Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

حقن Intrastriatal من ذاتي الدم أو اللاهوائية كولاجيناز كنماذج الفئران من نزف الدماغي الداخلي

Published: July 3, 2014 doi: 10.3791/51439
Automatic Translation
1, 1, 2, 3, 1,4, 1,2,4, 1,2
1Multidisciplinary Neuroprotection Laboratories, Department of Anesthesiology, Duke University, 2Department of Neurology, Duke University, 3Department of Radiology, Duke University, 4Department of Neurobiology, Duke University

Abstract

نزيف داخل المخ (ICH) هو شكل شائع من الأمراض الدماغية الوعائية ويترافق مع معدلات الاعتلال والوفيات كبيرة. نقص العلاج الفعال وفشل التجارب السريرية الكبيرة التي تستهدف الارقاء وإزالة جلطة تظهر الحاجة لمزيد من التحقيق يحركها آلية ICH. قد يتم تنفيذ هذا البحث من خلال الإطار الذي توفره نماذج قبل السريرية. وتشمل نموذجين الفئران في استخدام شعبية intrastriatal (العقد القاعدية) حقن الدم كله إما ذاتي أو كولاجيناز المطثية. منذ ذلك الحين، كل نموذج يمثل الميزات الفيزيولوجية المرضية تختلف اختلافا واضحا المتعلقة ICH، يمكن اختيار استخدام نموذج معين بناء على ما الجانب من المرض لدراستها. على سبيل المثال، وحقن الدم الذاتي يمثل أكثر دقة استجابة الدماغ على وجود الدم intraparenchymal، ويمكن تكرار أوثق فصي النزف. المطثية حقن كولاجيناز يمثل أكثر دقة لياليتمزق الأوعية مول وتطور ورم دموي سمات نزيف عميق. وبالتالي، فإن كل نتائج النموذج في تشكيل مختلف ورم دموي، والاستجابة neuroinflammatory والتنمية وذمة دماغية، ونتائج السلوك العصبي. قوة من التدخل العلاجي المزعوم يمكن أن يكون أفضل تقييمها باستخدام كلا النموذجين. في هذا البروتوكول، وأظهرت تحريض ICH باستخدام كلا النموذجين، مظاهرة بعد الجراحة الفورية للإصابة، وتقنيات الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية في وقت مبكر. كلا النموذجين تؤدي الى سقوط ضحايا استنساخه، وحجم ورم دموي، والعجز السلوك العصبي. بسبب عدم تجانس ICH الإنسان، وهناك حاجة إلى نماذج متعددة قبل السريرية لاستكشاف آليات الفسيولوجية المرضية بدقة واختبار الاستراتيجيات العلاجية المحتملة.

Introduction

نزيف داخل المخ (ICH) هو شكل شائع نسبيا من الأمراض الدماغية الوعائية مع ما يقرب من 40-50٪ من المرضى المصابين يموتون في غضون 30 يوما 1. للأسف، أحرز تحسن طفيف في معدل وفيات خلال ال 20 سنة الماضية 2. وأكد تقارير من المعاهد الوطنية للصحة (3) والمبادئ التوجيهية من جمعية القلب الأمريكية 4 على أهمية تطوير النماذج ذات الصلة سريريا من ICH تمديد فهم الفيزيولوجيا المرضية ووضع أهداف للنهج علاجية جديدة.

وتوجد عدة نماذج لمحاكاة ICH الإنسان 5. كما فهم ICH نضوج الفيزيولوجيا المرضية، فقد أصبح من الواضح أن مجموعة متنوعة من النماذج التي يمكن استخدامها لدراسة جوانب مختلفة من هذا المرض. وتشمل النماذج المستخدمة سابقا الفئران اميلويد اعتلال وعائي 6، intraparenchymal الإدراج microballoon والتضخم 7، والدم الشرياني المباشرتسلل 8،9. تم غرار فصي نزف من اميلويد اعتلال وعائي مع استخدام الفئران المعدلة وراثيا، ويمثل التراث الثقافي غير المادي سلالة متميزة. نماذج تحاكي تأثير Microballoon الشامل الحاد من تشكيل ورم دموي لكنه يفشل في التقاط استجابة الدماغ الخلوية إلى وجود الدم. أخيرا، مباشرة تسلل الدم الشرياني يخضع الدماغ للضغوط الشرياني من الشريان الفخذي. وهكذا، وهذا يحاكي نموذج الضغوط الشرياني ووجود الدم ولكن لا تعرض الدماغ لإصابة تمزق الاوعية الدموية الدقيقة من الأوعية الدموية الصغيرة. علاوة على ذلك، هذا النموذج قد تقلب عالية بطبيعتها. ومن المثير للاهتمام، الفئران ارتفاع ضغط الدم بشكل عفوي 10 تطوير عفوية ICH مع تقدمهم في السن. دراسة هذه الحيوانات بعد تطوير ICH قد تحاكي المرض في وجود واحد من الأمراض المصاحبة الرئيسية المهيئة للتراث الثقافي غير المادي البشر. في حين توجد هذه النماذج الأخرى، حقن intrastriatal من اللاهوائية كولاجيناز 11 أو حقن instrastiatal لالدم الكامل utologous 12 هي، في الوقت الراهن، واثنين من النماذج الأكثر شيوعا التي تستخدم في البحوث قبل السريرية ICH.

وينبغي بذل ICH اختيار نموذج استنادا إلى الهدف من السؤال التجريبية، بما في ذلك اختيار الأنواع وطريقة حمل تشكيل دموي. على سبيل المثال، الخنازير هي الحيوانات الكبيرة مع وحدات التخزين بيضاء الدماغ المسألة كبيرة نسبيا بالمقارنة مع الفئران. وبالتالي، هي مناسبة نماذج الخنازير لدراسة المسألة الأبيض الفيزيولوجيا المرضية التالية ICH. في المقابل، أدمغة القوارض هي المادة الرمادية إلى حد كبير، ولكن الأنظمة المعدلة وراثيا جعل القوارض مفيدة لتقييم الآليات الجزيئية من الإصابة والتعافي بعد ICH. يحتوي كل نموذج على نقاط القوة والضعف المتأصلة فيها (الجدول 1)، والتي ينبغي النظر فيها بعناية قبل التجريب.

البروتوكولات التالية تثبت الدم والحقن كولاجيناز نماذج ذاتي في الفئران. وقد ترجمت كل هذه النماذج من نماذج وضعت أصلا في الفئران13،14 والسماح باستخدام التكنولوجيا المعدلة وراثيا على نطاق واسع لاستكشاف الآليات الجزيئية المرتبطة موت الخلايا بعد ICH. سواء تمثل آليات الإصابة تختلف اختلافا واضحا من ICH الإنسان، وكلاهما النتيجة المتوقعة تختلف اختلافا واضحا من حيث التدابير السلوكية والنسيجية. وبالتالي، قد فرضيات معينة تصلح لنموذج واحد على الآخر، ولكن قد تتطلب التحقق من صحة العديد من الأفكار في كلا النموذجين.

الجدول 1. مقارنة بين خصائص كولاجيناز وحقن الدم نزيف داخل المخ نماذج ذاتي.

استنساخ
كولاجيناز حقن حقن الدم
سهولة الاستخدام + + + + +
+ + + +
السيطرة على النزيف الحجم + + + + +
الجزر الدم + + +
يحاكي الأمراض البشرية + -
بساطة + + + +
استخدام بأنواع متعددة + + + +

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

بيان الأخلاق: تمت الموافقة على هذا البروتوكول من قبل لجنة جامعة ديوك المؤسسية رعاية الحيوان واستخدام ويتبع كل مبادئ توجيهية لاستخدام الأخلاقية للحيوانات.

1. إعداد معدات

  1. الأوتوكلاف الأدوات الجراحية قبل الجراحة.
  2. تطهير الجهاز المجسم مع الايثانول 70٪.
  3. بدوره على حمام المياه والحفاظ على درجة حرارة المياه على 42 درجة مئوية.
  4. حل نوع IV-S المطثية كولاجيناز في محلول ملحي بتركيز 0.075 U في 0.4 ميكرولتر.

2. كولاجيناز حقن نموذج

  1. وزن الماوس.
  2. تخدير الماوس في غرفة الاستقراء مع 5٪ في isoflurane و30٪ O 2/70٪ N 2. وأشار التخدير كافية بعد حوالي 2 دقيقة عندما تباطأ التنفس الماوس إلى 1 في الثانية الواحدة.
  3. التنبيب القصبة الهوائية مع 30 ملم 20 G القسطرة الوريدية.
  4. الاتصال القسطرة لالتنفس الصناعي القوارض وتهوية الرئتين ميكانيكيا مع 1.6٪ في isoflurane و30٪ O 2/70٪ N 2 بمعدل 105 نفسا في الدقيقة مع حجم المد والجزر تسليمها من 0.75 مل ..
  5. يحلق فروة الرأس مع ماكينة حلاقة الإلكترونية. مرة واحدة يتم تخدير الماوس ومدخل أنبوب، نقله إلى محطة عمل مختلفة للحلاقة، ثم عاد إلى مقاعد البدلاء الجراحية.
  6. تأمين الرأس في إطار المجسم، ومستوى الرأس مع خياطة كلا الاكليلية والسهمي كنقاط مرجعية.
  7. تطبيق مرهم للعين للعيون.
  8. إدراج التحقيق في درجة الحرارة المستقيم. الحفاظ على درجة حرارة الجسم في 37.0 ± 0.2 ° C باستخدام بانسيابية تعميم مائي.
  9. مسح منطقة العمليات الجراحية مع بتدين اتباعها مع الايثانول 70٪ وكرر 3 مرات.
  10. جعل 1 سم خط الوسط فروة الرأس شق ومسح السمحاق أفقيا مع القطن ذات الرؤوس قضيب العقيمة لفضح bregma.
  11. الحفر 1 مم حفرة قطرها 2.2 مم لدغ غادر اللاتاألطراف إلى bregma مع حفر المياه المبردة.
  12. تدوير القارورة كولاجيناز 5 مرات، ثم غسل حقنة 0.5 ميكرولتر مع 25 G إبرة (تعلق على الإطار المجسم) مع 0.5 ميكرولتر حل كولاجيناز 5 مرات (اترك 0.5 ميكرولتر من محلول كولاجيناز في حقنة بعد غسل الماضي).
  13. محاذاة طرف الإبرة مع ثقب لدغ ثم طرد 0.1 ميكرولتر من حقنة ويمسح شطبة إبرة مع الحلاقة لتجاهل.
  14. باستخدام مياداة مجهرية، ودفع الإبرة 3 ملم العميق للقشرة وترك بلا حراك لمدة 30 ثانية.
  15. ضخ 0.4 ميكرولتر أكثر من 90 ثانية.
  16. تقليل isoflurane وإلى 1٪ وترك بلا حراك إبرة لمدة 5 دقائق.
  17. سحب الإبرة ببطء.
  18. تطبيق 1-2 قطرات من 0.25٪ بوبيفاكايين تحت الجلد وخياطة الجلد.
  19. إيقاف المرذاذ isoflurane وإزالة الماوس من إطار المجسم.
  20. السماح الماوس لاستعادة التهوية عفوية مع نزع الأنبوب الرغامي اللاحقة.
  21. عودة الماوس إلى القفص نظيفة والسماح بحرية الوصول إلىالغذاء والماء.

3. ذاتي حقن الدم نموذج

  1. اتبع الخطوات 2،1-2،11 للنموذج حقن كولاجيناز.
  2. رسم 50 ميكرولتر من محلول ملحي معقم الى ميكرولتر حقنة 30 G 50.
  3. ربط حقنة ميكروليتر مع 70 سم أنبوب PE10.
  4. طرد كل ملحي عادي من حقنة ميكروليتر في أنبوب PE10 تماما لإزالة أنابيب الهواء.
  5. سحب المكبس حقنة ميكروليتر من 1 ملم إلى جعل فقاعة هواء في افتتاح البعيدة للPE10 أنبوب ميكروليتر جهاز حقنة لتجنب خليط من المياه المالحة والدم أثناء الإجراءات في وقت لاحق.
  6. مسح القاصي الذيل وسط المنطقة الشريان من الفأر مع الايثانول 70٪، وقطع الشريان بشفرة الحلاقة عند 0.5 إلى 1 سم إلى طرف الذيل.
  7. جمع 40 ميكرولتر من الدم من ذيل يقتطع من PE10 أنبوب ميكروليتر جهاز حقنة. ملاحظة: أن لا يتم استخدام الهيبارين في الإبرة، وأنابيب، أو الماوس.
  8. نعلق حقنة ميكروليتر على injeمضخة كشن.
  9. ربط المعدن قنية جزء من إبرة 27 G إلى نهاية الأنبوب PE10، وتأمين الإبرة إلى مياداة مجهرية على الإطار المجسم.
  10. طرد 2 ميكرولتر من الدم من أصل 27 G الإبرة ومسح شطبة إبرة مع الحلاقة لتجاهل.
  11. محاذاة طرف الإبرة مع ثقب إبرة لدغ وإدراج 3 ملم العميق للقشرة.
  12. ضخ 35 ميكرولتر من الدم الذاتي بمعدل 2 ميكرولتر لكل دقيقة.
  13. تقليل isoflurane وإلى 1٪ وترك بلا حراك إبرة لمدة 10 دقيقة.
  14. سحب الإبرة أكثر من 30 ثانية.
  15. تطبيق 1-2 قطرات من 0.25٪ بوبيفاكايين تحت الجلد وخياطة الجلد.
  16. إيقاف المرذاذ isoflurane وإزالة الماوس من إطار المجسم.
  17. السماح الماوس لاستعادة التهوية عفوية مع نزع الأنبوب اللاحقة.
  18. عودة الماوس إلى القفص نظيفة والسماح بحرية الوصول إلى الغذاء والماء.

4. عملية الشام

  1. تتبع نفس الإجراءات لمباشرة صب كولاجينازنموذج ن، باستثناء من دون حقن إبرة بعد الإدراج.

5. رعاية ما بعد الجراحة

  1. حقن 0.5 مل تحت الجلد من الطبيعي المالحة في المساء لإجراء العمليات الجراحية في الجزء الخلفي من الرقبة الحيوان.
  2. توفير الغذاء خففت بالماء وهلام الغذاء في أكواب بلاستيكية صغيرة توضع على أرضية القفص. استبدال المواد الغذائية يوميا لمدة 7 أيام.
  3. تحقق من فقدان الوزن، والتئام الجروح، وعلامات الانزعاج يوميا لمدة 7 أيام.
  4. إذا كانت هناك حاجة فترات انتعاش أكبر من 7 أيام، وإزالة خياطة يمكن أداؤها تحت ضوء التخدير استنشاق (حوالي 1٪ isoflurane وفي 30٪ O 2/70٪ N 2)، إذا لزم الأمر.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

بسبب الاختلافات في تشكيل الورم الدموي (الشكل 1)، يظهر تحول المماثل مباشرة بعد الاستيقاظ بالنسبة للفئران حقنت الدم الذاتي وضمن 2-4 ساعة بعد الحقن كولاجيناز، كما يحدث توسع الورم الدموي (الشكل 2). غياب تحول المماثل يجب أن يثير القلق لعدم وجود إصابات كبيرة. في أول يوم إصابة آخر، وينبغي أن الفئران في كلا النموذجين إثبات عجز عصبي كبير (الشكل 3). في 24 ساعة بعد الحقن، وتظهر كميات من نصفي الكرة الأرضية المماثل دموي مستقر (الشكل 4)؛ أبعد من ذلك، في 24 ساعة بعد الحقن، ينبغي أن يتوقع أن تكون 79.8 + 0.34٪ في الفئران المحقونة كولاجيناز و79.3 + 0.23٪ في ذاتي الفئران حقن الدم محتوى الماء في الدماغ. ينبغي أن يتوقع أن يحدث ما بين 10 وفيات - 25٪ من الفئران المحقونة كولاجيناز وأقل من 10٪ من ذاتي الفئران حقن الدم. الموت لا مفر منه نظرا لحجم ورم دموي، وذمة دماغية، وincreaالضغط داخل الجمجمة ااا يحدث عادة في غضون أول 24 - 48 ساعة بعد الحقن intrastriatal. حدوث الوفاة بعد 72 ساعة قد يمكن تجنبها في كثير من الأحيان مع الرعاية المناسبة بعد التعرض للإصابة (على سبيل المثال، الوصول بسهولة إلى الغذاء والمياه خففت). يبدأ الانتعاش وظيفية بصفة عامة يوم آخر إصابة 2 مع ذاتي الفئران حقن الدم يتعافى بشكل أسرع بكثير من الفئران التي حقن كولاجيناز.

الشكل 1
الشكل 1. المسلسل التصوير بالرنين المغناطيسي أدمغة فئران مقارنة الدم الذاتي وكولاجيناز نماذج حقن نزيف داخل المخ. بعد تحريض النزف داخل المخ عن طريق الحقن ترك intrastriatal من 35 ميكرولتر من الدم ذاتي (A) أو 0.075 U-S النوع الرابع كولاجيناز المطثية (B) في 10 - C57/Bl6 الفئران الذكور 12 أسبوعا من العمر، المسلسل ايم بالرنين المغناطيسييوضح الشيخوخة التوسع ورم دموي في الفئران المحقونة كولاجيناز مقارنة تشكيل ورم دموي مستقرة في الفئران حقن الدم الذاتي. أحجام ورم دموي هي 10.1، 23.1، 29.9 مم 3 في 1، 6، 12 ساعة وبعد الحقن كولاجيناز، على التوالي، و 7.0، و 5.8، 3.2 مم 3 في 1 و 6 و 24 ساعة بعد الحقن الدم الكامل، على التوالي. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 2
. الرقم 2 ركن بدوره اختبار في الفئران بعد 24 ساعة نزيف داخل المخ اتخاذها على الفور بعد الحقن كولاجيناز intrastriatal في العقد القاعدية اليسار، وجود استجابة تحول المماثل المتوقع في 10 - 12 أسبوعا C57/Bl6 ذكور الفئران القديمة يدل على إصابة كافية. هذا تحوليجب أن تحدث مباشرة بعد إصابة كبيرة في الفئران التي حقنت الدم الذاتي وضمن 2-4 ساعة في الفئران المحقونة كولاجيناز. وأظهرت الفئران في كلا النموذجين أكثر اليسرى يتحول بعد الإصابة مقارنة مع الفئران لم يصب (** ع <0.01؛ في اتجاه واحد أنوفا مع ما بعد اختبار شيفيه مخصصة لل، ن = 10/group).

الرقم 3
. الرقم 3 بعد أداء Rotarod نزيف داخل المخ في الفئران خط الأساس وإصابة آخر الإختفاء rotorod من 10 - C57/Bl6 ذكور الفئران 12 أسبوعا من العمر لمدة أسبوع واحد بعد intrastriatal اليسرى 35 ميكرولتر ذاتي الدم، 0.075 U النوع الرابع-S المطثية كولاجيناز حقن ، أو عملية صورية (* ع = 0.022؛ المتكررة التدابير أنوفا مع ما بعد اختبار شيفيه مخصصة لل؛ F-قيمة = 12.726، ن = 10/group). ويتم تقييم الفئران عبر rotorod اختبار كل يوم بعد الإصابة لتجنب التحيز التدريب كبيرة. </ ع>

الرقم 4
الشكل 4 الهيماتوكسيلين والبقع يوزين من مخ الفأر بعد نزيف داخل المخ Photomicrographs من 10 - C57/Bl6 أدمغة فئران الذكور 12 أسبوع من العمر في 24 ساعة بعد الحقن intrastriatal الأيسر من 35 ميكرولتر الدم الذاتي (يمين) أو 0.075 U النوع الرابع-S اللاهوائية كولاجيناز (يسار). أحجام ورم دموي هي 20.2 مم 3 بعد الحقن كولاجيناز و 6.4 مم 3 بعد حقن الدم الكامل. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

على الرغم من البحوث قبل السريرية والتجارب السريرية الكبيرة الناتجة الناشئة للعلاجات واعدة 15-18، لا توجد التدخلات الدوائية أظهرت لتحسين النتيجة في ICH، ويبقى الرعاية الداعمة إلى حد كبير. قد يتم إنشاء قوائم العلاجات الممكنة بواسطة تكنولوجيات إنتاجية عالية، مثل العمل transcriptomic والبروتين. بينما تستمر هذه التقنيات لتعزيز معرفتنا الأهداف العلاجية المحتملة، إلى الأمام وإلى الوراء ترجمة أهداف واعدة قد تكون أفضل من خلال فحص استخدام نماذج قبل السريرية ذات الصلة سريريا 19-22. مثل هذه النماذج مفيدة لأنها تسمح الإنتاجية السريع للمرشحين المختارين، دراسة الآليات في الجسم الحي، والتحقيق غير مكلفة من الجرعات، نافذة العلاجية، وغيرها من المعالم وثيق لتطوير التجارب السريرية 23-25. في حين وجود مزايا واضحة في استخدام نماذج قبل السريرية، ينبغي أن يحدث النمذجة في معظم ذات الصلة سريريا بالتحرير نظام ممكن من الناحية السوقية المتاحة. بينما توجد نماذج ل"أعلى" ترتيب الحيوانات مثل القرود، واستخدام الفئران لنموذج المرض البشري يوفر غير مكلفة، والإنتاجية العالية، وتقنية قوية لدراسة الآليات المرضية والآثار العلاجية. دمج الأنظمة المعدلة وراثيا يسمح لإجراء تقييم أكثر قوة من مسارات الميكانيكية والسكان الخلية المعنية.

حاليا اثنين من نماذج الفئران هي في الاستعمال الشائع: الدم الذاتي intrastriatal أو حقن كولاجيناز. كلا النموذجين هي تنوعا وسهلة الاستخدام، وبالنسبة لنماذج السكتة الدماغية الأخرى. يمكن كلا النموذجين لحث ICH في مناطق الدماغ المختلفة 26، مما يتيح تقييم الاستجابات الإقليمية؛ حجم الورم الدموي يمكن السيطرة عليها وتغييرها، والسماح لتقييم إصابة خفيفة، متوسطة، وشديدة؛ وعلم وظائف الأعضاء سريريا ذات الصلة (على سبيل المثال، ضغط الدم، درجة الحرارة، الخ) يمكن السيطرة عليها. أخيرا، في حين أن كل نموذج وضعت أصلا فيالفئران، ومنذ ذلك الحين تم ترجمتها على حد سواء في الفئران للسماح باستخدام نظم المعدلة وراثيا 21،24،25،27. ومع ذلك، كل نموذج يفسح المجال لدراسة الجوانب المختلفة للتراث الثقافي غير المادي، حيث أن كل يمثل مكونات تختلف اختلافا واضحا من التراث الثقافي غير المادي. ذاتي حقن الدم قد أعد استجابة الدماغ على التعرض الدم intraparenchymal. وبالتالي، تؤثر على الكتلة الأولية وقوى القص، والتغيرات التهابات خفيفة، موت الخلايا المبرمج، وارتشاف الدم قد درس جميع 10،28. علاوة على ذلك، أدت التعديلات الأخيرة لهذا النموذج في القدرة على تقليد التوسع دموي 29،30. ولكن هذا النموذج لا استدعاء المكون من إصابة الأوعية الدموية و / أو توسيع ورم دموي وجدت في مرض الإنسان. في المقابل، كولاجيناز حقن يضيف عناصر تمزق الأوعية الدموية، والتوسع ورم دموي في وقت مبكر، وتعزيز تأثير neuroinflammatory. بينما توجد مخاوف واضحة حول مساهمة مصطنعة من كولاجيناز لهذا الغرض التهابات، وهناك نقص في البريد الثابتvidence لهذا 31، والخاصة (غير منشورة) البيانات المتوفرة لدينا تشير إلى أن كولاجيناز في عزلة لا يسبب استجابة التهابية ملحوظ في ثقافة الخلية.

من الناحية الإجرائية، سواء النماذج تتطلب مهارة محدودة مع المجهرية، وبالتالي يتم تعلمها بسهولة وذلك للحصول على الآثار استنساخه. المزالق التي ينبغي تجنبها تشمل ما يلي: 1) غزو الجافية أو إنشاء إصابات الدماغ الحرارية عند الحفر، 2) أو اختراق للنظام البطين مع غرز الإبرة. إصابة الجافية يسمح لارتداد injectant، ونتائج حقن داخل البطيني في قليل من دون تشكيل ورم دموي intraparenchymal. علاوة على ذلك، يجب توخي الحذر عند سحب الإبرة إلى عدم تعطيل شكلت حديثا / تشكيل دموي. وفيات أمر متوقع في نسبة معينة من الفئران ولكن هناك علاقة مباشرة لحجم الورم الدموي ودرجة الإصابة المطلوب؛ وبالتالي، قد يكون معاير هذه النتيجة عن طريق حجم injectant / التركيز.

كما هو الحال مع جميع النماذج، المواليةوسوف يكون الأمثل tocols للاستخدام من قبل مشغلي محددة. بسبب التقلبات الكامنة في جميع النظم في الجسم الحي، والخبرة مع نموذج معين كعامل أساسي للنجاح لا يمكن المبالغة فيها. يجب أن تؤخذ جميع الخصائص المميزة للنموذج، والخبرة المشغل مع نموذج معين، والقياسات نتيجة الفائدة، وعوامل لوجستية في الاعتبار عند اختيار النموذج التجريبي أفضل وجه ممكن.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Stereotactic frame Stoelting Co. 51603
Probe holder with corner clamp Stoelting Co. 51631
Mini grinder Power Glide Model 60100002
0.5 μl syringe Microliter 86259 25 G needle
5 μl syringe Microliter 7637-01
30 G microliter syringe Microliter 7762-03
Syringe pump KD Scientific Model 100
Heat therapy water pump Gaymar Industries, Inc. Model# TP650
Circulating waterbed CMS Tool & Die, Inc.
Rodent ventilator Harvard Apparatus Model 683
Isoflurane vaporizer Drager Vapor 19.1
Air flowmeter Cole Parmer Model PMR1-010295
Induction chamber Self made
Otoscope Welch Allyn 22820
Intravenous catheter Becton-Dickinson 381534 20 G, 1.16 inch Insyte-W
Isoflurane Baxter Healthcare Corporation NDC10019-360-69
Collagenase Type IV-S Sigma C1889
Polyethylene tubing PE10 Becton-Dickinson 427401
27 G 1 1/4 inch needle Becton-Dickinson 305136
Surgical scissors Miltex 21-539
Forceps Miltex 17-307
Needle holder Boboz RS-7840
Monofilament suture Ethicon 8698 Size 5-0
Indicating controller YSI 73ATD

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Asch, C. J., et al. Incidence, case fatality, and functional outcome of intracerebral haemorrhage over time, according to age, sex, and ethnic origin: a systematic review and meta-analysis. Lancet Neurology. 9, 167-176 (2010).
  2. Qureshi, A. I., Mendelow, A. D., Hanley, D. F. Intracerebral haemorrhage. Lancet. 373, 1632-1644 (2009).
  3. Participants, N. I. W. Priorities for clinical research in intracerebral hemorrhage: report from a National Institute of Neurological Disorders and Stroke workshop. Stroke. 36, (2005).
  4. Morgenstern, L. B., et al. Guidelines for the management of spontaneous intracerebral hemorrhage: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke. 41, 2108-2129 (2010).
  5. James, M. L., Warner, D. S., Laskowitz, D. T. Preclinical models of intracerebral hemorrhage: a translational perspective. Neurocrit Care. 9, 139-152 (2008).
  6. Winkler, D. T., et al. Spontaneous hemorrhagic stroke in a mouse model of cerebral amyloid angiopathy. J Neurosci. 21, 1619-1627 (2001).
  7. Sinar, E. J., Mendelow, A. D., Graham, D. I., Teasdale, G. M. Experimental intracerebral hemorrhage: effects of a temporary mass lesion. J Neurosurg. 66, 568-576 (1987).
  8. Mendelow, A. D., Bullock, R., Teasdale, G. M., Graham, D. I., McCulloch, J. Intracranial haemorrhage induced at arterial pressure in the rat. Part 2: Short term changes in local cerebral blood flow measured by autoradiography. Neurol Res. 6, 189-193 (1984).
  9. Bullock, R., Mendelow, A. D., Teasdale, G. M., Graham, D. I. Intracranial haemorrhage induced at arterial pressure in the rat. Part 1: Description of technique, ICP changes and neuropathological findings. Neurol Res. 6, 184-188 (1984).
  10. Sang, Y. H., Su, H. X., Wu, W. T., So, K. F., Cheung, R. T. Elevated blood pressure aggravates intracerebral hemorrhage-induced brain injury. J Neurotrauma. 28, 2523-2534 (2011).
  11. Krafft, P. R., et al. Modeling intracerebral hemorrhage in mice: injection of autologous blood or bacterial collagenase. J Vis Exp. , (2012).
  12. Sansing, L. H., et al. Autologous blood injection to model spontaneous intracerebral hemorrhage in mice. J Vis Exp. , (2011).
  13. Rosenberg, G. A., Mun-Bryce, S., Wesley, M., Kornfeld, M. Collagenase-induced intracerebral hemorrhage in rats. Stroke. 21, 801-807 (1990).
  14. Nath, F. P., Jenkins, A., Mendelow, A. D., Graham, D. I., Teasdale, G. M. Early hemodynamic changes in experimental intracerebral hemorrhage. J Neurosurg. 65, 697-703 (1986).
  15. Anderson, C. S., et al. Rapid blood-pressure lowering in patients with acute intracerebral hemorrhage. N Engl J Med. 368, 2355-2365 (2013).
  16. Clark, W., Gunion-Rinker, L., Lessov, N., Hazel, K. Citicoline treatment for experimental intracerebral hemorrhage in mice. Stroke. 29, 2136-2140 (1998).
  17. Mayer, S. A., et al. Efficacy and safety of recombinant activated factor VII for acute intracerebral hemorrhage. N Engl J Med. 358, 2127-2137 (2008).
  18. Mendelow, A. D., et al. Early surgery versus initial conservative treatment in patients with spontaneous supratentorial lobar intracerebral haematomas (STICH II): a randomised trial. Lancet. , (2013).
  19. James, M. L., Blessing, R., Bennett, E., Laskowitz, D. T. Apolipoprotein E modifies neurological outcome by affecting cerebral edema but not hematoma size after intracerebral hemorrhage in humans. J Stroke Cerebrovasc Dis. 18, 144-149 (2009).
  20. James, M. L., Blessing, R., Phillips-Bute, B. G., Bennett, E., Laskowitz, D. T. S100B and brain natriuretic peptide predict functional neurological outcome after intracerebral haemorrhage. Biomarkers. 14, 388-394 (2009).
  21. James, M. L., Sullivan, P. M., Lascola, C. D., Vitek, M. P., Laskowitz, D. T. Pharmacogenomic effects of apolipoprotein e on intracerebral hemorrhage. Stroke. 40, 632-639 (2009).
  22. James, M. L., et al. Brain natriuretic peptide improves long-term functional recovery after acute CNS injury in mice. J Neurotrauma. 27, 217-228 (2010).
  23. Indraswari, F., et al. Statins improve outcome in murine models of intracranial hemorrhage and traumatic brain injury: a translational approach. J Neurotrauma. 29, 1388-1400 (2012).
  24. Laskowitz, D. T., et al. The apoE-mimetic peptide, COG1410, improves functional recovery in a murine model of intracerebral hemorrhage. Neurocrit Care. 16, 316-326 (2012).
  25. Lei, B., et al. Interaction between sex and apolipoprotein E genetic background in a murine model of intracerebral hemorrhage. Translational Stroke Research. 3, (2012).
  26. Lekic, T., et al. Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage. J Neurosurg. 118, 465-477 (2013).
  27. Nakamura, T., et al. Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice. J Cereb Blood Flow Metab. 24, 487-494 (2004).
  28. Yang, D., et al. Statins Protect the Blood Brain Barrier Acutely after Experimental Intracerebral Hemorrhage. J Behav Brain Sci. 3, 100-106 (2013).
  29. Rynkowski, M. A., et al. A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion. Nature Protocols. 3, 122-128 (2008).
  30. Wang, J., Fields, J., Dore, S. The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood. Brain Research. 1222, 214-221 (2008).
  31. MacLellan, C. L., et al. Intracerebral hemorrhage models in rat: comparing collagenase to blood infusion. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 516-525 (2008).

Tags

الطب، العدد 89، ونزيف داخل المخ، والماوس، قبل السريرية، الدم الذاتي، كولاجيناز، علم الأعصاب والسكتة الدماغية وإصابات الدماغ، العقد القاعدية
حقن Intrastriatal من ذاتي الدم أو اللاهوائية كولاجيناز كنماذج الفئران من نزف الدماغي الداخلي
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lei, B., Sheng, H., Wang, H.,… More

Lei, B., Sheng, H., Wang, H., Lascola, C. D., Warner, D. S., Laskowitz, D. T., James, M. L. Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage. J. Vis. Exp. (89), e51439, doi:10.3791/51439 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter