में घ्राण रिसेप्टर न्यूरॉन्स के पूरा पर्वत immunolabeling<em> ड्रोसोफिला</em> एंटीना
Summary
Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
Abstract
Odorant अणुओं एक सटीक और समन्वित तरीके से अपने लक्ष्य रिसेप्टर्स करने के लिए बाध्य. प्रत्येक रिसेप्टर एक विशिष्ट संकेत पहचानता है और मस्तिष्क के लिए इस जानकारी रिले. जैसे, घ्राण जानकारी धारणा और व्यवहार, गुण जांच दोनों को संशोधित करने, मस्तिष्क को सौंप दिया है निर्धारण कैसे. दिलचस्प है, सेलुलर पारगमन और transcriptional कारकों घ्राण रिसेप्टर न्यूरॉन के विविधीकरण में शामिल कर रहे हैं कि उभरते सबूत नहीं है. यहाँ हम एक मजबूत पूरे vivo में घ्राण रिसेप्टर न्यूरॉन संगठन परख प्रतिरक्षाविज्ञानी लेबलिंग विधि माउंट प्रदान करते हैं. इस पद्धति का उपयोग करके, हम विरोधी ELAV एंटीबॉडी, एक ज्ञात अखिल तंत्रिका मार्कर और Or49a-mCD8 :: GFP, विशेष रूप से विरोधी GFP एंटीबॉडी का उपयोग एनबीए न्यूरॉन में व्यक्त एक घ्राण रिसेप्टर न्यूरॉन के साथ सभी घ्राण रिसेप्टर न्यूरॉन्स की पहचान की.
Introduction
घ्राण प्रणाली गंध अणुओं की एक विशाल विविधता के बीच भेद करने के लिए और बाद में उच्च मस्तिष्क केन्द्रों के लिए जिसके परिणामस्वरूप जानकारी भेजने के लिए प्रयोग किया जाता है. इस इनपुट ठीक ऐसी खिलाने और संभोग 1-6 के रूप में मौलिक पशु व्यवहार को नियंत्रित करने के लिए प्रयोग किया जाता है. प्रत्येक घ्राण न्यूरॉन प्रकार odors की एक विशिष्ट सेट, घ्राण रिसेप्टर न्यूरॉन्स के विविधीकरण के साथ जुड़ा हुआ है के रूप में (ORN) एस उचित घ्राण प्रणाली समारोह 7 के लिए आवश्यक है.
ड्रोसोफिला आनुवंशिकी ORN विकास और शारीरिक समारोह 8-16 के साथ जुड़े आणविक तंत्र से जुड़े एकल कोशिका के स्तर जांच करने के लिए सक्षम बनाता है. ड्रोसोफिला एंटीना के पूरे माउंट immunostaining के अधिक से अधिक विस्तार में घ्राण रिसेप्टर न्यूरॉन्स के विविधीकरण में शामिल आणविक तंत्र (ORN) एस 7 को समझने के लिए हमें सक्षम है. इस के साथ साथ हम एसी के लिए एक सरल विधि के लिए एक व्यापक वर्णन प्रदानइस hieve.
Protocol
Representative Results
Discussion
हम वर्णन ड्रोसोफिला एंटीना के विच्छेदन सरल और एक प्रयोगशाला की स्थापना में प्रदर्शन करने के लिए आसान है. एक सफल विच्छेदन सुनिश्चित करने के लिए, यह ठीक धार कैंची का उपयोग करने के लिए आवश्यक है. विच्छ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस अध्ययन से निजी विश्वविद्यालयों पर सामरिक अनुसंधान फाउंडेशन और हम वीडियो क्लिप को संपादित करने के लिए Ohtake Norihito धन्यवाद देना चाहूंगा हिंदुस्तान टाइम्स के लिए JSPS युवा वैज्ञानिक बी अनुदान के लिए MEXT समर्थित प्रोग्राम द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
| Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
| Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
| Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
| Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
| Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
| Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |
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