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Medicine

膀胱胀诱发内脏运动反应为膀胱疼痛小鼠模型

Published: April 27, 2014 doi: 10.3791/51413

Summary

约3-8亿人在美国患有间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC / BPS),其特征在于,部分盆腔疼痛衰弱状态。为了研究的条件神经系统的贡献,膀胱疼痛生理模型是用在小鼠和大鼠。

Abstract

约3-8万人,在美国从间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征患(IC / BPS),其特点是增加了紧迫感和排尿次数,以及夜尿和一般盆腔疼痛,特别是在膀胱充盈或衰弱状态排尿。尽管多年的研究,IC / BPS的原因仍然是难以捉摸和治疗策略无法为病人提供完整的救济。为了研究的条件神经系统的贡献,许多动物模型已经发展到模仿与IC / BPS带来的痛苦和症状。一个这样的小鼠模型是膀胱胀满(UBD)。在该模型中,一个特定的压力的压缩空气被输送到轻度麻醉动物超过一个设定的时间周期膀胱。在整个过程中,在上斜肌腹部肌肉的电线从肌肉记录电活动。这项活动被称为内脏运动反应(VMR)和我SA可靠和可重复的测量伤害性的。在这里,我们描述了在小鼠包括手术操作,生理记录和数据分析执行此技术的必要步骤。随着使用这种模式,初级感觉神经元,脊髓继发传入,以及参与膀胱疼痛更高中枢神经系统领域之间的协调可以解开。这个基本的科学知识,然后可以转换临床治疗患者从IC / BPS的痛苦。

Introduction

慢性疼痛的官方定义为疼痛持续约3个月,或比正常组织愈合时间较长1。这种类型的疼痛是人们被驱赶到求医2的主要原因之一,并且可以花费$ 635十亿每年3美元。目前慢性疼痛的应对策略被认为是过时的;几十年的医疗进步,的NSAIDs(非甾体抗炎药)和阿片类药物后,仍然由医师处方的主要治疗方法。然而,这些治疗方法针对所有不同类型的疼痛以同样的方式,提供镇痛作用超过一切,而不是特别注重,准确的痛苦事件的起因身体。为了更好地帮助那些患有慢性疼痛,研究应注意转向与慢性疼痛最常见的原因相关的病因及可能的疼痛特异性治疗方法。这manuscri的目标角是描述用于更好地理解被称为间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC / BPS)的状态的模型。

IC / BPS是一种使人衰弱的疾病,影响千百万人,主要是妇女的40 4岁以上的IC / BPS的确切原因尚不清楚,但发病率已经与遗传5,特定的饮食和高应力水平6 。 IC / BPS的症状包括但不限于:增加了紧迫性排尿,排尿次数增多,疼痛,穿刺,或膀胱充盈及排尿时灼热疼痛,以及夜尿7。患者出现这些情况有较高的压力水平,而且更着急8。这种增加的压力会导致疼痛加剧,这增强了原有的应力水平。有研究表明,抑郁和焦虑水平降低以下治疗方法,减轻尿疼,从而有效地打破这种积极的反馈循环

为了研究的条件神经系统的贡献,许多动物模型已经发展到模仿与IC / BPS带来的痛苦和症状。传统上,膀胱炎已经被重新创建在动物中通过引入各种化学品,例如芥末油,丙酮,脂多糖,盐酸,和环磷酰胺进入膀胱。但是没有外国代理人存在于IC / BPS患者的无菌尿,从而质疑这些模型的有效性。泌尿疼痛另一种小鼠模型是膀胱胀满(UBD)10。在该模型中,一个特定的压力的压缩空气被输送到一个清醒或轻度麻​​醉动物在一段设定时间的膀胱。在整个过程中,在上斜肌腹部肌肉纪录电气ACTIV电线从性肌(与肌电图(EMG))。此活动被称为内脏运动应答(VMR),是痛觉10的可靠的,可重复的测量。类似的中空器官,腹胀( 膀胱,直肠)在健康志愿者产生不舒服的感觉,并显著增加报告的疼痛11,12,这经常被用来诊断IC / BPS的特质。因此,在用刺激或抑制的电,药理学和光遗传学方法结合,UBD是对理解膀胱伤害感受和疼痛两者的外周和中枢神经系统组件的有用和有效的模型。

在这里,我们描述的过程欠平衡​​钻井是目前用在我们的实验室中常用的小鼠品系,C57BL/6J的女性成员内。由于男性的导尿过程中的困难,本程序主要是在雌性小鼠中进行。该协议是改编自由内斯<开发EM>等10及以前出版的从我们的实验室13。以下方案描述该模型在麻醉的动物的四个主要组成部分:(1)膀胱导管与记录电极手术(2)局部麻醉诱导(3)膀胱膨胀和VMR记录,以及(4)数据的原始VMR /肌电痕迹分析。由于选择的有机体,麻醉深度和诱导,和体温的欠平衡钻井-VMR过程中的细微差别将在下面讨论。

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Protocol

下面的协议已被批准的机构动物护理和使用委员会在杜肯大学,并与来自美国国立卫生研究院的指引一致。

电极丝和膀胱导尿管1。利用无菌操作技术植入手术(总时间5-10分钟)

  1. 下列项目前,应开始手术准备:
    1. 主动监视和使用温度监控系统与电池供电的加热垫和动物体温探头调节体温到37.5±0.5℃(材料清单)连接的自动系统来为体温的附加控制的低瓦数加热灯。
    2. 所需要的异氟醚麻醉设备包括压缩空气( 例如 100%O 2),异氟烷蒸发器,异氟醚,异氟醚感应腔(用于初始击倒),鼻锥和排气系统。
    3. 第组装Ë适当的手术器械,静脉导管和电极(材料清单)
  2. 在2-3%异氟醚诱导感应腔麻醉状态。从腔取出鼠标时翻正反射消失(0-1分钟)。
  3. 鼠标放置在鼻锥与2-2.5%异氟醚。捏脚趾,检查全麻醉。应该没有从动物的反应。启动定时器。
  4. 将1滴对小鼠每只眼睛眼药膏。
  5. 转动鼠标移到所以背面朝下。
  6. 通过尿道进入膀胱插入导管。
  7. 浸导管手术润滑油来润滑导管。
    1. 轻轻握住尿道开口在垂直于动物的身体尖头镊子。持导管与第二组镊子,轻轻插入导管的一端插入尿道口在垂直于动物的身体的角度。
    2. 当导管已进入尿道〜1-2毫米,轻轻地调节导管,使得它现在平行于本体旨在向头部。这一运动是必要的,以避免耻骨。
    3. 轻轻推导管向老鼠的身体。导管应滑入体腔平稳,无阻力。不要强迫导管。如果导管不能顺利进入,返回到垂直导管位置,并再次启动。
    4. 用导尿管在膀胱完全插入,轻轻向下按鼠标的腹部驱逐膀胱内容。推一小块纸巾入导管开口从导管中取出所有的尿液。当纸巾浸泡尿液,更换。在整个过程中膀胱膨胀实验剩余的协议,包括连续取出尿(见协议3下文。)
  8. 插入两个银线分为左腹部肌肉和一个银线到胸部(如地面)。
    1. 用酒精或碘酒消毒区域外侧导管的右侧(身体的动物的左侧。)
    2. 暴露左腹部肌肉。
      1. 按住左附近腹肌用钳子皮肤。做一个小1-2厘米的切口中等手术剪。
      2. 将剪刀尖插入切口,轻轻地扩大切口至2厘米。
      3. 使用镊子移动覆筋膜暴露上斜肌腹部肌肉。注意不要剪/撷取任何都位于这一地区的主要血管。
    3. 弯三银线的一半。使用锋利的21号针头取一小口的肌肉。然后,通过肌肉推针。在肌肉中插入的时候要小心,不要刺穿任何内脏器官或诱导肌肉造成不必要的损伤。
    4. 坚持一银线的自由端插入21号针头的开幕式。轻轻一拉退针穿过肌肉,通过肌肉咬绘制银线。当针不受肌肉,轻轻通过肌肉拉银线直到在导线环路是与冲水肌肉咬。
    5. 重复步骤1.7.3-1.7.4的第二肌丝。这根电线应放在从第一肌肉线约0.5厘米它的两个导线不要触摸插入之后是很重要的。
    6. 插入第三个银线(地线)在胸前逊色于心脏。
      1. 使用锋利的21号针头取一小口的皮肤(这是没有必要做一个切口或刮皮肤),并通过皮肤推针。
      2. 将上述银线,转危为安的皮肤。
  9. 将少量的摄氏37.5度的无菌矿物油覆盖在外露的肌肉,以保持湿润,拉皮肤上尽可能多暴露的肌肉尽可能。
  10. 注射0.5毫升皮下注射生理盐水,以帮助在随后的步骤中保持液面高度。
  11. 轻轻摇动动物到一边,这样体温可以很容易地保持。

2,局部麻醉,降压过程(托塔升时间〜75分钟)

下面麻醉协议已被批准的机构动物护理和使用委员会在杜肯大学,并与来自美国国立卫生研究院的指引一致。

  1. 立刻科后,我(上图)是完整的,异氟醚降低至1.5%。保持在这个水平上15分钟。
  2. 较低的异氟烷,使得该动物被部分地麻醉。
    1. 由0.125%降低异氟醚,每15分钟,直到动物表现出屈曲响应脚趾捏,但不发声,或以其他方式移动。
    2. 通常,0.8〜1.0%的异氟醚的水平是最优的,但是水平可以有所不同,因为在麻醉设置差异。发声和/或下床活动是极其罕见的事件时,麻醉是在适当的水平。

3,肌电图(EMG)记录在膀胱膨胀与压力梯度(15-75毫米汞柱)(总时间 - 变量取决于实验)

安装肌电图记录和膀胱充盈以下项目:
  1. 设置一个放大器,数字转换器,以及录音软件。在此设置中,数字转换器具有一个输入放大器和两个输入压力调节器(压力和刺激标记输入,见下文第3.1.2节)。确切的硬件和软件设置为自定义(见材料清单的具体说明)。
  2. 建立一个系统,提供空气压力的具体阵阵动物。这个系统被称为在下面的协议的“定时压力调节器”。它允许自动压力输送,包括数字化的空气压力,试验长度的控制,试验间隔自动化的试验数控制,以及刺激呈现数字信号(参见Anderson 等人 14的一个定时压力调节器示意图)。
  • 连接所有导线从鼠标(2腹线+ 1个接地线)到放大器和数字化仪和数字化仪的软件开始记录的肌电信号。注意:在数字化仪软件中选择什么时间“写”。
  • 从导尿管取出纸巾。连接导管空气管道(从定时压力调节器。)
  • 提供一个单一的20秒试验在60毫米汞柱扩张的压力。
    1. 将流量调节至60毫米汞柱(检查压力使用模拟血压计。)
    2. 设定的定时压力调节器提供一个20秒的预压力的时间间隔(这将被记录在数字化仪软件的2V刺激信号),后跟一个20秒的压力膨脉冲。
    3. 启动试验(预压力区间+膨压试验)。当实际压力试验开始,加倍使用3血压计连接到系统检查压力。
    4. 在压力膨胀试验,强大的肌电信号(> 0.5 V)应在与20秒腹胀可能是后观察。该动物可显示出经腹部NAL运动,但动物不能发声或以其他方式移动。虽然罕见,如果出现异常运动或发声的观察,增加异氟醚的水平。
  • 如果第一 60毫米汞柱腹胀产生适当的肌电信号,重复步骤3.4两次以1-2分钟的intertrial间隔。
  • 当从三个60毫米汞柱试验接收强信号,进行实验distentions。
    1. 许多研究使用渐变distensions开始在低压(10-15毫米汞柱),并工作到有害的压力(75〜80毫米汞柱)在10〜15毫米汞柱为单位。请参阅下面的代表性成果,例如痕迹在不同压力。
    2. 典型的试验包括一个20秒的预压力区间,一个20秒的压力扩张试验,以及1-2分钟intertrial间隔。
    3. 执行三个distentions在每个压力,然后平均在三个试验中(以获得针对每个压力单个内脏运动响应)。在另一种方法,对erform 5 distensions在每个压力,丢弃高和低的试验,然后平均剩余的三个反应。
  • 一旦实验distensions是完整的,停止录音,保存实验文件,并使用认可的方法牺牲动物。
  • 的原始痕迹肌电图4。分析

    1. 内脏运动反应( 肌电图记录)的分析是很容易做到使用板载数字转换器软件或通过第三方程序(材料清单)以下说明,可以使用多个程序或使用手动分析可用于分析这些数据的一般说明。
    2. 要导出肌电图,压力,并从数字化仪软件的刺激信号数据请执行以下操作:
      1. 打开实验文件。
      2. 点击“文件”“导出为”。
      3. 更改文件类型为“电子表格文本(。TXT)”,命名文件,然后单击“保存”。
      4. 中宝对窗口,改变输出采样率到“1000”,更改开始时间的那一刻开始数据采集和变更结束时间为“MAXTIME()”选择框标记“时移输出,所以第一行是一个0.0秒“,并单击”确定“。
      5. 的数据现在将导出为可以在各种程序中打开一个文本文件。该文件应包含四列(定时器,VMR(EMG),压力,刺激)。
    3. 每个实验动物进行测试,执行以下的数学运算。
      1. 纠正肌电图信号,通过计算各时间点的绝对值设置整个的数据。
      2. 确定实验的背景技术部分中的平均EMG反应。
      3. 减去在实验中每一个数据纠正这点平均背景肌电反应,以获得背景校正的数据集。
      4. 在曲线(AUC)为每20秒前决定下的面积在背景校正的数据设定压力的时间间隔。
      5. 确定AUC为每20秒压胀试验在背景校正后的数据集。
      6. 由最低预压力间隔AUC从整个实验将每个压力膨胀试验的AUC(在步骤4.3.5中获得)(在步骤4.3.4得到)。这是归一化和背景校正后的AUC为每个完整的膨压试验。
    4. 对于每个实验的动物,从一个单一的压力平均归一化的多个试验,以获得归一化的VMR中伏特*秒(VSEC)。
    5. 进行适当的统计数据上的数据取决于实验设计。

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    Representative Results

    整体UBD-VMR设置的图示可以看出,在图1A中 。越来越大的压力的步骤诱导的增加原材料VMR( EMG)( 图1B)。原始VMR,压力和刺激标记物的信号,即应使用数字化仪软件在录制过程中可观察到在图2中可以看出,顶部通道见于图2是肌电图跟踪(中五)。肌电图跟踪的背景信号应该是稳定的,低振幅(<0.2 V)。如果背景是高还是包含了零星的大峰值(> 0.5 V)导线和放大器的设置可能需要调整。在某些情况下包线(从鼠标到放大器和/或放大器,数字转换器),在铝箔可以减少一些噪音。 图2中的中间声道表示压力信号作为定量以mmHg定时压力调节器。注意,信号发生是一个曲线。这是因为满腹胀膀胱不是瞬时的。一旦压力信号达到该试验( 75毫米汞柱图2)的最大值,该压力应保持在该最大值。有时,空气会泄漏导管周围尿道。发生这种情况通常在高压下( 例如,> 60毫米汞柱),可以通过在压力信号的振幅的变化可以观察到,并且可以通过添加少量的外科润滑剂围绕尿道口被减小。最终的信道( 图2的底部)示出了刺激标记信道。刺激标记通道显示两个单独的信号。在预压力间隔的开始有一个瞬间2 V信号标志。这个信号可以被用于自动数据分析过程对于给定的实验。具体来说,我们可以编写一个数据分析系统,通过寻找一个超越1.5 V.这使得数据分析系统quickl刺激标记的数据文件进行扫描Ÿ找到每个完整的审判。刺激通道的第二部分是在整个压力膨胀试验期间发生的1 V信号。再次,可以使用简单的数据分析该第二信号的存在。

    从一个单一的实验动物有代表性的数据可以看出,在图3表1所述的动物是扩张三倍于下列各压力:( 图3A,表1)15,30,45,60,和75毫米汞柱的3 distentions的平均值,并表示为图中的单个数据点。请注意,归一化的信号逐渐增大而增加膀胱膨胀压力。根据这一初步腹胀集,这个动物接受分级膀胱膨胀的另外两个集。正如图3B所示 ,第二和第三组distentions的制备类似VMRS(在每个压力。)这三组distentions发生过2.5小时围OD展示了记录设置的稳定性和欠平衡钻井的刺激,并在一个动物VMR响应的可重复性。重要的是,这个准备的长期稳定性,当异氟醚麻醉逐渐降压超过1小时的过程中只发生。更短的麻醉过程可导致在UBD VMR信号逐渐丧失其每个组distentions的(未出版的观察,萨德勒和Kolber)在UBD VMR系统的稳定性的另一个关键因素是稳定的体温的维持。相比于37.5℃,就像在图4中,UBD VMR(响应于60毫米汞柱腹胀)是显著下于33.5℃下体温

    图1
    图1。内脏运动的欠平衡钻井反应(VMR)(A)原理图Ç欠平衡钻井设置的。压缩空气经由尿道导管输送到膀胱中。在distensions,在腹肌记录肌电电极。在整个过程中,温度是用电池供电的加热垫和开销灯保持。 二)欠平衡钻井过程中肌电图示例痕迹。随着压力的增加,从腹部肌肉的电力输出增加同成分。

    图2
    图2:屏幕显示拍摄数据欠平衡钻井过程中试用。三个通道显示。最佳信道示出了原始肌电迹(单位为V)的中间信道显示了被输送到膀胱中的压力(单位:mmHg)。底部跟踪显示刺激标记通道,指示预压力区间,整个压力腹胀审判的开始。形象是一个40秒的完整试验(20秒预压力区间,加上20秒的压力扩张试验。)

    图3
    图3显示分级VMR代表性的数据(A)归一化的VMR逐渐增加而增加压力(15-75毫米汞柱)传递到鼠标的膀胱。 (b)于膀胱distentions(15-75毫米汞柱= 1套)套显示出类似的VMRS相比,第一组distentions的。

    图3
    图4:体温降低欠平衡钻井VMR体温下降从37.5°C至33.5°C会导致在欠平衡钻井VMR一个显著下降。(N = 6;配对t检验P <0.05)


    表1。的全套distentions代表数据表显示数据,包括压力腹胀AUC,预压力区间AUC,背景校正压力腹胀AUC和归一化压力腹胀的AUC。对于每一个压力,动物收到三份腹胀试验。归一化的压力扩张的AUC于各压力的平均值绘制在图3A中

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    Discussion

    在人类中,间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC / BPS)表示一个显著的临床问题,因为病人已经衰弱的痛苦,往往是反应迟钝到正规的疼痛治疗15。其中一个在理解和最终治疗慢性膀胱疼痛的主要挑战是要了解所参与对伤害性膀胱膨胀,正常的神经过程。为了克服这个困难,膀胱疼痛的动物模型是必要的。这种模式应该是可重复的,稳定的,并且容易测量。幸运的是,尼斯和同事10研制出可用于研究的生理响应有毒膀胱膨胀的系统。

    系统设置非常简单,可以使用主要是现成的,现成的硬件和软件来完成。主要的定制片参与UBD VMR系统设备是定时压力调节器。本机提供了一个模拟- 数字气压的转换,并发送刺激开始标记到数字转换器的硬件。使用定时压力调节器大大简化了数据分析通过自动同步的压力的刺激与记录肌电图( ,VMR),这是重要的,因为VMR不一定开始精确当膀胱是第一扩张和VMR经常保持短期内(<5秒)的扩张结束后。然而,通过仔细的同步,人们可以很容易地与一个开/关调节器执行UBD VMR程序,以控制扩张开/关和一个计时器,是在与所记录的肌电信号同步。

    在欠平衡钻井VMR系统的询问在膀胱疼痛神经系统作用的一个主要优点是反应分级膀胱膨胀压力下降沿标准曲线越来越大的压力诱发更大的VMRS。这使得研究人员能够轻松地确定了实验的人ipulation导致在两个无害和有害膀胱膨胀压力的增加或减少在VMR。另外,从一个单一的动物,信号非常稳定跨越时间,以便多轮分级腹胀可以做到( 图3B)。这使研究人员能够获得基线欠平衡钻井VMR,然后操纵动物( 输送药物)的受试者内匹配13。研究人员已经使用UBD-VMR系统(小鼠和大鼠),以记录或处理脊髓背角神经元16与其它神经元在中枢神经系统( 例如,延髓腹侧髓质17或杏仁核13,16),这些研究和其他继续添加到神经系统在膀胱感觉输入和处理的各个组成部分的作用,我们的基本科学的认识最终的主观疼痛从这个伤害性输入感觉。而欠平衡钻井VMR系统包括许多实验的优点再有一些限制的模型。首先,虽然内脏膀胱膨胀唤起的人类“痛苦”的主观感受也不可能知道,如果腹部肌电图记录在老鼠是真正具有代表性的痛苦。然而,欠平衡钻井VMR响应由普通的止痛药暗示VMR是一个痛苦样反应抑制。其次,在目前的欠平衡钻井-VMR系统中,动物在录制过程中麻醉。虽然现场对麻醉UBD VMR的比较验证了使用麻醉10,还有异氟醚对疼痛样反应可能未知的作用。第三,所描述的协议不是一个生存术使小鼠个体随着时间的推移多个录音是不可能的。然而,利用欠平衡钻井-VMR模式以及其他内脏痛系统将允许对内脏痛更完整的理解,并会导致新的治疗途径,从患者的IC / BPS和其他内脏疼痛病症患者。

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    Acknowledgments

    我们要感谢博士。罗伯特Gereau,亨利赖,和Lara瓦罐在设立这个制度的有益的帮助。我们也想感谢的资金来源为这项工作(BJK - 疼痛早期职业研究资助由扫描研究国际协会|设计基金会由INGER&晶石BRUUN和杜肯大学Hunkele可怕的疾病基金)。

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    Infrared heating blanket and monitoring system Kent Scientific Right-Temp System  This system is set up to monitor two separate temperatures.  This should include the animal and the heating blanket.  In addition, the system can automatically adjust the temperature to maintain a set temp.  However, this automatic function produces electrical interference during EMG recording and must be turned off.  Kent can provide a battery pack for the heating pad for use during the riEMG recording part of the experiment.
    Isoflurane vaporizer Draeger Vapor 19.1 Any isoflurane vaporizer will work, but it is helpful to have one that has multiple notches between 0-2% isoflurane.
    Isoflurane multiple sources n/a
    100% Oxygen air tank multiple sources n/a For ventilation of animal
    Air breathing grade multiple sources n/a For bladder distention
    24 G 0.56 in IV catheter BD Biosciences  381411 For bladder catheterization
    Surgilube (sterile) Savage Laboratories 0281-0205-02 Any surgical grade lubricate would work fine.
    Mineral oil (sterile) multiple sources n/a
    Saline (sterile) multiple sources n/a
    AG8W Silver Wire, 2 m, 0.20 mm (.008 in) D, L, No Insulation  Warner Instruments W4 64-1318  Any silver wire with these specifications will work.  Wire does not need to be "chlorinated."
    Ophthalmic ointment multiple sources n/a
    Small surgical scissors multiple sources n/a
    Sharp forceps multiple sources n/a
    21 G Needle multiple sources n/a
    Grass amplifier P511 with 3-lead input cable Grass Instruments P511 (F-P5IC3/REV1) This is the "amplifier" used in the protocol.  Amplifier with the following settings: Calibrator = 1 mV; Lo freq = 300 Hz; Amplification = 20; Hi freq = 10 kHz; Line filter = in.
    Cambridge Electronic Design (CED) 1401 Plus (or equivalent) Cambridge Electronic Design 1401 Plus This is the "digitizer" used in the protocol.  Other digitizer systems from WINDAQ or other companies would work fine; Need inputs for pressure signal, EMG, and stimulus signal.
    CED Spike2 software Cambridge Electronic Design Spike 2 This is the the "digitizer software" used in the protocol.  Should be from same manufacturer as digitizer.  Program should be setup with 3 channels for pressure (0-100 mmHg scale), EMG signal (typically -5 to +5 V range), and stimulus marker (0-2 V) range.
    Flow chart from air tank to bladder catheter n/a n/a Sequence of connections from pressurized air tank to animal bladder:  Air tank to 1/4 in tubing to Gilmont flowmeter to y connector.  Branch 1 of y connector to to sphygmomanometer.  Branch 2 to a single input on the 4-way gang valve to 4-way valve output to the timed pressure regulator to 3/32 tubing from timed pressure regulator to 2nd y connector (branch 1 to sphygmomanometer) with branch 2 to 3/32 tubing  to a 3rd y connector.  Branch 1 of y connector to a 3rd sphygmomanometer and branch 2 to animal bladder catheter.
    Gilmont Flowmeter  Gilmont GF8321-1401 Multiple brands of flowmeters will work.  For bladder distention air, flow meter should be able to handle high pressures (such as this Gilmont meter).  For breathing air, flow rate should be adjustable down to 100 ml/min (typical mouse rate is 500-1,000 ml/min). 
    4-way Gang valve Elite This is a specific piece of equipment.  The Elite gang valve is designed for fish tanks at low air pressures.  In the bladder distention setup, this valve acts as a safety valves in case the pressure spikes.  Too high pressure during initial turning on of the tank will ruin the pressure transducer in the Timed pressure regulator and/or the sphygnometers. In addition, by providing a small amount of leak in the system, this valve makes it easier to adjust the pressure between 10-80 mmHg.  
    1/4 in Tubing multiple sources n/a
    3/32 inch Tubing multiple sources n/a
    "Y" connectors (1/4 and 3/32 in) multiple sources n/a
    Sphygmomanometer CVS Any analog sphygmomanometer from a drug store will work for this application.  
    Timed Pressure Regulator custom This is a custom built machine (Washington University in St. Louis Machine shop) that allows for automated pressure delivery including digitization of air pressure, control of trial length, inter-trial interval automation, control of trial number, and stimulus onset digital signal.  However, the basic components of the system (pressure on and off for a given trial period) could be controlled with a simple on/off in-line switch.   Such analog control of a trial would necessitate additional analysis parameters (see Protocol 4).  In addition, one would have to manually assign the pressure based on the analog sphygmomanometer during data analysis.  
    IGOR Pro Wavemetrics n/a For analysis of EMG signal. Many different types of software can be used for data analysis in these experiments.

    DOWNLOAD MATERIALS LIST

    References

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    医药,第86期,膀胱疼痛,肌电图(EMG),间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC / BPS),膀胱胀满(UBD),内脏运动反应(VMR)
    膀胱胀诱发内脏运动反应为膀胱疼痛小鼠模型
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    Sadler, K. E., Stratton, J. M.,More

    Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. Urinary Bladder Distention Evoked Visceromotor Responses as a Model for Bladder Pain in Mice. J. Vis. Exp. (86), e51413, doi:10.3791/51413 (2014).

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