Introduction
Данио рерио (Danio rerio) эмбрионы были широко используется в качестве модели для изучения развития почек и поликистоз почек. Есть много преимуществ в использовании данио в качестве животной модели: технико-экономическое изучения генетических взаимодействий, способность использовать антисмысловые Morpholinos (MO) для белка нокдаун, возможность быстро пробирной большое количество эмбрионов, и легкость просмотра органов фенотипы в жить личинки 1. Предпочка является первым почек развивать у позвоночных и функционально в личиночной рыбок данио 2. Структура данио предпочки относительно проста по сравнению с metanephros млекопитающих, третий и последний почек развивать у млекопитающих. Нефрона является рабочий блок почки, с каждой почки человека, содержащей от 3,4 500,000-1,000,000 нефронов и каждой мыши почки, имеющей приблизительно 13000 нефронов 5, что делает его трудно наблюдать единую структуру нефрона яN человека или мыши почки. Данио имеет только два нефронов, и каждый данио нефрона содержит все основные компоненты, найденные в клубочек и канальцев мышей и человека 6 и аналогичных специализированных видов почечных клеток. По сравнению с другими моделями позвоночных, таких как Xenopus, данио нефрона больше напоминает нефрона млекопитающего, поскольку она имеет закрытую систему 7.
В последние годы, данио геном был секвенирован, что позволяет обеспечить широкое введение генетических средств, обширные мутантных ресурсов и коллекций трансгенных репортерных линий в данио моделей. Данио предпочки формы между 12-72 ч после оплодотворения (ФВЧ) и могут быть легко визуализированы в прозрачных эмбрионов. Опухоль Белок Вильмса WT1 является существенным фактором для развития почек. Трансгенные линии, экспрессирующие данио зеленого флуоресцентного белка (GFP) под контролем промотора в wt1b Tg (wt1b: GFP), показывают, GFP expreделения специально расположен в pronephric регионах у эмбрионов данио рерио, начиная с 17 часов после оплодотворения 8. Nephronophthisis (NPHP), аутосомно-рецессивный поликистоз почек, вызывается мутациями NPHP генов 9. NPHP4 нокдаун в морфолино- вызвало образование кисты в TG (wt1b: GFP). Рыбу 10 Таким образом, эта трансгенная рыба подходит модель для наблюдения структуры почек и образованию кист во время развития почек. Важно отметить, что влияние модуляторов развития почек могут быть изучены с использованием этого штамма в времени и труда эффективным образом.
Наша статья описывает использование ТГ (wt1b: GFP) рыбы в качестве модели для визуализации формирование почек кисты после генной модуляции. Мы использовали пуско-и сайту сплайсинга, анти-смысл МО, чтобы сбить ген Wnt5A у рыбок данио. Wnt5a является неканонической секретируется гликопротеин из семейства Wnt, который играет важную роль в развитии различных органов и послеродовой сотовойФункция 11. Wnt5a работает через неканонических Wnt путей, в том числе плоской клеточной полярности (PCP) пути, который был найден, чтобы играть важную роль в ориентированной клеточное деление в процессе почечных канальцев удлинения. Wnt5a регулирует Wnt / PCP путь, формируя комплекс с рецептором, как тирозинкиназы (Ryk), который дополнительно преобразовывает сигналы Wnt5a путем образования комплекса с плоской VANGL клеточной полярности белка 2 (Vangl2), тем самым способствуя стабильности Vangl2 12. Дефекты в PCP пути может привести к разделению случайной клеток и вызывать образование почечных кист. Мы использовали Tg (wt1b: GFP) данио линию наблюдать формирование почек кисты после Wnt5A нокдаун. Tg (wt1b: GFP) данио модель позволяет живого изображения и своевременной наблюдение структуры почек. После Wnt5A нокдаун, формирование почек киста была обнаружена, начиная с 24 часов после оплодотворения; в 72 часов после оплодотворения, кисты могут быть найдены в клубочках и проксимальных канальцах. Этот метод также может быть использован для SCreen другие гены, которые могут привести к образованию почек кисты.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
О себе Этика:: Примечание Все данио эксперименты были одобрены уходу и использованию комитета Институциональная животных в Восточной Вирджинии медицинской школы в.
1. Морфолино Подготовка
- Дизайн и синтезировать перевод блокирующие (ческого увеличения) и сплайсинга ингибирования (сращивания) анти-смысл морфолино (MO) олигонуклеотиды для интересующего гена в соответствии с указаниями изготовителя (рис 1а). Пожалуйста, смотрите информацию изготовителя в таблице 1.
ПРИМЕЧАНИЕ: МО поставляются в виде лиофилизированных запасов в стеклянных бутылках. - Добавить полноценный стерильную воду в стеклянных бутылках, чтобы повторно приостанавливать МО до конечной концентрации 25 мкг / мкл. Убедитесь, что олигонуклеотид полностью не растворится. Если некоторые твердые остатки, нагреть флакон фондового олигонуклеотидную решение в 65 ° С в течение от 5 до 10 мин, а вихрь кратко.
- Храните маточного раствора МО при комнатной температуре. Не следует хранить их при 4 ° С или -20 °С, так как при более низких температурах может привести олигонуклеотид МО связываться с стенки контейнера. Измерьте концентрацию раствора с помощью спектрофотометра (см табл.1) каждый раз новый MO исходный раствор.
- Приготовления рабочего раствора MO в день инъекции разбавлением исходного раствора с высококачественной стерильной водой до желаемой дозы. Добавить 0,5% фенола-красного до достижения концентрации 0,05%. Например, чтобы сделать 5 мкл рабочего раствора с концентрацией 15 нг / нл, добавить 3 мкл исходного раствора MO и 0,5 мкл 0,5% фенола-красного до 1,5 мкл воды.
ПРИМЕЧАНИЕ: При этой рабочей концентрации, каждая капля (500 ФЛ) инъекций содержит 7,5 нг МО и две капли содержат 15 нг МО.
2. Получение инъекционного устройства
- Покупка стекла предварительно вытащил иглы (см таблицу 1 для получения более подробной информации). Кроме того, вытащить иглу Wi впрыска стеклаго иглы съемник.
- Включите компрессор воздуха и регулировать величину до 50 фунтов на квадратный дюйм давления. Включите рассекает микроскопа источника света и Пико микро-топливного насоса и настройте параметры следующим образом: удерживая давление 20 фунтов на квадратный дюйм, извлеките давление 10 фунтов на квадратный дюйм, период значение 2,5 и 100 мкс диапазоне стробирования.
- Загрузите стеклу, предварительно вытащил иглу с 5 мкл раствора для инъекций и поместите иглу в вертикальном положении с острием вниз. Подождите, пока весь раствор не достигнет кончика иглы без видимых пузырьков воздуха. Установите держатель иглы в соответствующем положении рядом с микроскопом и вставьте стекло иглу в держатель. Регулировка угла впрыска до 45 градусов.
- Принесите наконечник в целях иглы под микроскопом, высоко над сценой, и сосредоточить внимание на самой тонкой области кончика. Перерыв с кончика иглы с тонкой точечных пинцетом.
- Поместите линейку и капиллярную трубку с внутренним диаметром 0,15 мм бок о бок под микроскопом;инъекции раствора в один конец капиллярной трубки, чтобы столб жидкости. Отрегулируйте время извлечения для достижения каждые 17 капель в 1 мм колонке длина жидкой, то объем каждой капли 1 п (объем капли = π х 2 радиус х длина (от столба жидкости) / кол-во (капель).
Примечание: падение с диаметром 0,1 мм дает объем впрыска около 500 мкл (объем капли = 4/3 х π х радиус 3).
3. Подготовка оплодотворенной эмбрионов данио рерио и впрыска с Morpholinos
- Настройка Tg (wt1b: GFP) трансгенные данио гнездящихся пар в соответствии с опубликованными протоколами для стандартной данио хозяйства и технического обслуживания. Сбор эмбрионов после стихийных икры, и держать их в 10 см чашку Петри, заполненную E3 воды (5 мм NaCl, 0,17 мм KCl, 0,33 мМ CaCl 2, 0,33 мМ MgSO 4). Начните МО инъекции сразу 13. Монитор эмбриона морфологии под микроскопом и убедиться, что инъекции МО на одно-стадия ячейку, либо не позднее стадии четыре клетки.
- Трансфер эмбрионов в 10 см чашки Петри с клиновидным агар впадин. Аспирируйте дополнительный E3 воду и слегка нажмите эмбрионов в желобов.
- Манипулировать эмбрионов с микропипеткой для визуализации эмбрионов 1-клеток сцене под рассекает микроскопом. Проникнуть хориона и затем желток придать одну или две капли МО в желток (1 капле = 500 PL). Передача инъекционные эмбрионов в 10 см чашки Петри с E3 воды и инкубировать при 28,5 ° С.
- После инъекции, удалить мертвые эмбрионы и записать число вводимых эмбрионов. Замените воду E3 в блюдо каждый от 24 до 48 ч.
4. Фенотип Спасательные Эксперименты
- Выберите ортолог от других видов, что имеет другой первичный пар оснований ее структуре (обычно 3-7 пар оснований несоответствия) и, следовательно, устойчивых к МО, для спасения. Например, в этом эксперименте мы выбралимыши, потому что последовательность мыши Wnt5a мРНК отличается от данио последовательности.
- Разработка набора праймеров с прямой праймер, начиная с поступательным сайта и обратного праймера в непосредственной близости от конца кодирующей области мРНК. Добавить последовательность промотора Т7 в 5'-конце последовательности праймера вперед. В этом эксперименте мы использовали следующие последовательности праймеров; вперед: 5'-НТО TAC ПКК TCA кту тег GGA кту TGA ТГК ТГК TGA AGC TGA а- 3 'и обратного: 5'-TCA СТТ ГПК ПКК GTA CTG gtc- 3 ».
- Выполнение 50 мкл полимеразной цепной реакции (ПЦР) с набором праймеров (0,5 мкМ каждого праймера) предназначен выше и 0,1 мкг матричной ДНК, содержащей мыши Wnt5a кДНК последовательность со следующей программой: ПЦР 1 цикл при 95 ° С в течение 5 мин; 35 циклов 95 & deg; С (30 сек), 58,5 ° С (30 сек), 72 & deg; С (1 мин); и заключительный шаг удлинение при 72 ° С в течение 7 мин.
- После окончания тон цикл, запустить 2 мкл ПЦР-продукта на 1% агарозном геле, чтобы убедиться, полоса правильный размер. Очищают продукт ПЦР с ПЦР-набор для очистки в соответствии с инструкциями изготовителя. Проверка концентрации ДНК с помощью спектрофотометра. Хранить очищенный продукт ПЦР при -20 ° С или непосредственно использовать в ограничен транскрипции РНК на следующей стадии.
- Обобщить в пробирке с крышкой мРНК с ограничен набором синтеза РНК в соответствии с инструкциями изготовителя. Развести мРНК в 20 мкл РНКазы свободной воды и определить концентрацию. Алиготе РНК и хранить при температуре -80 ° C.
- В день инъекции, подготовить рабочий раствор мРНК с РНКазы свободной стерильной воды. Следует отметить, что 40 мкг, как правило, высокие дозы РНК, при которой не происходит неспецифические или токсические эффекты РНК. Держите рабочий раствор на льду. Вводите эмбриона с МО, а затем спасательную мРНК, или совместно вводить оба вместе. Например, если концентрация мРНК В ведениеред на этапе 4,5 0,6 мкг / мкл, добавить 0,67 мкл мРНК (0,4 мкг) с 4,33 мкл РНКазы свободной воды, чтобы получить конечную концентрацию 0,08 мкг / мкл, а затем одну каплю (500 мкл) из каждой инъекции содержит 40 стр мРНК. Подготовка MO, как описано в шаге 3.
5. Подготовка закачанного эмбрионов для флуоресцентных изображений
- После инкубации при 28,5 ° CO / N, добавить 0,003% N-фенилтиомочевины (ПТУ) в воде E3, чтобы предотвратить меланизации, который влияет на наблюдение структуры предпочки с помощью флуоресцентной микроскопии. Однако, не добавляйте ПТУ до гаструляции, потому что это влияет на раннее эмбриональное развитие.
- В 48 часов после оплодотворения, вручную dechorionate эмбрионов с мелкими пинцетом. Выполняйте съемку 48 и 72 часов после оплодотворения эмбрионов под световым микроскопом рассечение.
ПРИМЕЧАНИЕ: Эти фотографии могут быть приняты без анестезии. - Около 10 минут до визуализации под флуоресцентным микроскопом, обезболить эмбрионов, помещая их в10 см чашку Петри, содержащую 160 мкг / мл забуференного Tricaine. Подождите 5-10 минут, а затем они слегка касались данио, чтобы подтвердить, что они не двигаются, и поэтому анестезия работает.
- После того, как эмбрионы под наркозом, смонтировать их в 3% растворе метилцеллюлозы и ориентировать их в положении лежа при вскрытии микроскопа (пожалуйста, обратитесь к таблице 1).
- Обратите внимание на структуру предпочки под флуоресцентным микроскопом (пожалуйста, обратитесь к таблице 1) и сфотографироваться на разных увеличениях (10x и 20x).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Wnt5a сбить была достигнута путем введения перевод блокирующий МО (август-MO) или экзон / интрон границы сращивания MO (разъем-MO), чтобы эмбрионов данио на стадии одной клетки. Авг-мишени из стартовый кодон и, следовательно, ингибирует матери и зиготического сообщение Wnt5A. Сплайсинга мишени из третьего сращивания доноров сайт и ингибирует только зиготического стенограмму Wnt5A (рис 1а). Ческого увеличения и сращивания морфанты phenocopied друг с другом с несколькими дефектами, в том числе фигурные хвост вниз оси тела и перикарда отека (рис 1б). Мышь Wnt5a мРНК частично спасает morphant фенотип (рис 4б), демонстрируя, что фенотип не из-за офф-целевых эффектов. Tg (wt1b: GFP), трансгенное данио, который выражает GFP, приводимый в действие wt1b промотора, так что GFP повторяет эндогенную экспрессию wt1b, был использован, чтобы очертить pronephric структуру. Tg (WT1B: GFP) рыба показал клубочковой образованию кист после Wnt5A нокдаун в 48 часов после оплодотворения, в то время как эмбрионы управления вводится с фенолом-красный одиночку отображается нормальный pronephric развития, формирования конденсированного клубочек в "U" формы с канальцев, которые проходят в поперечном направлении (рис 2). В 72 часов после оплодотворения, клубочковой структура дальнейшее развитие с легкостью визуализированных сосудистых петель, как с ческого увеличения и сплайсинга МО разработаны кисты в клубочков и проксимальных канальцев (рис 3). H & E окрашивание поперечной гистологических срезов эмбрионов morphant 72 часов после оплодотворения показал, образованию кист, нарушается клубочковой структуры и расширенные почечные канальцы (рис 4А).
Рисунок 1: Морфолино конструкция и малый появление микроскопических эмбрионов данио на 72 ч после оплодотворения (ФВЧ) после инъекциифенол-красный контроля, август-MO, или сплайсинга МО. () Схема данио ген Wnt5A, кодирующую область и регионы должны быть охвачены ческого увеличения и сращивания МО. Wnt5a Авг-MO был разработан для целевой ATG стартовый кодон, чтобы блокировать трансляции белка; сплайсинга МО был разработан для целевой границы экзонов +3 и 4. Сплайс-MO олиго, направленных против любое соединение соединение, как ожидается, генерировать либо полное или частичное одного удаления экзона или полное или частичное одного вставку интронов. Мы решили сбить Wnt5A с одновременно Авг-MO, который влияет на материнскую и зиготического сообщение и сплайсинга МО, который влияет только на зиготического стенограмму, в целях повышения специфичности. (B) эмбрион вводят с фенол-красный ( управление впрыском) показали, нормальная кривизна тела, длину и перикард. Эмбрион вводят с Авг-МО показал вниз вьющиеся структуру хвост и перикарда отек, и эмбрион вводят с сращивания-MO phenocopiedвид эмбриона вводят Авг-МО. Bar = 2 мм.
Рисунок 2: флуоресценции микроскопических появление TG (wt1b: GFP). Данио эмбрионов на 48 часов после оплодотворения после инъекции фенола красного контроль, Wnt5A Авг-MO или Wnt5a сращивания-мо управления впрыском фенол-красный, разработка Предпочка была завершена в 48 HPF. Два конденсированные клубочков и проксимальных канальцах могут быть видны. Формирование кисты можно наблюдать в клубочков как ческого увеличения и сращивания-MO эмбрионов на 48 часов после оплодотворения до конца развития рыбок данио предпочки (бар = 100 мкм).
Рисунок 3: флуоресценции микроскопических появление TG (wt1b: GFP) эмбрионов данио на 72 часов после оплодотворения после инъекции фенола красногоконтроль, Wnt5a Авг-MO или Wnt5a сплайсинга МО. В 72 часов после оплодотворения, клубочковой структура может быть четко визуализируется. В управления впрыском фенол-красный, два конденсированных клубочков и сосудов петли можно наблюдать. Wnt5a нокдаун привело к образованию кист во всех нефрона структур, которые могут быть визуализированы, в том числе клубочков и проксимальных канальцев области (бар = 100 мкм).
Рисунок 4: (а) Н & Е окрашивание поперечных гистологических срезах 72 HPF morphant эмбрионов показал образованию кист, нарушается клубочковой структуры и расширенные почечные канальцы. Arrow: pronephric клубочков; стрелка: расширены и почечных канальцев. Бар = 20 мкм. (B), фенотип августа-МО может быть частично спасен мышью Wnt5a, стойкого к МО-за разницы в структуре первичной пар оснований, Тем самым демонстрируя, что фенотип не из-за офф-целевых эффектов. Разница была статистически значимыми при р <0,05 (* P <0,05 по сравнению с фенол-красный группой; # Р <0,05 по сравнению с Авг-MO 15 нг группы).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Поликистоз почек (ДОК) является одним из ведущих причин терминальной стадии почечной болезни у людей и характеризуется образованием прогрессивной кисты, почечной расширения, и аномального развития канальцев 14. Аутосомно-доминантное PKD (ADPKD) является генетическим заболеванием, в котором мутация или PKD1, кодирование Polycystin-1 (PC1), или PKD2, кодирование Polycystin-2 (PC2), приводит к поликистозных почек. Многие другие гены, особенно те, кодирования белков, обнаруженных в первичной реснички являются думал участвовать в развитии кист почек и до сих пор не существует идеальной инструментом для скрининга эти гены. Мы описываем быстрый и легкий способ наблюдать формирование почек кисты после генной нокдаун у рыбок данио. Этот метод, вероятно могут быть использованы для скрининга других генов-кандидатов ДОК.
Одна из сильных сторон этого метода является его простота. В Tg (wt1b: GFP) у рыбок данио, выражение GFP в клубочки, канальцы и протоки, что делает его особоеLY подходящая модель для изучения всю pronephric структуру почек. Tg (wt1b: GFP) данио позволяет прямой визуализации pronephric структуры и формирование почек кисты после гена сбить. Было подозрение, что Wnt5a нокдаун может привести к PCP направлениями развития дефектов и образование почек кисты у мышей. Тем не менее, глобальная нокаут Wnt5a является послеродовой смертельным для мышей и не могут быть использованы, чтобы наблюдать образование почек кисты после рождения. С помощью метода, описанного здесь, в короткий период времени было установлено, что Wnt5a нокдаун у рыбок данио приводит к образованию почек кисты. С этой результате Следующим шагом будет генерировать в почках конкретные Wnt5A мышах.
Этот метод также имеет ряд ограничений. Трудно оценить эффективность МО без хорошего антитела и, чтобы исключить возможность того, что MO может ингибировать функцию неуместный гена, чтобы вызвать фенотип. Обширная управления experimeНТС обязаны преодолеть эти проблемы. Два различных MOS, Aug-MO и сращивания МО использовались, чтобы оценить Wnt5A нокдауна. Оба морфанты phenocopied друг с другом, а инъекции мРНК мышиной Wnt5a, устойчивы к МОП-за разницы в первичной структуре пар оснований, спасены аномальный фенотип, демонстрируя, что фенотип не из-за "проходит мимо" эффектов МО.
Наша модель показывает, что Wnt5a нокдаун вызывает образование кист почек у эмбрионов данио рерио. Эта методика может быть использована для проверки многие другие гены, которые предположительно вызывает образование почечных кист, как это просто и менее трудоемким. После того, как он показал, что результаты генной мутации в образовании кисты почек у рыбок данио, дальнейшие эксперименты могут быть проведены, чтобы исследовать подробные механизмы формирования почек кисты. В этом эксперименте, так как глобальная Wnt5a нокаутных мышей летальной являются послеродовые и не может быть использована для OBслужить образование почек кисты после рождения, следующим шагом будет генерировать в почках конкретных Wnt5a мышах с использованием системы Cre-LOX.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана NIH (DK093625 с ЛГ, и DK069909 и DK047757 в лдх) и VA (Merit Award I01BX000820 в лдх). Мы хотели бы поблагодарить д-ра Майкла обновления и доктора Джи Не при Университете Пенсильвании, данио рерио Core, для обеспечения необходимой поддержки.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.5% Phenol-Red | Sigma | P0290 | Color indicator for injection |
| Morpholino | Genn Tools, LLC | (customized) | Customized designed to the gene of interest |
| Pre-pulled needle | Tritech Research | MINJ-PP | If large amount of needle is required, you can also purchase a needle puller and prepare the needle in the lab |
| T7 mMessage Kit | Ambion | 1344 | For in vitro transcription to make capped mRNA for rescue experiment |
| N-Phenylthiourea | Sigma | P7629 | For prevention of melanization |
| Tricaine | Sigma | A5040 | Also called ethyl 3-aminobenzoate, for zebrafish anesthesia |
| Methyl Cellulose | Sigma | M-0387 | For position of zebrafish |
| QIAquick PCR Purification Kit | Qiagen | 28104 | For purification of PCR product for cap RNA synthesis. |
| dNTP mix | Promega | U1511 | For PCR |
| Tag DNA Polymerase | Invitrogen | 10342-053 | For PCR |
| NanoDrop spectrophotometer | Thermo Scientific | ND-1000 | For measure morpholino and RNA concentration |
| Air Compressor | Werther International, Inc. | Panther Compact 106 | Air source for injection |
| Pico micro-injection pump | World Precision Instruments Inc | PV830 Pnematic PicoPump | Other types of microinjection system can be used. |
| Micro-manuplator | World Precision Instruments Inc | MMJR | Right-handed (MMJL for left handed) |
| Needle holder | World Precision Instruments Inc | 5430-ALL | To hold needle for micromanipulation |
| Dumont Tweezers | Fine Surgical Tools | 11253-20 | For breaking off the needle tip |
| Dissecting microscope | Leica M205C | For observing and imaging zebrafish embryos | |
| Fluorscence microscope | Zeiss Axio Obserer D1m | For imaging zebrafish pronephros | |
| Capillary tube (I.D. 0.15 mm) | VitroCom | CV1525Q-100 | For measure the volume of each injected drop |
References
- Choi, S. Y., et al. Cdc42 deficiency causes ciliary abnormalities and cystic kidneys. J Am Soc Nephrol. 24 (9), 1435-1450 (2013).
- Hostetter, C. L., Sullivan-Brown, J. L., Burdine, R. D. Zebrafish pronephros: a model for understanding cystic kidney disease. Dev Dyn. 228 (3), 514-522 (2003).
- Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man. Anat Rec. 232 (2), 514-201 (1992).
- Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. Nephron number in patients with primary hypertension. N Engl J Med. 348 (2), 101-108 (2003).
- Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice. Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).
- Gerlach, G. F., Wingert, R. A. Kidney organogenesis in the zebrafish: insights into vertebrate nephrogenesis and regeneration. Wiley Interdiscip Rev Dev Biol. 2 (5), 559-585 (2013).
- Igarashi, P. Overview: nonmammalian organisms for studies of kidney development and disease. J Am Soc Nephrol. 16 (2), 296-298 (2005).
- Zhou, W., Boucher, R. C., Bollig, F., Englert, C., Hildebrandt, F. Characterization of mesonephric development and regeneration using transgenic zebrafish. Am J Physiol Renal Physiol. 299 (5), 1040-1047 (2010).
- Liu, S., et al. A defect in a novel Nek-family kinase causes cystic kidney disease in the mouse and in zebrafish. Development. 129 (24), 5839-5846 (2002).
- Slanchev, K., Putz, M., Schmitt, A., Kramer-Zucker, A., Walz, G. Nephrocystin-4 is required for pronephric duct-dependent cloaca formation in zebrafish. Hum Mol Genet. 20 (16), 3119-3128 (2011).
- Huang, L., et al. The role of Wnt5a in prostate gland development. Dev Biol. 328 (2), 188-199 (2009).
- Andre, P., et al. The Wnt coreceptor Ryk regulates Wnt/planar cell polarity by modulating the degradation of the core planar cell polarity component Vangl2. J Biol Chem. 287 (53), 44518-44525 (2012).
- Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F.
- Torres, V. E., Harris, P. C., Pirson, Y. Autosomal dominant polycystic kidney disease. Lancet. 369 (9569), 1287-1301 (2007).
