Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

הזרקת Intrastriatal של עצמי בדם או קלוסטרידיאל Collagenase כמודלים Murine של Intracerebral שטף דם

Published: July 3, 2014 doi: 10.3791/51439
Automatic Translation
1, 1, 2, 3, 1,4, 1,2,4, 1,2
1Multidisciplinary Neuroprotection Laboratories, Department of Anesthesiology, Duke University, 2Department of Neurology, Duke University, 3Department of Radiology, Duke University, 4Department of Neurobiology, Duke University

Abstract

דימום תוך מוחי (ICH) הוא צורה נפוצה של מחלת כלי דם במוח והיא קשורה עם תחלואה ותמותה משמעותיות. חוסר טיפול ואי יעילים של ניסויים קליניים הגדולים שמטרתו עצירת דימום והסרת קריש להדגים את הצורך בחקירה מונחה מנגנון נוספת של ICH. מחקר זה עשוי להתבצע דרך המסגרת הניתנת על ידי מודלים פרה. שני מודלים עכבריים בשימוש פופולרי כוללים הזרקת intrastriatal (גרעיני בסיס) של או דם כולו עצמי או collagenase קלוסטרידיאל. מאז, כל דגם מייצג תכונות pathophysiological שונות במובהק קשורים לICH, שימוש בדגם מסוים ניתן לבחור על סמך מה היבט של המחלה היא כדי להיחקר. לדוגמא, הזרקת דם עצמית באופן מדויק ביותר מייצגת תגובה של המוח לנוכחות של דם intraparenchymal, ועשויה לשכפל דימום אונים באופן הדוק ביותר. הזרקת collagenase קלוסטרידיאל מייצגת באופן מדויק ביותר שלקרע כלי קניון ואופייני התפתחות שטף דם של שטפי דם עמוקים. לפיכך, כל תוצאות מודל במבנה שונה שטף דם, תגובת neuroinflammatory, פיתוח בצקת מוחי, ותוצאות neurobehavioral. חוסנה של התערבות טיפולית כביכול ניתן להעריך הטוב ביותר באמצעות שני המודלים. בפרוטוקול זה, אינדוקציה של ICH שימוש בשתי המודלים, הפגנה שלאחר ניתוח מיידית של פציעה, וטכניקות טיפול שלאחר ניתוח הראשונה הם הפגינו. שני הדגמים לגרום לפציעות לשחזור, כרכי שטף דם, וגירעונות neurobehavioral. בגלל חוסר האחידות של ICH אדם, יש צורך במודלים פרה מרובים כדי לחקור ביסודיות מנגנוני pathophysiologic ולבדוק אסטרטגיות טיפוליות פוטנציאליות.

Introduction

דימום תוך מוחי (ICH) הוא צורה נפוצה יחסית של מחלת כלי דם במוח בכ 40-50% מהחולים נגועים למות בתוך 30 ימים 1. למרבה הצער, שיפור מועט נעשה בשיעור התמותה מעל 20 השנים האחרונות 2. דיווחים מהמכון הלאומי לבריאות 3 והנחיות מהלב האמריקאי 4 האיגוד הדגישו את החשיבות של פיתוח מודלים רלוונטיים קליני של ICH להאריך את ההבנה של הפתופיזיולוגיה ולפתח מטרות לגישות טיפוליות חדשות.

מספר דגמים קיימים לחקות ICH אדם 5. ככל שהבנה של מתבגרת הפתופיזיולוגיה ICH, זה הפך להיות ברור כי מגוון רחב של דגמים ניתן להשתמש כדי לבחון את ההיבטים שונים של המחלה. מודלים ששמשו בעבר כוללים angiopathy העכברי עמילואיד 6, כניסה microballoon intraparenchymal ואינפלציה 7, ודם עורקים ישירהחדירה 8,9. דימום אונים מangiopathy עמילואיד כבר דגם עם השימוש בעכברים הטרנסגניים ומייצג תת סוג ICH מובחן. מודלים Microballoon לחקות אפקט מסה חריף מהיווצרות שטף דם אבל לא מצליחים ללכוד תגובה התאית של המוח לנוכחות של דם. לבסוף, חדירת דם עורקים ישירה מכפיפה את המוח לחצים עורקים מעורק הירך. לפיכך, לחצים זה מחקה מודל העורק ואת הנוכחות של דם, אך לא תחשוף את המוח לפגיעה כלי הדם מקרע של כלי דם קטן. יתר על כן, מודל זה יש גבוה מיסודו השתנות. מעניין לציין, כי חולדות עם יתר לחץ דם באופן ספונטני 10 לפתח ICH ספונטני כשהם מזדקנים. מחקר של בעלי חיים אלה לאחר פיתוח ICH יכול לחקות את המחלה בנוכחותו של אחד מהתחלואות הגדולות predisposing בני אדם לICH. בעוד מודלים אחרים אלה קיימים, הזרקת intrastriatal של collagenase קלוסטרידיאל 11 או הזרקת instrastiatal שלדם כל utologous 12 הם, כיום, שני המודלים הנפוצים ביותר בשימוש במחקר קליני ICH.

בחירה במודל ICH צריכה להתבצע על בסיס האובייקטיבי של שאלת הניסוי, כוללים בחירת זנים ושיטה של ​​גרימת היווצרות שטף דם. לדוגמא, חזירים הם בעלי חיים גדולים עם נפח מוח חומר הלבן גדול יחסית בהשוואה לעכברים. לפיכך, מודלים חזיריים מתאימים ללמוד הפתופיזיולוגיה חומר לבנה לאחר ICH. בניגוד לכך, המוח של מכרסמים הם במידה רבה עניין אפור, אבל מערכות מהונדסים לעשות מכרסמים שימושיים כדי להעריך את המנגנונים מולקולריים של פגיעה והתאוששות לאחר ICH. לכל דגם עוצמות הטבועות בו וחולשות (טבלה 1), אשר יש לשקול בזהירות לפני ניסויים.

הפרוטוקולים הבאים להדגים את המודלים דם והזרקת collagenase עצמיים בעכברים. מודלים אלה כל תורגמו ממודלים שפותחו במקור בחולדות13,14 ולאפשר את השימוש בטכנולוגיה מהונדס זמינה באופן נרחב כדי לחקור מנגנונים מולקולריים הקשורים למוות של תאים לאחר ICH. שניהם מייצגים מנגנוני פציעה שונים במובהק מICH האנושי, ושניהם יש תוצאה צפויה שונה במובהק במונחים של מדדים התנהגותיים והיסטולוגית. לפיכך, השערות מסוימות עשויות להשאיל את עצמם למודל אחד על פנים השני, אך רעיונות רבים עשויים לדרוש אימות בשני המודלים.

טבלת 1. השוואה של מאפיינים של collagenase ודגמי דימום עצמיים הזרקת דם תוך מוחיים.

שחזור
הזרקת Collagenase הזרקת דם
קלות השימוש + + + + +
+ + + +
שליטה על גודל שטף דם + + + + +
Reflux דם + + +
מדמה מחלה אנושית + -
פשטות + + + +
השתמש במינים רבים + + + +

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הצהרת אתיקה: פרוטוקול זה אושר על ידי הוועדה של אוניברסיטת דיוק בבעלי חיים מוסדי הטיפול והשימוש ועוקב כל ההנחיות לשימוש האתיים בבעלי חיים.

1. הכנת הציוד

  1. החיטוי הכלים כירורגיים לפני הניתוח.
  2. לחטא את מנגנון stereotactic עם 70% אתנול.
  3. הפעל אמבט מים ולשמור על טמפרטורת מים ב42 ° C.
  4. ממיסים collagenase קלוסטרידיאל IV-S סוג במלח רגיל בריכוז של 0.075 U ל0.4 μl.

2. דגם הזרקת Collagenase

  1. לשקול את העכבר.
  2. להרדים את העכבר בתא אינדוקציה עם isoflurane 5% ב30% O 2/70% N 2. הרדמה נאותה הוא אותת לאחר כ 2 דקות כאשר נשימות עכבר יש האטה עד 1 לשנייה.
  3. צנרר קנה הנשימה עם קטטר תוך ורידי G 30 מ"מ 20.
  4. חבר את הקטטר להנשמה מכרסמים ומכאניים לאוורר את הריאות עם isoflurane 1.6% ב30% O 2/70% N 2 בשיעור של 105 נשימות לדקה עם נפח גאות נמסר מ0.75 מיליליטר ..
  5. לגלח את הקרקפת עם מכונת גילוח חשמלי. ברגע שהעכבר הוא מורדם ומונשם, להעביר אותו לתחנת עבודה שונה לגילוח ולאחר מכן חזרתי לספסל כירורגית.
  6. לאבטח את הראש במסגרת stereotactic, ואת רמת הראש עם תפר שתי העטרה ועל sagittal כנקודות התייחסות.
  7. החל משחת עיניים לעיניים.
  8. הכנס בדיקה טמפרטורה רקטלית. לשמור על טמפרטורה רקטלית ב37.0 ± 0.2 מעלות צלזיוס באמצעות underbody במחזור מיטת מים.
  9. נגב את אזור הניתוח עם בטאדין אחריו עם 70% אתנול ולחזור 3 פעמים.
  10. לעשות חתך בקרקפת קו האמצע 1 סנטימטר ולנגב periosteum רוחבי עם המוליך כותנה שקצה סטרילי לחשוף גבחת.
  11. לקדוח חור בקוטר 1 מ"מ בר 2.2 מ"מ עזב latאראל לגבחת עם מקדחת מקורר מים.
  12. סובב בקבוקון collagenase 5 פעמים, ולאחר מכן לשטוף מזרק 0.5 μl עם מחט 25 G (המצורף למסגרת stereotactic) עם 0.5 פתרון collagenase μl 5 פעמים (השאר 0.5 μl של פתרון collagenase במזרק לאחר השטיפה האחרונה).
  13. יישר קצה מחט עם חור בר לאחר מכן לגרש 0.1 μl מהמזרק ולנגב פוע מחט עם סכין גילוח כדי לבטל.
  14. באמצעות micromanipulator, לקדם מ"מ העמוק לקליפת מחט 3 ולהשאיר תנועה במשך 30 שניות.
  15. הזרק 0.4 μl מעל 90 שניות.
  16. ירידת isoflurane עד 1% ולהשאיר את התנועה מחט למשך 5 דקות.
  17. לסגת מחט באיטיות.
  18. החל 1 - 2 טיפות של 0.25% מתחת לעור bupivacaine ולתפור את העור.
  19. כבה את מכשיר האדים isoflurane ולהסיר עכבר מהמסגרת stereotactic.
  20. לאפשר עכבר כדי להתאושש אוורור ספונטני עם האקסטובציה לקנה הנשימה שלאחר מכן.
  21. חזור עכבר לכלוב נקי ולאפשר גישה חופשית אלמזון ומים.

3. דגם הזרקת דם עצמי ב

  1. בצע את השלבים 2.1-2.11 עבור דגם הזרקת collagenase.
  2. צייר 50 μl של מלח רגיל סטרילי לתוך מזרק μl 30 G 50.
  3. חבר את מזרק microliter עם צינור PE10 70 סנטימטר.
  4. לגרש את כל מלח הרגיל ממזרק microliter לתוך צינור PE10 לחלוטין לצינורות דה אוויר.
  5. משוך את הבוכנה מזרק microliter מתוך 1 מ"מ לעשות בועת אוויר בפתיחה הדיסטלי של מנגנון מזרק צינור microliter PE10 כדי למנוע תערובת של מי מלח ודם במהלך הליכים מאוחר יותר.
  6. נגב את אזור עורק הזנב המרכזי הדיסטלי של העכבר עם 70% אתנול, וחתך את העורק בסכין גילוח ב.5-1 סנטימטר ועד לקצה הזנב.
  7. לאסוף 40 μl דם מהזנב החתוך למנגנון מזרק צינור microliter PE10. הערה: שלא נעשה שימוש בהפרין במחט, צינורות, או העכבר.
  8. צרף את מזרק microliter על injeמשאבת ction.
  9. חבר את חלק צינורית המתכת של מחט 27 G לסוף צינור PE10, ולאבטח את המחט לmicromanipulator על מסגרת stereotactic.
  10. לגרש 2 μl דם מתוך 27 מחט G ולנגב פוע מחט עם סכין גילוח כדי לבטל.
  11. יישר קצה מחט עם חור בר ולהכניס את המחט 3 מ"מ עמוק לקליפת המוח.
  12. הזרק 35 μl דם עצמי בשיעור של 2 μl לדקה.
  13. ירידת isoflurane עד 1% ולהשאיר את התנועה מחט ל10 דקות.
  14. לסגת מחט מעל 30 שניות.
  15. החל 1 - 2 טיפות של 0.25% מתחת לעור bupivacaine ולתפור את העור.
  16. כבה את מכשיר האדים isoflurane ולהסיר עכבר מהמסגרת stereotactic.
  17. לאפשר עכבר כדי להתאושש אוורור ספונטני עם האקסטובציה שלאחר מכן.
  18. חזור עכבר לכלוב נקי ולאפשר גישה חופשית למזון ומים.

4. שאם מבצע

  1. בצע את אותו נהלים למכוירים יציקת collagenaseמודל n, למעט ללא הזרקה לאחר החדרת מחט.

5. טיפול שלאחר ניתוח

  1. הזרק 0.5 מיליליטר של תת עורי מלח הרגיל בערבו של ההליך הכירורגי בחלק האחורי של צווארו של בעל החיים.
  2. לספק מזון מרוכך במים ומזון ג'ל בכוסות פלסטיק קטנים שהונחו על הרצפה של הכלוב. החלף את המזון ביום למשך 7 ימים.
  3. הגעה לירידה במשקל, ריפוי פצעים, וסימנים של אי נוחות ביום למשך 7 ימים.
  4. אם מרווחי התאוששות של יותר מ 7 ימים נדרשים, הסרת תפר עשויה להיות מבוצעת בהרדמה בשאיפה אור (isoflurane כ 1% ב30% O 2/70% N 2), במידת צורך.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

בשל הבדלים בהיווצרות המטומה (איור 1), מפנה ipsilateral מוצג מייד לאחר השכמה לעכברים שהוזרקו דם עצמי ובתוך 2 - 4 שעות לאחר הזרקת collagenase, כהרחבת שטף דם מתרחשת (איור 2). העדרו של מפנה ipsilateral צריך להעלות חשש להיעדרות של פציעה משמעותית. ביום שלאחר הפציעה הראשון, עכברים בשני המודלים צריכים להפגין גירעונות נוירולוגיות משמעותיים (איור 3). ב24 שעות לאחר הזרקה, ההמיספרות ipsilateral להראות כרכי המטומה יציבים (איור 4); נוסף, ב24 שעות לאחר הזרקה, צריכה להיות צפוי תכולת מים במוח להיות 79.8 0.34 +% בעכברים מוזרקים collagenase ו79.3 0.23 +% בעכברים שהוזרק דם עצמי. תמותה צריכה להיות צפויה להתרחש בין 10-25% מעכברים שהוזרק collagenase ופחות מ -10% מעכברים שהוזרק דם עצמיים. מוות בלתי נמנע עקב שטף דם נפח, בצקת מוחית, וincreaלחץ תוך גולגולתי SED מתרחש בדרך כלל בתוך 24 הראשונות - 48 שעות לאחר הזרקת intrastriatal. מוות שהתרחש לאחר 72 שעה עשוי לעתים קרובות להימנע עם טיפול הולם לאחר פציעה (לדוגמא. גישה מוכנה, מזון ומים מרוכך). התאוששות תפקודית בדרך כלל מתחילה ביום שלאחר פציעת 2 עם עכברים שהוזרק דם עצמיים מתאוששים מהר יותר באופן משמעותי מאשר עכברים שהוזרק collagenase.

איור 1
איור 1. הדמיה בתהודה מגנטית סידורי של מוח עכבר השוואת דם עצמי וcollagenase דגמי הזרקה של דימום תוך מוחי. לאחר אינדוקציה דימום תוך מוחית באמצעות הזרקת intrastriatal השמאלית של 35 μl דם עצמי (א) או 0.075 collagenase U סוג IV-S קלוסטרידיאל (ב ') ב 10 - עכברי זכרי C57/BL6 12 בן שבוע, im תהודה מגנטית סידוריהזדקנות מדגימה התרחבות שטף דם בעכברים שהוזרק collagenase בהשוואה להיווצרות המטומה יציבה בעכברים שהוזרק דם עצמי. כרכי המטומה הם 10.1, 23.1, 29.9 מ"מ 3 ב 1, 6, ו12 שעות לאחר הזרקת collagenase, בהתאמה, ו7.0, 5.8, 3.2 מ"מ 3 ב 1, 6, ו24 שעות לאחר הזרקת דם כולה, בהתאמה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
. איור 2 מבחן תורו פינה בעכברים 24 שעות לאחר דימום תוך מוחי צילום מייד לאחר הזרקת collagenase intrastriatal לגרעינים הבזליים עזבו, הנוכחות של תגובה הצפויה ipsilateral מפנה ב10 -. 12 שבוע עכברי זכרי C57/BL6 ישנים מציין פציעה הולמת. מפנה זהצריך להתרחש מייד לאחר פגיעה משמעותית בעכברים שהוזרקה עם דם עצמי ובתוך 2 - 4 שעות בעכברים מוזרקים collagenase. עכברים בשני המודלים הראו יותר שמאלי פונה לאחר פציעה בהשוואה לעכברים ללא כל פגע (** p <0.01; בכיוון אחד ANOVA עם פוסט הוק המבחן של Scheffe, n = 10/group).

איור 3
. איור 3 ביצועי Rotarod לאחר דימום תוך מוחי בעכברי Baseline ושיהוי rotorod פציעת תפקיד 10 -. עכברי זכרי 12 בן השבוע C57/BL6 במשך שבוע אחד לאחר 35 μl שמאל intrastriatal דם, 0.075 U סוג collagenase הזרקת קלוסטרידיאל IV-S עצמי , או בהפעלת דמה (* p = 0.022; חזר אמצעי ANOVA עם פוסט הוק המבחן של Scheffe; F-ערך = 12.726, n = 10/group). עכברים הוערכו באמצעות rotorod בודק בכל יום אחר אחרי פציעה כדי למנוע הטיה הכשרה משמעותית. </ P>

איור 4
. איור 4 Hematoxylin וכתמי eosin של מוח עכבר לאחר דימום תוך מוחי Photomicrographs של 10 -. מוחות 12 בן שבוע C57/BL6 זכר עכבר ב24 שעות לאחר הזרקת שמאל intrastriatal 35 μl דם עצמי (מימין) או 0.075 U סוג IV-S קלוסטרידיאל collagenase (משמאל). כרכי המטומה הם 20.2 מ"מ 3 לאחר הזרקת collagenase ו6.4 מ"מ 3 לאחר הזרקת דם כולה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

למרות מתעורר מחקר קליני וניסויים קליניים גדולים שנוצר למבטיח הרפוי 15-18, אין התערבויות תרופתי הפגינו כדי לשפר את התוצאה בICH, וטיפול נשאר במידה רבה תומך. רשימות של טיפולים אפשריים עשויות להיות שנוצרו על ידי טכנולוגיות תפוקה גבוהה, כגון עבודת transcriptomic וproteomic. בעוד טכנולוגיות אלה להמשיך לקדם את הידע שלנו ממטרות טיפוליות פוטנציאליות, קדימה ואחורה תרגום של מטרות מבטיחות עשוי להיבחן הטוב ביותר באמצעות שימוש במודלים פרה קליני רלוונטיים 19-22. מודלים כאלה הם שימושיים משום שהם מאפשרים תפוקה מהירה של מועמדים שנבחרו, בדיקה של מנגנוני in vivo, חקירה זולה של מינון, חלון טיפולי, ופרמטרים אחרים רלוונטיים לפיתוח ניסויים קליניים 23-25. בעוד יתרונות ברורים קיימים בשימוש במודלים פרה, דוגמנות צריכה להתרחש בב רלוונטי ביותר מבחינה קליניתמערכת לוגיסטית אפשרית ut זמין. בעוד מודלים קיימים לבעלי חיים כדי "גבוהים" יותר, כגון קופים, שימוש בעכברי מודל למחלה אנושית מספק תפוקה גבוהה לא יקר, וטכנולוגיה רבת עוצמה לבחינת מנגנונים פתולוגיים והשפעות טיפוליות. שילוב מערכות מהונדסים מאפשר לעוד יותר חזק הערכה של מסלולים מכניסטית ואוכלוסיות תאים מעורבים.

נכון לעכשיו שני מודלים עכבריים נמצאים בשימוש נפוץ: דם עצמי intrastriatal או הזרקת collagenase. שני הדגמים הם תכליתיים וקלים לשימוש, יחסית לדגמי שבץ אחרים. שני דגמים יכולים לגרום ICH באזורים שונים במוח 26, המאפשרים הערכה של תגובות אזוריות; שטף דם בנפח יכול להיות נשלט והשתנה, ומאפשר להערכה של פציעה קלה, בינונית, וחמורה; וקליני פיזיולוגיה רלוונטית (למשל., לחץ דם, טמפרטורה, וכו ') יכול להיות נשלטה. לבסוף, בעוד כל דגם פותח במקור בהחולדה, שניהם ומאז תורגמה לעכברים כדי לאפשר את השימוש במערכות מהונדסים 21,24,25,27. עם זאת, כל אחד מהדגמים משאיל את עצמו ללימוד היבטים שונים של ICH, כמו כל מייצג רכיבים שונים במובהק מICH. דם הזרקה עצמית עשויה לשחזר את התגובה של המוח לחשיפת דם intraparenchymal. לכן, מסה ראשונית משפיעה וכוחות הגזירה, שינויים דלקתיים קלים, אפופטוזיס, וספיגת דם עשויים כל להיחקר 10,28. יתר על כן, השינויים אחרונים במודל זה הביאו את היכולת לחקות התרחבות המטומה 29,30. עם זאת, מודל זה לא להפעיל את המרכיב של פגיעה בכלי דם ו / או הרחבת שטף דם שנמצא במחלה האנושית. לעומת זאת, collagenase ההזרקה מוסיפה אלמנטים של קרע של כלי דם, התרחבות המטומה מוקדם, והשפעת neuroinflammatory משופרת. בעוד חששות ברורים להתקיים על תרומת artifactual של collagenase להשפעה דלקתית זה, יש חוסר של דואר קשהvidence ליום 31 בזה, והנתונים שלנו (שלא פורסמו) מצביעים על כך שcollagenase בבידוד לא לגרום תגובה דלקתית ניכר בתרבית תאים.

מבחינה פרוצדורלית, שני הדגמים דורשים מיומנות מוגבלת עם מייקרו, ולכן, נלמדים בקלות כדי להשיג אפקטים לשחזור. החסרונות יש להימנע כוללים: 1) פלישה לדורה או יצירת פגיעה מוחית תרמית כאשר קידוח, 2) או חדירה של מערכת חדרית עם החדרת מחט. פציעת dural מאפשרת ריפלוקס של injectant, ותוצאות הזרקה תוך חדרי בלא מעט היווצרות שטף דם intraparenchymal. יתר על כן, יש להקפיד על נסיגת מחט לא לשבש חדש שנוצר שטף דם להרכיב /. תמותה צפויה באחוז מסוים של עכברים אך קשור באופן ישיר לגודל שטף דם ואת מידת הפגיעה הרצויה; וכך, תוצאה זו עשויה להיות טיטרציה לפי נפח / ריכוז injectant.

כמו בכל הדגמים, פרוtocols יהיה מותאם לשימוש על ידי מפעילים ספציפיים. בשל שונות הגלומות בכל in vivo המערכות, לא יכול להיות מוגזם ניסיון עם דגם מסוים כגורם מפתח להצלחה. מאפיינים הייחודיים של מודל, ניסיון מפעיל עם מודל נתון, מדדי תוצאה של ריבית, וגורמים לוגיסטיים חייבים כל להילקח בחשבון בעת ​​בחירת מודל ניסיוני הטוב ביותר האפשרי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Stereotactic frame Stoelting Co. 51603
Probe holder with corner clamp Stoelting Co. 51631
Mini grinder Power Glide Model 60100002
0.5 μl syringe Microliter 86259 25 G needle
5 μl syringe Microliter 7637-01
30 G microliter syringe Microliter 7762-03
Syringe pump KD Scientific Model 100
Heat therapy water pump Gaymar Industries, Inc. Model# TP650
Circulating waterbed CMS Tool & Die, Inc.
Rodent ventilator Harvard Apparatus Model 683
Isoflurane vaporizer Drager Vapor 19.1
Air flowmeter Cole Parmer Model PMR1-010295
Induction chamber Self made
Otoscope Welch Allyn 22820
Intravenous catheter Becton-Dickinson 381534 20 G, 1.16 inch Insyte-W
Isoflurane Baxter Healthcare Corporation NDC10019-360-69
Collagenase Type IV-S Sigma C1889
Polyethylene tubing PE10 Becton-Dickinson 427401
27 G 1 1/4 inch needle Becton-Dickinson 305136
Surgical scissors Miltex 21-539
Forceps Miltex 17-307
Needle holder Boboz RS-7840
Monofilament suture Ethicon 8698 Size 5-0
Indicating controller YSI 73ATD

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Asch, C. J., et al. Incidence, case fatality, and functional outcome of intracerebral haemorrhage over time, according to age, sex, and ethnic origin: a systematic review and meta-analysis. Lancet Neurology. 9, 167-176 (2010).
  2. Qureshi, A. I., Mendelow, A. D., Hanley, D. F. Intracerebral haemorrhage. Lancet. 373, 1632-1644 (2009).
  3. Participants, N. I. W. Priorities for clinical research in intracerebral hemorrhage: report from a National Institute of Neurological Disorders and Stroke workshop. Stroke. 36, (2005).
  4. Morgenstern, L. B., et al. Guidelines for the management of spontaneous intracerebral hemorrhage: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke. 41, 2108-2129 (2010).
  5. James, M. L., Warner, D. S., Laskowitz, D. T. Preclinical models of intracerebral hemorrhage: a translational perspective. Neurocrit Care. 9, 139-152 (2008).
  6. Winkler, D. T., et al. Spontaneous hemorrhagic stroke in a mouse model of cerebral amyloid angiopathy. J Neurosci. 21, 1619-1627 (2001).
  7. Sinar, E. J., Mendelow, A. D., Graham, D. I., Teasdale, G. M. Experimental intracerebral hemorrhage: effects of a temporary mass lesion. J Neurosurg. 66, 568-576 (1987).
  8. Mendelow, A. D., Bullock, R., Teasdale, G. M., Graham, D. I., McCulloch, J. Intracranial haemorrhage induced at arterial pressure in the rat. Part 2: Short term changes in local cerebral blood flow measured by autoradiography. Neurol Res. 6, 189-193 (1984).
  9. Bullock, R., Mendelow, A. D., Teasdale, G. M., Graham, D. I. Intracranial haemorrhage induced at arterial pressure in the rat. Part 1: Description of technique, ICP changes and neuropathological findings. Neurol Res. 6, 184-188 (1984).
  10. Sang, Y. H., Su, H. X., Wu, W. T., So, K. F., Cheung, R. T. Elevated blood pressure aggravates intracerebral hemorrhage-induced brain injury. J Neurotrauma. 28, 2523-2534 (2011).
  11. Krafft, P. R., et al. Modeling intracerebral hemorrhage in mice: injection of autologous blood or bacterial collagenase. J Vis Exp. , (2012).
  12. Sansing, L. H., et al. Autologous blood injection to model spontaneous intracerebral hemorrhage in mice. J Vis Exp. , (2011).
  13. Rosenberg, G. A., Mun-Bryce, S., Wesley, M., Kornfeld, M. Collagenase-induced intracerebral hemorrhage in rats. Stroke. 21, 801-807 (1990).
  14. Nath, F. P., Jenkins, A., Mendelow, A. D., Graham, D. I., Teasdale, G. M. Early hemodynamic changes in experimental intracerebral hemorrhage. J Neurosurg. 65, 697-703 (1986).
  15. Anderson, C. S., et al. Rapid blood-pressure lowering in patients with acute intracerebral hemorrhage. N Engl J Med. 368, 2355-2365 (2013).
  16. Clark, W., Gunion-Rinker, L., Lessov, N., Hazel, K. Citicoline treatment for experimental intracerebral hemorrhage in mice. Stroke. 29, 2136-2140 (1998).
  17. Mayer, S. A., et al. Efficacy and safety of recombinant activated factor VII for acute intracerebral hemorrhage. N Engl J Med. 358, 2127-2137 (2008).
  18. Mendelow, A. D., et al. Early surgery versus initial conservative treatment in patients with spontaneous supratentorial lobar intracerebral haematomas (STICH II): a randomised trial. Lancet. , (2013).
  19. James, M. L., Blessing, R., Bennett, E., Laskowitz, D. T. Apolipoprotein E modifies neurological outcome by affecting cerebral edema but not hematoma size after intracerebral hemorrhage in humans. J Stroke Cerebrovasc Dis. 18, 144-149 (2009).
  20. James, M. L., Blessing, R., Phillips-Bute, B. G., Bennett, E., Laskowitz, D. T. S100B and brain natriuretic peptide predict functional neurological outcome after intracerebral haemorrhage. Biomarkers. 14, 388-394 (2009).
  21. James, M. L., Sullivan, P. M., Lascola, C. D., Vitek, M. P., Laskowitz, D. T. Pharmacogenomic effects of apolipoprotein e on intracerebral hemorrhage. Stroke. 40, 632-639 (2009).
  22. James, M. L., et al. Brain natriuretic peptide improves long-term functional recovery after acute CNS injury in mice. J Neurotrauma. 27, 217-228 (2010).
  23. Indraswari, F., et al. Statins improve outcome in murine models of intracranial hemorrhage and traumatic brain injury: a translational approach. J Neurotrauma. 29, 1388-1400 (2012).
  24. Laskowitz, D. T., et al. The apoE-mimetic peptide, COG1410, improves functional recovery in a murine model of intracerebral hemorrhage. Neurocrit Care. 16, 316-326 (2012).
  25. Lei, B., et al. Interaction between sex and apolipoprotein E genetic background in a murine model of intracerebral hemorrhage. Translational Stroke Research. 3, (2012).
  26. Lekic, T., et al. Evaluation of the hematoma consequences, neurobehavioral profiles, and histopathology in a rat model of pontine hemorrhage. J Neurosurg. 118, 465-477 (2013).
  27. Nakamura, T., et al. Intracerebral hemorrhage in mice: model characterization and application for genetically modified mice. J Cereb Blood Flow Metab. 24, 487-494 (2004).
  28. Yang, D., et al. Statins Protect the Blood Brain Barrier Acutely after Experimental Intracerebral Hemorrhage. J Behav Brain Sci. 3, 100-106 (2013).
  29. Rynkowski, M. A., et al. A mouse model of intracerebral hemorrhage using autologous blood infusion. Nature Protocols. 3, 122-128 (2008).
  30. Wang, J., Fields, J., Dore, S. The development of an improved preclinical mouse model of intracerebral hemorrhage using double infusion of autologous whole blood. Brain Research. 1222, 214-221 (2008).
  31. MacLellan, C. L., et al. Intracerebral hemorrhage models in rat: comparing collagenase to blood infusion. J Cereb Blood Flow Metab. 28, 516-525 (2008).

Tags

רפואה, דימום תוך מוחי עכבר פרה דם עצמי collagenase מדעי המוח שבץ מוחי פגיעה מוחית הגרעינים הבזליים גיליון 89
הזרקת Intrastriatal של עצמי בדם או קלוסטרידיאל Collagenase כמודלים Murine של Intracerebral שטף דם
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lei, B., Sheng, H., Wang, H.,… More

Lei, B., Sheng, H., Wang, H., Lascola, C. D., Warner, D. S., Laskowitz, D. T., James, M. L. Intrastriatal Injection of Autologous Blood or Clostridial Collagenase as Murine Models of Intracerebral Hemorrhage. J. Vis. Exp. (89), e51439, doi:10.3791/51439 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter