Всего Гора иммунного обонятельных рецепторов нейронов в<em> Дрозофилы</em> Антенны
Summary
Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
Abstract
Пахучих молекул связываются с их целевыми рецепторами в точном и скоординированным образом. Каждый рецептор распознает специфический сигнал и передает эту информацию в мозг. Таким образом, определение того, как обонятельная информация передается в мозг, изменяя как восприятие и поведение, заслуживает изучения. Интересно, что появляется все больше доказательств, что сотовой трансдукции и транскрипционные факторы участвуют в диверсификации обонятельной нейрона рецептора. Здесь мы предлагаем надежные вся гора иммунологический способ маркировки для анализа в естественных условиях обонятельный организацию рецепторов нейронов. Используя этот метод, мы определили все обонятельные нейроны рецептора с анти-Elav антитела, известный пан-нейронной маркера и Or49a-mCD8 :: GFP, обонятельного рецептора нейрона специально выражается в НБА нейрона с использованием анти-GFP антитела.
Introduction
Обонятельная система используется, чтобы различать между огромным разнообразием молекулами запаха и впоследствии отправить получаемую информацию на высших мозговых центров. Этот вход используется для точного контроля фундаментальные поведения животных, такие как кормление и спаривание 1-6. Поскольку каждый обонятельный Тип нейрон связан с определенным набором запахов, диверсификации обонятельных рецепторных нейронов (ORN) с является жизненно необходимым для обонятельной системы функции 7.
Drosophila генетика позволяет нам выполнять один расследование клеточном уровне с участием молекулярных механизмов, связанных с развитием ORN и физиологической функции 8-16. Вся гора иммуноокрашивание Drosophila антенн позволило нам понять более подробно молекулярные механизмы, участвующие в диверсификации обонятельных рецепторных нейронов (ORN) с 7. При этом мы предоставляем всестороннее описание простой метод для переменного токаhieve это.
Protocol
Representative Results
Discussion
Рассечение антенны Drosophila мы описываем является простым и легким для выполнения в лабораторных условиях. Чтобы обеспечить успешное вскрытие, важно использовать тонкой краями ножниц. В то время как иммунного окрашивания рассеченные антенну, важно, чтобы инкубировать их в влаги зап…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование было поддержано МПКСНТ программы, поддерживаемой для исследовательского Фонда стратегической в частных университетах и JSPS молодых ученых B гранта на HT Мы хотели бы поблагодарить Ohtake Норихито редактировать видеоклипы.
Materials
| Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
| Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
| Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
| Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
| Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
| Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |
References
- Christensen, T. A., White, J. . Representation of olfactory information in the brain In The Neurobiology of Taste and Smell. , 201-232 (2000).
- Ache, B. W. Towards a common strategy for transducing olfactory information. Sem. Cell Biol. 5, 55-63 (1994).
- Bargmann, C. I., Hartwieg, E., Horvitz, H. R. Odorant-selective genes and neurons mediate olfaction. C. elegans. Cell. 13, 515-527 (1993).
- Barth, A. L., Justice, N. J., Ngai, J. Asynchronous onset of odorant receptor expression in the developing zebrafish olfactory system. Neuron. 16, 23-34 (1996).
- Firestein, S. How the olfactory system makes sense of scents. Nature. 413, 211-218 (2001).
- Stockinger, P., et al. Neural circuitry that governs Drosophila male courtship behavior. Cell. 121, 795-807 (2005).
- Endo, K., et al. Chromatin modification of Notch targets in olfactory receptor neuron diversification. Nat Neurosci. 15, 224-233 (2011).
- Karim, M. R., Moore, A. W. Morphological analysis of Drosophila larval peripheral sensory neuron dendrites and axons using genetic mosaics. J Vis Exp. , (2011).
- Suh, G. S., et al. A single population of olfactory sensory neurons mediates an innate avoidance behaviour in Drosophila. Nature. 431, 854-859 (2004).
- Sachse, S., Galizia, C. G. Role of inhibition for temporal and spatial odor representation in olfactory output neurons: A calcium imaging study. J Neurophysiol. 87, 1106-1117 (2002).
- Hallem, E. A., Ho, M. G., Carlson, J. R. The molecular basis of odor coding in the Drosophila antenna. Cell. 117, 965-979 (2004).
- Vosshall, L. B., Wong, A. M., Axel, R. An olfactory sensory map in the fly brain. Cell. 102, 147-159 (2000).
- Couto, A., Alenius, M., Dickson, B. J. Molecular, anatomical and functional organization of the Drosophila olfactory system. Curr Biol. 15, 1535-1547 (2005).
- Clyne, P., et al. Odorant response of individual sensilla on the Drosophila antenna. Invert Neurosci. 3, 127-135 (1997).
- Vosshall, L. B., et al. A spatial map of olfactory receptor expression in the Drosophila antenna. Cell. 96, 725-736 (1999).
- Wang, J. W., et al. Two-photon calcium imaging reveals an odor-evoked map of activity in the fly brain. Cell. 112, 271-282 (2003).
