Summary

Vorteilhafte Reduzierte Droplet-Oberflächen-Wechselwirkung, um den Transport Bioanalyten in Digitale Mikrofluidik Optimieren

Published: November 10, 2014
doi:

Summary

The protocol for fabrication and operation of field dewetting devices (Field-DW) is described, as well as the preliminary studies of the effects of electric fields on droplet contents.

Abstract

Digital microfluidics (DMF), a technique for manipulation of droplets, is a promising alternative for the development of “lab-on-a-chip” platforms. Often, droplet motion relies on the wetting of a surface, directly associated with the application of an electric field; surface interactions, however, make motion dependent on droplet contents, limiting the breadth of applications of the technique.

Some alternatives have been presented to minimize this dependence. However, they rely on the addition of extra chemical species to the droplet or its surroundings, which could potentially interact with droplet moieties. Addressing this challenge, our group recently developed Field-DW devices to allow the transport of cells and proteins in DMF, without extra additives.

Here, the protocol for device fabrication and operation is provided, including the electronic interface for motion control. We also continue the studies with the devices, showing that multicellular, relatively large, model organisms can also be transported, arguably unaffected by the electric fields required for device operation.

Introduction

Die Miniaturisierung von Vorrichtungen, die mit Flüssigkeiten arbeiten, ist von größter Bedeutung für die Entwicklung des "lab-on-a-chip" Plattformen. In dieser Richtung haben sich in den letzten zwei Jahrzehnten einen bedeutenden Fortschritt auf dem Gebiet der Mikrofluidik erlebt, mit einer Vielzahl von Anwendungen. 1-5 Kontrast mit dem Transport von Flüssigkeit in geschlossenen Kanälen (Kanal Mikrofluidik), DMF manipuliert Tröpfchen auf Arrays von Elektroden. Einer der attraktivsten Vorzüge dieser Technik ist das Fehlen von beweglichen Teilen, um Flüssigkeiten zu transportieren, und die Bewegung wird sofort durch Ausschalten von elektrischen Signalen angehalten.

Jedoch ist Tröpfchenbewegung abhängig Tröpfchen Inhalt sicher eine unerwünschte Eigenschaft für ein universelles "lab-on-a-chip" Plattform. Tröpfchen, die Proteine ​​und andere Analyten bleibe Gerät Flächen, zu unbeweglich. Wohl hat sich diese für die Ausweitung der DMF-Anwendungen war die große Einschränkung; 6-8Alternativen zu den unerwünschten Oberflächenverschmutzung zu minimieren beinhalten die Zugabe von zusätzlichen chemischen Spezies an das Tröpfchen oder seiner Umgebung, die möglicherweise Tröpfchengehalt beeinträchtigen könnten.

Früher entwickelte unsere Gruppe eine Vorrichtung, um den Transport von Zellen und Proteinen in DMF zu ermöglichen, ohne zusätzliche Additive (Field-DW-Geräte). 9. Dies wurde durch Kombinieren einer Oberfläche, bezogen auf Kerze Ruß, 10 mit einer Vorrichtung, die Tröpfchengeometrie begünstigt erreicht Walz und führt zu einer nach oben gerichteten Kraft auf das Tröpfchen, weiter verringert Tröpfchenoberflächenwechselwirkung. In diesem Ansatz wird Tröpfchenbewegung mit Oberflächenbenetzung verbunden ist. 11

Ziel des nachfolgend beschriebenen detaillierten Verfahrens ist es, eine Vorrichtung DMF transportieren kann Tröpfchen enthaltende Proteine, Zellen und ganzen Organismen zu erzeugen, ohne zusätzliche Additive. The Field-DW-Geräte ebnen den Weg für völlig gesteuerten Plattformen weitgehend unabhängig arbeiten von Tröpfchen Chemikerry.

Auch hier haben wir vorliegenden Simulationen zeigen, dass trotz der hohen Spannung zum Betrieb der Vorrichtung erforderlich ist, der Spannungsabfall über dem Tröpfchen ist ein kleiner Bruchteil der angelegten Spannung, was vernachlässigbare Auswirkungen auf Bioanalyten innerhalb des Tropfens. In der Tat, Vorversuche mit Caenorhabditis elegans (C. elegans), eine Nematode für eine Vielzahl von Studien in der Biologie verwendet, zeigen, dass Würmer schwimmen ungestört Spannungen angelegt werden.

Protocol

Hinweis: In der unten beschriebenen Verfahren, muss Laboratoriumsrichtlinien befolgt werden. Von besonderer Bedeutung ist die Sicherheit beim Umgang mit Hochspannung (> 500 V) und den Umgang mit Chemikalien. 1. Beschichtung aus einem leitfähigen Substrat mit Kerzenruß Cut Kupfermetall in Rechtecke (75 x 43 mm, 0,5 mm dick). Reinigen Sie jede Kupfersubstrat durch Eintauchen in Kupferätzmittel für etwa 30 sec, waschen mit Leitungswasser für ca. 20 sec, und trocken mit Papier…

Representative Results

Zuvor haben wir Feld DW Vorrichtungen verwendet, um die Bewegung von Proteinen in DMF zu ermöglichen. Insbesondere könnte Tröpfchen mit Rinderserumalbumin (BSA) in einer Konzentration 2.000 mal höher als zuvor berichtet auch von anderen Autoren (ohne Zusätze) bewegt werden. Dies war aufgrund der reduzierten Wechselwirkung zwischen Tropfen und Oberfläche; Figur 4 zeigt ein Tröpfchen enthaltenden fluoreszenzmarkierten BSA (siehe 9 für weitere Informationen zu den Experimenten Freire <em…

Discussion

Der wichtigste Schritt des Protokolls ist der Schutz der Rußschicht, direkt mit dem Erfolg beim Bewegen Tröpfchen verbunden. Metallisieren der Russschicht (Methode 1 oben) können nahezu 100% der Herstellungs Erfolg. Jedoch ist die maximale Betriebsdauer 10 min; möglicherweise werden Tröpfchen Fraktionen Benetzen der Ruß durch Löcher in der Metallschicht. Beschichten der Rußschicht mit dem fluorierten Flüssigkeit ist die einfachste und schnellste Alternative und erfordert minimalen Ressourcen, aber nur 40-50% de…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Wir danken dem Lindbäck Stiftung für die finanzielle Unterstützung und Dr. Alexander Sidorenko und Elza Chu für fruchtbare Diskussionen und technische Unterstützung, und Professor Robert Smith für die Unterstützung bei der C. elegans-Assays.

Materials

Name of Material/ Equipment Company Catalog Number Comments/Description
Paraffin candle Any paraffin candle
Sputtering system Denton Vacuum, Moorestown, NJ Sputter coater Desk V HP equipped with an Au target. 
1-dodecanethiol Sigma-Aldrich 471364
Teflon Dupont AF-1600
Fluorinert FC-40 Sigma-Aldrich F9755 Fluorinated liquid: Prepare Teflon-AF resin in Fluorinert FC-40, 1:100 (w/w), to create the hydrophobic coating.
Graphic design software -Adobe Illustrator Adobe Systems Other softwares might be used as well.
Copper laminate Dupont LF9110
Laser Printer Xerox Phaser 6360 or similar Check for the compatibility with "rich black" or "registration black" (see text).
Copper Etchant Transene CE-100
Perfluoroalkoxy (PFA) film McMaster-Carr 84955K22
Breadboard Allied Electronics 70012450 or similar Large enough to allow the assemble of 10 drivers.
Universal circuit board Allied Electronics 70219535 or similar
Connector Allied Electronics 5145154-8 or similar
Control board and control program (LabView software) National Instruments NI-6229 or similar
High-voltage amplifier Trek PZD700
Resistor R 27 kΩ, 1/4 W Allied  2964762
Capacitors C and C1, 100 nF, 60 V Allied  8817183
Transistor T, NPN Allied  9350289
Diode D, 1N4007 Allied  2660007
Relay  Allied  8862527
Visualization system Edmund Optics VZM 200i or similar System magnification 24X- 96X. It is combined with a Hitachi KP-D20B 1/2 in CCD Color Camera.
Recorder Sony GV-D1000 NTSC or similar It is connected to the camera by an S-video cable.
Simulations COMSOL Multiphysics V. 4.4

References

  1. Fair, R. B. Digital microfluidics: is a true lab-on-a-chip possible. Microfluid Nanofluid. 3 (3), 245-281 (2007).
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  7. Perry, G., Thomy, V., Das, M. R., Coffinier, Y., Boukherroub, R. Inhibiting protein biofouling using graphene oxide in droplet-based microfluidic microsystems. Lab Chip. 12 (9), 1601-1604 (2012).
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  9. Freire, S. L. S., Tanner, B. Additive-Free Digital Microfluidics. Langmuir. 29 (28), 9024-9030 (2013).
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Cite This Article
Freire, S. L. S., Thorne, N., Wutkowski, M., Dao, S. Taking Advantage of Reduced Droplet-surface Interaction to Optimize Transport of Bioanalytes in Digital Microfluidics. J. Vis. Exp. (93), e52091, doi:10.3791/52091 (2014).

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