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Immunology and Infection

छवि आधारित फ्लो तकनीक granulocyte फंक्शन में परिवर्तन का मूल्यांकन करने के लिए Published: December 26, 2014 doi: 10.3791/52201
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1
1Applied Physiology Laboratory, University of North Texas

Introduction

Granulocytes हमलावर एंटीजन के खिलाफ रक्षा की पहली पंक्ति प्रदान करता है जो शरीर की सहज प्रतिरक्षा प्रणाली, के एक घटक का प्रतिनिधित्व करते हैं। Granulocyte समारोह का आकलन करने के लिए पिछले विधियों granulocytes 1-4 कैसे बदल दिया है यह मुश्किल सामूहिक रूप से पता लगाने के लिए कर रही है, अलग तरीकों का उपयोग कर phagocytosis क्षमता या ऑक्सीडेटिव फट पर जोर दिया। प्रवाह के क्षेत्र में अग्रिम cytometry के एक उच्च throughput ढंग 5 में कोशिकाओं की उच्च संकल्प, बहु रंग इमेजिंग में सक्षम benchtop उपकरणों के उत्पादन में हुई है। पारंपरिक प्रवाह के साथ इमेजिंग गठबंधन करने की क्षमता cytometry के तरीकों के cytometry के मौजूदा प्रवाह के भीतर नया और प्रतिरक्षा प्रणाली के बारे में नई जानकारी निकालने के लिए आवश्यक तकनीकी मंच प्रदान करता है कि एक उन्नति का प्रतिनिधित्व करता है।

पिछले दस वर्षों में, दूसरों के बीच में हमारी प्रयोगशाला, गौर से विभिन्न पोषण और व्यायाम उपचार patte के प्रभाव पर ध्यान केंद्रित किया गयासहज प्रतिरक्षा समारोह 6-9 पर RNS। इस पांडुलिपि में प्रदर्शन विधि क्लीनिकल इम्यूनोलॉजी के क्षेत्र के भीतर व्यावहारिक निहितार्थ हैं। वर्तमान पद्धति एक साथ जीवाणु कणों और ऑक्सीडेटिव फट के phagocytosis को मापने के लिए छवि आधारित फ्लो की शक्ति का लाभ उठाता है। इस दृष्टिकोण का प्रयोग, एक विश्लेषण की छवि के आधार पर हिस्सा द्वारा प्रदान की चर का उपयोग कर सक्रिय granulocytes को अलग करने में सक्षम है। इन कैंपेन्स व्यक्ति granulocytes पर सेलुलर छवियों का आकलन करने के बाद ही पहचाना जा रहे थे। इसके अलावा परख ऊष्मायन समय तीन सक्रियण कैंपेन्स 10 के बीच संक्रमण को प्रभावित किया। इस प्रकार, यह कई ऊष्मायन बार के उपयोग के लिए एक विधि एक विशिष्ट प्रायोगिक इलाज के बाद granulocyte समारोह में परिवर्तन का परीक्षण करने की अनुमति दे सकता है कि प्रशंसनीय है। इस पांडुलिपि के प्रयोजन के लिए एक साथ oxidat साथ phagocytosis को मापने के लिए छवि आधारित फ्लो का उपयोग करके आकलन granulocyte समारोह की एक विधि प्रदर्शित करने के लिए किया गया थाIve फट।

Protocol

नोट: इस विधि में वर्णित सभी रक्त संग्रह की प्रक्रिया हेलसिंकी की घोषणा के अनुसार आयोजित की और मानव विषयों के लिए UNT संस्थागत समीक्षा बोर्ड (आईआरबी) द्वारा अनुमोदित किया गया। सभी विषयों के रक्त वे सामान्य शरीर के वजन के, जाहिरा तौर पर स्वस्थ थे कि यह सुनिश्चित करने के लिए वर्तमान विधि में इस्तेमाल किया गया था, जो संग्रह, और रोग मुक्त करने के लिए लिखित सहमति दे दी है।

1. अभिकर्मक स्रोत एवं तैयारी

  1. इस्तेमाल की CD66b-एपीसी (क्लोन # G10F5; लोमो = 1: 50) और CD45-APCeFluor780 (क्लोन # 2D1; = 1 लोमो: 50) इस परख के लिए।
    नोट: पूर्व के अध्ययन के लिए, CD45 और CD66b एंटीबॉडी इष्टतम कमजोर पड़ने का निर्धारण करने के titered थे कि अन्य ल्यूकोसाइट्स से स्पष्ट रूप से हल हो granulocytes (CD45 / + 66b +) (CD45 / + 66b-) 11। धुंधला करने के लिए पतला एंटीबॉडी के अलावा पर ट्यूब में अंतिम कमजोर पड़ने 875 था।
  2. खरीद और शेयर एस गल ऑरियस pHrodo लाल रंग के साथ लेबल bioparticles। एक मीटर की एकाग्रता में सस्पेंडबाँझ पीबीएस में मिलीलीटर प्रति bioparticles के जी। परख में इस्तेमाल किया जब तक विभाज्य पतला bioparticles और दुकान -20 डिग्री सेल्सियस पर जमे हुए।
  3. ग्राम / मिलीलीटर 10 की एक अंतिम एकाग्रता DMSO में, ऑक्सीजन मुक्त कण (यानी, ऑक्सीडेटिव फट) की उपस्थिति में फ्लोरोसेंट ethidium ब्रोमाइड में बदल जाती है जो dihydroethidium (DHE), भंग।
  4. 200 मिलीग्राम / एमएल और / क्रमशः ml 17.5 मिलीग्राम की एक दो कदम कमजोर पड़ने में बाँझ पीबीएस के साथ (निर्दिष्ट परख ऊष्मायन अवधि निम्न अतिरिक्त phagocytosis को रोकने के लिए प्रयोग किया जाता है) एन ethylmaleimide मिलाएं। परख में, 15 मिमी के अंतिम एकाग्रता का उपयोग करें। एन ethylmaleimide विगलन जब एन ethylmaleimide समाधान में नहीं रहना है, के रूप में, एक 37 डिग्री सेल्सियस गर्मी ब्लॉक का उपयोग करें।
  5. अंतिम निर्धारण कदम के बाद, परमाणु डीएनए दाग 7AAD का उपयोग करें। पहले इसके लिए, बाँझ पीबीएस के साथ शेयर 7AAD 01:10 पतला।

2. रक्त नमूना संग्रह

  1. एक हे / एन तेजी से (> 8hr) और abstenti निम्नलिखित प्रयोगशाला पर पहुंचने के लिए विषयों से पूछोशारीरिक गतिविधि से (> 12 घंटा) पर।
  2. एक शराब प्रस्तुत करने का पैड के साथ त्वचा की सफाई के बाद, एक परिधीय हाथ की नस में एक बाँझ रक्त संग्रह सुई डालें।
  3. व्यावसायिक रूप से सोडियम हेपरिन से भर रहे हैं कि खाली ट्यूब में रक्त ले लीजिए।
  4. संग्रह के बाद, विषय के हाथ करने के लिए एक चिपकने वाली पट्टी लागू होते हैं।
  5. 10 बार मिश्रण है और फिर विश्लेषण जब तक एक घुमाव पर जगह रक्त नलियों पलटना।

3. Phagocytosis परख तकनीक

  1. पिघलना S.aureus bioparticles (आरटी), DHE (आरटी), और एन ethylmaleimide (37 डिग्री सेल्सियस)।
  2. बाँझ हुड में काम कर रहा है, जबकि चार व्यक्ति 1.2 मिलीलीटर ट्यूबों के लिए S.aureus bioparticles 20 एल जोड़ें।
  3. Bioparticles युक्त प्रत्येक ट्यूब DHE के 40 एल जोड़ें।
  4. धीरे ट्यूब के नीचे में अभिकर्मकों इकट्ठा करने के लिए बेंच की सतह पर ट्यूबों नल।
  5. Bioparticles और DHE से भर दिया गया है कि प्रत्येक ट्यूब मिश्रित पूरे रक्त की 100 एल जोड़ें।
  6. किसी भी दूषित रक्त को दूर करने के लिए एक कपास इत्तला दे दी applicator के साथ ट्यूबों के अंदर किनारे साफ कर लें।
  7. खून के बाद इसके अलावा तीन चक्रों के लिए रक्त और अभिकर्मकों मिश्रण करने के लिए सेट एक इलेक्ट्रॉनिक pipet के साथ खून और अभिकर्मकों मिलाएं।
  8. एक बर्फ की बाल्टी में परख ट्यूबों प्लेस और प्रकाश से बचाने के लिए कवर किया।
  9. 10, 20, और 40 मिनट के लिए परख ट्यूबों सेते हैं। सभी परख नलियों एक ही समय में खत्म सुनिश्चित करने के लिए 40 मिनट ट्यूब के साथ शुरू करो।
  10. पिघलना एन ethylmaleimide 37 डिग्री सेल्सियस मनका स्नान में।
  11. Pipet प्रत्येक परख नली में (1.4 में ऊपर वर्णित है) एन ethylmaleimide के 15 एल, 30 मिनट के लिए सेते हैं।
  12. Pipet CD66b-एपीसी के 10 एल और CD45-APCeFluor780 (1.1 में ऊपर वर्णित है) पतला एंटीबॉडी के 10 एल, 60 मिनट के लिए सेते हैं।
  13. Pipet प्रत्येक परख नली में WBC तय / आरबीसी lyse समाधान के 750 एल, 60 मिनट के लिए सेते हैं।
  14. अपकेंद्रित्र परख ट्यूब (400 XG पर 10 मिनट) सेल गोली लेने के लिए।
  15. वैक्यूम एक अवशिष्ट FL छोड़ रहा है, WBC lyse / आरबीसी ठीक समाधान महाप्राणसेल गोली से ऊपर यूआईडी मात्रा (100 एल)।
  16. पतला 7AAD (1.5 में ऊपर वर्णित) समाधान और प्रत्येक परख नली में पीबीएस के 50 एल के pipet 10 एल।
  17. एक रेफ्रिजरेटर में एक पन्नी में परख ट्यूबों, लपेटो ट्यूब पर अंशांकन मोती (~ 25 एल) प्रत्येक परख ट्यूब, जगह टोपी के ड्रॉप, और जगह जोड़ें।
  18. कोशिकामापी छवि आधारित प्रवाह में नमूना ट्यूब लोड और पूर्व निर्धारित मापदंडों का उपयोग कर 3000 granulocyte घटनाओं की एक न्यूनतम जमा: autosampler, नीला (488 एनएम, 60 मेगावाट), लाल (640 एनएम, 100 NW), एसएससी (785 एनएम; 8.5 मेगावाट) पराबैंगनीकिरण (चित्रा 1)।

चित्रा 1
चित्रा 1. अधिग्रहण विधि एवं टेम्पलेट। नमूने (ए) कोशिकामापी एक छवि आधारित प्रवाह पर हासिल किया गया। अधिग्रहण के दौरान, CD66b-एपीसी बनाम उज्ज्वल क्षेत्र पहलू अनुपात की डॉट भूखंडों usin नुकीला अंशांकन मोतियों से अलग granulocytes करने के लिए उत्पन्न किया गयाजी प्रेरित वी। 100.2.292.0 सॉफ्टवेयर (बी)। लाल, (640 एनएम, 100 NW), एसएससी (785 एनएम, 8.5 मेगावाट) लेज़रों, 5000 granulocytes की एक न्यूनतम नीले एक autosampler, (60 मेगावाट 488 एनएम) का उपयोग करते हुए प्रत्येक नमूने के लिए हासिल किया गया। Histograms के एक नंबर लेजर सेटिंग और डेटा के अन्य पहलुओं को इकट्ठा करने की निगरानी के लिए अधिग्रहण के दौरान मौजूद हैं कि कृपया ध्यान दें। इन histograms के सभी वैकल्पिक और प्रयोगशाला मानक संचालन प्रक्रिया गुणवत्ता नियंत्रण के रूप में उन्हें आवश्यकता है केवल जरूरत है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

4. नमूना अधिग्रहण और विश्लेषण

  1. Imaged फ़ाइलों को क्षतिपूर्ति (सीआईएफ) कच्चे छवि फ़ाइलें (राइफल्स) के लिए एक मुआवजा मैट्रिक्स लागू करते हैं और बनाने के लिए विचारों सॉफ्टवेयर की स्वचालित सॉफ्टवेयर मुआवजा जादूगर का प्रयोग करें।
  2. विचारों सॉफ्टवेयर में अलग-अलग सीआईएफ फ़ाइलों को लोड और granulocyte कैंपेन्स पहचानने के लिए निम्न भूखंडों उत्पन्न: उज्ज्वल क्षेत्र ढाल आरएमएस (2A चित्रा) के लिए एक हिस्टोग्राम का उपयोग करते हुए ध्यान में माना जाता था कि कोशिकाओं की पहचान करने के लिए प्रारंभिक फाटकों स्थापित करना। एक संदर्भ के मानक के रूप में unstimulated नियंत्रण का उपयोग कर प्रत्येक रोगी के नमूने के लिए इस दृढ़ संकल्प करना।
  3. बनाम उज्ज्वल क्षेत्र क्षेत्र (चित्रा 2B) उज्ज्वल क्षेत्र पहलू अनुपात (चौड़ाई बनाम सेल ऊंचाई के अनुपात) के एक डॉट साजिश का उपयोग कर मलबे और दोहरी से अलग स्वेटर कोशिकाओं को माध्यमिक भूखंडों का प्रयोग करें। एक संदर्भ के मानक के रूप में unstimulated नियंत्रण का उपयोग कर प्रत्येक रोगी के नमूने के लिए इस दृढ़ संकल्प करना।
  4. कोशिकाओं की एक साफ आबादी पहचान की गई थी एक बार, सकारात्मक (CD45 / + 66b +) granulocytes की पहचान के लिए CD66b बनाम CD45 (चित्रा -2) के एक डॉट साजिश की स्थापना। एस के लिए उज्ज्वल विस्तार तीव्रता का एक बेटी साजिश (चित्रा 3) बनाएँ ऑरियस बनाम ऑक्सीडेटिव फट (DHE, वाई अक्ष) के लिए उज्ज्वल विस्तार तीव्रता (एक्स अक्ष) सक्रिय granulocytes के सबसेट की पहचान करने के लिए। BR लीजिएचैनल 1 और 9 में ight क्षेत्र छवियों, 2 चैनल में bioparticles, DHE चैनल 4 में, 7AAD चैनल 5 में, CD66b चैनल 11, और CD45 में चैनल 12 में।

चित्रा 2
चित्रा 2. विश्लेषण टेम्पलेट। यह आंकड़ा फोकस (ए) में थे कि कोशिकाओं की पहचान करने के लिए उत्पन्न किया गया कि भूखंडों की श्रृंखला, एकल कक्षों (बी), granulocytes (सी)। अतिरिक्त भूखंडों सक्रिय granulocytes बनाम निष्क्रिय granulocytes के तीन सबसेट की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया गया। अधिग्रहीत छवि फ़ाइलों के सभी विश्लेषण विचारों v.6 सॉफ्टवेयर का उपयोग कर पूरा किया गया। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Representative Results

छवि आधारित फ्लो का उपयोग करके हमें तीन अलग अलग सक्रियण कैंपेन्स (चित्रा 3) में सक्रिय granulocytes का एक समरूप जनसंख्या को अलग करने की अनुमति दी। इस विधि में, सबसे प्रभावी तरीका तीन सक्रियण कैंपेन्स ऑक्सीडेटिव फट बनाम (एस ऑरियस) (DHE) (; चित्रा 4 चित्रा 3) phagocytosis के लिए उज्ज्वल विस्तार तीव्रता की साजिश रचने के द्वारा होता है हल करने के लिए। इसके अलावा, विचारों सॉफ्टवेयर में सह स्थानीयकरण जादूगर का उपयोग अत्यधिक सक्रिय granulocytes की एक बानगी संकेत है जो एक साथ phagocytosis और oxidative फट की उपस्थिति की मात्रा का ठहराव के लिए अनुमति देगा।

चित्रा 3
सक्रिय granulocyte कैंपेन्स के चित्रा 3. पहचान। सेल सतह मार्कर (CD45 / + 66b +) का उपयोग granulocytes की पहचान करने के बाद, एक बेटी की साजिश उज्ज्वल विस्तार इरादे के साथ उत्पन्न किया गयाऑक्सीडेटिव फट के लिए उज्ज्वल विस्तार तीव्रता बनाम phagocytosis के लिए चर्चाएं। इस दृष्टिकोण, निष्क्रिय (बैंगनी), कम सक्रिय का प्रतिशत (लाल, ए), मध्यम सक्रिय का प्रयोग (नीले, बी), और उच्च सक्रिय (पीला, सी) granulocytes निर्धारित किया गया था। इस gating तकनीक को भी विभिन्न सक्रिय granulocyte कैंपेन्स के रिश्तेदार बहुतायत पर परख ऊष्मायन समय के प्रभाव का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। "उच्च सक्रिय" granulocytes के सर्वोच्च प्रतिशत 40 मिनट ऊष्मायन के बाद उपस्थित थे। अधिग्रहीत छवि फ़ाइलों के सभी विश्लेषण विचारों v.6 सॉफ्टवेयर का उपयोग कर पूरा किया गया। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

सक्रिय granulocytes के तीन अलग कैंपेन्स की उपस्थिति का प्रदर्शन करने के लिए इसके अलावा, यह परख ऊष्मायन समय प्रत्येक सक्रिय granulocytes सबसेट के रिश्तेदार बहुतायत प्रभावित है कि प्रदर्शन किया गया। विशेष रूप से, 40 मिनट इंकubation "उच्च सक्रिय" granulocytes का सबसे बड़ा प्रतिशत में हुई। कम से कम तीन परख ऊष्मायन durations के शामिल करके इसे एक दिया चिकित्सीय उपचार granulocytes के अस्थायी सक्रियण स्थिति बदल कैसे निर्धारित करने के लिए संभव हो सकता है। इस phagocytosis और oxidative फट के एक साथ माप के एक समारोह के रूप में विभिन्न सक्रिय granulocyte सबसेट की पहचान करने के लिए छवि आधारित फ्लो का उपयोग कर पहली बार प्रकाशित विधि है।

चित्रा 4
सेलुलर मार्करों चित्रा 4. प्रतिनिधि छवियाँ। उच्च सक्रिय (ए) के रूप में वर्गीकृत कोशिकाओं की एक छवि गैलरी, मध्यम-सक्रिय (बी), और कम सक्रिय (सी) इस आंकड़े में प्रस्तुत किया है। S.aureus bioparticles Ch03 में हैं , ऑक्सीडेटिव फट CD66b में है, ओर तितर बितर Ch06 में है, नाभिक के लिए 7AAD Ch05 में है, Ch04 में हैCh11, और CD45 Ch12 में है। इसके अलावा, ऑक्सीडेटिव फट बनाम phagocytosis (Ch03) (Ch04) के सह-स्थानीयकृत मर्ज छवि प्रदर्शित किया जाता है। मर्ज छवि में पीले रंग के क्षेत्रों कि phagocytosis और oxidative फट एक ही समय में एक ही शारीरिक अंतरिक्ष में होने वाली हैं निरूपित। इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Discussion

वर्तमान विधि 1,3,4,12-14 प्रवाह cytometry का उपयोग granulocyte समारोह के आकलन के लिए मौजूदा तरीकों की एक शोधन का प्रतिनिधित्व करता है। इस परख की महत्वपूर्ण कदम bioparticles और DHE के साथ खून का नमूना का उचित मिश्रण से संबंधित हो जाते हैं। अधूरा मिश्रण गलत परिणाम में परिणाम होगा। पूर्ण मिश्रण महत्वपूर्ण है, मिश्रण विधि प्रकृति में कोमल होना चाहिए। यह एक मिश्रण समारोह के बजाय एक भंवर मिक्सर के साथ एक इलेक्ट्रानिक pipet का उपयोग पूरा किया जा मिश्रण का सुझाव दिया है। परख में एक और महत्वपूर्ण कदम हमेशा परख नली के ऊपरी आधे contaminating कोई खून नहीं है सुनिश्चित करने के लिए है। इस अवशिष्ट रक्त एक बाँझ कपास इत्तला दे दी applicator का उपयोग कर हटाया जा सकता है। असफलता संयुक्त राष्ट्र के lysed लाल रक्त कोशिकाओं के साथ अंतिम परख तैयारी दूषित हो सकता है ऐसा करने के लिए, क्योंकि पूरी तरह हटाने के लिए महत्वपूर्ण है।

इस विधि उपयुक्त मुआवजा नियंत्रण का उपयोग करने से पहले सपा के लिए नियंत्रित करने के लिए जोड़ा जाना चाहिएgranulocyte समारोह के विभिन्न पहलुओं की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया अभिकर्मकों के बीच ectral ओवरलैप। इस विधि के लिए, मुआवजा नियंत्रण 40 मिनट परख ऊष्मायन सुझाव दिया और फिर एक एकल मार्कर के साथ लेबलिंग किया गया है कि रक्त के नमूनों को इकट्ठा शामिल है (यानी, ई कोलाई, DHE, आदि)। लेबलिंग के बाद, एक सकारात्मक घटनाओं एकत्र कर रहे हैं और एक मुआवजा मैट्रिक्स विचारों विश्लेषण सॉफ्टवेयर में एक स्वचालित विजार्ड उत्पन्न होता है। यह इस परख के लिए इस्तेमाल किया जाता है, तो उचित मुआवजा नियंत्रण उचित परख प्रदर्शन सुनिश्चित करने के लिए पूरा कर रहे हैं कि महत्वपूर्ण है।

विश्लेषण उज्ज्वल विस्तार तीव्रता आबादी सबसे अलग चर रहा है कि पहचान के लिए और भी ज्यादा ओवरलैप ऑक्सीडेटिव फट और phagocytosis संकेतों के बीच मौजूद है कैसे पहचान करने के लिए सुविधा खोजक और सह स्थानीयकरण जादूगरों का उपयोग कर पूरा किया है। विशेष रूप से, छवि आधारित cytometry का उपयोग तीन कैंपेन्स में सक्रिय granulocytes अलग करने की क्षमता प्रदान की है। टीउसकी सबसेट टूटने ऑक्सीडेटिव फट बनाम phagocytosis की उज्ज्वल विस्तार तीव्रता का उपयोग कर निर्धारित किया गया था। इन विलक्षण सेल कार्यों की जांच करने के अलावा, एक ही संरचनात्मक स्थान (सह स्थानीयकरण) में एक ही समय में दोनों घटनाओं का प्रदर्शन किया है कि कोशिकाओं की पहचान की गई। "उच्च सक्रिय" सबसेट में गिर गई है कि granulocytes phagocytosis और oxidative फट के बीच लगातार सह स्थानीयकरण दिखा दिया कि केवल फेनोटाइप थे। सक्रिय granulocyte कैंपेन्स की इस पहचान को समस्या निवारण की जरूरत है, जहां सबसे बड़ा क्षेत्र है। एक नया उपयोगकर्ता विचारों में नमूना प्रक्रिया कार्यप्रवाह समझने के लिए समय लेने के लिए और इमेजिंग घटक का उपयोग सेल आबादी gating के यांत्रिकी समझने के लिए यह बहुत महत्वपूर्ण है। एक उपयोगकर्ता बनाने के लिए प्राप्त कर सकते हैं कि अन्य संशोधनों के वैकल्पिक या अतिरिक्त परख ऊष्मायन बार के चयन में शामिल हैं। वर्तमान पद्धति 10-40 मिनट के durations के उपयोग से पता चलता है; हालांकि, प्रयोगात्मक मॉडल के आधार पर इस विधि है, जहांइस्तेमाल किया जाएगा, यह अब परख durations के चयन करने के लिए आवश्यक हो सकता है। इस तरह के एक संशोधन के एक व्यक्ति के आधार पर मूल्यांकन करने की आवश्यकता होगी।

इसके अलावा यह परख ऊष्मायन की अवधि तीन सक्रिय कैंपेन्स की उपस्थिति पर एक महत्वपूर्ण प्रभाव पड़ता है कि निर्धारित किया गया था। इस रिपोर्ट में वर्णित दृष्टिकोण पहले से granulocyte समारोह 3,4,13,15 के संबंध में प्राप्त किया जा सकता है क्या जानकारी का एक विस्तार का प्रतिनिधित्व करता है। अन्य प्रयोगशालाओं उन्मुक्ति और रोग 15-17 के लिए एक व्यापक मूल्यांकन के भाग के रूप में granulocyte समारोह में परिवर्तन का आकलन करने के महत्व का प्रदर्शन किया है। इस परख की क्षमता होने के बावजूद यह सीमाओं के बिना नहीं है। प्रमुख सीमाओं में से एक उच्च throughput नमूना प्रसंस्करण से जुड़े लागत और समय की मांग है। एक अध्ययन के डिजाइन एक भी दिन में नमूने की एक बड़ी संख्या की आवश्यकता है, इन संसाधित करने के लिए मुश्किल हो सकता है। प्रसंस्करण इलेक्ट्रॉनिक pipets और dispensers के उपयोग के द्वारा सुव्यवस्थित है,लेकिन इन महंगे होते हैं और हर प्रयोगशाला में जरूरी उपलब्ध नहीं हैं।

अनुसंधान के हमारे क्षेत्र व्यायाम और आहार की आदतों प्रतिरक्षा प्रणाली स्वास्थ्य को प्रभावित करने और 6,8-10,18-20 कैसे कार्य के एक अध्ययन पर केंद्रित है। इस तरह के उद्देश्यों से मानव स्वास्थ्य के क्षेत्रों की एक किस्म के लिए महत्वपूर्ण व्यावहारिक निहितार्थ हैं। Phagocytosis समारोह की निगरानी उपचार के परिणामों के लिए महत्वपूर्ण है, जहां व्यायाम और पोषण संबंधी प्रभाव के अध्ययन से परे इस पांडुलिपि में प्रदर्शन phagocytosis विधि क्लीनिकल इम्यूनोलॉजी के अन्य क्षेत्रों में उपयोगी हो सकता है। वर्तमान परख क्षमता के साथ प्रतिरक्षाविज्ञानी assays के कोशिकामापी एक छवि आधारित प्रवाह से कर सकते हैं हो सकता है कि अद्वितीय इमेजिंग जानकारी के फायदे लेने के द्वारा फिर से आविष्कार किया है कि कई का पहला है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Vacutainers BD Life Sciences used for blood collection
WBC Fixative / RBC Lysis solution eBioscience 00-5333-57
CD66b-APC eBioscience clone G10F5
CD45-APCeFluor780 eBioscience clone 2D1
S. aureus bioparticles Life Technologies A10010
dihydroethidium Sigma-Aldrich D7008
N-ethylmalemide Sigma-Aldrich 4259
7AAD EMD Millipore
Hematology Analyzer Mindray BC-3200
96-channel pipet Integra Biosciences ViaFlo
Bead Bath Incubator LabArmour BeadBath
Imaging Flow Cytometer EMD Millipore Amnis FlowSight
INSPIRE Software EMD Millipore Amnis INSPIRE
IDEAS Software EMD Millipore Amnis IDEAS
X-Pierce Piercable Plate Sealer Excel Scientific, Inc. X-Pierce
Dell Precision Workstation Dell Computers Various Used for IDEAS analysis

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References

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