Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

Methylnitrosourea (MNU) -indusert Retinal degenerasjon og regenerasjon i Sebrafisk: histologiske og funksjonelle egenskaper

doi: 10.3791/51909 Published: October 20, 2014

Summary

Heri vi demonstrere kvantifisering av retinal de- og regenerering og dens innvirkning på visuell funksjon ved hjelp av N-metyl-N -nitrosourea i den voksne sebrafisk. Tap av synsskarphet og redusert fotoreseptorlidelser tall ble etterfulgt av spredning i indre kjernefysiske lag. Komplett morfologisk og funksjonell regenerering skjedde 30 dager etter første behandling.

Abstract

Retinal degenerative sykdommer, f.eks retinitis pigmentosa, med resulterende fotoreseptoren skader står for det meste av synstap i den industrielle verden. Dyremodeller er av avgjørende betydning for å studere slike sykdommer. I denne forbindelse fotoreseptoren spesifikke toksin N-metyl-N -nitrosourea (MNU) har vært mye brukt i gnagere til farmakologisk indusere retinal degenerasjon. Tidligere har vi etablert en MNU-indusert retinal degenerasjon modell i sebrafisk, en annen populær modell system i visuell forskning.

En fascinerende forskjell for pattedyr er den vedvarende neurogenesis i den voksne sebrafisk netthinnen og regenerering etter skade. For å kvantifisere denne observasjonen vi har ansatt synsskarphet målinger i den voksne sebrafisk. Derved ble den optokinetiske refleks brukes til å følge funksjonelle endringer i ikke-bedøvet fisk. Dette ble supplert med histologi samt immunhistokjemisk staining for apoptose (TUNEL) og spredning (PCNA) å korrelere utviklings morfologiske endringer.

I sammendrag, oppstår apoptose av fotoreseptorene tre dager etter behandling MNU, som blir fulgt av en markert reduksjon av celler i det ytre kjernelaget (onl). Deretter blir proliferasjon av celler i den indre kjernesjikt (INL) og onl observert. Heri viser vi at det ikke bare en fullstendig histologisk men også en funksjonell restitusjon skjer over et tidsforløp på 30 dager. Nå illustrerer vi de metoder for å kvantifisere og følge opp sebrafisk retinal de- og regenerering ved hjelp MNU i en video-format.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Vision er den mest avgjørende betydning for mennesket og dets funksjon har en høy samfunnsøkonomisk effekt. I den industrialiserte verden, retinal degenerative sykdommer er den ledende årsak til synstap og blindhet blant eldre voksne en. Årsaken til de fleste degenerative retinal sykdommer er bare delvis forstått og terapeutiske løsninger for å gjenvinne tapt visjon er svært begrenset. Retinitis pigmentosa er et typisk eksempel på en retinal degenerativ sykdom med primære fotoreseptoren tap 2-3. N-metyl-N -nitrosourea (MNU) induserer retinal degenerasjon og er derfor mye brukt i gnagere å modellere sykdommer med primære fotoreseptoren celledød 4. Det er et alkyleringsmiddel, og fører til benigne og maligne tumorer, som vanligvis vises flere måneder etter eksponering 5-7. I tillegg fører det spesifikke fotoreseptoren celledød i en kortvarig observasjonsperioden. Dermed tap av retinal lag strukturer;re og betydelig retinal tynning ble observert på en konsentrasjonsavhengig måte. Retinal gliaceller celler ble aktivert, men ingen endringer i retinal pigment epitel (RPE) ble funnet. Endoplasmatiske retikulum (ER) stressrelatert apoptose synes å være den viktigste sti av MNU handling i netthinnen åtte.

Vi har nylig introdusert MNU som en kjemisk modell for å indusere fotoreseptoren degenerasjon i sebrafisk ni. Blant andre grunner, har sebrafisk (Danio rerio) blitt viktig i visuell forskning på grunn av likheter i sin visuelle system til det av andre virveldyr 10. Den ytre retina inneholder fotoreseptorer, som kan grupperes i fire ulike kjegle typer med peak følsomhet i ultrafiolett, kort, middels og lang bølgelengden til synlig spektra og en stang fotoreseptoren type. I indre kjernefysiske lag (INL), blir cellen likene av bipolare, horisontale og amacrine interneurons funnet, som well som cellen soma av Muller gliaceller celler. I den ytre plexiform lag (OPL) synaptiske kontakter mellom fotoreseptorene og den indre retina er dannet, mens cellelaget nærmest linsen er ganglion cellelaget (GC), som komponentene danner lange axoner omfattende den optiske nerven og den optiske veis . Synaptiske kontakter mellom ganglion-celler og cellene i den indre kjernesjikt er dannet i den indre plexiform lag (IPL) 11. RPE ligger utenfor nevrosensorisk netthinnen og omgir fotoreseptorlidelser ytre segmenter med lang apikal microvilli 12. Videre er sebrafisk sterkt regenerativ og i stand til å vokse lesioned hjerne, retina, ryggmarg, hjerte og andre vev 13. Når retinal skade oppstår, celler i INL, som er antatt å være Muller-celler, er aktivert og har potensial til å differensiere i ulike retinale celletyper. I tillegg har de også generere stang stamceller, som er plassert i onl. En annen slikurce som forsyner netthinnen av voksen sebrafisk med nye celler er ciliary marginal sone. Denne kilden er nødvendig for å oppnå en konstant tetthet på stangfotoreseptorer i det kontinuerlig voksende sebrafisk øye 14.

Den MNU modellen kan brukes som en enkel og reproduserbar degenerering / regenerering tilnærming for netthinnevevet. På grunn av visse likheter av biologiske prosesser i sebrafisk og hos mennesker dette kunne åpne dørene for å identifisere involverte celledødsveier og til skjermen potensielle nervecellene narkotika. Basert på en tidligere studie fra vår gruppe, har vi nå illustrere metodene for denne MNU-indusert sebrafisk-modellen av retinal de- og påfølgende regenerering inkludert funksjonelle endringer med henhold laboratorium videoer ni.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Alle eksperimenter overholdt erklæringen for bruk av dyr i Ophthalmic og Visjon Forskning av Foreningen for Research in Vision og Ophthalmology (ARVO).

1. Dyr

  1. Opprettholde villtype sebrafisk (Danio rerio) av AB (Oregon) stamme i alderen mellom 6-12 måneder under standardbetingelser i vann med en temperatur på 26,5 ° C og en 14/10 timers lys / mørke syklus 15.
  2. Følg retningslinjene dyr vare på de involverte institusjonene for dyreforsøk etter godkjenning av Cantonal Veterinary Office.

2. MNU Treatment

  1. Forbered vann som inneholder 150 mg / L tørrstoff av N-metyl-N -nitrosourea (MNU). FORSIKTIG! MNU er giftig; kan forårsake kreft, arvelige skader eller skade på det ufødte barnet.
  2. Inkuber sebrafisk i vann inneholdende MNU i 60 min ved romtemperatur.
  3. Skyll sebrafisk raskt medferskvann og legg fisken til en ny fisk tank uten MNU. Oppretthold fisk under standard betingelser så lenge som ønsket for eksperimentene.

3. synsskarphet Måling

  1. Start optomotor system, velg 'testing' fra menyen, og angi alternativene til "Enkel Staircase", "skarphet (Freq)" og "Randomized / Separat" 16.
  2. Installer en infusjonsflaske fylt med 500 ml vann ca 1 m over optomotor system.
  3. Plasser en sebrafisk i eksamensrommet og koble den til infusjonsflasken. Plasser undersøkelse kammeret i optomotor systemet.
  4. Start målingen og observere øyebevegelser i sanntid på skjermen. Dermed er en positiv respons ("ja") definert som fortløpende flytter seg i riktig retning, mens et negativt svar ("nei") representerer tilfeldige øyebevegelser som ligner på de observert med stasjonary gitter. Hvis øynene av sebrafisk utstillings tre eller flere påfølgende optokinetisk svar (okr), trykk 'ja'; Hvis ikke, trykker du "nei".
  5. Ekstraher den synsskarphet, som er blitt beregnet av programmet ved å bestemme terskelen for den romlige frekvensen for den optokinetiske stimulus, under "Resultater" i menyen.

4. Histologi

  1. Avlive sebrafisk av en overdose av etyl-3-aminobenzoat methanesulfonate (200-300 mg / L) og enucleate øynene.
  2. Løs hele øyne i 4% paraformaldehyd (PFA) i fosfatbufret saltvann (PBS) ved 4 ° C i 12 timer og deretter dehydrere prøvene i en gradert serie av alkohol.
  3. Bygg inn prøvene i parafin, skåret fem mikrometer seksjoner gjennom synsnervehodet (ONH) og montere dem på et objektglass.
  4. Flekken deparaffized parafinsnitt med hemalum for 4 min og dypp lysbildene to ganger i destillert vann etterfulgt av 0,2% saltsyre acid og 0,8% ammoniakk. Flekken seksjoner med eosin for 3 min etter utviklingen av hemalum flekker i vann fra springen i minst 10 min (H & E).
  5. Bygge inn dehydrerte lysbilder i monteringsmedium og observere lysbildene under lysmikroskop.

5. Immunhistokjemi

  1. Terminal deoksynukleotidyl transferase dUTP nick end merking (TUNEL)
    1. Inkuber deparaffinized seksjoner med 20 pg / ml proteinase K ved romtemperatur i 15 min. Vask seksjonene tre ganger med Tris-bufret saltvann (TBS) i 5 minutter hver.
    2. Inkuber seksjoner med 50 ul TUNEL reaksjonsblandingen (10% merking løsning og 90% enzymløsning) i et fuktet kammer ved 37 ° C i 60 min. Vask tre ganger med TBS i 5 minutter hver.
    3. Monter lysbilder med montering medium som inneholder DAPI og observere lysbildene under fluorescens mikroskop.
  2. Prolifererende Cell Nuclear Antigen (PCNA) flekker
    1. Kok deparaffinized seksjoner i antigen gjenfinning buffer (Tris-EDTA + 0,05% Tween 20, pH 9,0) i 3 min og vaskes tre ganger med TBS i 5 minutter hver. Blokker med 100 ul blokkeringsløsning (TBS + 10% geite normalt serum + 1% bovint serumalbumin, pH7.6) ved romtemperatur i 1 time.
    2. Flekk med anti-PCNA primære antistoffer i en 1: 200 fortynning i et fuktet kammer ved 4 ° C over natten. Vask tre ganger med TBS + Tween 20 i 5 min hver.
    3. Fullfør påvisning med de passende sekundære antistoffer i en 1: 500 fortynning ved romtemperatur i 1 time.
    4. Monter lysbilder med montering medium som inneholder DAPI og observere lysbildene under fluorescens mikroskop.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Synsskarphet:

Den eksperimentelle oppsett [romlig frekvens: 0.042 sirkler / grad (c / d); Kontrast: 100%; drift hastighet: 20 grader / sekund (d / src); bakgrunnslys luminans: 152 cd / m 2] av denne studien aktivert okr vurdering av voksen sebrafisk. Gjennomsnittlig varighet av VA-måling var ca 5-10 minutter for hver sebrafisk, som tolerert behandlingen godt. Synsskarphet før MNU eksponering var 0.577 ± 0.014 sykluser / grad (c / d). Figur 1 viser synsskarphet kurs etter påføring av 150 mg / L MNU. Starter fra dag 1, målingene viste en markant nedgang i synsskarphet, og nådde minimumsverdier på dag 3. Beginning fra dag 8, en økning på synsskarphet skjer, viser en full gjenoppretting av synsskarphet 30 dager etter MNU eksponering. For statistisk analyse en enveis ANOVA etterfulgt av Bonferroni multiple sammenligningstest har blitt påført. Dermed forskjellene i synsskarphet between baseline og målinger etter var signifikant for dag 1, 3, 5 behandling, og 8 (p <0,001, hver), men ikke for dager 15 og 30.

Histologisk vurdering av retinal degenerasjon:

H & E farging ble brukt for å kvantifisere morfologiske endringer i ett øye av sebrafisk per tidspunkt (n = 3) ved start, så vel som 3, 8, 15 og 30 dager etter behandling (figur 2). Histologi ble utført som beskrevet av Tappeiner et al. 9.. Derved ble det observert retinal degenerasjon inkludert forstyrrelse av INL og hulromdannelse av onl starter på dag 3. Antall celler i ganglion cellelaget (GC), det indre kjernesjikt (INL) og antallet av stangen (RN) og kjegle (CN) fotoreseptorer ble bestemt manuelt 250 mikrometer fra sentrum av den ONH på begge sider av øyet seksjon (størrelsen på tellet område refererer til en del av retinal 100 pm lengde). Degenerasjon ble fulgt i 30dager etter behandling med maksimalt stang ker tap funnet på dag 8. Dermed reduseres antall stangfotoreseptorer (RN) til 82% på dag 3, 71% på dag 8 og 77% på dag 15 og 30 av det opprinnelige antallet . Videre er oppbyggingen av celleklynger ble funnet, hovedsakelig i INL.

Kvantifisering av apoptose:

TUNEL farging ble utført i henhold til produsenten (In situ Cell Død Detection Kit; Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Sveits). Den observerte retinal degenerasjon MNU etter behandling var forårsaket av apoptose. Dette ble avslørt av positive TUNEL behandling i forskjellige cellelagene i den sensoriske netthinnen. For kvantifisering ble antallet TUNEL-positive celler bestemmes manuelt ved to retinal områder av 450 um lengde hver, med start ved periferien av netthinnen. Derved ble det meste av TUNEL-positive celler funnet i onl ved dag 3. Imidlertid var døende celler også sett i INL på det tidspunktet (Figur 3). Ingen relevante TUNEL-positive celler var påvisbare før behandling.

Kvantifisering av celleproliferasjon:

For å vurdere spredning etter celledød, ble netthinne farget til formering cell nuclear antigen (PCNA) som beskrevet av Tappeiner et al. 9. For kvantifisering ble antallet av PCNA-positive celler bestemmes manuelt som beskrevet ovenfor. Celledød ble etterfulgt av indusert proliferasjon sett på som PCNA-positive celler (figur 4). Derved ble det maksimale av prolifererende celler målt i INL på dag 5. I tillegg celler i onl (hovedsakelig stenger) viste positiv farging for PCNA til slutten av studiet (dag 30). Få PCNA-positive celler i ciliary randsone var påvisbare før og på alle tidspunkter etter behandling.

d / 51909 / 51909fig1highres.jpg "width =" 500 "/>
Figur 1:. Synsskarphet Måling av synsskarphet hos voksne sebrafisk etter påføring av 150 mg / L MNU. Betydelig reduksjon av synsskarphet med et minimum på dag 3 etter behandling ble etterfulgt av full gjenoppretting, som begynner på dag 5, inntil dag 30 (gjennomsnitt ± SD, n = 3).

Figur 2
Figur 2: Histologi Eksempler på H & E farget histologiske seksjoner av sebrafisk retina i utgangspunktet (A) og 3 (B), 8 (C), 15 (D), og 30 (E) dager etter behandling MNU.. CN, kjegle kjerner; RN, Rød kjerner; INL, indre kjernefysiske lag; GC, ganglion cellelaget. Pilene markerer celleklynger i INL. Scale bar lik 50 mikrometer.


Figur 3:. Tunel-positive celler TUNEL-positive celler (røde) i sebrafisk netthinnen på dag 3 etter MNU behandling. Cellene ble hovedsakelig lokalisert i onl men ble også funnet i INL. Panel A viser en kontroll, mens Panel B viser bildene etter MNU behandling. Scale bar indikerer 50 mikrometer.

Figur 4
Figur 4:. PCNA-positive celler PCNA-positive celler (røde) i sebrafisk netthinnen på dag 5 etter MNU behandling sammenlignet med kontrollutvalget. Panel A viser en kontroll, mens Panel B viser bildene etter MNU behandling. Scale bar indikerer 100 mikrometer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Tidligere har vår gruppe overført MNU modell av fotoreseptoren degenerasjon fra gnagere inn i sebrafisk system ni. De påfølgende hendelsene ble beskrevet og fulgt i opptil 30 dager. I denne tidsperioden komplett retinal morfologisk degenerasjon og regenerasjon skjedde etter den første behandlingen. Først avslører histologi en redusert stang celle telle fra dag 3 på med et minimum på dag 8. Tilsvarende identifiserer TUNEL farging apoptose av stang fotoreseptorer 3 dager etter MNU behandling. Regenerering starter i INL på dag 3, med et maksimum på dag 5. I onl, prolifererende celler kan observeres til slutten av observasjonsperioden med et maksimum på dag 5. Dette er i kontrast til den INL der ingen økt proliferasjon Det ble ikke observert etter dag 15. Den Ciliary marginal sone er det eneste sted av netthinnen hvor noen PCNA-positive celler ble funnet i den ubehandlede retina. Dette indikerer et område med stadig retinal neurogenesis gjennHout levetid 14. Identifiseringen av celletyper som er involvert i regenerering av farmakologisk skadet fotoreseptorer i sebrafisk var ikke i fokus for dette manuskriptet. Men i de tidligere publikasjoner prosessen har blitt sporet tilbake til regenererende celler i INL som har blitt foreslått å være Muller celler 9,17,18.

I denne studien har vi også vurdert funksjonelle endringer i MNU-indusert sebrafisk-modellen. For å kvantifisere visuell funksjon i voksen fisk, har vurderingen av okr vært ansatt, en av flere teknikker for å pålitelig måle synsskarphet (VA) av små dyr 19. Derved, at okr, basert på en medfødt oppførsel, trenger ikke før tidkrevende opplæring av dyr 20. Videre, som den okr kan være gjentatte ganger fremkalte uavhengig av dyrenes samarbeid, og de store øynene kan lett observeres, er vurdering av okr en ideell metode for å følge synsskarphet During degenerasjon og regenerasjon i sebrafisk. Okr målinger i denne studien viste en nedadsynsskarphet til dag 3, etterfulgt av en fullstendig restaurering av visuell funksjon på dag 30. Dette er i samsvar med de histologiske etterkom og regenerative forandringer etter MNU applikasjon som viser maksimalt apoptose på dag 3.

En fordel med modellen er dens enkelhet som MNU er rask å tilberede og kan være direkte oppløst i vanntanken på sebrafisk. Behandling av sebrafisk med MNU utføres i en time. Antallet fisk som kan behandles en masse er bare begrenset av størrelsen på fisken tank. Samlet sett gjør dette enkle induksjon av retina degenerasjon i et stort antall av sebrafisk uten behov for manipulering av individuelle fisk. Derfor er denne modellen mindre invasiv enn andre modeller av retina degenerasjon som bruker intravenøse eller kirurgisk indusert teknikker 21-23 og det kan dermed vise en bedre reproduserbarhet.

Generelt er dette sebrafisk MNU modellen et allsidig verktøy for å indusere fotoreseptoren spesifikke degenerasjon og å visualisere følgende regenerering ikke bare morfologisk, men også funksjonelt. Derfor er vi sikre på at modellen bidrar til å bedre forstå degenerasjon og regenerasjon prosess i den sensoriske netthinnen generelt og åpner muligheten for å sammenligne utfallet med pattedyr system.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Acetic acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland A6283
Ammonia Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 294993 0.80%
Bovine serum albumine (BSA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 05470
Dako Pen Dako, Glostrup, Danmark S2002
DAPI mounting medium Vector Labs, Burlingame, CA, USA H-1200
Eosin Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 45260
Ethanol Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 2860 100%, 96%, 70%
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland ED
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland E10521 Tricaine
Eukitt Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 3989
Goat anti-rabbit Alexa 594 Life Technologies, Zug, Switzerland  A11012
Goat normal serum Dako, Glostrup, Danmark X0907
Hydrochloric acid Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 320331 0.20%
In situ Cell Death Detection Kit Roche Applied Sciences, Rotkreuz, Switzerland 11684795910 TUNEL Kit
Mayer's hemalum solution Merck, Darmstadt, Germany 109249
Methylnitrosourea (MNU) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland N4766 Toxic
OptoMotry CerebralMechanics, Lethbridge, AB, Canada n.a.
Paraformaldehyde (PFA) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P6148
Phosphate buffered saline (PBS) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P5368
Proteinase K Dako, Glostrup, Danmark S3004
Rabbit anti-PCNA  Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, USA sc-33756
Superfrost Plus glass slides Gehard Menzel GmbH, Braunschweig, Germany 10149870
Tris buffered saline (TBS) Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P5912
Trizma base Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland T1503
Tween 20 Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland P1379
Xylene Sigma-Aldrich, Buchs, Switzerland 534056
Zebrafish (Danio rerio) AB (Oregon) strain University of Fribourg, Dept. of Biology n.a. Own fish facility

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Haddad, S., Chen, C. A., Santangelo, S. L., Seddon, J. M. The genetics of age-related macular degeneration: a review of progress to date. Surv. Ophthalmol. 51, (4), 316-363 (2006).
  2. Bhatti, M. T. Retinitis pigmentosa, pigmentary retinopathies, and neurologic diseases. Curr. Neurol. Neurosci. Rep. 6, (5), 403-413 (2006).
  3. Hartong, D. T., Berson, E. L., Dryja, T. P. Retinitis pigmentosa. Lancet. 368, 1795-1809 (2006).
  4. Tsubura, A., Yoshizawa, K., Kuwata, M., Uehara, N. Animal models for retinitis pigmentosa induced by MNU; disease progression, mechanisms and therapeutic trials. Histol. Histopathol. 25, 233-248 (2010).
  5. Machida, K., Urano, K., Yoshimura, M., Tsutsumi, H., Nomura,, Usui, T. Carcinogenic comparative study on rasH2 mice produced by two breeding facilities. J. Toxicol. Sci. 33, 493-501 (2008).
  6. Morton, D., et al. N-Methyl-N-Nitrosourea (MNU): A positive control chemical for p53+/- mouse carcinogenicity studies. Toxicol. Pathol. 36, 926-931 (2008).
  7. Terracini, B., Testa, M. C. Carcinogenicity of a single administration of N-nitrosomethylurea: a comparison between newborn and 5-week-old mice and rats. 24, 588-598 (1970).
  8. Zulliger, R., Lecaudé, S., Eigeldinger-Berthou, S., Wolf-Schnurrbusch, U. E. K., Enzmann, V. Caspase-3-independent photoreceptor degeneration by N-methyl-N-nitrosourea (MNU) induces morphological and functional changes in the mouse retina. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 249, 859-869 (2011).
  9. Tappeiner, C., et al. Characteristics of rod regeneration in a novel zebrafish retinal degeneration model using N-methyl-N-nitrosourea (MNU). PLOS One. 12, (2013).
  10. Bilotta, J., Saszik, S. The zebrafish as a model visual system. Int. J. Dev. Neurosci. 19, 621-629 (2001).
  11. Fleisch, C., Neuhauss, S. Visual Behavior in Zebrafish. Zebrafish. 3, 191-201 (2006).
  12. Hodel, C., Neuhauss, S. C. F., Biehmaier, O. Time course and development of light adaptation processes in the outer zebrafish retina. InterScience. 288, 653-662 (2006).
  13. Gemberling, M., Bailey, T. J., Hyde, D. R., Poss, K. D. The zebrafish as a model for complex tissue regeneration. Trends Genet. 29, (11), 611-620 (2013).
  14. Brockerhoff, S. E., Fadool, J. M. Genetics of photoreceptor degeneration and regeneration in zebrafish. Cell Mol. Life Sci. 68, 651-659 (2011).
  15. Brand, M., Granato, M., Nüsslein-Volhard, C. Keeping and raising zebrafish. Zebrafish: A Practical Approach. Nüsslein-Volhard, C., Dahm, R. IRL Press. 7-38 (2002).
  16. Tappeiner, C., Gerber, S., Enzmann, V., Balmer, J., Jazwinska, A., Tschopp, M. Visual acuity and contrast sensitivity of adult zebrafish. Front. Zool. 9, (1), 10 (2012).
  17. Bailey, T. J., Fossum, S. L., Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Hyde, D. R. The inhibitor of phagocytosis, O-phospho-L-serine, suppresses Müller glia proliferation and cone cell regeneration in the light-damaged zebrafish retina. Exp. Eye Res. 91, 601-612 (2010).
  18. Nelson, C. M., Hyde, D. R. Müller glia as a source of neuronal progenitor cells to regenerate the damaged zebrafish retina. Adv. Exp. Med. Biol. 723, 425-430 (2012).
  19. Prusky, G. T., Alam, N. M., Beekman, S., Douglas, R. M. Rapid quantification of adult and developing mouse spatial vision using a virtual optomotor system. Invest. Ophthalmol Vis. Sci. 45, (12), 4611-4616 (2004).
  20. Beck, J. C., Gilland, E., Tank, D. W., Baker, R. Quantifying the ontogeny of optokinetic and vestibulo-ocular behaviors in zebrafish, medaka, and goldfish. J. Neurophysiol. 92, (6), 3546-3561 (2004).
  21. Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Burket, C. T., Hyde, D. R. Regeneration of Inner Retinal Neurons after Intravitreal Injection of Ouabain in. Zebrafish. J. Neurosci. 27, 1712-1724 (2007).
  22. Sherpa, T., et al. Ganglion cell regeneration following whole-retina destruction in zebrafish. Dev. Neurobiol. 68, 166-181 (2008).
  23. Yurco, P., Cameron, D. A. Responses of Müller glia to retinal injury in adult zebrafish. Vision Res. 45, 991-1002 (2005).
Methylnitrosourea (MNU) -indusert Retinal degenerasjon og regenerasjon i Sebrafisk: histologiske og funksjonelle egenskaper
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Maurer, E., Tschopp, M., Tappeiner, C., Sallin, P., Jazwinska, A., Enzmann, V. Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics. J. Vis. Exp. (92), e51909, doi:10.3791/51909 (2014).More

Maurer, E., Tschopp, M., Tappeiner, C., Sallin, P., Jazwinska, A., Enzmann, V. Methylnitrosourea (MNU)-induced Retinal Degeneration and Regeneration in the Zebrafish: Histological and Functional Characteristics. J. Vis. Exp. (92), e51909, doi:10.3791/51909 (2014).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter