Drosophila melanogaster, son útiles en el estudio de las manipulaciones genéticas o ambientales que afectan a comportamientos como la actividad locomotora espontánea. Aquí se describe un protocolo que utiliza monitores con rayos infrarrojos y software de análisis de datos para cuantificar la actividad locomotora espontánea.
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Artículo de método
Determinación de la actividad locomotora espontánea en
En este artículo
Resumen
Resumen
Drosophila melanogaster se ha utilizado como un organismo modelo excelente para estudiar manipulaciones ambientales y genéticos que afectan el comportamiento. Uno de estos es el comportamiento de la actividad locomotora espontánea. A continuación se describe el protocolo que utiliza monitores de población de Drosophila y un sistema de seguimiento que permite el monitoreo continuo de la actividad locomotora espontánea de moscas durante varios días a la vez. Este método es simple, fiable, y objetivo y se puede utilizar para examinar los efectos del envejecimiento, el sexo, cambios en el contenido calórico de los alimentos, además de los medicamentos, o las manipulaciones genéticas que imitan las enfermedades humanas.
Introducción
Moscas de la fruta, Drosophila melanogaster, se han utilizado como un organismo modelo útil para estudiar los mecanismos que subyacen a los comportamientos complejos, como el aprendizaje y la memoria, la interacción social, la agresión, el abuso de drogas, el sueño, la función sensorial, el cortejo y el apareamiento 1,2. Un comportamiento que se ha estudiado a través de múltiples protocolos es la actividad locomotora espontánea. Geotaxis negativo fue uno de los primeros métodos desarrollados para medir la actividad de Drosophila, y este protocolo consiste en medir el porcentaje de moscas que llegar a una cierta altura del vial después de ....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Protocolo
Nota: La cepa Canton-S es la línea de fondo de tipo salvaje estándar obtenida de la Bolsa Center Bloomington.
1. Preparación de Alimentos y Recetas para 1000 ml de Alimentos
Nota: En esta sección se describe el protocolo para la preparación de alimentos. Ollas grandes del metal se utilizan para preparar aproximadamente 18 L de alimento a la vez. El protocolo aquí descrito se redujo y utiliza 1,000 ml de H 2 O. La comida se trata en autoclave dos veces.
- Mezclar 113 g de sacarosa y 28 g de levadura de cerveza en 643 ml de agua. Agregar los ingredientes en un conjunto placa caliente a 25 ° C....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Resultados
La actividad locomotora espontánea en Drosophila depende del sexo mosca (Figura 3), el contenido calórico de los alimentos (Figura 3B) y el ciclo de luz / oscuridad. Una vez que la luz se apaga actividad de las moscas disminuye dramáticamente. Figura 3A ilustra las 24 horas de grabaciones de la actividad locomotora de las moscas macho y hembra. Un asterisco en el eje x marca el momento en que la luz se apaga y la transición a la oscuridad ciclo. F.......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Discusión
Actividad locomotora espontánea de las moscas está influenciada por muchos factores como la edad, antecedentes genéticos, y el género 2,13,18,19. Además, los factores ambientales tales como el contenido calórico de la comida, la temperatura del medio ambiente, adición de diferentes medicamentos, y ciclo de luz día / noche pueden afectar actividad de la mosca. Por ejemplo, las moscas macho de la misma edad tienen una mayor actividad física espontánea en comparación con las mujeres (Figura 1). .......
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Divulgaciones
No tenemos nada que revelar.
Agradecimientos
Este trabajo fue apoyado por una beca de los Institutos Nacionales de Salud (AG023088 a BR).
....Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Sacarosa FCC grado alimenticio 100 lb, | Fisher Scientific MP Biomedicals | ICN90471380 | |
| Brewer' s Levadura | Fisher Scientific MP Biomedicals | ICN90331280 | |
| Drosophila Agar Fino | SciMart | DR-820-25F | |
| Harina de maíz | Fisher Scientific MP Biomedicals | ICN90141125 | |
| Metil4-hidroxibenzoato de metal, tegosept | Sigma | H5501-5KG | |
| EtOH | Pharmco-AAPER | 111000200 | |
| Levadura seca activa | Fisher Scientific ICN10140001 | ||
| Fly Tanque de CO2 | LabScientific | BGSU-7 | |
| Microscopio estereoscópico | Olympus | SZ40 | |
| Drosophila dióxido de carbono (CO2) | Airgas | UN1013 | |
| Pincel pequeño para empujar las moscas | |||
| Frasco de cáscara ancho | Fischer Scientific | AS519 | |
| Buzztaps para viales de plástico anchos | Fischer Scientific | AS275 | |
| Viales de vidrio (25 x 95 mm) | Fischer Scientific Kimble 60931-8 | AS-574 | |
| Tapones de esponja para viales de vidrio | SciMart | DR-750 | |
| Drosophila Dispensador de alimentos | Applied Scientific (Fischer Científico) | AS780Q | |
| DPM Drosophila Monitor de población | Trikinetics Inc. | ||
| Fuente de alimentación de CC con cable de línea | Trikinetics Inc. | ||
| PSIU9 La unidad de interfaz de fuente de alimentación | Trikinetics Inc. | ||
| Cables telefónicos y divisores de 5 vías | Trikinetics Inc. | ||
| Hardware de bus serie universal (USB) | Trikinetics Inc. | ||
| Macintosh o PC con Windows con puerto | |||
| Software de adquisición de datos DAMSystem308X para Macintoch OSX (Intel) | www.trikinetics.com | ||
| Software de adquisición de datos DAMSystem308 para PC con Windows (XP/Vista/7) | www.trikinetics.com | ||
| [header] | |||
| Software DAMFileScan108X para Macintosh | |||
| software DAMFileScan108X para PC con Windows (XP/Vista/7) | www.trikinetics.com | ||
| software USB (PSIUdrivers.zip) | www.trikinetics.com | ||
| DAMSystem Notes 308 | (http://www.trikinetics.com/Downloads/DAMSystem%20Notes%20308.pdf |
Referencias
- Ali, Y. O., Escala, W. E., Ruan, K., Zhai, R. G. Assaying Locomotor, Learning, and Memory Deficits in Drosophila Models of Neurodegeneration. J. Vis. Exp. 49, 2504(2011).
- Jones, M. A., Grotewiel, M. Drosophila as a model for age-related impairment....
Acceso restringido. Inicie sesión o comience una prueba gratuita para ver este contenido.
Reimpresiones y permisos
