Herein we describe the process of whole mount immunostaining of Drosophila antennae, which enables us to better understand the molecular mechanisms involved in the diversification of olfactory receptor neurons (ORN)s.
Odorant moleculen binden aan hun doel receptoren in een precieze en gecoördineerde manier. Elke receptor herkent een specifiek signaal en stuurt deze informatie naar de hersenen. Als zodanig bepaalt hoe olfactorische informatie wordt naar de hersenen, modificeren zowel perceptie en gedrag verdient onderzoek. Interessant ook wordt steeds duidelijker dat cellulaire transductie en transcriptiefactoren betrokken bij de diversificatie van reukreceptor neuron. Hier bieden wij een robuust geheel monteren immunologische etikettering methode om in vivo reukreceptor neuron organisatie assay. Met deze methode identificeerden we allemaal reukreceptor neuronen met anti-Elav antilichaam, een bekende pan-neurale marker en Or49a-mCD8 :: GFP een reukreceptor neuron specifiek uitgedrukt in NBA neuron met anti-GFP antilichaam.
Het olfactorische systeem wordt onderscheid gemaakt tussen een enorme verscheidenheid van geurmoleculen en vervolgens de verkregen informatie naar de hogere hersencentra. Deze ingang wordt gebruikt om fundamentele dierlijke gedrag, zoals voeding en paring 1-6 nauwkeurig te regelen. Zoals elk olfactorische soort neuron is gekoppeld aan een specifieke set van geuren, de diversificatie van de olfactorische receptor neuronen (ORN) s is essentieel voor een goede olfactorische systeem functioneren 7.
Drosophila genetica stelt ons in staat om enkele cel niveau onderzoek bij moleculaire mechanismen geassocieerd met ORN ontwikkeling en fysiologische functie 8-16 uit te voeren. Ganse berg immunostaining van Drosophila antennes heeft ons in staat om te begrijpen in meer detail de moleculaire mechanismen die betrokken zijn bij de diversificatie van olfactorische receptor neuronen (ORN) s 7. Hierin bieden wij een uitgebreide beschrijving van een eenvoudige methode om achieve dit.
De ontleding van de Drosophila antenne beschrijven we is eenvoudig en in een laboratorium omgeving. Om een succesvolle dissectie te garanderen, is het essentieel om fijne kanten schaar gebruiken. Terwijl de immunokleuring ontleed antenne, is het belangrijk te incuberen in een vocht gevulde container verdamping van de antilichaamoplossing voorkomen. De ontleed antenne heeft de neiging te zweven in de oplossing. Met 0,1% Triton in PBS gedurende de fixatie verhinderde stappen zullen verzinken van de antenne …
The authors have nothing to disclose.
Deze studie werd ondersteund door MEXT gesteund programma voor de Strategic Research Foundation bij Private universiteiten en JSPS Young Scientist B subsidie voor HT Wij willen Ohtake Norihito bedanken om de videoclips te bewerken.
Stemi DV4 dissection microscope | Zeiss | Stemi DV4 | |
Glass bottom culture dishes | MatTek corporation | P35G-0-10-C | |
Dissection scissor | Fine Science Tools | 15000-08 | |
Rat anti-ELAV | Developmental Studies Hybridoma Bank | 7E8A10 | Dilution 1:200 |
Mouse anti-GFP | Invitrogen | A11122 | Dilution 1:400 |
Donkey Anti-Rabbit IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 711-225-152 | Dilution 1:200 |
Donkey Anti-Rat IgG | Jackson ImmunoResearch Laboratories | 712-165-150 | Dilution 1:200 |