Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Methylnitrosourea (MNU) -inducerede nethindedegeneration og Regeneration i zebrafisk: Histologisk og funktionelle egenskaber

doi: 10.3791/51909 Published: October 20, 2014

Summary

Heri vi demonstrere kvantificering af retinal de- og regenerering og dens indvirkning på visuel funktion ved anvendelse af N-methyl-N -nitrosourea i den voksne zebrafisk. Tab af synsstyrke og nedsat fotoreceptor numre blev efterfulgt af proliferation i den indre nukleare lag. Komplet morfologiske og funktionelle regenerering forekom 30 dage efter den indledende behandling.

Abstract

Retinale degenerative sygdomme, fx retinitis pigmentosa, med deraf følgende fotoreceptor skader tegner sig for størstedelen af synstab i den industrielle verden. Dyremodeller af central betydning for at studere sådanne sygdomme. I denne forbindelse fotoreceptoren-specifikke toksin N-methyl-N -nitrosourea (MNU) er blevet meget udbredt i gnavere til farmakologisk fremkalde nethindedegeneration. Tidligere har vi etableret en MNU-induceret nethindedegeneration model i zebrafisk, en anden populær model-system i visuel forskning.

En fascinerende forskel til pattedyr er den vedvarende neurogenese i den voksne zebrafisk nethinden og dens regenerering efter skader. For at kvantificere denne observation har vi ansat visuelle skarphed målinger i den voksne zebrafisk. Derved blev den optokinetic refleks anvendes til at følge funktionelle ændringer i ikke-bedøvede fisk. Dette blev suppleret med histologi samt immunhistokemiske staining til apoptose (TUNEL) og proliferation (PCNA) at korrelere udviklingslandene morfologiske ændringer.

Sammenfattende forekommer apoptose af fotoreceptorer tre dage efter MNU behandling, som er efterfulgt af en markant reduktion af celler i det ydre kernelag (ONL). Derefter observeres proliferation af celler i det indre kernelag (INL) og ONL. Heri viser vi, at ikke kun en fuldstændig histologisk, men også en funktionel regenerering sker over et tidsforløb på 30 dage. Nu skal vi illustrere de metoder, til at kvantificere og følge op zebrafisk retinal de- og regeneration ved hjælp af MNU i en video-format.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Vision er den mest afgørende mening for mennesket og dets leverfunktion har en stor samfundsøkonomisk virkning. I den udviklede verden, retinale degenerative sygdomme er den hyppigste årsag til synstab og blindhed blandt ældre voksne 1. Årsagen til de fleste degenerative retinale sygdomme er kun delvist forstået og terapeutiske løsninger til at genvinde tabte vision er meget begrænsede. Retinitis pigmentosa er et typisk eksempel på en retina degenerativ sygdom med primær fotoreceptor tab 2-3. N-methyl-N -nitrosourea (MNU) inducerer retinal degeneration og er derfor almindeligt brugt i gnavere at modellere sygdomme med primær fotoreceptor celledød 4. Det er et alkyleringsmiddel og fører til benigne og maligne tumorer, som normalt vises flere måneder efter eksponering 5-7. Desuden bevirker specifikke fotoreceptor celledød inden for en kort sigt observationsperiode. Derved tabet af retinal lag struktre og betydelig retinal udtynding blev observeret i en koncentrationsafhængig måde. Retina gliaceller blev aktiveret, men ingen ændringer i det retinale pigment epitel (RPE) findes. Endoplasmatiske reticulum (ER) stressrelateret apoptose synes at være den vigtigste vej for MNU aktion i nethinden 8.

Vi har for nylig indført MNU som en kemisk model til at inducere fotoreceptordegenerering i zebrafisk 9. Blandt andre grunde har zebrafisk (Danio rerio) blevet vigtigt i visuel forskning grund af lighederne i dens visuelle system til andre hvirveldyr 10. Den ydre nethinde indeholder fotoreceptorer, som kan inddeles i fire forskellige kegle typer med peak følsomhedsberegninger i det ultraviolette, kort, mellemlang og lang bølgelængde af det synlige spektre og en stang fotoreceptor type. I den indre nukleare lag (INL) er cellelegemerne bipolære, vandret og amacrine interneuroner fundet, som welll som celle soma af Muller gliaceller. I det ydre netformige lag (OPL) dannes synaptiske kontakter mellem fotoreceptorer og den indre nethinde, mens cellelag nærmest linsen er ganglion cellelag (GC), hvilke komponenter danner lange axoner omfatter synsnerven og optisk tarmkanalen . Synaptiske kontakter mellem ganglieceller og cellerne i det indre kernelag er dannet i det indre netformige lag (IPL) 11. RPE ligger udenfor neurosensoriske nethinde og omgiver fotoreceptor ydre segmenter med lange apikale microvilli 12. Endvidere zebrafisk er meget regenerative og i stand til at regrow læderede hjerne, nethinde, rygmarv, hjerte og andre væv 13. Når beskadigelse af nethinden opstår, celler i INL, der formodes at være Müller celler aktiveres og har potentialet til at differentiere til forskellige retinale celletyper. Desuden er de også generere stang stamceller, der er placeret i ONL. Et andet såurce der forsyner nethinden af ​​voksne zebrafisk med nye celler er ciliaere randzone. Denne kilde er nødvendig for at opnå en konstant tæthed af stangen fotoreceptorer i de stadigt voksende zebrafisk øje 14.

Den MNU model kan anvendes som en simpel og reproducerbar degenerering / regenerering fremgangsmåde for retinavæv. På grund af visse ligheder mellem biologiske processer i zebrafisk og i mennesker dette kunne åbne dørene for at identificere de involverede celledødsveje og at screene potentielle neurobeskyttende lægemidler. Baseret på en tidligere undersøgelse fra vores gruppe, vi nu illustrere metoderne for denne MNU-induceret zebrafisk model af retinal de- og deraf følgende regenerering, herunder funktionelle ændringer med ifølge laboratorium videoer 9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alle eksperimenter klæbet til erklæring til anvendelse af dyr i øjen og Vision Research for Foreningen for Forskning i Vision og Oftalmologi (ARVO).

1. Dyr

  1. Oprethold vildtype-zebrafisk (Danio rerio) af AB (Oregon) stamme i alderen 6-12 måneder under standardbetingelser i vand med en temperatur på 26,5 ° C og en 14/10 timers lys / mørke-cyklus 15.
  2. Følg retningslinjerne dyr pleje af de involverede institutioner for dyreforsøg efter godkendelsen af ​​det kantonale Veterinærkontor.

2. MNU Behandling

  1. Forbered vand indeholdende 150 mg / l tørstof N-methyl-N -nitrosourea (MNU). ADVARSEL! MNU er giftig; kan fremkalde kræft, arvelige genetiske skader eller skade det ufødte barn.
  2. Inkuber zebrafisk i vand indeholdende MNU i 60 min ved stuetemperatur.
  3. Skyl zebrafisk hurtigt medferskvand og puttede fisken til et nyt akvarium uden MNU. Opretholde fisk under standardbetingelser så længe som ønsket til forsøgene.

3. Visuel Acuity Måling

  1. Start optomotor systemet, skal du vælge 'test' i menuen og angiv indstillingerne for "Simple Staircase", "Acuity (Freq)" og "Randomiseret / separat" 16.
  2. Installer en infusion flaske fyldt med 500 ml vand omkring 1 m over optomotor systemet.
  3. Placer den ene zebrafisk i undersøgelsen kammer og tilslut det til infusionsflasken. Placer eksamen kammer i optomotor systemet.
  4. Start målingen og observere øjenbevægelser i realtid på computerskærmen. Derved er et positivt svar ("ja"), der defineres som fortløbende saccades i den rigtige retning, mens et negativt svar ("Nej") repræsenterer tilfældige øjenbevægelser svarende til dem observeret med stationAry riste. Hvis øjne zebrafisk udstille tre eller flere efterfølgende optokinetic reaktioner (OKR), skal du trykke på "ja"; hvis ikke, tryk "nej".
  5. Uddrag synsstyrke, som er blevet beregnet af softwaren ved at bestemme grænsen for den rumlige frekvens af optokinetic stimulus, under "Resultater" i menuen.

4. Histologi

  1. Aflive zebrafisk med en overdosis af ethyl-3-aminobenzoat-methansulfonat (200-300 mg / l) og enucleate øjnene.
  2. Fix hele øjne i 4% paraformaldehyd (PFA) i phosphatbufret saltvand (PBS) ved 4 ° C i 12 timer og derefter dehydrerer prøverne i en gradueret alkoholserie.
  3. Integrer prøverne i paraffin, skåret 5 um snit gennem synsnerven (ONH) og montere dem på et glas dias.
  4. Plette deparaffized paraffinsnit med hemalum i 4 min og dyppe slides to gange i destilleret vand efterfulgt af 0,2% saltsyre ACId og 0,8% ammoniak. Farv afsnittene med eosin i 3 minutter efter udvikling af hemalum farvning i postevand i mindst 10 minutter (H & E).
  5. Integrer de dehydrerede dias i montering medium og observere dias under lys mikroskop.

5. Immunohistokemi

  1. Terminal deoxynucleotidyltransferase dUTP-nick-endemærkning (TUNEL)
    1. Inkubér afparaffinerede sektioner med 20 ug / ml proteinase K ved stuetemperatur i 15 minutter. Vask sektionerne tre gange med Tris-bufret saltvand (TBS) i 5 minutter hver.
    2. Inkubér sektioner med 50 ul TUNEL-reaktionsblandingen (10% mærkning opløsning og 90% enzymopløsning) i et befugtet kammer ved 37 ° C i 60 min. Der vaskes tre gange med TBS i 5 min hver.
    3. Monter dias med indeholdende DAPI og observere dias under fluorescens mikroskop.
  2. Prolifererende Cell (PCNA) farvning
    1. Kog afparaffinerede sektioner i antigen-hentning (Tris-EDTA + 0,05% Tween 20, pH 9,0) i 3 minutter og vaskes tre gange med TBS i 5 min hver. Bloker med 100 pi blokeringsopløsning (TBS + 10% ged normalt serum + 1% bovint serumalbumin, pH 7,6) ved stuetemperatur i 1 time.
    2. Farv med anti-PCNA primære antistoffer i en 1: 200 fortynding i et fugtigt kammer ved 4 ° C natten over. Der vaskes tre gange med TBS + Tween 20 i 5 min hver.
    3. Afslut detektion med passende sekundære antistoffer i en 1: 500 fortynding ved stuetemperatur i 1 time.
    4. Monter dias med indeholdende DAPI og observere dias under fluorescens mikroskop.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Synsstyrke:

Den eksperimentelle opstilling [rumlige frekvens: 0,042 cirkler / grad (c / d); kontrast: 100%; afdrift hastighed: 20 grader / sekund (d / SRC); baggrundslys luminans: 152 cd / m 2] i denne undersøgelse aktiveret OKR vurdering af den voksne zebrafisk. Den gennemsnitlige varighed af VA måling var omkring 5 - 10 minutter til hver zebrafisk, som tolereres proceduren godt. Synsstyrke før MNU eksponering var 0,577 ± 0,014 cyklusser / grad (c / d). Figur 1 viser den synsstyrke kursus efter anvendelse af 150 mg / L MNU. Startende fra dag 1, målingerne viste et markant fald i synsstyrke, nåede minimumsværdier på dag 3. Fra fra dag 8, en stigning på synsstyrken sker, viser en fuld tilbagebetaling af synsstyrke 30 dage efter MNU eksponering. Til statistisk analyse en envejs ANOVA efterfulgt af Bonferroni multiple sammenligning test er blevet anvendt. Derved forskellene i synsstyrke betweOr baseline og målinger efter behandlingen var signifikant for dag 1, 3, 5 og 8 (p <0,001, hver), men ikke for dag 15 og 30.

Histologisk vurdering af nethindedegeneration:

H & E farvning blev anvendt til at kvantificere morfologiske ændringer i det ene øje af zebrafisk pr tidspunkt (n = 3) ved baseline samt 3, 8, 15 og 30 dage efter behandlingen (figur 2). Histologi blev udført som beskrevet af Tappeiner et al. 9.. Derved blev der nethindedegeneration herunder afbrydelse af INL og hulrum dannelse af ONL observeret begyndende på dag 3. Antallet af celler i ganglion cellelag (GC), det indre kernelag (INL) og antallet af stangen (RN) og kegle (CN) fotoreceptorer blev bestemt manuelt 250 um fra centrum af ONH på begge sider af afsnittet øjet (størrelsen af ​​det optalte område refererer til en retinal sektion 100 um længde). Degeneration blev fulgt i 30dage efter behandling med maksimalt stangen onl tab fundet på dag 8. Derved er antallet af stangen fotoreceptorer (RN) faldt til 82% på dag 3, 71% på dag 8 og 77% på dag 15 og 30 af det oprindelige antal . Endvidere blev akkumulering af celleklynger fundet, hovedsageligt i INL.

Kvantificering af apoptose:

TUNEL farvning blev udført i overensstemmelse med producenten (in situ Celledød Detection Kit; Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Schweiz). Den observerede nethindedegeneration efter MNU behandling var forårsaget af apoptose. Dette blev påvist ved positiv TUNEL-farvning i forskellige cellelag i den sensoriske nethinde. Til kvantificering, blev antallet af TUNEL-positive celler bestemmes manuelt to retinale områder 450 um længde hver begyndende ved periferien af ​​nethinden. Derved blev størstedelen af ​​TUNEL-positive celler fundet i ONL på dag 3. Imidlertid var døende celler også ses i INL på dette tidspunkt (Figur 3). Ingen relevante TUNEL-positive celler var påviselige før behandling.

Kvantificering af celleproliferation:

For at vurdere proliferation efter celledød blev nethinder farvet for prolifererende celler (PCNA) som beskrevet af Tappeiner et al. 9. Til kvantificering, blev antallet af PCNA-positive celler bestemmes manuelt som beskrevet ovenfor. Celledød blev efterfulgt af proliferation ses som PCNA-positive celler (figur 4). Derved blev den maksimale af prolifererende celler målt i INL på dag 5. Desuden celler i ONL (hovedsagelig stænger) viste positiv farvning for PCNA indtil slutningen af ​​studiet (dag 30). Få PCNA-positive celler i det ciliære randzone var påviselige før og på alle tidspunkter efter behandling.

d / 51909 / 51909fig1highres.jpg "width =" 500 "/>
Figur 1:. Visuel skarphed Måling af synsstyrke hos voksne zebrafisk efter anvendelse af 150 mg / L MNU. Signifikant fald i synsstyrke med et minimum på dag 3 efter behandling blev efterfulgt af fuld helbredelse, begyndende på dag 5, indtil dag 30 (gennemsnit ± SD, n = 3).

Figur 2
Figur 2: Histologi Eksempler på H & E farvede histologiske sektioner af zebrafisk nethinden ved baseline (A) og 3 (B), 8 (C), 15 (D) og 30 (E) dage efter MNU behandling.. KN, kegle kerner; RN, stang kerner; INL, indre kernelag; GC ganglioncelle lag. Pilene markerer celle klynger i INL. Målestokken er lig med 50 um.


Figur 3:. Tunel-positive celler TUNEL-positive celler (røde) i zebrafisk nethinden på dag 3 efter MNU behandling. Cellerne blev hovedsageligt placeret i ONL men blev også fundet i INL. Panel A viser kontrol, hvorimod panel B viser billederne efter MNU behandling. Målestokken viser 50 um.

Figur 4
Figur 4:. PCNA-positive celler PCNA-positive celler (røde) i zebrafisk nethinden på dag 5 efter MNU behandling i forhold til kontrolprøven. Panel A viser kontrol, hvorimod panel B viser billederne efter MNU behandling. Målestokken viser 100 um.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tidligere har vores gruppe overført MNU model fotoreceptordegenerering fra gnavere i zebrafisk systemet 9. De efterfølgende hændelser blev beskrevet og fulgt i op til 30 dage. I denne periode opstod fuldstændig retina morfologiske degeneration og regeneration efter den indledende behandling. Først histologi afslører en reduceret stang celletal fra dag 3 på med et minimum på dag 8. Tilsvarende TUNEL farvning identificerer apoptose af stangen fotoreceptorer 3 dage efter MNU behandling. Regenerering begynder i INL på dag 3, med et maksimum på dag 5. I ONL, prolifererende celler kan observeres indtil slutningen af ​​observationsperioden med et maksimum på dag 5. Dette er i modsætning til INL hvor ingen øget proliferation blev observeret efter dag 15. ciliær randzone er det eneste sted på nethinden, hvor nogle PCNA-positive celler blev fundet i den ubehandlede nethinden. Dette indikerer et område med konstant retinal neurogenese througHout levetid 14. Identifikationen af ​​celletyper involveret i regenerering af farmakologisk beskadigede fotoreceptorer i zebrafisk ikke var i fokus i dette manuskript. Men i tidligere udgivelser processen er blevet sporet til regenererende celler i INL der er blevet foreslået at være Müller celler 9,17,18.

I den foreliggende undersøgelse har vi også vurderet funktionelle ændringer i MNU-induceret zebrafisk model. For at kvantificere visuel funktion i voksne fisk, har været beskæftiget vurdering af OKR, en af flere teknikker til pålideligt at måle den visuelle skarphed (VA) af små dyr 19. Derved er OKR, baseret på en medfødt adfærd, ikke behøver forudgående tidskrævende træning af dyrene 20. Desuden, som OKR gentagne gange kan fremkaldes uafhængigt af dyrenes samarbejde, og de store øjne let kan observeres, vurdering af OKR er en ideel metode til at følge synsstyrken during degeneration og regeneration i zebrafisk. Okr målinger i den foreliggende undersøgelse viste en faldende synsstyrke indtil dag 3, efterfulgt af en fuldstændig genoprettelse af synsfunktionen på dag 30. Dette er i overensstemmelse med de histologiske de- og regenerative ændringer efter MNU program, der viser et maksimum af apoptose ved dag 3.

En fordel ved modellen er dets enkelhed, da MNU er hurtig at tilberede og kan opløses direkte i vandtanken af ​​zebrafisk. Behandling af zebrafisk med MNU udføres i en time. Antallet af fisk, som kan behandles i massevis er kun begrænset af størrelsen af ​​den fisk tank. Samlet giver dette simple induktion af nethinden degeneration i et stort antal zebrafisk uden brug af manipulation af fisk. Derfor er denne model er mindre invasiv end andre modeller af nethinden degeneration, der bruger intravitreale eller kirurgisk inducerede teknikker 21-23, og det kan derved udvise en bedre reproducerbarhed.

Generelt er dette zebrafisk MNU model er et alsidigt værktøj til at fremkalde fotoreceptor-specifik degeneration og at visualisere følgende regenerering ikke kun morfologisk men også funktionelt. , Er vi derfor overbeviste om, at modellen hjælper til bedre at forstå den degeneration og regeneration proces i den sensoriske nethinde i almindelighed og åbner mulighed for at sammenligne resultatet med pattedyrs-systemet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetic acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland A6283
Ammonia Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 294993 0.80%
Bovine serum albumine (BSA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 05470
Dako Pen Dako, Glostrup, Danmark S2002
DAPI mounting medium Vector Labs, Burlingame, CA, USA H-1200
Eosin Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 45260
Ethanol Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 2860 100%, 96%, 70%
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland ED
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland E10521 Tricaine
Eukitt Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 3989
Goat anti-rabbit Alexa 594 Life Technologies, Zug, Switzerland  A11012
Goat normal serum Dako, Glostrup, Danmark X0907
Hydrochloric acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 320331 0.20%
In situ Cell Death Detection Kit Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Switzerland 11684795910 TUNEL Kit
Mayer's hemalum solution Merck, Darmstadt, Germany 109249
Methylnitrosourea (MNU) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland N4766 Toxic
OptoMotry CerebralMechanics, Lethbridge, AB, Canada n.a.
Paraformaldehyde (PFA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P6148
Phosphate buffered saline (PBS) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P5368
Proteinase K Dako, Glostrup, Danmark S3004
Rabbit anti-PCNA  Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, USA sc-33756
Superfrost Plus glass slides Gehard Menzel GmbH, Braunschweig, Germany 10149870
Tris buffered saline (TBS) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P5912
Trizma base Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland T1503
Tween 20 Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P1379
Xylene Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 534056
Zebrafish (Danio rerio) AB (Oregon) strain University of Fribourg, Dept. of Biology n.a. Own fish facility

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Haddad, S., Chen, C. A., Santangelo, S. L., Seddon, J. M. The genetics of age-related macular degeneration: a review of progress to date. Surv. Ophthalmol. 51, (4), 316-363 (2006).
  2. Bhatti, M. T. Retinitis pigmentosa, pigmentary retinopathies, and neurologic diseases. Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 6, (5), 403-413 (2006).
  3. Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. Retinitis pigmentosa. Lancet. 368, 1795-1809 (2006).
  4. Tsubura, A., Yoshizawa, K., Kuwata, M., Uehara, N. Animal models for retinitis pigmentosa induced by MNU; disease progression, mechanisms and therapeutic trials. Histol. Histopathol. 25, 233-248 (2010).
  5. Machida, K., Urano, K., Yoshimura, M., Tsutsumi, H., Nomura,, Usui, T. Carcinogenic comparative study on rasH2 mice produced by two breeding facilities. J. Toxicol. Sci. 33, 493-501 (2008).
  6. Morton, D., et al. N-Methyl-N-Nitrosourea (MNU): A positive control chemical for p53+/- mouse carcinogenicity studies. Toxicol. Pathol. 36, 926-931 (2008).
  7. Terracini, B., Testa, M. C. Carcinogenicity of a single administration of N-nitrosomethylurea: a comparison between newborn and 5-week-old mice and rats. 24, 588-598 (1970).
  8. Zulliger, R., Lecaudé, S., Eigeldinger-Berthou, S., Wolf-Schnurrbusch, U. E. K., Enzmann, V. Caspase-3-independent photoreceptor degeneration by N-methyl-N-nitrosourea (MNU) induces morphological and functional changes in the mouse retina. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 249, 859-869 (2011).
  9. Tappeiner, C., et al. Characteristics of rod regeneration in a novel zebrafish retinal degeneration model using N-methyl-N-nitrosourea (MNU). PLOS One. 12, (2013).
  10. Bilotta, J., Saszik, S. The zebrafish as a model visual system. Int. J. Dev. Neurosci. 19, 621-629 (2001).
  11. Fleisch, C., Neuhauss, S. Visual Behavior in Zebrafish. Zebrafish. 3, 191-201 (2006).
  12. Hodel, C., Neuhauss, S. C. F., Biehmaier, O. Time course and development of light adaptation processes in the outer zebrafish retina. InterScience. 288, 653-662 (2006).
  13. Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends Genet. 29, (11), 611-620 (2013).
  14. Brockerhoff, S. E., Fadool, J. M. Genetics of photoreceptor degeneration and regeneration in zebrafish. Cell Mol. Life Sci. 68, 651-659 (2011).
  15. Brand, M., Granato, M., Nüsslein-Volhard, C. Keeping and raising zebrafish. Zebrafish: A Practical Approach. Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. IRL Press. 7-38 (2002).
  16. Tappeiner, C., Gerber, S., Enzmann, V., Balmer, J., Jazwinska, A., Tschopp, M. Visual acuity and contrast sensitivity of adult zebrafish. Front. Zool. 9, (1), 10 (2012).
  17. Bailey, T. J., Fossum, S. L., Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Hyde, D. R. The inhibitor of phagocytosis, O-phospho-L-serine, suppresses Müller glia proliferation and cone cell regeneration in the light-damaged zebrafish retina. Exp. Eye Res. 91, 601-612 (2010).
  18. Nelson, C. M., Hyde, D. R. Müller glia as a source of neuronal progenitor cells to regenerate the damaged zebrafish retina. Adv. Exp. Med. Biol. 723, 425-430 (2012).
  19. Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system. Invest. Ophthalmol Vis. Sci. 45, (12), 4611-4616 (2004).
  20. Beck, J. C., Gilland, E., Tank, D. W., Baker, R. Quantifying the ontogeny of optokinetic and vestibulo-ocular behaviors in zebrafish, medaka, and goldfish. J. Neurophysiol. 92, (6), 3546-3561 (2004).
  21. Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Burket, C. T., Hyde, D. R. Regeneration of Inner Retinal Neurons after Intravitreal Injection of Ouabain in. Zebrafish. J. Neurosci. 27, 1712-1724 (2007).
  22. Sherpa, T., et al. Ganglion cell regeneration following whole-retina destruction in zebrafish. Dev. Neurobiol. 68, 166-181 (2008).
  23. Yurco, P., Cameron, D. A. Responses of Müller glia to retinal injury in adult zebrafish. Vision Res. 45, 991-1002 (2005).
Methylnitrosourea (MNU) -inducerede nethindedegeneration og Regeneration i zebrafisk: Histologisk og funktionelle egenskaber
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Maurer, E., Tschopp, M., Tappeiner, C., Sallin, P., Jazwinska, A., Enzmann, V. Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics. J. Vis. Exp. (92), e51909, doi:10.3791/51909 (2014).More

Maurer, E., Tschopp, M., Tappeiner, C., Sallin, P., Jazwinska, A., Enzmann, V. Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics. J. Vis. Exp. (92), e51909, doi:10.3791/51909 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter