गैर इनवेसिव Endotracheal इंटुबैषेण के साथ वयस्क चूहों में पूरा Thymectomy
Summary
Rodent thymectomy is a valuable technique in immunological research. Here, a protocol for complete thymectomy in adult rats using a mini-sternotomy along with non-invasive intubation and positive pressure ventilation to minimize perioperative morbidity and mortality is described.
Abstract
नवजात कृन्तकों में Thymectomy प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययन के लिए एक स्थापित और विश्वसनीय प्रक्रिया है। हालांकि, वयस्क चूहों में, फुफ्फुस विघटन से नकसीर और वातिलवक्ष की जटिलताओं के एक महत्वपूर्ण मृत्यु दर में परिणाम कर सकते हैं। इस प्रोटोकॉल एक मिनी sternotomy और अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण इस्तेमाल करता है कि चूहे thymectomy का एक सरल तरीका है। इंटुबैषेण एक गैर-आक्रामक और आसानी से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य विधि के साथ पूरा किया और वातिलवक्ष को रोकने के लिए सकारात्मक दबाव वेंटिलेशन और फुफ्फुस व्यवधान को कम से कम करने के लिए सावधान थाइमस विच्छेदन के लिए पर्याप्त समय की अनुमति देता है कि एक नियंत्रित airway के लिए अनुमति देता है। अभी थाइमस का पूरा दृश्य प्रदान करते हुए एक 1.5 सेमी sternal चीरा, mediastinal वाहिकाओं और फुस्फुस का आवरण के साथ संपर्क कम हो जाती है। मध्यस्थानिका के प्रदर्शन के बाद, थाइमस बढ़ाई तहत कुंद विच्छेदन द्वारा हटा दिया जाता है। फुफ्फुस अंतरिक्ष तो शल्य गोंद के आवेदन के बाद पूर्व सांस की नली की मांसपेशियों के सिवनी बंद होने से बंद है।छाती तो त्वचा के सिवनी बंद होने के द्वारा पीछा उरोस्थि के सिवनी बंद करने, द्वारा बंद कर दिया है। प्रवाह cytometry द्वारा भोले टी कोशिकाओं के immunohistochemical (आईएचसी) mediastinal ऊतक के धुंधला हो जाना, और अभाव से सबूत के रूप में सभी thymectomies पूरा थे, और प्रक्रिया एक 96% जीवित रहने की दर थी। कम से कम जटिलताओं के साथ पूरा thymectomy athymic वयस्क चूहों में आगे प्रतिरक्षाविज्ञानी अध्ययन के लिए वांछित है जब इस विधि उपयुक्त है।
Introduction
1960 के दशक के बाद से, थाइमस केंद्रीय प्रतिरक्षक सहिष्णुता के विकास में इसकी महत्वपूर्ण भूमिका के लिए मान्यता दी गई है। कृंतक thymectomy allograft प्रत्यारोपण और ट्यूमर मेटास्टेसिस की सेटिंग में लिम्फोसाइट भेदभाव, आत्म-सहिष्णुता, और immunotolerance में थाइमस की भूमिका को परिभाषित करने में एक आवश्यक प्रक्रिया साबित हो गया है। चूहे थाइमस को हटाने के टी सेल कमी या देशी भोले टी कोशिकाओं की फिर से उद्भव के बिना परिभाषित टी सेल आबादी के दत्तक हस्तांतरण शामिल अध्ययन के लिए अनुमति देता है।
नवजात कृन्तकों में Thymectomies विश्वसनीय परिणामों एक साथ एक चूषण तकनीक का उपयोग कर पूरा किया जा सकता है। वयस्क चूहों में इस तकनीक का एक अनुमानित 20% मृत्यु दर के साथ जुड़ा हुआ है और अक्सर एक अधूरी thymectomy 2 में परिणाम है। लगातार वयस्क चूहों में पूरा thymectomy को प्राप्त करने के लिए, एक मंझला sternotomy के माध्यम से मध्यस्थानिका की खुली लोगों तक पहुंचाने के लिए आवश्यक है। हालांकि, इस6% 2- 4 – प्रक्रिया 1.5 से लेकर एक समग्र मृत्यु दर के लिए अग्रणी सांस की नली में चोट, रक्तस्राव और वातिलवक्ष शामिल है कि जटिलताओं के साथ जुड़ा हुआ है।
पिछले दो दशकों में thymectomy तकनीक में सुधार PeriOperative जटिलताओं में कमी आई है और जीवित रहने की दरों में सुधार हुआ है। सकारात्मक दबाव वेंटिलेशन के लिए अनुमति अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण वातिलवक्ष दरों 5 कम है। इंटुबैषेण के तरीके में पहले से प्रत्यक्ष मुखर गर्भनाल दृश्य का उपयोग कर कम आक्रामक तरीकों की श्वासनली के लिए खुला जोखिम से सीमा का वर्णन किया। इंटुबैषेण प्रक्रिया से संबंधित जटिलताओं हृदय पंचर या बेहतर रग कावा की पंगु बनाना से उत्पन्न सांस की नली में चोट, मुखर गर्भनाल टूटना, अनायास ही esophageal इंटुबैषेण, और नकसीर शामिल हैं। इसके अलावा, फुफ्फुस परत को कम Thymic पालियों की करीब निकटता वातिलवक्ष में परिणाम कर सकते हैं।
यहाँ हम में से एक तकनीक का वर्णनएक पा अंत angiocatheter और Transcutaneous सांस की नली रोशनी का उपयोग कर अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण का एक सरल विधि के बाद एक न्यूनतम इनवेसिव 2 सेमी त्वचा चीरा के माध्यम से thymectomy। thymectomy एक 1.5 सेमी sternotomy और मध्यस्थानिका मुहर और नकसीर और सांस की जटिलताओं की घटनाओं को कम करने के लिए शल्य चिकित्सा गोंद आवेदन के साथ एक तीन परत बंद होने के शामिल है। Thymectomy और आईएचसी धुंधला पर Thymic ऊतक के अभाव निम्नलिखित सीडी 4 + और सीडी 8 + भोले टी कोशिकाओं के लापता होने के सबूत के रूप इस विधि को मज़बूती से पूरा thymectomy में यह परिणाम है। ऑपरेटिव बार और पेरी-प्रक्रियात्मक मृत्यु दर एक न्यूनतम करने के लिए रखा जाता है।
Protocol
Representative Results
Discussion
पूरा thymectomy के लिए वर्तमान प्रोटोकॉल जटिलताओं को कम से कम करने के लिए डिजाइन शल्य गोंद आवेदन के साथ एक तीन परत चीरा बंद होने के साथ एक न्यूनतम इनवेसिव दृष्टिकोण प्रदान करता है। थाइमस का पूरा हटाने भोले टी …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported by AI101263 from the National Institutes of Health (T.V.B), and by a grant from The Hartwell Foundation (M.L.M). M.L.M. is a member of the Duke Comprehensive Cancer Center.
Materials
| Name of Reagent/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| 2" 14-gauge angiocatheter | |||
| Operating microscope | Zeiss | ||
| Warming pad | |||
| Heart rate and blood oxygenation monitor for rodents with foot sensors | Harvard Apparatus | ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Rat foot sensor) | |
| Intubation apparatus (plastic with metal bar at the top) | See Figure 2 | ||
| Small animal anesthesia system with induction box, isoflurane tank and O2 tank | Harvard Apparatus | ST1 72-6420 | |
| Small animal ventilator with tubing | CWE | 12-02000 (ventilator)and 12-04000 (external valve assembly for mice/rats) | |
| High-intensity Fiber-Optic Illuminator | Dolan Jenner | EEG 2823M | |
| Student standard pattern forceps | Fine Science Tools | 91100-16 | |
| Fine straight scissors | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Blunt-tipped Shea scissors | Fine Science Tools | 14105-12 | |
| Small Alm retractor (for sternum) | Fine Science Tools | 17008-07 | |
| Blunt Graefe forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Fine Dumont forceps | Fine Science Tools | 11254-20 | |
| 5-0 Maxon sutures | Ethicon | ||
| 4-0 Silk sutures (with cutting needle) | Ethicon | ||
| 6-0 Nylon suture | Ethicon | ||
| Cyanoacrylate glue (Endermil) | |||
| Lubrication gel | Akorn Animal Health | NDC 17478-162-35 |
References
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