We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.
Высококачественная серозный рак яичников (HGSC), причиной распространенных перитонеального метастазов, по-прежнему имеет чрезвычайно плохой прогноз; меньше, чем 30% женщин живы через 5 лет после постановки диагноза. Сальник является предпочтительным местом формирования HGSC метастазов. Несмотря на клиническое значение этого микросреды, вклад сальника жировой ткани яичников прогрессии рака остается недостаточно изученной. Сальника жировой необычна тем, что она содержит структуры, известные как белесые пятна, которые состоят из B, T, и NK-клеток, макрофагов и клеток-предшественников, окружающих плотные гнезда сосудов. Белесые пятна играют ключевую роль в физиологических функций сальника, которые необходимы для перитонеального гомеостаза. Мы показали, что белесые пятна также способствовать рака яичников метастатического колонизации перитонеального жировой, ключевой шаг в развитии перитонеальных метастазов. Здесь мы опишем подходы мы разработали, чтобы оценить и количественно белесые пятна в заitoneal жировой и изучать их функциональное вклад в яичников клеток рака метастатического колонизации сальника тканей и в естественных условиях и экс естественных условиях. Эти подходы к обобщению дополнительные модели мыши и клеточные линии, что позволяет изучение формирования метастазов рака яичников от первоначального локализации клеток в молочных местная структур к развитию распространенных перитонеального метастазов.
В отличие от большинства солидных опухолей, метастазов из высококачественной серозного рака яичников (HGSC) ограничены в брюшную полость 1. Таким образом, эффективные методы лечения перитонеального потенциально может контролировать или искоренить HGSC. В настоящее время стандарт терапевтический подход хирургического циторедукции в комбинации с химиотерапией 1-3. К сожалению, подавляющее большинство пациентов испытывают и поддаваться осложнений рецидива заболевания. Эти мрачные статистические данные показывают, необходимость в улучшении понимания метастатического колонизации, процесс, посредством которого раковые клетки локализуются в, использовать и размножаться в тканях хозяина, чтобы сформировать метастазы 2.
Сальник является предпочтительным рано сайт HGSC метастазов 4-7. В отличие от других перитонеального жировой, сальниковой жировой ткани содержит необычные иммунные структуры, известные как белесые пятна, которые содержат B, T, и NK-клеток и макрофагов, которые играют ключевую роль в перитонеальных homeosТАСИС 8,9. В дополнение к их физиологических функций, мы обнаружили, что белесые пятна играют активную роль в метастатическим раком яичников колонизации 4. В экспериментальных метастазов анализов, SKOV3ip.1, CaOV3 и HeyA8 (человека) и ID8 (мышиного; C57BL / 6) клеток рака яичников быстро домой, чтобы белесые пятна, предполагая, что клетки движутся к секретируемого хемотаксиса фактора. Интересно, что раковые клетки не заселяют перитонеальный жировой хватает белесые пятна (то есть, гонадных и матки жир) 4.
Для того, чтобы определить механизмы, регулирующие молочный пятна колонизации, мы оптимизировали модели ксенотрансплантатов, которые позволяют допрос клеточных и молекулярных событий в течение времени, конечно метастатического колонизации 4. Конкретный преимущество подходов, описанных в настоящем документе, его акцент на архитектуре и функции тканей, что позволяет пользователям проверять гипотезы в полностью интегрирована в естественных условиях и бывших естественных модели мetastatic колонизация 4,10. Сравнивая локализации раковых клеток и рост в перитонеальных жировых депо, которые либо содержат или отсутствие белесые пятна, исследователи могут проверить относительный вклад (ы) адипоцитов и клеток в молочных пятен на жилье и прогрессивного роста клеток рака яичников в физиологически соответствующих тканей.
Разработка терапии для целевой ячейки, распространяемых требует механическое понимание метастатического колонизации, критический первый шаг в развитии перитонеального болезни. Для решения этих проблем мы фиксировали подходы, которые могут быть использованы для различить,…
The authors have nothing to disclose.
Supported by grants from the Department of Defense (W81XWH-09-1-0127), the NIH (2-R01-CA089569), the Elsa U. Pardee Foundation, a Marsha Rivkin Center for Ovarian Cancer Research Pilot Study Award, and generous philanthropic support from Section of Urology and Section of Research in the Department of Surgery, University of Chicago.
Dissection Tools | Fine Science Tools | NA | |
Geimsa | Fluka/Sigma Aldrich | 48900 | |
5% Formalin | Sigma | HT501320 | |
DMEM | Corning | 10-013-CV | |
Trypsin | Gibco | 25200-056 | |
PBS | Corning | 21-040-CV | Without calcium and Magnesium |
26 gauge needle | BD | 329652 | |
BSA | Sigma | A7906 | |
Collagenase | Worthington | LS004196 | |
Stomacher | Seward Labsystems | Stomacher 80 Biomaster | |
Microstomacher bag | Stomacher Lab Systems | BA6040/Micro | |
ACK Lysis Buffer | Gibco | A10492-01 | |
Millicell culture plate insert | Millipore | PICM01250 | |
Cell-Tak | BD | 354240 |