Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
מולקולות odorant נקשרות לקולטנים היעד שלהם באופן מדויק ומתואם. כל קולטן מזהה אות מסוימת ומעביר מידע זה למוח. ככזה, קביעת אופן בו מידע הרחה מועבר למוח, שינוי הן תפיסה והתנהגות, חקירה ראויה. מעניין לציין, כי יש ראיות המתעוררות כי גורמי התמרה ותעתיק תאיים מעורבים בפיזור של עצב קולטני ריח. כאן אנו מספקים כולה חזקים הר שיטת תיוג חיסוני לassay in vivo ארגון תא עצב קולטני ריח. באמצעות שיטה זו, זיהינו את כל תאי העצב קולטני הריח עם נוגדן אנטי ELAV, סמן פאן עצבי ידוע וOr49a-mCD8 :: ה-GFP, נוירון קולטני ריח במיוחד לידי ביטוי בנוירון-NBA באמצעות נוגדן אנטי-GFP.
מערכת חוש הריח משמשת להבחין בין מגוון עצום של מולקולות ריח ולאחר מכן לשלוח את המידע וכתוצאה מכך למרכזי המוח גבוהים יותר. קלט זה משמש לשלוט במדויק התנהגות בעלי חיים בסיסית, כגון האכלה והזדווגות 1-6. כמו כל סוג תא עצב חוש הריח קשור לקבוצה מסוימת של ריחות, הפיזור של תאי עצב קולטני ריח (orn) ים הוא חיוני לתפקוד התקין של מערכת חוש הריח נכון 7.
הגנטיקה דרוזופילה מאפשרת לנו לבצע חקירה ברמת התא בודדת מעורבת מנגנונים מולקולריים הקשורים בהתפתחות orn ותפקוד פיסיולוגי 8-16. immunostaining ההר השלם של אנטנות דרוזופילה אפשר לנו להבין בפירוט רב יותר את המנגנונים המולקולריים המעורבים בפיזור של תאי עצב קולטני ריח (orn) של 7. במסמך זה אנו מספקים תיאור מקיף של שיטה פשוטה לachieve זה.
דיסקציה של אנטנת דרוזופילה אנו מתארים היא פשוט וקל לביצוע בסביבת מעבדה. כדי להבטיח לנתיחה מוצלחת, חיוני לנצל מספריים עדינים עם קצוות. בעוד immunostaining האנטנה גזור, חשוב כדי לדגור אותם במכל המלא בלחות, כדי למנוע אידוי של פתרון הנוגדן. יש האנטנה גזור נטייה לצוף בפתרון. …
The authors have nothing to disclose.
מחקר זה נתמך על ידי תכנית נתמכת-MEXT לקרן המחקר האסטרטגי באוניברסיטאות פרטיות וJSPs מדען הצעיר ב 'המענק לHT ברצוננו להודות לOhtake Norihito כדי לערוך את קטעי וידאו.
Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |