Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
Lugtstof molekyler binder til deres mål-receptorer på en præcis og koordineret måde. Hver receptor genkender et bestemt signal og relæer disse oplysninger til hjernen. Som sådan at bestemme, hvor olfaktoriske information overføres til hjernen, ændre både perception og adfærd, fortjener undersøgelse. Interessant, er der spirende tegn på, at celletransduktion og transkriptionsfaktorer er involveret i diversificeringen af olfaktoriske receptor neuron. Her giver vi en robust helhed mount immunologisk mærkning metode til at analysere in vivo olfaktoriske receptor neuron organisation. Ved hjælp af denne metode, vi identificeret alle olfaktoriske receptor neuroner med anti-ELAV antistof, en kendt pan-neurale markør og Or49a-mCD8 :: GFP, et olfaktoriske receptor neuron specifikt udtrykt i NBA neuron hjælp af anti-GFP antistof.
Bruges det olfaktoriske system til at skelne mellem en enorm vifte af lugtmolekyler og efterfølgende at sende resulterende oplysninger til de højere centre i hjernen. Denne indgang anvendes til præcist at kontrollere grundlæggende dyreadfærd, såsom fodring og parring 1-6. Da hver olfaktoriske neuron type er forbundet med en bestemt sæt af lugte, diversificering af olfaktoriske receptor neuroner (ORN) s er afgørende for en ordentlig olfaktoriske system fungerer 7.
Drosophila genetik giver os mulighed for at udføre enkelt celle niveau efterforskning, der omfatter molekylære mekanismer, der er forbundet med ORN udvikling og fysiologiske funktion 8-16. Hele mount immunfarvning af Drosophila antenner har gjort det muligt for os at forstå nærmere de molekylære mekanismer involveret i diversificeringen af olfaktoriske receptor neuroner (ORN) s 7. Heri giver vi en omfattende beskrivelse af en simpel metode til at achieve dette.
Dissektion af Drosophila antenne beskriver vi er enkel og let at udføre i laboratoriet. For at sikre en vellykket dissektion, er det vigtigt at anvende fine kanter saks. Mens immunfarvning det dissekerede antenne, er det vigtigt at inkubere dem i en fugt-fyldte beholder for at undgå fordampning af antistoffet løsning. Det dissekerede antenne har en tendens til at flyde i opløsningen. Brug 0,1% Triton i PBS under fiksering og blokering skridt vil lette nedsænkning af antennen i opløsningen, og at sikre en …
The authors have nothing to disclose.
Denne undersøgelse blev støttet af MEXT-støttet program for Strategiske Research Foundation på private universiteter og JSP'er Young Scientist B tilskud til HT Vi vil gerne takke Ohtake Norihito at redigere videoklip.
Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |