Summary
نقدم طريقة إعداد الميكا بدعم طبقات ثنائية الدهون عالية الدقة المجهر. الميكا شفافة ومسطحة على المقياس الذري، ولكن نادرا ما تستخدم في التصوير بسبب التعامل مع الصعوبات؛ إعداد لدينا في النتائج حتى ترسب ورقة الميكا، ويقلل من المواد المستخدمة في إعداد طبقة ثنائية.
Abstract
وتستخدم على نطاق واسع بدعم طبقات ثنائية الدهون (SLBs) كنموذج لدراسة خصائص الغشاء (مرحلة الانفصال، والتجميع، وديناميات) وتفاعله مع مركبات أخرى، مثل المخدرات أو الببتيدات. ولكن خصائص SLB تختلف تبعا لدعم استخدامها.
التقنيات المستخدمة عادة لSLB التصوير والقياسات هي واحدة جزيء المجهري مضان، FCS والقوة الذرية المجهري (AFM). لأن تتم معظم الدراسات التصوير الضوئي خارجا على الدعم الزجاج، في حين يتطلب فؤاد على سطح مستو للغاية (الميكا عموما)، لا يمكن مقارنة النتائج من هذه التقنيات بشكل مباشر، لأن هذا الاتهام ونعومة خصائص هذه المواد تؤثر بشدة نشرها. للأسف، ومستوى عال من البراعة اليدوية اللازمة لقطع ولصق شرائح رقيقة من الميكا إلى شريحة زجاجية يمثل عقبة أمام الاستخدام الروتيني للالميكا لإعداد SLB. على الرغم من أن هذا من شأنه أن يكون وسيلة من خيار، مثل إعداد الميكاالأسطح غالبا ما ينتهي الأمر متفاوتة (متموج) ويصعب الصورة، وخاصة مع المسافة العمل الصغيرة، وارتفاع العدسات الفتحة العددية. ونحن هنا نقدم وسيلة بسيطة وقابلة للتكرار لإعداد رقيقة، والسطوح الميكا شقة لترسب الدهون حويصلة وإعداد SLB. بالإضافة إلى ذلك، لدينا غرفة العرف يتطلب سوى كميات صغيرة جدا من حويصلات لتشكيل SLB. نتائج الإجراء العام في كفاءة الإنتاج، بسيطة وغير مكلفة ذات جودة عالية السطوح الدهون طبقة ثنائية قابلة للمقارنة مباشرة لتلك المستخدمة في الدراسات فؤاد.
Introduction
الهدف العام من هذا البروتوكول هو إظهار طريقة لإعداد الأسطح الميكا لتصوير عالية الدقة من الميكا بدعم طبقات ثنائية الدهون (SLBs) باستخدام المجهر الضوئي مجموع مضان انعكاس الداخلي (TIRFM) أو المجهري متحد البؤر، والتي يمكن أيضا أن تكون جنبا إلى جنب مع القوة الذرية المجهري (AFM).
SLBs هي النموذج المستخدم على نطاق واسع لدراسات عديدة من تجمع الدهون، مرحلة الانفصال، وديناميات مكونات طبقة ثنائية أو تفاعلاتها مع الببتيدات والبروتينات أو غيرها من المركبات 1-5. يمكن استخدامها ركائز مختلفة لتشكيل SLB (أي الزجاج، والميكا، وثاني أكسيد السيليكون، والبوليمرات) تبعا لطبيعة الدراسة 4،6-8. دراسات غشاء نموذجية تعتمد على تقنيات التصوير القائم على الفحص المجهري، مثل TIRFM وفؤاد. وبالتالي، لتصوير TIRFM، سطح الزجاج هو خيار نموذجي لأن الزجاج الشفاف. إعداد كوب من السهل نسبيا، ونوعية النتائج هو في المقام الأوليحدده سطح شامل تنظيف قبل ترسب الدهون الحويصلات. فؤاد بسبب قرار المحورية العالية يتطلب السطوح الميكا. الميكا هو معدن سيليكات، مع ما يقرب من الكمال الانقسام القاعدية. وبالتالي، فإن الميكا المشقوق حديثا مسطح بالذرة، مما يتيح مراقبة الخلافات ارتفاع الغشاء حتى على مقياس متناهي الصغر الفرعية 9.
وأظهرت دراسات نشرها باستخدام أساليب مثل التحليل الطيفي علاقة مضان (FCS)، جزيء واحد تتبع (SMT)، والانتعاش بعد مضان photobleaching من (FRAP) مع ذلك، أن ديناميات غشاء الدهون تعتمد اعتمادا كبيرا على نوع من السطحية التي تترسب على أنهم، حيث الزجاج والميكا على نطاق واسع يمكن أن تعطي نتائج متفاوتة 10،11. وتشمل هذه الخلافات ليس فقط معاملات نشر تحقيقات الغشاء، ولكن أيضا للكشف عن السكان منفصلة من الجزيئات نشرها مع أسعار مختلفة، وربما التبديل بين ولايات مختلفة.
وبالتالي،المقارنة المباشرة للنتائج التي تم الحصول عليها باستخدام تقنيات TIRFM وفؤاد هو في كثير من الأحيان إشكالية، إلا إذا كان السطح نفسه (في هذه الحالة الميكا) يستخدم. على الرغم من أن هناك بعض الدراسات التي أجريت TIRFM والتصوير فؤاد طبقة ثنائية الميكا على نفس السطح 12،13، ونادرا ما يستخدم لالميكا المجهر الضوئي، ومعظمهم بسبب مشاكل التعامل معها. إعداد الميكا يتطلب القطع باليد الى منشورات رقيقة، والتي يتم بعد ذلك لصقها على ساترة باستخدام لاصق البصرية 12. ولكن هذا الأسلوب يتطلب بعض الممارسة لتحقيق نتائج مرضية. وعلاوة على ذلك، فإن الأسطح التي تم الحصول عليها في كثير من الأحيان مائج وسميكة، مما يجعل من الصعب استخدامها مع مسافة العمل المنخفضة، وارتفاع العدسات الفتحة العددية.
السطوح الميكا أعدت على النحو المبين في هذا البروتوكول هي رقيقة جدا (~ 220 ميكرون، بما في ذلك سمك ساترة من 170 ميكرون) ومسطحة للغاية، وتجنب "التموج"، وهو أمر حاسم لنجاح عالية الدقة التصوير. يمكن استخدامهالTIRFM أو متحد البؤر الاجهزة. علاوة على ذلك، نفس العينات يمكن نقلها إلى فؤاد، وحتى تصويرها في وقت واحد مع TIRFM / متحد البؤر وفؤاد. الجمع بين هاتين التقنيتين تسمح علاقة مباشرة السلوك نشرها مع هيكل الغشاء طبقة ثنائية 14. لأن الأسطح الميكا والمشقوق حديثا، فهي نظيفة ولا تتطلب وقتا طويلا، وضعف استنساخه، وإجراءات التنظيف يحتمل أن تكون خطرة (تشمل البروتوكولات تنظيف الزجاج عادة المواد الكيميائية مثل البيرانا حل، وحامض الكبريتيك، والصوديوم / البوتاسيوم هيدروكسيد). تصاعد من غرفة صغيرة، كما هو موضح في البروتوكول، ويقلل من حجم الحويصلات المطلوبة لتشكيل طبقة ثنائية فعالة إلى أقل من 50 ميكرولتر. أخيرا، والعملية برمتها التجمع السطح ليست مضيعة للوقت (إعداد تستغرق أقل من 30 دقيقة)، و لا يتطلب درجة عالية من المهارة اليدوية، وكذلك الانقسام الميكا التقليدية ولصق.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. ميكا وإعداد الشرائح
- المكان رقم 1 ½ (0.17 ملم) coverslips في تلطيخ الرف.
- يصوتن لمدة 30 دقيقة في 2٪ المنظفات في 60 درجة مئوية.
- يغسل 20 مرات مع الماء منزوع الأيونات.
- إزالة الشرائح باستخدام ملقط وضربة الجافة باستخدام الهواء المضغوط أو النيتروجين.
- قطع ورقة الميكا إلى 10 × 10 مم قطع مربعة باستخدام مقص أو شفرة حلاقة.
- قطع كل قطعة الميكا في 2-3 منشورات أرق باستخدام شفرة حلاقة.
ملاحظة: يتطلب هذا خطوة استخدام شفرة حادة.
2. الجمعية ميكا وغرفة تصاعد
- شريحة زجاجية مجهرية نظيفة مع الايثانول.
- النشرة الغراء من الميكا قطع في الخطوة 1.6 إلى شريحة زجاجية باستخدام لاصق البصرية. وينصح اللزوجة المنخفضة لاصقة لنشر أفضل قطرة والغراء الميكا.
- علاج تحت مصباح الأشعة فوق البنفسجية، 10 دقيقة.
يتم الشفاء لاصق بواسطة ضوء الأشعة فوق البنفسجية مع أقصى قدر من الاستيعاب في حدود 350 إلى 380NM والطاقة أوصت REQU ملاحظة:IRED للعلاج الكامل هو 4.5 J / سم 2. ومع ذلك، مصادر الضوء مختلفة يمكن استخدامها لهذه الخطوة (انظر المواد المقدمة من قبل المورد لاصق). - فضح سطح الميكا نظيفة عن طريق إزالة طبقات القليلة الأولى مع لاصق شفاف.
- وضع قطرة صغيرة (~ 20 ميكرون) من مادة لاصقة البصرية على سطح الميكا.
ملاحظة: في هذه الخطوة، وينصح لاصقة عالية اللزوجة مع انخفاض مستوى تألق ذاتي. أظهرت تجربتنا أن استخدام مزيج من انخفاض (الخطوة 2.2) ومواد لاصقة عالية اللزوجة يزيد فعالية بكثير من الميكا تقسيم (الخطوة 2.7). - وضع بلطف ساترة تنظيفها حديثا على قطرة من مادة لاصقة، وتجنب فقاعات الهواء، والسماح تسوية لمدة 1 دقيقة.
- علاج تحت مصباح الأشعة فوق البنفسجية، 10 دقيقة.
ملاحظة: بعد هذه الخطوة، وشطيرة من شريحة زجاجية، والميكا وساترة يمكن تخزينها لفترة طويلة نسبيا من الزمن (تصل إلى بضعة أسابيع). انتقل إلى الخطوة التالية قبل إعداد SLB الفعلية، للتأكد من أن سطح الميكا هو جديد.
ملاحظة: يتم الشفاء لاصق بواسطة ضوء الأشعة فوق البنفسجية مع أقصى قدر من الاستيعاب في حدود 350 إلى 380NM والطاقة اللازمة لعلاج أوصى الكامل هو 4.5J/cm 2. ومع ذلك، مصادر الضوء مختلفة يمكن استخدامها لهذه الخطوة (انظر المواد المقدمة من قبل المورد لاصق). - باستخدام سكين exacto، ترجل بلطف ساترة من الشريحة الزجاجية الجانبية كما هو موضح في الفيديو. في معظم الحالات، سوف طبقة رقيقة ومسطحة من الميكا لا تزال تعلق على ساترة. تعلق الميكا لشريحة زجاجية يمكن إعادة استخدامها (اكرر من الخطوة 2.4).
- تحقق من جودة سطح بالعين المجردة أو تحت مجهر تشريح، للتأكد من أن طبقة الميكا لا يزال لصقها على ساترة وليس ازالتها بالكامل خلال تقسيم في الخطوة 2.8. سوف يجعل خدش صغير مع ملقط أو إبرة تشريح تساعد على التمييز بين اللاصق الذي لديه الاتساق مختلفة detectably من الميكا.
- إزالة الختم المطاطي من 1.5 مل قارورة غطاء الغراء وغطاء رأسا على عقب إلى السطح باستخدام البصريةلاصقة أو طلاء الأظافر، وعلاج مع مصباح الأشعة فوق البنفسجية، أو السماح الهواء الجاف 10 دقيقة على التوالي.
ملاحظة: إذا تم إعداد نموذج لفي وقت واحد البصرية (TIRFM أو متحد البؤر) مع التصوير فؤاد، 1.5 مل قارورة كأب قد تكون صغيرة جدا لتحميل رئيس فؤاد على المسرح المجهر. في هذه الحالة، يمكن استبداله بأي غطاء من البلاستيك يا الدائري بقطر أكبر، ومناسبة للرئيس فؤاد في تصاعد مستمر. في حالة عندما يتطلب التجربة إزالة الغطاء دون الإضرار سطح الميكا، السيليكون الشحوم يمكن استخدامها بدلا من الغراء أو طلاء الأظافر.
3. المدعومة الدهن طبقة ثنائية (SLB) تشكيل
- وضع حل الحويصلية الطازجة في الغرفة مع السطح. الحد الأدنى للحجم المطلوب لتشكيل SLB هو ~ 30 ميكرولتر.
ملاحظة: للحصول على مزيد من التفاصيل حول الحويصلية وتشكيل SLB، راجع بروتوكولات المنشورة، مثل مثل حقيبة وآخرون 2014 15. - المضي قدما في تشكيل SLB باستخدام بروتوكول المطلوب. أثناء الحضانة ووالتصوير، ويمكن وضعها في غرفة في كتلة الحرارة أو ساخنة المرحلة المجهر للحفاظ على درجة الحرارة المطلوبة للحفاظ على الدهون المستخدمة فوق درجة حرارة انصهارها.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
سلوك نشر تحقيقات الفلورسنت الدهون في SLBs مختلفة اعتمادا على الركيزة. TIRFM جنبا إلى جنب مع تقنية SMT هي طريقة قيمة لتصور حركات الجسيمات واستخراج معاملات نشرها. وترد إشارات جزيء واحد من تحقيق سفينغوميالين-ATTO647N نشرها في DOPC (1،2-dioleoyl-SN-glycero-3-phosphocholine) طبقة ثنائية معتمدة على الزجاج والميكا على الرقم المتحركة المرفقة. تم إعداد سطح الميكا وفقا لبروتوكول المعروضة هنا. لتقدير الانحرافات البصرية، وقد تم قياس العرض الكامل في نصف كحد أقصى (FWHM) وبمعدل متوسط أعلى من وظيفة انتشار 20 نقطة (PSF) باستخدام الفسيفساء 2D PSF الحجم يماغيج المساعد 16،17. كانت FWHM المقاسة للزجاج والميكا 441nm 464nm وعلى التوالي (الشكل 1). الفرق في 22nm في القرار بين التصوير على الزجاج والميكا ليست كبيرة. في كلتا الحالتين، فإن قوات الأمن الفلسطينية النقطه الوسطى من كل جزيء نيون واحدة يمكن المحلىlized في الأطر المتعاقبة، وربطها في مسارات الجسيمات على مر الزمن مع فسيفساء الجسيمات المقتفي يماغيج المساعد 16،17 الشكل 2 يوضح مسارات عينة من جسيمات نشرها عبر طبقة ثنائية معتمدة على كل السطوح. وقد تآمر التشريد مربع متوسط (MSDS) من لجنة التحقيق الفلورسنت نشرها في DOPC غشاء معتمدة على الزجاج والميكا على الشكل 3. نظرا لتعايش السكان متعددة تم استخدام نموذج اثنين من السكان لاستخراج معاملات نشر السريعة والبطيئة، وفقا لطريقة وصفها بواسطة شوتز (الشكل 4 الشكل 5) 18. تم استخراج معاملات نشر وجزيئاتها باستخدام برنامج TrackArt 19 وملخصة في الجدول 1.
النتائج من هذا المثال يثبت وجود دولتين منفصلتين لجنة التحقيق نشرها: السريعة والبطيئة. معامل انتشار السكان السريع هو ما يقرب من 1 أعلى .5 مرات على الميكا من على الزجاج. المكون بطيئة ومع ذلك، غير متحرك تقريبا على الزجاج (<0.01 ميكرومتر 2 / ثانية)، مقارنة D فقط ~ 10/1 السكان بسرعة على الميكا.
الشكل 1. متوسط حجم قوات الأمن الفلسطينية. متوسط ملف كثافة قوات الأمن الفلسطينية لمدة 20 بقع تقاس على الزجاج (خط سوداء صلبة) والميكا (خط متقطع أحمر). ويقدر العرض الكامل في نصف كحد أقصى (FWHM) من شدة تطبيع للزجاج والميكا لتكون 441 نانومتر و 464 نانومتر، على التوالي. الفرق في 22nm يشير إلى أنه ليس هناك انخفاض كبير في القرار التصوير بين هذه السطوح اثنين. وقد تم قياس كثافة قوات الأمن الفلسطينية باستخدام ملف تعريف الفسيفساء PSF 2D أداة يماغيج المساعد 16،17. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
ق = "jove_content"> 
الشكل 2. عينة مسارات. عينة مسارات SM-ATTO647N نشرها في طبقة ثنائية الدهن DOPC معتمدة على الزجاج (A) والميكا (B). على الزجاج بدعم طبقة ثنائية، وكثيرا ما يجمد التحقيق على السطح، والتحول في بعض الأحيان إلى حالة نشرها بسرعة. تحقيقات نشرها على الميكا بدعم طبقة ثنائية، في المقابل، نادرا ما يجمد على السطح. بدلا من ذلك، فإنها تميل إلى التبديل بين السريعة والبطيئة دولة نشرها. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 3. يعني تشريد مربع. يعني تهجير مربع الإدلاء بالبيانات من الجسيمات SM-ATTO647N نشرها على الزجاج (■) ودعم الميكا (●) DOPC طبقة ثنائية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4. يناسب التوزيع الاحتمالي التراكمي. التوزيع التراكمي احتمال (CPD) من التشريد مربع ويناسب لثنائية الأسي (السكان اثنين) نموذج انتشار جزيئات SM-ATTO647N نشرها على الزجاج (A) والميكا (B) المدعومة طبقات ثنائية DOPC. يتم عرض التوزيعات ويناسب فقط لخامس الوقت تأخر (Δ ر = 50 مللي ثانية). ويتم الحصول على حسابات والمؤامرات باستخدام TrackArt 19 البرمجيات.ضامر "> الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
المؤامرات الرقم 5. MSD والمؤامرات الكسر. MSD عن الصيام (ص 1 2) وبطيئة (ص 2 2) السكان ونشرها جزء من السكان سريع (F 1) تحسب من نوبات ثيقة البرنامج القطري. يتم عرض النتائج بشكل منفصل للجسيمات SM-ATTO647N نشرها على الزجاج (A) ودعم الميكا (B) طبقات ثنائية DOPC. تم الحصول على الحسابات والمخططات باستخدام TrackArt 19 البرمجيات. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
| السكان 1 (سريع) | 2 السكان (بطيء) | |||||||
| D 1 (2 ميكرون / ثانية) | الكسر (٪) | D 2 (2 ميكرون / ثانية) | الكسر (٪) | |||||
| زجاج | 1.840 ± 0.031 | 65.19 ± 0.56 | 0.006 ± 0.001 | 34.81 ± 0.56 | ||||
| الميكا | 53.88 ± 0.26 | 0.176 ± 0.002 | 46.12 ± 0.26 | |||||
الجدول 1. معاملات الانتشار. ملخص الإحصاءات نشرها. معاملات نشر للسكان بطيئة وسريعة وجزيئاتها. وأجريت العمليات الحسابية في برنامج TrackArt باستخدام نموذج السكان اثنين. واعترف المسارات وربطها باستخدام الفسيفساء المقتفي الجسيمات يماغيج المساعد.
الشكل الرسوم المتحركة : جزيئات مفردة نشر الفيلم Timelapse TIRFM من سفينغوميالين-ATTO647N نشرها في طبقة ثنائية DOPC معتمدة على الزجاج (يسار) والميكا (يمين). شريط المقياس 5 ميكرون.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
يصف هذا البروتوكول وسيلة لإعداد الأسطح الملساء ورقيقة الميكا لترسب طبقة ثنائية الدهون وعالية الدقة التصوير. تقنية تتطلب الحد الأدنى من المهارات اليدوية، تقتصر في معظمها إلى التفكيك حذرا من الساندويتش الزجاج الميكا من الزجاج (الخطوة 2.8)، وهو أمر حاسم للحصول على سطح الميكا ذات جودة عالية. التفتيش على الميكا المشقوق حديثا مطلوب دائما عند هذه النقطة، لأنه من الممكن لالميكا لفصل من دون لاصقة البصرية الشق، وترك المناطق المكشوفة من مادة لاصقة البصرية. قد ينتج عنها ترسيب غير المرغوب فيها من طبقة ثنائية على لاصق بدلا من على الميكا. أعدت سطح الميكا باستخدام الطريقة الموصوفة هي مع استثناءات قليلة موازية لسطح ساترة، استنادا الى نوعية التصوير الضوئي عالية بشكل موحد حصلنا عليها؛ ونحن بالتالي لا يرى حاجة للتحقق إضافية.
الخطوة النهائية في تركيب غرفة يمكن تخصيصها. يظهر البرنامج التعليمي فيديو ل1.5 مل قارورة من الزجاج غطاء من البلاستيك تستخدم كغرفة، ولكن هذا يمكن أن تكون بديلا مع أي كائن من نفس الشكل والأبعاد المطلوبة، على سبيل المثال لAFM-TIRFM/confocal التصوير في وقت واحد، حيث العينة مع حاملها أن تنسجم مع رئيس فؤاد . تصاعد من غرفة مخصصة يمكن تخطي، إذا التصوير التي يتعين القيام بها باستخدام معيار، 35 مم غرفة خلية معدنية. في هذه الحالة ومع ذلك، فإن 25 ملم جولة غطاء زجاجي لابد من استخدامها، وسوف تكون هناك حاجة إلى حجم أكبر بكثير من حل الحويصلية لتشكيل SLB.
النتائج المعروضة هنا تبين أن التصوير جزيء واحد وتتبع يمكن القيام به بسهولة على الأسطح الميكا مسطحة للغاية رقيقة بما فيه الكفاية لتكون قابلة للTIRFM التصوير، وفقا لبروتوكول لإعداد السطح وصفها. إعداد نفسها يمكن تطبيقها على غيرها من التقنيات، بما في ذلك ارتفاع القرار المجهر الضوئي، مثل مجموع الداخلية انعكاس مضان الطيفي الارتباط (TIR-FCS). الأهم من ذلك، SLBs الإعداديةعرب كورب في نفس الطريق (أو حتى العينات نفسه بالضبط) ويمكن أن تستخدم في كل الاجهزة التجريبية، معيارا أساسيا للمقارنة مباشرة من النتائج التي تم الحصول عليها باستخدام أساليب مختلفة، مثل فؤاد، SMT، FCS، وFRAP.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
والكتاب ليس لديهم ما يكشف.
Acknowledgments
والكتاب ليس لديهم الاعترافات.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bath Sonicator | Fisher Scientific | FB15051 | |
| Coverslips 24 x 50 mm - No H1.5 | Marienfeld | 102222 | |
| DOPC | Avanti Polar Lipids | 850357 | |
| Hellmanex III (detergent) | Hellma Analytics | 320.003 | |
| Mica V-1 Grade | SPI Suppliers | 1872-CA | |
| Optical Adhesive (high viscosity) | Norland Products | NOA63 | |
| Optical Adhesive (low viscosity) | Norland Products | NOA60 | |
| Sphingomyelin-ATTO647N | AttoTec | AD 647N-171 | |
| UV lamp | Synoptics Ltd. | GelVue GVM20 | The lamp was set to 100% power |
References
- Giocondi, M. -C., et al.
- Garcia-Saez, A. J., Schwille, P.
- Plochberger, B., et al. Cholesterol slows down the lateral mobility of an oxidized phospholipid in a supported lipid bilayer. Langmuir. 26, 17322-17329 (2010).
- El Kirat, K., Morandat, S., Dufrêne, Y. F. Nanoscale analysis of supported lipid bilayers using atomic force microscopy. Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Biomembranes. 1798, 750-765 (2010).
- Szmodis, A. W., Blanchette, C. D., Longo, M. L., Orme, C. A., Parikh, A. N. Thermally induced phase separation in supported bilayers of glycosphingolipid and phospholipid mixtures. Biointerphases. 5, 120-130 (2010).
- Strulson, M. K., Maurer, J. A. Microcontact printing for creation of patterned lipid bilayers on tetraethylene glycol self-assembled monolayers. Langmuir. 27, 12052-12057 (2011).
- Satriano, C., et al. Plasma oxidized polyhydroxymethylsiloxane--a new smooth surface for supported lipid bilayer formation. Langmuir. 26, 5715-5725 (2010).
- Bag, N., Sankaran, J., Paul, A., Kraut, R. S., Wohland, T. Calibration and limits of camera-based fluorescence correlation spectroscopy: a supported lipid bilayer study. Chemphyschem: a European Journal of Chemical Physics and Physical Chemistry. 13, 2784-2794 (2012).
- Singh, S., Keller, D. J. Atomic force microscopy of supported planar membrane bilayers. Biophysical Journal. 60, 1401-1410 (1991).
- Przybylo, M., et al. Lipid Diffusion in Giant Unilamellar Vesicles Is More than 2 Times Faster than in Supported Phospholipid Bilayers under Identical Conditions. Langmuir. 22, 9096-9099 (2006).
- Scomparin, C., Lecuyer, S., Ferreira, M., Charitat, T., Tinland, B. Diffusion in supported lipid bilayers: influence of substrate and preparation technique on the internal dynamics. Eur Phys J E Soft Matter. 28, 211-220 (2009).
- Oreopoulos, J., Yip, C. M. Combined scanning probe and total internal reflection fluorescence microscopy. Methods. 46, 2-10 (2008).
- Shaw, J. E., Slade, A., Yip, C. M. Simultaneous in situ total internal reflectance fluorescence/atomic force microscopy studies of DPPC/dPOPC microdomains in supported planar lipid bilayers. J Am Chem Soc. 125, 11838-11839 (2003).
- Skaug, M. J., Faller, R., Longo, M. L. Correlating anomalous diffusion with lipid bilayer membrane structure using single molecule tracking and atomic force microscopy. J Chem Phys. 134, (2011).
- Bag, N., Yap, D. H., Wohland, T. Temperature dependence of diffusion in model and live cell membranes characterized by imaging fluorescence correlation spectroscopy. Biochimica et Biophysica Acta. , (2013).
- Sbalzarini, I. F., Koumoutsakos, P. Feature point tracking and trajectory analysis for video imaging in cell biology. J Struct Biol. 151, 182-195 (2005).
- Linkert, M., et al. Metadata matters: access to image data in the real world. J Cell Biol. 189, 777-782 (2010).
- Schutz, G. J., Schindler, H., Schmidt, T. Single-molecule microscopy on model membranes reveals anomalous diffusion. Biophys J. 73, 1073-1080 (1997).
- Matysik, A., Kraut, R. TrackArt: the user friendly interface for single molecule tracking data analysis and simulation applied to complex diffusion in mica supported lipid bilayers. BMC Research Notes. 7, (2014).
