikelse på enheten er ikke mulig, og derfor celletall er avhengig av hvor stor andel at de er funnet i den innfødte fullblod. Dette kan by på problemer med å skaffe kjemotaksis målinger fra et betydelig antall celler i tilstander som neutropeni, hvor nøytrofile celler er lav. Et annet potensielt problem i vår enhet er den steriske hindring av trekkende celler ved RBC eller andre celler migrere samtidig. I våre forsøk, kan nøytrofile presse siste RBC fanget i svingene av RBC filtrering kam uten å endre deres migrasjon hastighet. I tillegg er den kjemotiltrekkende konsentrasjon og potens ekstremt viktig å indusere cellemigrering. For å feilsøke analysen med andre forhold kan det være viktig å kjøre dose-responskurver med varierende størrelser på kjemotiltrekkende. Håndtering og bearbeiding mer ustabile chemoattractants som lipid mediatorer er også viktig, så er det viktig å prime enheterumiddelbart før WB lasting. Til slutt er det også avgjørende at hele blodet ikke koagulere før priming WB-enheten. Hvis det ikke er mulig å kjøre analysen umiddelbart etter blodsamlingen blod må være lagret på en vippe i heparin. Lasting av prøven bør skje langsomt, med forsiktighet for ikke å innføre høyt trykk inn i WB-enheten.
I fremtiden kan vår enhet brukes til å måle forstyrrelser i nøytrofile funksjon til forbrenning eller traumepasienter uten å fjerne nøytrofile fra pasientens nativserum, som sannsynligvis spiller en nøkkelrolle i nøytrofile dysfunksjon 17. Denne enheten kan også benyttes i fremtiden for å screene potensielle pro-oppløsning legemiddelselskap å gjenopprette normal nøytrofile funksjonen hos disse pasientene. Endelig kan denne enheten være ytterligere konstruert for å måle chemotaxis fra andre trekkceller slik som monocytter, makrofager og T-celler.
I konklusjonen, har vi utviklet en novel fremgangsmåten for måling av nøytrofil kjemotakse direkte fra en dråpe med fullblod. Inkorporering av helblod microfluidic enhet i en 12 eller 24 brønns plate letter screening av flere betingelser samtidig. Denne enheten vil lette utviklingen av mediatorer av inflammasjon oppløsning til å behandle brannskader og andre inflammatoriske tilstander. I fremtiden vil denne enheten brukes til å måle forstyrrelser i nøytrofile kjemotaktisk funksjon over tid i pasientprøver og murine modeller der prøvevolum er begrenset.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Det er ingen interessekonflikter å avsløre.
Acknowledgments
Støtte fra National Institutes of Health (gir GM092804, DE019938) og Shriners Burns Hospital.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Device Fabrication | |||
| SU-8 | Microchem | Y131273 | |
| Polydimethylsiloxane (PDMS) | Ellsworth Adhesives | Sylgard 184 1.1 lb. Kit | |
| Standard glass slides | Fisher Scientific | 125495 | 1 X 3 inches |
| Glass-bottom plate | MatTek | P12G-1.5-14-F | |
| Harris Uni-Core, Tip Diameter 5.0 mm | Ted Pella, Inc. | 15081 | |
| Harris Uni-Core, Tip Diameter 1.5 mm | Ted Pella, Inc. | 15072 | |
| Microfluidic Assay Preparation and Analysis | |||
| Gel-loading pipet tip | Fisher Scientific | 02-707-139 | |
| Syringe | Fisher Scientfic | 309602 | |
| Blunt tip needle, 30 G ½ in. | Brico Medical Supply | BN3005 | |
| Vacutainer, Heparin | Becton Dickinson | ||
| HBSS | Sigma-Aldrich | ||
| Human serum albumin | Sigma-Aldrich | A5843-5G | 0.2% final concentration in HBSS |
| Fibronectin | Sigma-Aldrich | F0895-1MG | |
| fMLP | Sigma-Aldrich | F3506-10MG | |
| SurgiLance safety lancet, 2.2-mm depth, 22 G | SLN240 | ||
| Hoescht stain | Life Technologies | H3570 | |
| Positive Control | |||
| HetaSep | STEMCELL Technologies Inc. | 7906 | |
| EasySep Human Neutrophil Enrichment Kit | STEMCELL Technologies Inc. | 19257 | |
| Plasma Asher | March Instruments | P-250 | |
| Lindberg/Blue M Oven | Thermo Scientific | 13-258-30C | |
| Stainless Steel Precision Tweezers | Techni Tool | 758TW458 | |
| Bel-Art Scienceware Chemical-Resistant Vacuum Desiccator | Fisher Scientific | 08-594-15A | |
| Dataplate Digital Hot Plate | Alpha Multiservices | PMC 720 | |
| Nikon TiE inverted microscope | Nikon - Micro Video Instruments Inc. | MEA53100 | |
| CFI Plan Fluor DL 10X NA 15.2 wd Objective | Nikon - Micro Video Instruments Inc. | MRH20101 | |
| Lumen 200 with 2 Meter Light Guide for Nikon | Nikon - Micro Video Instruments Inc. | 500-L200NI2 | |
| DAPI/Hoechst/AMCA Narrow Band 32-mm Exciters - 25-mm Emitters | Chroma - Micro Video Instruments Inc. | 31013v2 | |
| Retiga R 2000 cooled CCD Camera 1,600 x 1,200 pixels | Qimaging - Micro Video Instruments Inc. | RET-2000R-F-M-12-C | |
References
- Hansson, G. K., Robertson, A. K., Soderberg-Naucler, C.
- Phillipson, M., Kubes, P.
- Butler, K. L., et al. Burn injury reduces neutrophil directional migration speed in microfluidic devices. PloS one. 5, (2010).
- Lavrentieva, A., et al. Inflammatory markers in patients with severe burn injury. What is the best indicator of sepsis. Burns : journal of the International Society for Burn Injuries. 33, 189-194 (2007).
- De Filippo, K., et al. Mast cell and macrophage chemokines CXCL1/CXCL2 control the early stage of neutrophil recruitment during tissue inflammation. Blood. 121, 4930-4937 (2013).
- Mankovich, A. R., Lee, C. Y., Heinrich, V. Differential effects of serum heat treatment on chemotaxis and phagocytosis by human neutrophils. PloS one. 8, (2013).
- Palabrica, T., et al. Leukocyte accumulation promoting fibrin deposition is mediated in vivo by P-selectin on adherent platelets. Nature. 359, 848-851 (1992).
- Sackmann, E. K., et al. Microfluidic kit-on-a-lid: a versatile platform for neutrophil chemotaxis assays. Blood. 120, (2012).
- Jones, C. N., et al. Microfluidic chambers for monitoring leukocyte trafficking and humanized nano-proresolving medicines interactions. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109, 20560-20565 (2012).
- Nauseef, W. M. Isolation of human neutrophils from venous blood. Methods Mol Biol. 412, 15-20 (2007).
- Lyons, P. A., et al. Microarray analysis of human leucocyte subsets: the advantages of positive selection and rapid purification. BMC genomics. 8, (2007).
- Hasenberg, M., et al. Rapid immunomagnetic negative enrichment of neutrophil granulocytes from murine bone marrow for functional studies in vitro and in vivo. PloS one. 6, (2011).
- Agrawal, N., Toner, M., Irimia, D. Neutrophil migration assay from a drop of blood. Lab on a chip. 8, 2054-2061 (2008).
- Hoang, A. N., et al. Measuring neutrophil speed and directionality during chemotaxis, directly from a droplet of whole blood. Technology. 0, 1-9 (2013).
- Kurihara, T., et al. Resolvin D2 restores neutrophil directionality and improves survival after burns. FASEB journal : official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. , (2013).
- Buffone, V., Meakins, J. L., Christou, N. V. Neutrophil function in surgical patients. Relationship to adequate bacterial defenses. Arch Surg. 119, 39-43 (1984).
- Malawista, S. E., de Boisfleury Chevance, A., van Damme, J., Serhan, C. N. Tonic inhibition of chemotaxis in human plasma. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105, 17949-17954 (2008).
