Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

İnsani Gelişim her üç trimesterde Eşdeğeri sırasında Alkol Fare Expose Kullanılan Buhar Odaları İnşaatı

Published: July 13, 2014 doi: 10.3791/51839
Automatic Translation
1, 1, 1, 1
1Department of Neurosciences, School of Medicine, University of New Mexico Health Sciences Center

Summary

Biz aynı anda 6 fare kafesleri ev hazır malzemeler kullanılarak alkol buhar odaları inşaatı göstermektedir. Biz ayrıca, insan gebelik 3 üç aylık denk fetal alkol maruz kalmanın bir fare modelinde bunların kullanımını tarif eder. Bu paradigma, gebelik ve doğum sonrası günlerde 1-12 sırasında hayvanlar ortaya koyar.

Abstract

Gelişimi sırasında alkole maruz kalma toplu Fetal Alkol Spektrum Bozuklukları (FASDs) olarak bilinir morfolojik ve davranışsal anormallikler takımyıldızında neden olabilir. Yelpazenin en şiddetli sonunda büyüme geriliği, kraniofasial dysmorphology ve nörodavranışsal açıkları ile karakterize Fetal Alkol Sendromu (FAS), olduğunu. Kemirgenler gibi hayvan modellerinde, yapılan çalışmalar FASDs patofizyolojisinde dahil birçok moleküler ve hücresel mekanizmaları aydınlatmıştır. Hamile kemirgenler için etanol uygulaması gebeliğin birinci ve ikinci trimesterde insan poz modellemek için kullanılır olmuştur. İnsanlarda üçüncü trimester etanol tüketimi neonatal kemirgenler kullanılarak modellenmiştir. Ancak, birkaç kemirgen çalışmalar insan hamilelik, gebe kadınlarda sık görülür maruz kalma bir desen her üç trimesterde için eşdeğer sırasında etanol maruz kalma etkisini nitelendirmiştir. İşte, biz o kolayca gelen buhar odaları oluşturmak için nasıl göstermekHer altı standart fare kafesleri kapasitelidir btainable malzemeler. Biz her üç trimesterde minimal kullanımı ile, etanol maruz modellemek için kullanılan bir buhar odası paradigma açıklar. Bizim çalışmalar hamile barajlar etanol önemli metabolik tolerans geliştirmiştir göstermektedir. Ancak, yenidoğan farelerin metabolik hoşgörü ve fetusların sayısını, fetus ağırlığı, plasenta ağırlığı, yavrular / çöp sayısı, ölü yavrular / çöp sayıda geliştirmek vermedi ve yavru ağırlığı önemli ölçüde etanol maruz tarafından etkilenmemiştir. Bu paradigmanın önemli bir avantajı genetiği değiştirilmiş fareler ile çalışmalara uygulanabilmesidir. Ayrıca, bu paradigma hayvanların kullanımı, fetal alkol araştırma önemli bir bulandırabilir en aza indirir.

Introduction

Gebelikte İçme belirgin etkilenen bireyler ve ailelerinin yaşam kalitesini azaltan birçok organ ve sistemlerde kalıcı değişikliklere neden fetüse zarar verebilir. Bu kadınların yaklaşık% 10-30 bir alem desen 1,2 olarak% 1-8 içme, ABD'de gebelik sırasında içki olduğu tahmin edilmektedir. Fetal gelişim sırasında etanol maruz tarafından üretilen etkiler aralığı toplu fetal alkol spektrum bozuklukları (FASDs) olarak da bilinir. Son tahminler FASDs ABD'de 3% 2-5 gibi yüksek bir prevalansı ile önemli bir halk sağlığı sorunu olduğunu göstermektedir. FASDs daha şiddetli tezahürü büyüme geriliği, kraniofasial anormallikleri, ve öğrenme engelliler de dahil olmak üzere nörodavranışsal açıkları ile karakterizedir Fetal Alkol Sendromu (FAS), olduğunu. FAS'ın prevalansı ABD'de 3 0.2-0.7% olarak tahmin edilmiştir. FASDs için mevcut tedaviler sadece kısmen etkilidirve daha etkin tedavileri geliştirme bozuklukları bu karmaşık spektrum hücresel ve moleküler temelleri zayıf anlayışı ile sınırlıdır.

Ulusal Doğum Kusur Önleme Çalışması (NBDPS) verileri gebelik gebelik 2 sonraki aşamalarında, tespit perhiz tarafından takip edilmiştir önce hamile kadınların en sık, 1. trimesterde içmek olduğunu göstermektedir. NBDPS ayrıca gebelik sırasında etanol tüketimi, ikinci en yaygın desen gebelik 2 her trimesterde boyunca içme içerdiğini buldu. Bunun nedeni fetal etanol maruz kalma (düşük dozlarda bile), doğum öncesi bakım için sınırlı erişim, nöropsikiyatrik hastalıklar için pozitif tarih ve kötüye veya etanol 4 bağımlılık potansiyel zararlı etkileri hakkında farkındalık eksikliği bulunmaktadır. İlginçtir, NBDPS tüketiminin üçüncü en yaygın desen 1 sırasında yoksunluk dahil olduğunu bildirdi 3. trimesterde sırasında tüketimi ardından 2. trimesterde. Bu nöronal devreler derin arıtma 2 geçmesi bir dönem olduğundan, ancak 3. trimester etanol kaynaklı sinir sistemi hasarı yüksek duyarlılık dönemidir. NBDPS de 1. ve 3. trimesterde 2 sırasında cinsel perhiz ardından 2. trimesterde genelinde tüketimi de dahil olmak üzere, gebelik sırasında oluşan alkol tüketiminin diğer, daha az sıklıkla desenleri, tespit.

Gebe kadınlarda görülen etanol tüketim farklı tiplerini modellemek için bir girişim olarak, gelişim etanol maruz paradigmalar bir dizi en yaygın 5,6 olan sıçan ve fareler, çeşitli hayvan türlerinin kullanımı ile tespit edilmiştir. Bu hayvanlarda gebelik süresi tipik lasyaklaşık 3 hafta, 1 st ve insan gebeliğin 2. trimesterde karşılık ts. Birçok kemirgen çalışmalar bu dönemde değişik dozlarda ve etanol maruz kalma desen etkisini değerlendirdik. Sık sık hamile farelere etanol yönetmek için kullanılan yöntem ve sıçanların örnek sıvı diyetler 7,8, içme suyu 9,10 etanol ek olarak, sakarin-şekerli çözeltiler gönüllü içme 11, mide sondası 12, 13 üzerinden buhar inhalasyon verilmesini içerir ve deri altına ya da periton içine enjeksiyon 14. Bu çalışmaların sonuçları hamileliğin erken dönemlerinde (6,15 gözden) beyindeki nöronal devreler üzerinde zarar için yeterli olduğu maruz olduğu gösteren, FASDs insanlarda gözlenen kusurların çeşitli değinmeyecek var.

Kemirgenler ile yapılan deneyler de göstermiştir ki 3 rd için eşdeğer sırasında maruz 16-18, mide içi entübasyon 19, deri altı enjeksiyon yoluyla 20 gastrostomi besleme dahil olmak üzere, çeşitli yöntemler, buhar ve inhalasyon 21,22 kullanarak bu hayvanlara tatbik edilmiştir. Bu çalışmalar inandırıcı beyin büyüme atağı etanol 6 gelişimsel etkilere karşı yüksek güvenlik açığı bir dönem olduğunu göstermiştir.

Yukarıda belirtildiği gibi, her üç aylık gebelik sırasında içme kadınlarda 2 etanol tüketiminin bir modeldir. Ancak, nispeten az sayıda çalışmalar hayvan modelleri kullanılarak pozlama bu desen etkisini değerlendirdik. Bu çalışmaların bazıları advantag almış3. üç aylık eşdeğer sıçan ve farelerin durumunda olduğu gibi uterus yerine neonatal dönemde ortaya büyük hayvanların e. Bu hayvan modelleri, insan olmayan primatlar, koyun 23,24 ve 25-27 dahildir. Bununla birlikte, bu hayvan modelleri yaygın, çünkü, yüksek maliyet ve özel bir bakım tesisleri için ihtiyaç, kısmen, FASDs araştırmalarda kullanılan edilmemiştir. Kemirgenler daha sık fetal gelişim 5 tüm trimester etanol maruz kalma etkisini karakterize etmek için kullanılmıştır. Kobay insan 28,29 bu beyin olgunlaşmasında kendi geniş doğum öncesi gelişimini belirli bir benzerlik ve bu açıdan özellikle avantajlı olmuştur. Kobay ile, insan 3. üç aylık eşdeğer gelişme dönemi içerir rahimde etanol maruz kalma etkisini karakterize etmek mümkün olmuştur. Bu hayvanların nispeten yüksek maliyet, hem de gebeliğin nispeten uzun süresinin(~ 67 gün), FASDs araştırma üzerinde çalışıyor birkaç laboratuvarlara kullanımını sınırlandırmaktadır.

Çünkü biyomedikal araştırmalarda maliyet-etkililik ve geniş kullanım, araştırmacılar hamileliğin her trimesterde etanol maruz modellemek için sıçanları kullandık. İlk çalışmalarda, fareler 0.08 g / dl baraj tepe kan düzeyleri etanol (BEC) ile sonuçlanan gastrostomi yapay yetiştirilen YENİDOĞANLARDA (doğum sonrası gün (P) 1-10) ile, etanol uygulaması takip sıvı diyetler ile hamilelik sırasında maruz bırakıldı ve yavrular 0.16 g / dl olarak. Bu paradigma optik sinir miyelinasyonda uzun süreli değişimlere neden ve beyincik 30-32 Bergmann glia liflerinin sayısını azalttı. 3. trimester eşdeğeri (P4-9) 33,34 parçası sırasında neonatal idaresi tarafından takip İntragastrik entübasyon ile bir alem gibi bir şekilde gebe sıçan barajlara etanol uygulanan yapay yetiştirme koşulları kullanılarak benzer şekilde, Maier ve işbirlikçileri. Peak anne ve yavru BECS gebeliğin 20 ve P6 hem de 0.3 g / dl idi. Bu her üç aylık dönem maruziyet paradigma gebeliğin 33 seçilmiş dönemlerinde maruz kalan yavrular gözlenen belirgin şekilde daha fazla olduğu büyüme geriliği sonuçlandı. Buna ek olarak, tüm üç aylık için eşdeğer sırasında etanole maruz kalan sıçan beyincik Purkinje ve diğer dönemlerde 34 boyunca maruz kalan hayvanlarda gözlenenden daha büyük olmuştur granül hücrelerin sayısında bir azalma sergiledi. Hipokampal hücre sayılarında azalmalar da bu paradigma ile bildirdi, ancak bu etkiler 35 trimester eşdeğer 3 rd sırasında öncelikle maruz kalma sonucu ortaya çıktığı saptanmıştır edildi. Hamile farelere ve neonatal farelerde hem de intragastrik gavaj yoluyla etanol verilmesini içeren bir yöntem olup, aynı zamanda, tüm üç aylık maruz 36 modellemek için kullanılmıştır. Barajlarda 0.13 g / dl (gestasyonel gün 17) ve P6 yavrular 0.24 g / dl, neden boylam arasında BECS vermiştir Bu yöntem,monoamin nörotransmiter hipokampus ve hipotalamusta seviyeleri ve hipokampus 37,38 protein 2 bağlayıcı DNA metiltransferaz ve metil CpG artan ekspresyonu g süreli değişiklikler. Benzer bir poz paradigma (baraj ve yavrular 0.2 g / dl BEC = 0,14-0,2 g / dl) kullanılarak, Gil-Mohapel vd. 39 yetişkin farelerin kıvrımlarının yeni olgunlaşmamış nöronların sayısında bir artış tespit ettiklerini yetişkin doğumlu nöronların olgunlaşmasında etanol neden olduğu nöronal hasar veya bir değişiklik için bir telafi mekanizması temsil edebilir. Müfettişler ayrıca sıvı diyetler yoluyla barajlar teşhir veya hamilelik ve emzirme 9,40 sırasında hem su içerek bütün trimester etanol poz modellemek için çalıştılar. Genellikle düşük yavru BECS (; 41,42 örneğin, ,002-,05 g / dl) sonuçlanır Ancak, annelerinin sütü ile yavrular teşhir yarar sınırlıdır.

Fareler aynı zamanda extens kullanılmıştırgelişim etanol maruz kalma etkilerini karakterize etmek için kısaltılmıştır. Bu hayvan modeli birçok genetik olarak tadil edilmiş fare soyları 5 kullanılabilir olan ek bir avantaj, sıçan hayvan modeli için yukarıda tarif edilen güçlü birçok hisse. Fareler başarıyla 1 st, 2. ya da gebelik 43,44 arasında 3. trimesterinde etanolün etkilerini karakterize etmek için kullanılmaktadır. Bu teknik olarak daha zor insan gebeliğin tüm trimesterlere eşdeğer sırasında fareler maruz çünkü Ancak, bu hayvanların tüm trimester maruziyetin etkisi iyi karakterize edilmemiştir. Örneğin, sıçanlarda başarılı bir şekilde kullanılmış olan yapay yetiştirme ve mide sondası, fareler 45 daha özel işlemleri gerektirir. Bildiğimiz kadarıyla, bugüne kadar sadece tek bir çalışma fareleri kullanarak tüm trimester etanol maruz kalma etkisini incelemek için çalıştı; Bu hayvanlar su Duri içme etanol solusyonlarındanng gebelik ve laktasyon 46. Maternal BECS 0.07 g / dl ve yavru Becs belirlenir, ancak barajlarda olan kısım olması bekleniyor yordu.

Burada, biz alkol buharı teneffüs odalarına yoluyla hamile baraj ve yenidoğanlarda hem de uygulanır farelerin tüm trimester etanol maruz kalma için yeni bir model tarif. Buhar odaları, bir önceki tasarıma 47 göre inşa edilmiştir. Biz inhalasyon odalarını inşa ve pozlama işlemlerini yürütmek konusunda ayrıntılı yönergeler sağlar. Biz de elde edilebilir BECS ve yavru hayatta kalma ve büyüme maruziyetin etkisi hakkında bilgi vermek.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Tüm Hayvan prosedürler New Mexico-Sağlık Bilimleri Üniversitesi Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi.

1.. Vapor Chamber Meclisi

  1. (Şekil 1 ve Tablo 1) üst, alt, ön, arka, yan, ve kapı video sağlanan boyutlara dairesel testere veya dekupaj testeresi ile kesme polikarbonat levhalar.
  2. Dairesel bir testere veya dekupaj testeresi ile, ön panelin ortasında geniş 16 inç 8 inç yüksek bir açılış kesmek.
  3. Ölçün ve haznenin kapısı olacak 10 inç polikarbonat tabaka ile 18 inç üzerine piyano menteşe için delikleri işaretleyin.
  4. Kapı, 5/16 inç matkap ile karşı lavabo delik ve 3/16 inç matkap ucu ile, vidalar için delik açın. Vida başlarının için kapının iç sayaç lavabo delikleri delmek için emin olun.
  5. Kaynak için polikarbonat levhalar hazırlayın.
  6. Fro birleştirinnt, 16. Kaynaklı kullanarak alt panel üzerine geri ve yan paneller.
  7. # 16 Weld-on ile paneller arasında herhangi kapayınız.
  8. # 16 Weld-on ile üst panelini takın.
  9. Kaynaklar tedavi süre yerde her şeyi tutmak için bar kelepçeler veya ağır ders kitapları kullanın.
  10. Kapı menteşesi bağlanması için açıklığın altında ön panel 1 inç üzerine polikarbonat, 12 inç parça ile bir 1 inç takın.
  11. Tedavi Weld-on için en az 24 saat bekleyin.
  12. 12 inç uzunluğunda ve 1 inç uzunluğunda PEX boru 1 adet PEX boru 2 adet kesin.
  13. A 5/16 matkap ucu ile bir ucundan 12 inç PEX boru her biri yaklaşık 1-2 inç bir delik delin.
  14. Uzak konnektörü mesafede bulunan delikli bir 3/8 inç T-konnektör 2 x 12 inç PEX boru takın.
  15. 3/8 inç fişleriyle PEX Hortumun açık olan uçları Cap.
  16. 4-40 makine vida ve somun kullanılarak ön panel ve kapı piyano menteşe takın.
  17. Bir kılavuz olarak kullanarak, kapıyı, mhaznenin ön panelindeki 1 inç ara parçasının piyano menteşe için gerekli olan delikleri ve ark.
  18. 3/16 inç matkap ucu ile, piyano menteşe için ön panele delmenizi.
  19. 4-40 makine vida ve somun kullanılarak ön panele kapı ve piyano menteşe takın.
  20. Yan kolun her iki tarafında, bir çamaşır makinesi ve somun ile video gösterildiği gibi, mafsallı kelepçeleri bir araya getirin.
  21. Mark ve matkap geçiş için 3/16 inç delik ön panelde kelepçeler ve 4-40 makine vida ve somun ile kelepçeler geçiş eklemek.
  22. Kapının içine 3/8 inç lastik ampul mühürler ekleyin.
  23. Bir 5/8 inç sıkıcı matkap ucu ile, giriş ağzı için üst panelin merkezinde bir delik açın.
  24. Çıkış noktası için arka panelin alt / merkezinde 1/2 inç delik delin.
  25. Çıkış ağzı deliği buhar bölmesinin arka duvarı boyunca boydan boya duvar adaptörler 3/8 inç dişli bölümünü iterek çıkış noktası birleştirin. Gelen somunu takınyerinde tutmak için bölmenin içine.
  26. Polikarbonat levhalar koruyucu kapağı çıkartın.
  27. T-konektörüne PEX boru 1 inçlik bir parça takın ve iç bölmenin üst delikten PEX boru zorlar.
  28. Dışarıdan 1 inç PEX boru en üstüne bir 3/8 inch 90 dirsek takın.
    NOT: kapı bir 1/2 inç delik açın ve deliğe 1/2 inç mühür septayı yerleştirin.
  29. Hava sadece odasını kontrol için tekrarlayın 1-22 adımları.

2.. Rack ve Hava Dağıtım Meclisi

  1. Malzeme listesinde belirtilen sepeti / rafa odaları yerleştirerek, üreticinin talimatlarına göre sepeti monte.
  2. Yedek somun ve cıvata ile, hava akımı regülatörleri tutmak için rafa polikarbonat bir hurda parça eklemek.
  3. Anywhere polikarbonat, işareti ve matkap hava akımı düzenleyiciler için 3/4 inç delik hurda parçası üzerinde ve fındık ile düzenleyiciler eklemekResim.
  4. Hava akış düzenleyicilerin giriş ve çıkış delikleri içinden geçen duvar adaptörü 3/8 inç takın.
  5. Havalandırma taş, 8. stoper ve in-line bağlantı hızlı sürümü ile etanol şişeyi birleştirin.
  6. Şekil 1 'de gösterildiği gibi 3/8 inç Tygon boru kullanılarak, hava pompası ve etanol şişeye akış regülatörleri bağlayın.
  7. Şekil 1 'de gösterildiği gibi, hava, sadece bölmesi için, giriş 3/8 inch 3/8 inç olan Tygon borusu 90 dirsek için, hava akışı regülatörünün çıkış noktası ekleyin.

Şekil 1
Buhar bölmelerin yapılandırmasının Şekil 1. Şematik temsili. Bir T-konektörü düşük gürültü hava pompasına bağlanır. T-konnektörünün bir tarafı üzerine doğrudan hava yalnızca buhar odası için bir hava akımı regülatörüne bağlanır. Diğer side tekrar bölünmüş ve 2, farklı hava akış düzenleyicileri, hava ve bir etanol birine takılır. Gösterildiği gibi, hava haznesi doğrudan regülatörüne bağlanır. Etanol buhar odası için, bir hava akışı regülatörü filtre şişesi, sıvı etanol içine daldırılmış havalandırıcı taş bağlanır. Belirtildiği gibi, filtre şişenin yan kol noktası, hava regülatörünün çıkışı ile bağlanır. Birleştirilmiş etanol buhar ve hava daha sonra etanol buhar odasının girişine bağlanır. (Gösterilmemiş olan) çıkış boruları odasında bir havalandırma çıkışına bağlanır.

3.. Testi Buhar Odaları ve Etanol Düzeyleri ayarlayın

  1. , Filtre şişeye 190 derece etanol 600 ml ilave edilir, havalandırma taşı yerleştirin ve şişenin yan koluna tüp girişine kadar kanca.
  2. Yakın oda kapıları ve hava pompası üzerinde dönüş.
  3. Yaklaşık olarak yarısı kadar hava, ile karıştırılır hava gibi sıvı alkol akar, böylece hava akışı düzenleyiciler ayarlayın. Adjusetanol odasının alkol ve hava akışına birleştirilmiş havayı hava akımı sadece t.
  4. Hava odaları etanol konsantrasyonunun ölçülmesi önce en az 30 dakika boyunca dengelenmeye bırakın.
  5. Septum üzerinden bir 18G iğne ve bir 60 ml şırınga ile bir hava 5 ml ekstraksiyonuyla hava etanol konsantrasyonu ölçümü. Lütfen 60 ml (1:12 seyreltme) için pistonu çekerek, oda havası ile bu örnek sulandırmak. Üreticinin talimatlarına uygun olarak bir alkol ölçeri kullanarak hava etanol seviyesi ölçülür. Odacık havanın seyreltme alkol ölçer algılama aralığı içinde alkol buhar seviyeleri elde etmek için gereklidir.
    NOT: Alkol farklı maruz kalma seviyelerini kullanarak ise seyreltme ayarlanması gerekebilir.
  6. Yaklaşık 4.5-5 g / dl (hava dl başına buharlaşan alkol g) bir hava alkol konsantrasyonu elde etmek için gerektiği gibi, bir başlangıç ​​noktası olarak, hava akışı düzenleyiciler ayarlayın.

4. Hayvan Yetiştiriciliği

  1. Ev grup kadın yumurtalık döngülerini senkronize etmek için, en az 1 hafta / 6 fareleri (2-3 aylık) C578BL.
  2. Tek tek dönüştürerek en az 2 hafta boyunca erkek C57BL / 6 fareleri (2-5 aylık) ev.
  3. Senkronize ettikten sonra, çiftleşme için izin vermek için 5 gün boyunca bir tek erkek ile bir tek kadın koymak.
  4. Çiftleşme sonrasında erkek kaldırmak ve bireysel ev kadın ve odaların içine koyun.

5. Öncesi ve Sonrası-natal Etanol Vapor Pozlama

  1. Yavru ölümü önlemek için doğum günü hariç ışık döngüsü sırasında 10:00 başlayan günde 4 saat (06:00-18:00 itibaren ışıkları) için etanol buharı hamile barajlar Açığa.
  2. Gebelik izlemek için gestasyonel gün (G) 5, G13-G14, G18 ve G20-on baraj tartılır; yatak kadın işleme en aza indirmek için tartılmıştır o günlerde değiştirilmiştir.
  3. Her gün bunların emilir, etanol ile bir pelet tüketimi önlemek için etanol maruz kalan gruplar için gıda değiştirin.
  4. Günündedoğum hayvanları maruz bırakmayın. Doğumdan sonra P1-P12 10:00 başlayan günde 4 saat boyunca baraj ve yavrular ortaya.
  5. P2, P8, P12, P25 ve üzerinde yavrular tartılır; ve ek işleme en aza indirmek için P8 ve P12 ile ilgili yatak değiştirmek.
  6. Derhal son maruz kalma (P12) sonra, standart hayvan konut oda kafesleri aktarın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Şekil 2A hamile fareler ve yenidoğan yavrular hem odalarında nispeten istikrarlı etanol buhar yoğunluklarına maruz kaldıklarını göstermektedir. Bunlar arasında değişen 4-6 g / dl arasındadır. Şekil 2B, zamanın bir fonksiyonu olarak hamile farelerde elde BECS gösterir. BECS standart bir alkol dehidrojenaz göre deney 48 kullanılarak ölçülmüştür. G5 anda, BECS hızla maruz kalma başladıktan sonra ~ 60 mM 2 saat yükseldi ve 4 saat temas süresi sonunda zirve yaptı. BECS yavaş yavaş maruz sonuna aşağıdaki ek 4 saat sonra ~ 12 mm azalmış. G13-14 tarafından, G5 tespit seviyelerinin yaklaşık% 60 BECS dramatik bir azalma vardı. Buna ek olarak, BECS düzeyi daha yavaş arttı ve gebe farelerin kanında etanol kısa bir mevcudiyetinde sonuçlanan, daha hızlı bir şekilde azalmıştır. Kısa vadede (G18-20) de, BECS ayrıca G5 tespit seviyelerinin yaklaşık% 30 azaldı. Bu bulgular developm ile tutarlıdırgebe farelerde etanol hızlı metabolik hoşgörü ent. Şekil 2C yenidoğan yavrular 30 mM yakın BECS maruz kaldıklarını göstermektedir. BECS kademeli olarak 4 saatlik temas süresi sonunda bir zirveye ulaşan, bu hayvanlarda artmıştır ve yavaş yavaş 8 saat, 4 saat maruz bırakma paradigma sonunda taban seviyelerine azalmaktadır. Hamile baraj aksine, erken (P2) maruz kalan yenidoğanlarda ölçülen BECS arasında hiçbir fark yenidoğan döneminde vs geç (P7-P12) oldu. Bu bulgular yenidoğan farelerin etanol metabolik tolerans geliştirmek olmadığını göstermektedir.

Şekil 2,
Etanol düzeyleri Şekil 2.. Karakterizasyonu. A) Etanol buhar odası düzeyleri maruziyet paradig gestasyonel ve postnatal aşamaları boyunca nispeten sabit kalmıştırm. Bu seviyelerini ölçmek için, odacık hava çevre havası ile seyreltildi, kauçuk septum içinden bir şırınga ile çekilir ve (ayrıntılar için video), bir alkol ölçer giriş portuna atıldı. Değerleri sırasıyla, gebelik ve doğum sonrası aşamaları için 5 ve 4 farklı pozlama turlarından elde edilmiştir. B) hamile baraj (n = 5-7 barajlarda) olarak belirtilen tahmini gestasyonel gün için farklı zaman noktalarında ölçülen kan etanol seviyeleri. Yasal zehirlenmesi sınırı (17.4 mM ya da 0.08 g / dl) kesikli çizgi ile gösterilmektedir. Gri çubuk) barajlar etanol B gibi. C) Aynı maruz kalan süreyi gösterir fakat farklı yavrularda yenidoğan farelerde (n = 5-9 yavrular.

Şekil 3 pozlama paradigma önemli ölçüde ağırlık barajlarda kazanç veya yavrular etkilemediğini göstermektedir. Tablo 2 etanol maruz kalma önemli ölçüde uygulanabilir Fetu sayısını etkilemediğini gösteriyorses, (yakın dönemde ölçülen) rezorbe fetus, fetus ağırlığı ve plasenta ağırlığı. Tablo 2 sayısı da çöp ve yavru ölümlerinin başına yavruların sayısı önemli ölçüde etanol maruz etkilenmez olmadığını göstermektedir. daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız Bu rakamın.

Şekil 3,
Baraj ve yavru ağırlıkları üzerinde etanol maruz kalma bir etkisi Şekil 3.. Eksikliği. Bir tahmini gebelik günün fonksiyonu (n = 8-12) gibi A) Barajı kilo. Tahmini gebelik 5. günde ağırlık, yaş fonksiyonu (n = 7-9) gibi maruz ilk günü. B) Pup ağırlık kazancı ölçülür ağırlığına karşılık gelir. Her iki panel, hata çubukları, semboller daha küçüktür. <a href = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/51839/51839fig3highres.jpg" target = "_blank"> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.

Boyutlar (inç) Yükseklik Genişlik
Üst 32 22
Alt 32 22
Ön 32 14
Geri 32 14
Yan 1 21.5 14
Side 2 21.5 14
Kapı 18 10

Tablo 1. Polikarbonat levhalar Boyutları.

Hava EtOH
7.50 ± 1.08, n = 6 7.33 ± 1.52, n = 6
Ortalama Fetus Ağırlık (g): ~ E18 1.04 ± 0.09, n = 6 0.82 ± 0.09, n = 6
Ortalama Plasenta Ağırlık (g): ~ E18 0.12 ± 0.003, n = 6 0.14 ± 0.01, n = 6
Yeniden emilen FETUSLARA sayısı: ~ E18 0.50 ± 0.34, n = 6 0.50 ± 0.50, n = 6
Yavrular / çöp Sayısı 7.11 ± 0.67, n = 9 6.89 ± 0.42, n = 9
Ölü yavrular / çöp Sayısı 0.11 ± 0.11, n = 9 0.66 ± 0.24, n = 9

Tablo 2. Öncesi ve fare buhar maruziyet paradigmanın post-natal karakterizasyonu.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Burada ayrıntılı olarak buhar inhalasyon bölmelerin yapımı için yöntemleri tarif eder. Odacıkları oluşturmak için gereken malzemeler ve aletler ticari tedarikçilerden temin edilebilir ve bölmelerin yapımı için adımları nispeten doğru olan,. Burada tarif sistemi, geri akış ve karıştırma önlemek için herhangi bir in-line check valfleri içermez. Biz havada biz havaya tek odaları içine herhangi bir karıştırma veya etanol geri akışı yok düşündüren tek odalarını herhangi bir saptanabilir etanol ölçmek için koyamadık. Tek odalar periyodik etanol buhar için kontrol edilmelidir hava (bu hava haznesi her alkol ölçerin ve / veya bir şırınga içinde mevcut olan artık etanol buhar saptanmasını önlemek için önce etanol bölmesine test edilmesi gerektiği not edilmelidir). İdeal olarak, odaları fare kafesleri sürekli e süresince muhafaza edilebilir hayvan bakım tesisinde özel odalarında konulmalıdırfareler taşımak için olan ihtiyacı ortadan kaldırarak Xposure paradigması, böylece stresi azaltır. Bir havalandırma çıkışı ile standart oda, bu paradigma için gerekli hepsi bu. Oda diğer araştırmacılar ile paylaşılır Ancak, bu etanol koku diğer hayvanların maruz kalma en aza indirmek için ayrılmış kabinleri ile bir odada odalarını yerleştirmek için gerekli olabilir. Her odası örneğin daha maruz kalma daha az emek yoğun bir yöntem, mide içi sonda yaparak, 6 standart fare kafesleri kapasitelidir.

Pozlama paradigma kolaylıkla belirli bir denemenin ihtiyaca göre değiştirilebilir. Hayvanlar insan gebeliğin tüm trimesterlere eşdeğer sırasında etanol maruz olabilir. Bu insan gelişimine kemirgen gelişimsel eşdeğer kabul ve gelişim hangi işlemi bir (nöron, sinaptik entegrasyon, vb) ilgi ne beyin bölgesi bağlı olarak değişebilir unutulmamalıdır. Bu çalışmada, üçüncü tri tanımlanmışmester eşdeğer beyin büyüme atağı döneminde. Araştırmacılar süresi 49 çeviri web sitesine danışmak için teşvik edilir. Şekil 2B 'de gösterilen sonuçlara dayanarak, maruz kalma etanol buhar (örn., ~ 3 g / dl) daha düşük bir seviyede başlayan ve giderek metabolik tolerans gelişimi için telafi etmek için arttırılabilir önerilir. Prosedürün uygulanması sırasında, araştırmacılar yakından bu gebe barajlarda daha istikrarlı düzeylerine neden olmadığını belirlemek için farklı gestasyonel günlerde BECS izlemelidir. Alkol dehidrojenaz inhibitörü buhar odalarına 50 etanol maruz bırakılan farelerde tolerans gelişimini önlemek için kullanılmıştır. Ancak, bu çalışmalar sonuç 51,52 yorumlanmasını zorlaştıracaktır verebilecek potansiyel teratojenik etkileri vardır öneririz çünkü bu ajan gebe farelerde kullanılması tavsiye edilmez. Ayrıca, herhangi bir form enjeksiyonları hamile baraja ek gerilime neden olur,potansiyel deneyi 53 karıştırıcı.

Hamile baraj aksine, yenidoğan döneminde buhar odası maruz metabolik tolerans gelişimine neden yoktu. BECS P2 ve P7-12 fareler arasında farklı değildi. Tepe BECS G13-14 de baraj tespit benzer ve G18-20 tespit göre biraz daha yüksek bulunmuştur. Bununla birlikte, BECS yavrular başlangıca dönün uzun sürdü. Gebelik döneminde buhar odalarına etanol maruz etanol metabolize etmek için yenidoğan yavrularının kapasitesini değiştirir eğer tespit edilecek kalır. Ancak, literatüre dayalı, bu biraz azalmış veya etanol 54,55 metabolize değişmeden kapasite sergilemek etanole gebelik sırasında maruz kaldıkları yavrular için beklenir. Çalışmalarımızda biz ortalama yavru ağırlığında bir fark gözlemlemek vermedi ve bizim veri gebeliğin sonuna, anne BECS ancak hiçbir mor için yasal zehirlenme üzerinde yükselmeye olduğunu göstermektedir2 saat daha e. Bu veriler annelerin önemli ölçüde post-natal dönemde alkol maruz etkilenmez öneririz. Hayvanlar daha yüksek etanol düzeyde maruz eğer Bununla birlikte, bu özellikle daha araştırılmalıdır.

Bu poz paradigma bazı sınırlamalar vardır. Bu dönemde erkekler ile yetiştirilen çünkü dişi fareler gebeliğin ilk beş gün boyunca maruz değildi. Daha kısa bir üreme aralığı teşebbüs (örn., 2-3 gün), ancak bu hamile kadın sayısında bir azalmaya neden olabilir. Alternatif olarak, hayvanların çiftleşme fişler için kontrol kısa sürede ve kadınlar için yetiştirilen olabilir. Diğer bir sınırlama, belirli bir bölme içinde, tüm fareler, yalnızca etanol buhar nin tek bir konsantrasyonu maruz olmasıdır. Dahası, etanol buhar odası poz paradigmanın bazı yönleri gibi barajlar tek başına gebeliğin çoğunluğu boyunca muhafaza edilir ve maruz kaldığı gerçeği gibi, stresliGüçlü etanol kokusu. Etanol buhar maruz baraj ve / veya yavruların solunum sistemindeki bazı değişikliklere neden olmakta, bu da mümkündür. Ayrıca, yenidoğan sıçanlarda maruz üçüncü trimesterde (örneğin, plasenta-fetal birim, bu modelde mevcut değildir) sırasında insan maruz kalma mükemmel bir model değildir. Bununla birlikte, bu paradigmanın avantajları zayıflıkları ağır iddia ve FASDs patofizyolojisinde rol mekanizmaları karakterize etmek için yararlı bir model olabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Acknowledgments

R01-AA015614, R01-AA014973, T32-AA014127 ve K12-GM088021 Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenen verir. Yazarlar, teknik yardım ve Dr Samantha L. Blomquist teşekkür ederim. Eleştirel el yazması ve video değerlendirmek için Kevin Caldwell ve Donald Partridge.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Polycarbonate 1/4" clear 48" x 24" McMaster-Carr 8574K23 10
Foam Rubber bulb seal 3/8"w x 7/32"h McMaster-Carr 93085K67 10 ft
Weld-on #16 McMaster-Carr 7515A11 3
Piano hinge 12" long McMaster-Carr 1658A11 2 x 1 ft
Hold-down toggle clamps standard McMaster-Carr 5126A26 8
PEX tubing 1/2" McMaster-Carr 51275K88 10 ft
Barbed Tee tube fitting (Black) Pkg 10 McMaster-Carr 5463K608 1
Barbed plug fitting (Black) Pkg 10 McMaster-Carr 5462K79 1
Barbed Elbow tube fitting (Black) Pkg 10 McMaster-Carr 5463K596 1
3/8" Through-Wall Adapters, Tube to Threaded Pipe McMaster-Carr 5463K851 1
Phillips Machine screw 4-40 McMaster-Carr 91772A112 1
Machine screw hex nut 4-40 McMaster-Carr 90480A005 1
Panel-mount flowmeter 2-20 McMaster-Carr 41945K76 3
FLASK, FILTER 1,000 ml 6/PACK VWR 89001-800 2
Precision Seal Septa VWR 89084-490 1
VWR Black Rubber Stopper #8 1-hole VWR 59581-367 1
TUBE TYGON R3603 3/8X9/16 50' VWR 89068-556 1
TUBE TYGON R3603 1/4X11/16 50' VWR 89068-502 1
Aerator Stone P2120 VWR 32573-007 1
3/8" T-connectors Pk of 20 VWR 46600-060 1
VWR Disconnectors tapered Pk of 10 VWR 46600-110 1
3/8 Hose Barb valved in-line coupling Colder Products Company HFCD17612 1
Air pump medium capacity LMI Manufacturers DB60L 1
Nexelate Wire Shelving 36"W X 24"D X 63"H Global industrial T9A990135 1
Stem Casters Set of (4) 5" Polyurethane Wheel Global industrial T9A500591 1

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). World Health Organization Who. Alcohol use and binge drinking among women of childbearing age--United States. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. 61 (28), 534-538 (2012).
  2. Ethen, M. K., et al. Alcohol consumption by women before and during pregnancy. Matern Child Health J. 13, 274-285 (2009).
  3. May, P. A., et al. Prevalence and epidemiologic characteristics of FASD from various research methods with an emphasis on recent in-school studies. Dev Disabil Res Rev. 15, 176-192 (2009).
  4. Wendell, A. D. Overview and epidemiology of substance abuse in pregnancy. Clin Obstet Gynecol. 56, 91-96 (2013).
  5. Cudd, T. A. Animal model systems for the study of alcohol teratology. Exp Biol Med (Maywood. 230, 389-393 (2005).
  6. Valenzuela, C. F., Morton, R. A., Diaz, M. R., Topper, L. Does moderate drinking harm the fetal brain? Insights from animal models). Trends Neurosci. 35, 284-292 (2012).
  7. Sliwowska, J. H., Song, H. J., Bodnar, T., Weinberg, J. Prenatal Alcohol Exposure Results in Long-Term Serotonin Neuron Deficits in Female Rats: Modulatory Role of Ovarian Steroids. Alcohol Clin. Exp. Res. 10, (2013).
  8. Sutherland, R. J., McDonald, R. J., Savage, D. D. Prenatal exposure to moderate levels of ethanol can have long-lasting effects on hippocampal synaptic plasticity in adult offspring. Hippocampus. 7, 232-238 (1997).
  9. Naassila, M., Daoust, M. Effect of prenatal and postnatal ethanol exposure on the developmental profile of mRNAs encoding NMDA receptor subunits in rat hippocampus. J Neurochem. 80, 850-860 (2002).
  10. Servais, L., et al. Purkinje cell dysfunction and alteration of long-term synaptic plasticity in fetal alcohol syndrome. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 9858-9863 (2007).
  11. Brady, M. L., Allan, A. M., Caldwell, K. K. A limited access mouse model of prenatal alcohol exposure that produces long-lasting deficits in hippocampal-dependent learning and memory. Alcohol Clin Exp Res. 36, 457-466 (2012).
  12. Bake, S., Tingling, J. D., Miranda, R. C. Ethanol exposure during pregnancy persistently attenuates cranially directed blood flow in the developing fetus: evidence from ultrasound imaging in a murine second trimester equivalent model. Alcohol Clin Exp Res. 36, 748-758 (2012).
  13. Cuzon, V. C., Yeh, P. W., Yanagawa, Y., Obata, K., Yeh, H. H. Ethanol consumption during early pregnancy alters the disposition of tangentially migrating GABAergic interneurons in the fetal cortex. J Neurosci. 28, 1854-1864 (2008).
  14. Godin, E. A., et al. Magnetic resonance microscopy defines ethanol-induced brain abnormalities in prenatal mice: effects of acute insult on gestational day 7. Alcohol Clin Exp Res. 34, 98-111 (2010).
  15. Gil-Mohapel, J., Boehme, F., Kainer, L., Christie, B. R. Hippocampal cell loss and neurogenesis after fetal alcohol exposure: insights from different rodent models. Brain Res Rev. 64, 283-303 (2010).
  16. Diaz, J., Samson, H. H. Impaired brain growth in neonatal rats exposed to ethanol. Science. 208, 751-753 (1980).
  17. Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Neonatal ethanol exposure impairs eyeblink conditioning in weanling rats. Alcohol Clin Exp Res. 22, 270-275 (1998).
  18. West, J. R., Hamre, K. M., Pierce, D. R. Delay in brain growth induced by alcohol in artificially reared rat pups. Alcohol. 1, 213-222 (1984).
  19. Tran, T. D., Stanton, M. E., Goodlett, C. R. Binge-like ethanol exposure during the early postnatal period impairs eyeblink conditioning at short and long CS-US intervals in rats. Dev Psychobiol. 49, 589-605 (2007).
  20. Ikonomidou, C., et al. Ethanol-induced apoptotic neurodegeneration and fetal alcohol syndrome. Science. 287, 1056-1060 (2000).
  21. Heaton, M. B., Paiva, M., Madorsky, I., Siler-Marsiglio, K., Shaw, G. Effect of bax deletion on ethanol sensitivity in the neonatal rat cerebellum. J Neurobiol. 66, 95-101 (2006).
  22. Ryabinin, A. E., Cole, M., Bloom, F. E., Wilson, M. C. Exposure of neonatal rats to alcohol by vapor inhalation demonstrates specificity of microcephaly and Purkinje cell loss but not astrogliosis. Alcohol Clin Exp Res. 19, 784-791 (1995).
  23. Kraemer, G. W., Moore, C. F., Newman, T. K., Barr, C. S., Schneider, M. L. Moderate level fetal alcohol exposure and serotonin transporter gene promoter polymorphism affect neonatal temperament and limbic-hypothalamic-pituitary-adrenal axis regulation in monkeys. Biol Psychiatry. 63, 317-324 (2008).
  24. Schneider, M. L., et al. Moderate-level prenatal alcohol exposure alters striatal dopamine system function in rhesus monkeys. Alcohol Clin Exp Res. 29, 1685-1697 (2005).
  25. Ramadoss, J., Hogan, H. A., Given, J. C., West, J. R., Cudd, T. A. Binge alcohol exposure during all three trimesters alters bone strength and growth in fetal sheep. Alcohol. 38, 185-192 (2006).
  26. Ramadoss, J., Lunde, E. R., Pina, K. B., Chen, W. J., Cudd, T. A. All three trimester binge alcohol exposure causes fetal cerebellar purkinje cell loss in the presence of maternal hypercapnea, acidemia, and normoxemia: ovine model. Alcohol Clin Exp Res. 31, 1252-1258 (2007).
  27. Ramadoss, J., Tress, U., Chen, W. J., Cudd, T. A. Maternal adrenocorticotropin, cortisol, and thyroid hormone responses to all three-trimester equivalent repeated binge alcohol exposure: ovine model. Alcohol. 42, 199-205 (2008).
  28. Byrnes, M. L., Reynolds, J. N., Brien, J. F. Brain growth spurt-prenatal ethanol exposure and the guinea pig hippocampal glutamate signaling system. Neurotoxicol Teratol. 25, 303-310 (2003).
  29. Catlin, M. C., Abdollah, S., Brien, J. F. Dose-dependent effects of prenatal ethanol exposure in the guinea pig. Alcohol. 10, 109-115 (1993).
  30. Phillips, D. E., Krueger, S. K. Effects of combined pre- and postnatal ethanol exposure (three trimester equivalency) on glial cell development in rat optic nerve. Int J Dev Neurosci. 10, 197-206 (1992).
  31. Phillips, D. E., Krueger, S. K., Rydquist, J. E. S. hort- Short- and long-term effects of combined pre- and postnatal ethanol exposure (three trimester equivalency) on the development of myelin and axons in rat optic nerve. Int J Dev Neurosci. 9, 631-647 (1991).
  32. Shetty, A. K., Burrows, R. C., Wall, K. A., Phillips, D. E. Combined pre- and postnatal ethanol exposure alters the development of Bergmann glia in rat cerebellum. Int J Dev Neurosci. 12, 641-649 (1994).
  33. Maier, S. E., Chen, W. J., Miller, J. A., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability regional differences in alcohol-induced microencephaly as a function of the timing of binge-like alcohol exposure during rat brain development. Alcohol Clin Exp Res. 21, 1418-1428 (1997).
  34. Maier, S. E., Miller, J. A., Blackwell, J. M., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability: regional differences in cell loss as a function of the timing of binge-like alcohol exposure during brain development. Alcohol Clin Exp Res. 23, 726-734 (1999).
  35. Livy, D. J., Miller, E. K., Maier, S. E., West, J. R. Fetal alcohol exposure and temporal vulnerability: effects of binge-like alcohol exposure on the developing rat hippocampus. Neurotoxicol Teratol. 25, 447-458 (2003).
  36. Kelly, S. J., Lawrence, C. R. Intragastric intubation of alcohol during the perinatal period. Methods Mol Biol. 447, 101-110 (2008).
  37. Perkins, A., Lehmann, C., Lawrence, R. C., Kelly, S. J. Alcohol exposure during development: Impact on the epigenome. Int J Dev Neurosci. 31, 391-397 (2013).
  38. Tran, T. D., Kelly, S. J. Alterations in hippocampal and hypothalamic monoaminergic neurotransmitter systems after alcohol exposure during all three trimester equivalents in adult rats. J Neural Transm. 106, 773-786 (1999).
  39. Gil-Mohapel, J., et al. Altered adult hippocampal neuronal maturation in a rat model of fetal alcohol syndrome. Brain Res. 1384, 29-41 (2011).
  40. Popovic, M., Caballero-Bleda, M., Guerri, C. Adult rat's offspring of alcoholic mothers are impaired on spatial learning and object recognition in the Can test. Behav Brain Res. 174, 101-111 (2006).
  41. Guerri, C., Sanchis, R. Alcohol and acetaldehyde in rat's milk following ethanol administration. Life Sci. 38, 1543-1556 (1986).
  42. Matta, S. G., Elberger, A. J. Combined exposure to nicotine and ethanol throughout full gestation results in enhanced acquisition of nicotine self-administration in young adult rat offspring. Psychopharmacology (Berl. 193, 199-213 (2007).
  43. Olney, J. W. Fetal alcohol syndrome at the cellular level). Addict Biol. 9, 137-149 (2004).
  44. Sulik, K. K. Genesis of alcohol-induced craniofacial dysmorphism. Exp Biol Med (Maywood). 230, 366-375 (2005).
  45. Lewis, S. M., et al. Modifying a displacement pump for oral gavage dosing of solution and suspension preparations to adult and neonatal mice). Lab Anim (NY). 39, 149-154 (2010).
  46. Cebolla, A. M., et al. Effects of maternal alcohol consumption during breastfeeding on motor and cerebellar Purkinje cells behavior in mice. Neurosci Lett. 455, 4-7 (2009).
  47. Becker, H. C., Hale, R. L. Repeated episodes of ethanol withdrawal potentiate the severity of subsequent withdrawal seizures: an animal model of alcohol withdrawal "kindling". Alcohol Clin. Exp. Res. 17, 94-98 (1993).
  48. Galindo, R., Valenzuela, C. F. Immature hippocampal neuronal networks do not develop tolerance to the excitatory actions of ethanol. Alcohol. 40, 111-118 (2006).
  49. Workman, A. D., Charvet, C. J., Clancy, B., Darlington, R. B., Finlay, B. L. Modeling transformations of neurodevelopmental sequences across mammalian species. J Neurosci. 33, 7368-7383 (2013).
  50. Becker, H. C., Diaz-Granados, J. L., Weathersby, R. T. Repeated ethanol withdrawal experience increases the severity and duration of subsequent withdrawal seizures in mice. Alcohol. 14, 319-326 (1997).
  51. Ukita, K., Fukui, Y., Shiota, K. Effects of prenatal alcohol exposure in mice: influence of an ADH inhibitor and a chronic inhalation study. Reprod Toxicol. 7, 273-281 (1993).
  52. Varma, P. K., Persaud, T. V. Influence of pyrazole, an inhibitor of alcohol dehydrogenase on the prenatal toxicity of ethanol in the rat. Res Commun Chem Pathol Pharmacol. 26, 65-73 (1979).
  53. Balcombe, J. P., Barnard, N. D., Sandusky, C. Laboratory routines cause animal stress. Contemp Top Lab Anim Sci. 43, 42-51 (2004).
  54. Arias, C., Molina, J. C., Mlewski, E. C., Pautassi, R. M., Spear, N. Acute sensitivity and acute tolerance to ethanol in preweanling rats with or without prenatal experience with the drug. Pharmacol Biochem Behav. 89, 608-622 (2008).
  55. Nizhnikov, M. E., Molina, J. C., Varlinskaya, E. I., Spear, N. E. Prenatal ethanol exposure increases ethanol reinforcement in neonatal rats. Alcohol Clin Exp Res. 30, 34-45 (2006).

Tags

Tıp Sayı 89 fetal etanol pozlama paradigma buhar geliştirme alkolizm teratojenik hayvan fare model
İnsani Gelişim her üç trimesterde Eşdeğeri sırasında Alkol Fare Expose Kullanılan Buhar Odaları İnşaatı
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Morton, R. A., Diaz, M. R., Topper,… More

Morton, R. A., Diaz, M. R., Topper, L. A., Valenzuela, C. F. Construction of Vapor Chambers Used to Expose Mice to Alcohol During the Equivalent of all Three Trimesters of Human Development. J. Vis. Exp. (89), e51839, doi:10.3791/51839 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter