Komplette Thymektomie bei erwachsenen Ratten mit Nicht-invasive Intubation

Abstract

Thymektomie bei neugeborenen Nagern ist ein etabliertes und zuverlässiges Verfahren für immunologische Untersuchungen. Doch bei erwachsenen Ratten, Komplikationen von Blutungen und Pneumothorax von pleural Unterbrechung kann zu einer signifikanten Sterblichkeit führen. Dieses Protokoll ist ein einfaches Verfahren zur Ratte thymectomy, die einen Mini-Sternotomie Intubation verwendet. Intubation ist mit einer nicht-invasiv und leicht reproduzierbares Verfahren erfolgen und ermöglicht positive Druckventilation Pneumothorax zu verhindern und eine gesteuerte Luftwege, die ausreichende Zeit für eine sorgfältige Dissektion Thymus pleurale Minimierung von Störungen ermöglicht. Ein 1,5 cm Brustbeineinschnitt nimmt Kontakt mit mediastinale Gefäße und Rippenfell, während immer noch eine vollständige Visualisierung des Thymus. Nach der Belichtung des Mediastinums wird der Thymus stumpf unter Vergrößerung entfernt. Pleuraraum wird dann durch Nahtverschluss der vorge tracheale Muskeln, gefolgt von der Anwendung des chirurgischen Klebstoff abgedichtet. DieBrustkorb wird dann durch Nahtverschluss des Brustbeins, gefolgt von Nahtverschluss der Haut verschlossen. Alle thymectomies abgeschlossen waren, wie durch immunhistochemische (IHC) Färbung der mediastinalen Gewebe und Abwesenheit von naiven T-Zellen, nachgewiesen durch Durchflusszytometrie, und das Verfahren war eine 96% ige Überlebensrate. Diese Methode eignet sich, wenn Sie fertig Thymektomie mit minimalen Komplikationen für weitere immunologische Untersuchungen in athymischen erwachsenen Ratten gewünscht.

Introduction

Seit den frühen 1960er Jahren hat sich die Thymusdrüse für seine entscheidende Rolle in der Entwicklung der zentralen immunologische Toleranz anerkannt. Nagetier thymectomy hat sich als ein wesentlicher Vorgang bei der Definition der Rolle von Thymus der Lymphozytendifferenzierung Selbsttoleranz und Immuntoleranz in der Einstellung der Allograft Transplantation und Tumormetastasen. Die Entfernung der Ratte Thymus ermöglicht Studien mit T-Zell-Depletion oder adoptiven Transfer von definierten T-Zellpopulationen, ohne das erneute Auftreten von einheimischen naiven T-Zellen.

Thymectomies bei neugeborenen Nagetieren können mit einem Saug-Technik mit zuverlässigen Ergebnissen ¹ durchgeführt werden. In erwachsenen Ratten wird diese Technik mit einer ungefähren 20% Todesrate und führt häufig zu einer unvollständigen thymectomy ^2. Um eine vollständige Thymektomie bei erwachsenen Ratten durchgängig zu erreichen, ist offen Belichtung des Mediastinum über eine mediane Sternotomie erforderlich. Doch diese6% ^{2- 4} - Verfahren ist mit Komplikationen, die Trachea Verletzungen, Blutungen und Pneumothorax, die zu einer Gesamtmortalität von 1,5 sind verbunden.

In den letzten zwei Jahrzehnten Verbesserungen thymectomy Techniken perioperativen Komplikationen vermindert und wurden Überlebensraten verbessert. Intubation so dass für Überdruckbeatmung hat Pneumothorax Raten ⁵ verringert. Methoden der Intubation zuvor aus offenen Exposition beschriebenen Bereich um die Luftröhre zu weniger invasiven Methoden mit direkter Stimmband Visualisierung. Komplikationen im Zusammenhang mit der Intubation Verfahren verbunden sind Luftröhrenverletzung, Stimmbandbruch, unbeabsichtigte Speiseröhre Intubation und Blutungen aus Herzpunktion oder Zerstörung von der oberen Hohlvene resultieren. Außerdem kann die Nähe der unteren thymic Keulen pleuralen Auskleidung Pneumothorax führen.

Hier beschreiben wir eine TechnikThymektomie durch eine minimal-invasive 2 cm Hautschnitt nach einer einfachen Methode der Intubation mit einem stumpfen Ende Angiokatheter und transkutane Luftröhrenbeleuchtung. Die thymectomy beinhaltet eine 1,5 cm Sternotomie und einen dreischichtigen Verschluß mit chirurgischen Leimauftrag auf das Mediastinum abzudichten und die Inzidenz von Blutungen und respiratorische Komplikationen zu minimieren. Dieses Verfahren zuverlässig entsteht lücken thymectomy wie durch das Verschwinden der CD4 ⁺ und CD8 ⁺ T-Zellen naive folgenden thymectomy und Abwesenheit von Thymusgewebe auf IHC Färbung nachgewiesen. Operative Zeiten und peri-prozedurale Sterblichkeit sind auf ein Minimum reduziert.

Protocol

HINWEIS: Alle experimentellen Verfahren, die die Verwendung von Ratten wurden in Übereinstimmung mit Protokollen von der Animal Care und Verwenden Ausschuss der Duke University genehmigt wurde.

1. Vorbereitung der Intubation Kanüle

1. Schneiden Sie die Nadel Ende einer 2-Zoll-14 G angiocathether Nadel mit einer Zange.
2. Klemmen Sie das Lumen der Nadel geschlossen mit einer Spitzzange.
3. Schneiden Sie den Abschnitt eingeklemmt an den Rand des offenen Lumens Teil mit einer Zange, und dann schneiden Sie die Kanten auf beiden Seiten des verbleibenden Ende bei 30 - 45 ° Winkel zur Nadel Rand.
4. Legen Sie die unteren 3-4 mm der Kanüle in den offenen Bereich des Straight-Schiebe-Zange und nach oben ziehen, bis eine leichte Aufwärtskurve am Ende gebildet.
   Hinweis: das Lenken des Katheters in der Luftröhre (1) zu erleichtern.
5. Verwenden feinem Sandpapier, um am Ende der Kanüle glätten Sie die Kanten.

2. Pre-chirurgische Verfahren

1. Richten Sie die Website für die Prozedur, indem ein Operationsmikroskop zu 10-facher Vergrößerung über den Betriebsbereich eingestellt.
2. Legen Sie eine wärmende Unterlage auf den Arbeitsbereich und mit einem sauberen absorbierenden Pad.
3. Richten Sie eine Herzfrequenz und Blutsauerstoffsensors in das Operationsfeld.
4. Wiegen Sie die Ratte für gewichtsbasierte Dosierung von Medikamenten (zB postoperative Analgesie, Antibiotika oder Lymphozyten-abbauende Antikörper).
   HINWEIS: Typische erwachsenen Ratten wiegen zwischen 350 bis 450 g.
5. Sedate die Ratte mit verdampften 3% _Isofluran-O & sub2; (3 l / min) unter Verwendung einer Induktionskammer entlüftet, um einen Abfallanästhesiegas System Aktivkohle enthält. Lassen Sie 5 Minuten für die Narkoseeinleitung zu tiefe Narkose für Intubation erforderlich sind.
6. Verabreichen Carprofen oder Meloxicane (4,4 mg / kg) subkutan in die Ratte vor der Anwendung mit Intubation und Operation fortfahren.
7. Verwenden elektrischen Haarschneider, um den Hals und Brust des narkotisierten Ratten vor der Intubation zu rasieren.

3. Intubation

1. Bereiten Sie die Intubation Setup durch Reiben einer kleinen Menge von Schmier (zB KY Gel) auf das Ende des Intubationskanüle. Drehen an dem Beatmungsgerät, um den Fluß von Isofluran Gas durch die Rohrverbinder beginnen.
2. Übertragen der Ratte zur Intubation Vorrichtung und die Ratte an der Metallleiste zu suspendieren mit seinem oberen Schneidezähne (2A).
   ANMERKUNG: Bestimmte Intubation Vorrichtungen können online erworben werden. Die hier gezeigte Modell ist mit einer Acrylplatte um Abschnitte einer 2 x 4 Zoll Lendenstück mit einer Butanbrenner Formhausgemacht, und Verstärkungen mit Chloroform befestigt. Die Bar (oder Metalldraht) wird durch Bohren von Löchern über Kreppband an der s an diesem befestigtide der Acryl zu Absplitterungen oder Risse zu verhindern.
3. Trans beleuchten Nacken der Ratte, indem eine flexible hochintensive Lichtquelle 1-2 cm von der Bauchseite des Halses (2B).
4. Verwenden Sie ein Paar Studenten Standardmuster einer Pinzette, um die Zunge leicht nach oben und an der Seite der unteren Zähne zu ziehen. Fassen Sie die Lasche zwischen Daumen und Zeigefinger einer Hand beim Aufsetzen der flachen Innenfläche der einen Seite der Zange gegen das untere Ende der Zunge. Press ventral den Kehldeckel und der Öffnung des Kehlkopfs (2C) zu belichten.
5. Visualisieren Sie die Stimmbänder und führen die umgedrehten, abgestumpft Ende des Intubationskanüle nach vorn durch die offene Stimmritze in die Luftröhre, bis die Nabe des Angiokatheter berührt die Schneidezähne.
6. Entfernen Sie die Metallführungsstab, und befestigen Sie den Schlauch mit dem Narkose Angiokatheter Öffnung zur Belüftung mit Isofluran beginnen.
   HINWEIS: Die typische Sauerstoff flow Rate an das Beatmungsgerät 3 L / min mit 3% Isofluran.
   1. Gesetzt den Ventilator mit einer Geschwindigkeit von 60 Atemzügen / min in einem Volumen gesteuert Beatmungsmodus, der einen Druck von ~ 12 erreicht - 14 mmHg. Verwenden Sie einen positiven endexspiratorischen Druck (PEEP) von 3 cm H ₂ O.
7. Beobachten bilateralen Brustwand Expansion synchron mit dem Beatmungsgerät, um eine ordnungsgemäße Plazierung des Endotrachealtubus zu gewährleisten.
8. Bewerben Tierarzt empfohlenen Augensalbe die Augen der Ratte zur Trockene, während der Narkose zu verhindern.
9. Bewerben Tierarzt Salbe auf die Augen der Ratte zur Trockene, während der Narkose zu verhindern.
10. Sichern Sie den Tubus auf den Kopf der Ratte mit einem Streifen aus Gewebeband. Achten Sie darauf, eine feste Verbindung zwischen dem Endotrachealtubus und dem Narkose Zufluss Schläuche.
11. Befestigen Sie die Sauerstoffsättigung des Blutes und Herzfrequenz-Messgerät bis zu den Füßen der Ratte und beginnen Überwachung. Überprüfen Sie die Betäubung durch die Bestätigung erfolgt keine Reaktion aufE-Prise.

4. Thorakotomie und Thymektomie

1. Folgen Sie der üblichen aseptischen Technik für die Gesamtheit des Verfahrens.
   1. Reinigen Sie den Arbeitsbereich und Operationstisch und desinfizieren mit einer 70% igen Ethanollösung.
   2. Verwenden Sie sterile Handschuhe während des Verfahrens, und Autoklaven alle Instrumente und Materialien während des Verfahrens verwendet.
   3. Bewerben Providon-Jod auf die gesamte Brustbereich und lassen Sie ihn trocknen. Danach die Oberfläche der Haut mit 70% Ethanol auf Gaze. Decken Sie die Ratte mit Klarsichtfolie ein Loch, um das sterile Operationsfeld freizulegen.
2. Identifizieren Sie die Jugulum im oberen Brustbereich. Machen Sie eine 2 cm Mittelschnitt durch die Haut ab 2-3 mm über dem Jugulum und sich distal Mittellinie entlang des Brustbeins mit stumpfen Shea Schere.
3. Führen Sie einen 1,5 cm Längssternotomie vom Jugulum wieder mit stumpfen Shea Schere. KEEP die Unterkante der Schere direkt unter dem Brustbein und Fortschritt langsam.
4. Legen Sie einen kleinen Alm Aufroller knapp unterhalb des Brustbeins getrennt und offen für die Pre-Luftröhrenhalsmuskulatur (M. sternohyoideus und M. sternothyroideus Muskeln) zu offenbaren. Trennen Sie die Pre-Luftröhrenhalsmuskulatur mit stumpfen Graefe Pinzette. HINWEIS: An diesem Punkt kann der Trachea zu sehen ist, und der Intubationstubus sollte innerhalb der Luftröhre sichtbar gemacht werden.
5. Legen Sie die Zinken des kleinen Alm Aufroller unter den getrennt Halsmuskulatur und Brustbein. Öffnen Sie die Rückziehvorrichtung, die überlegene Aspekt der Thymus aus.
6. Verwenden feinen Pinzette Dumont, um die Seitenränder des Thymusgewebe lösen und setzen die unteren Thymus Lappen.
7. Ziehen Sie den Thymus sanft souverän ins Freie Inzisionsstelle, kümmert sich um den Kontakt mit der oberen Hohlvene, subclavia und Halsgefäße zu vermeiden und zu einer Störung der empfindlichen Brustfellfutter zwischen dem Thymus und Lunge zu minimieren.
8. Da ter Thymus Gefäße präpariert und aufgedeckt, verwenden Mikro-Scheren, um sie zu teilen. Verwenden Sie ein Wattestäbchen, um den Druck auf die Gefäße zur Blutstillung zu halten, wenn nötig.
9. Liefern Sie die unteren Lappen des Thymus in den Einschnitt und dann scharf lysieren die hinteren Anbaugeräte. Entfernen Sie die intakten Thymus und sorgfältig inspizieren entfernt Thymus nach fehlenden Abschnitte.
   HINWEIS: Kleine Brust-Lymphknoten rund um den Thymus sichtbar gemacht werden und sind oft nur schwer von Thymusgewebe unterscheiden. Diese werden diskrete runde Knoten mit einer ähnlichen Erscheinung Thymusgewebe, wird jedoch nicht in Kontinuität mit der Thymus sein.
10. Entfernen Sie die Alm Aufroller und schließen Sie die M. sternohyoideus und sternothyoid Muskeln mit zwei unterbrochen 5-0 Maxon Nähten.
11. 2 Tropfen von chirurgischer Qualität Cyanoacrylatkleber über die Nähte, die Mediastinum unter Überdruckbeatmung zu versiegeln.
    Hinweis: das wird die Häufigkeit von Pneumothorax und Hämatome zu verringern.
12. Schließen Sie die sternum mit zwei unterbrochen 4-0 Seidenfäden auf ein Schneide Nadel. Führen Sie die Nadel durch die Lücken zwischen den Rippen, kümmert sich um die Nadel direkt unter dem Brustbein zu führen, um die darunter liegende Muskelschicht zu vermeiden.
13. Schließen Sie die Hautschicht mit einer Lauf 4-0 Nylonnaht. Unterbrechen Sie die Isofluran an dieser Stelle auf die postoperative Anästhesie Erholungszeit zu verkürzen.
14. Reinigen Sie die Inzisionsstelle und der umgebenden Haut mit Kochsalzlösung angefeuchtet Gaze.
15. Mehrere Tropfen Bupivicain (0,25%) zur Lokalanästhesie, gefolgt von 1-2 Tropfen Sekundenkleber auf den Schnitt, um den Einschnitt zu versiegeln.
16. Weiter zu belüften, bis die Ratte Anzeichen von unabhängigen Atemanstrengung und fängt an, seine Gliedmaßen zu bewegen. Extubieren die Ratte und lassen Sie ihn unter Beobachtung in einem Käfig auf eine wärmende Unterlage platziert erholen.
17. Verwalten Buprenorphin (0,01 bis 0,05 mg / kg) subkutan in die Ratte unmittelbar nach der Operation, und wiederholen Sie alle 8-12 h 48 h post operativ (in der Regel 5 Gesamtdosen). Nach 24 und 48 Stunden nach der Operation, Administration Carprofen oder Meloxicane (4,4 mg / kg) subkutan (3 Gesamtdosen einschließlich der präoperativen Dosis).
18. Weiter zu überwachen, bis die Ratte um den Käfig zu bewegen. Bei Anzeichen von Atemnot, führen Sie Re-Intubation und Wieder Erforschung der Brust.
    1. Sie ein Tier nicht unbeaufsichtigt lassen, bis er wieder zu sich kam, um ausreichende Brustlage zu halten.
    2. Sie ein Tier, das der Operation an die Firma von anderen Tieren unterzogen wurde, bis vollständig erholt nicht zurück.
19. Entfernen Sie die Hautschicht Nähte 1 Woche nach der Operation.

Representative Results

Dieses Verfahren wurde zur Erwachsenen Lewis-Ratten (n = 26) durchgeführt. Die mittlere Operationszeit betrug 15 ± 3 min. Es gab keine intraoperative Mortalität. Die mittlere Intubation Zeit - von Platzierung von Ratten auf der Intubation Gerät zur Gründung der Belüftung - betrug 45 ± 5 sec. 24 Ratten hatten eine vollständige Genesung von der Operation ohne Anzeichen von Atembeschwerden oder Blutungen durch postoperativen Tag (POD) 14. Eine Ratte entwickelten Atemnot auf POD 4 und unterzog Re-Operation, um das Mediastinum erkunden. Die Ratte wurde gefunden, dass eine kollabierte Lungenflügel haben. Nach Wiederausdehnung der Lunge, des Mediastinums wurde mit chirurgischen Leim unter Druckbelüftung wieder verschlossen und die Brust wurde wieder verschlossen. Die Ratte mit komplett ohne weitere Atemanomalien erholt. Eine Ratte starb am POD 7 aus ungeklärter Ursache.

Die Post-Thymektomie Mediastinum wurde beibehalten Thymus untersucht und die entfernt Thymusgewebe war visually für fehlende Abschnitte kontrolliert und später histologisch untersucht. Bei der Nekropsie wurde Brustgewebe durch Hämatoxylin-Eosin (H & E) Flecken untersucht. Immunhistochemie (IHC) für Cytokeratin wurde dann durchgeführt, um Rest Thymusgewebe von thorakalen Lymphknoten (LN), vor allem auch über Abschnitte mit einem höheren Kernfärbung mit H & amp; E ist normal Thymusgewebe unterscheiden. Cytokeratin-Färbung wurde durchgeführt unter Verwendung von Kaninchen anti-pan Cytokeratin als primäre ab, gefolgt von biotinyliertem Ziege-Anti-Kaninchen-IgG und Vectastain Elite ABC Kit Objektträger wurden mit Hämatoxylin vor der Auswertung Mikroskopie gegengefärbt. Thymusgewebe aus Brust LNs durch dichtere Kernfärbung auf H & E (3A & 3B) und einer charakteristischen Spitzen- Muster von Zytokeratin-Färbung, was sich aus dem Fehlen von Zytokeratin-Färbung in LNs (3C und 3D) gesehen unterscheidet sich unterscheiden.

Peripheren Blutproben erhaltenaus euthanasiert Ratten wurden persistent Depletion von naiven T-Zellen analysiert. Kurz gesagt, wurden die roten Blutkörperchen mit ACK-Lysepuffer und peripheren Blutleukozyten (PBLs) lysiert wurden zweimal mit PBS gewaschen, 2% FBS vor mit Antikörpern für 30 Minuten bei 4 ° C gefärbt. PBLs wurden dann mit 4% w / v Paraformaldehyd in neutralem pH-gepufferte Kochsalzlösung vor der Analyse von Mehrfarben-Durchflusszytometrie fixiert. Gesamt-T-Zellen wurden durch Anfärben PBMCs (periphere Blut mononukleare Zellen) mit Anti-CD45 +, und CD3 + und naiven T-Zellen wurden durch Färben mit anti-CD45RC, anti-CD62L und entweder Anti-CD4 oder Anti-CD8 identifiziert identifiziert. Die Prozentsätze der einzelnen T-Zell-Subpopulation wurden durch die absolute Lymphozytenzahl (von Herzog Vet Clinical Diagnostic Lab erhalten wird) multipliziert, um Zellzahlen zu bestimmen. Repräsentative Naive CD4 ⁺ und CD8 ⁺ T-Zellen und Gesamt-T-Zellzahlen sind in Fig. 4 gezeigt ist insgesamt T-Zellzahlen im Vergleich zu r steuern thymektomierten Ratten beibehaltenats aber gezeigt, Verlust der naiven T-Zellpopulationen.

Abbildung 1. Design des Intubationskanüle. Die Kanüle wird durch eine Unterdrückung des Endes des Mandrins einer 14 G x 2 inch Angiokatheter gebildet. Das distale 3 mm des Führungsstabes ist leicht gebogen, um den Katheter ventral Leitfaden für Intubation zu erleichtern. (A) Seitenansicht des Metall Stilett. (B) Seitenansicht Angiokatheter über Stilett. (C) Vergrößerte Ansicht der stumpfen Spitze des Mandrins.

Figur 2 eine schräge Intubation Plattform verwendet wird, um die Ratte zur Intubation zu positionieren. Die Ratte wird aus der Metallstab der Intubation Plattform mit seinem oberen Schneidezähne suspendiert. Eine leichte source werden dann ventral Hals der Ratte zu positionieren trans beleuchten den Rachen. Zangen sind nach der Aussetzung der Ratte und der Exposition des Kehlkopfes verwendet, um den Mund zu halten und setzen die Öffnung des Kehlkopfes. (A) Draufsicht und (B) Seitenansicht Intubation Plattform. (C) Schematische Darstellung der Visualisierung der Stimmritze . Der Kehlkopf in dem Diagramm aus einer Folie aus Motifolio gekauft.

Abbildung 3. H & E und Cytokeratin Anfärbung mediastinalen Gewebe Thymus aus Lymphknoten zu unterscheiden. Hematoxylin und Eosin (H & E) Färbung eines normalen Thymus (A) und Brust LN (B). Cytokeratin-Färbung von Thymusgewebe (C) und einer Brust LN erholt nach Thymektomie Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieses Bild anzuzeigen.

Abbildung 4. Attrition der peripheren Blut naiven T-Zellen nach Thymektomie. Gesamt T-Zellen, naiven CD4 + T-Zellen und naive CD8 + T-Zellen, in denen aus PBLs mittels Durchflusszytometrie in der Vor-Thymektomie (Pre) und Ratten 4 Wochen nach der Thymektomie quantifiziert (Beitrag ). Die Daten werden für eine Ratte pro Gruppe gezeigt und sind repräsentativ für das Gesamtergebnis erzielt.

Discussion

Die vorliegende Protokoll für die komplette Thymektomie eine minimal-invasive Ansatz mit einem Drei-Schicht Einschnitt Verschluss mit chirurgischen Klebstoff Anwendung entwickelt, um Komplikationen zu minimieren. Die vollständige Entfernung des Thymus wurde durch den Verlust von naiven T-Zellen und durch IHC Färbung mediastinaler Lymphgewebe Zytokeratin demonstriert.

20% aufgrund von perioperativen Komplikationen, von denen die meisten der auf die enge Verbindung der unteren Lappen des Thymus mit dem Rippenfell, das Herz und die - das Verfahren der erwachsenen Ratte Thymektomie wurde von Mortalitätsraten im Bereich von 1,5 kompliziert große mediastinale Gefäße ^2-4. Öffnen Intubation Techniken, wo die Luftröhre durchstoßen, eine 6% Sterblichkeit ^2. Die Verwendung von nicht-invasiven Intubation wurde von Na und Mitarbeitern berichtet; jedoch waren die Überlebensraten nicht berichtet ^5. Intubation mit der Kanüle hergestellt, wie hier beschrieben,mit transkutanen Luftröhrenbeleuchtung ermöglicht eine klare Visualisierung der Stimmbänder für konsequent erfolgreiche Intubation. Keine moderne Ausrüstung für die vorgestellte Methode, die sich von anderen berichtet, nicht-invasive Techniken ^{2,5- 8} benötigt. Unser Verfahren zur Abschwächung der Ende eines Angiokatheter Nadel und die Schaffung einer Aufbiegung am Ende erleichtert es, eine unbeabsichtigte Speiseröhren Intubation vermieden und tracheale Trauma minimiert. Dies sind Verbesserungen an einem zuvor beschriebenen Verfahren der Intubation auch unter Verwendung einer modifizierten Angiokatheter ^9.

Wir finden, dass die Beibehaltung der Brustbeinschnitt auf ein Minimum verringert Kontakt mit großen mediastinalen Apparate und Blutungsrisiko und ermöglicht eine angemessene Belichtung für eine vollständige Entfernung des Thymus. Theoretisch sollte die kleineren Schnitt auch postoperativen Schmerzen und Recovery-Zeit zu verringern. Die Verwendung von Fibrinkleber wurde zuerst als eine Modifikation eines offenen Intubation gemeldetVerfahren Pneumothorax und Atemwegsschäden ² zu verhindern. Wir haben festgestellt, dass die Anwendung einer kleinen Menge an Klebstoff in den genähten pre-tracheale Muskeln beim Aufbringen von Überdruck ausreichend dichtet die Pleurahöhle und hilft, um postoperative Komplikationen der Atemwege zu vermeiden.

Es gibt einige Aspekte des Protokolls, die wichtig hervorzuheben, so kann das Verfahren erfolgreich durchgeführt werden. Es ist wichtig, den Anästhesieschläuche mit ausreichender Band sicher, da es möglich ist, den Gasfluss während des Betriebs getrennt werden, um die Hände des Chirurgen sind nahe dem Kopf der Ratte positioniert und Visualisierung nur an der Operationsstelle unter dem Mikroskop fokussiert. Die minimal mögliche Schmierung an der Kanüle vor der Intubation angewendet verhindert, dass die Kanüle ein Abrutschen in die Speiseröhre. Während des mehrschichtigen Verschluss, es hilft auch, die Cyanoacrylatkleber durch eine kleine Nadel mit einer Spritze, gelten, die ermöglicht eine präzise Anwendung und verhindert ein versehentliches Überklebstoffauftrag.

Dieses Verfahren keine Wieder Vaskularisierung des entnommenen Thymus ermöglichen in einer Empfängerratte, die an anderer Stelle ¹⁰ beschrieben wurde. Wir haben auch nicht versuchen, dieses Verfahren bei Mäusen, die oft für die Immun Studien eingesetzt werden. Die aktuellsten Beschreibungen der Thymektomie Verfahren in erwachsenen Mäusen werden entweder über Vakuumabsaugung des Thymus nach der Exposition, die hohe Komplikationsrate bei erwachsenen Ratten oder eine Dissektion Methode, die ähnlich wie bei unserem Verfahren ist ^11,12 hat. Der Verschluss ist in Schichten ausgeführt wird, und Anästhesie durch intraperitoneale Injektion von Pentobarbital, die nicht vor, muss die Intubation erreicht. Die wichtigsten Einschränkungen der Thymektomie Verfahren in jedem Nager sind die Voraussetzung für ein Operationsmikroskop, das sehr teuer sein kann, und das technische Know-how benötigt, um unter Vergrößerung zu betreiben und führen Sie das Verfahren schnell.

Inhalt "> Komplette Thymektomie bei erwachsenen Ratten erleichtert immunologische Studien mit T-Zell-Entwicklung, T-Zell-Reaktivität und Toleranz in der Transplantationsmedizin und Tumorstudien und Studien mit T-Zell-Depletion in athymischen Ratten ^{13- 15.}

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
2 inch 14 G angiocatheter
Operating microscope	Zeiss
Warming pad
Heart rate and blood oxygenation monitor for rodents with foot sensors	Harvard Apparatus	ST1 72-8010, ST1 72-8098 (Rat foot sensor)
Intubation apparatus (plastic with metal bar at the top)			See Figure 2
Small animal anesthesia system with induction box, isoflurane tank and O2 tank	Harvard Apparatus	ST1 72-6420
Small animal ventilator with tubing	CWE	12-02000 (ventilator) and 12-04000 (external valve assembly for mice/rats)
High-intensity fiber optic Illuminator	Dolan Jenner	EEG 2823M
Student standard pattern forceps	Fine Science Tools	91100-16
Fine straight scissors	Fine Science Tools	14060-09
Blunt-tipped Shea scissors	Fine Science Tools	14105-12
Small Alm retractor (for sternum)	Fine Science Tools	17008-07
Blunt Graefe forceps	Fine Science Tools	11050-10
Fine Dumont forceps	Fine Science Tools	11254-20
5-0 Maxon sutures	Ethicon
4-0 Silk sutures (with cutting needle)	Ethicon
6-0 Nylon suture	Ethicon
Cyanoacrylate glue (Endermil)
Lubrication gel	Akorn Animal Health	NDC 17478-162-35