We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.
Yüksek dereceli seröz over kanseri (HGSC), yaygın periton metastazı nedeni, son derece kötü prognoz devam eder; Kadınların% 30'dan azının 5 yıl teşhisten sonra hayatta. Omentum HGSC metastaz oluşumunun tercih edilen bir edilir. Bu mikro-klinik önemine rağmen, yumurtalık kanseri ilerlemesine omental adipoz dokudan katkısı örüntüsü oldukça kalır. Bu damar yoğun yuvalar çevreleyen süt B, T oluşmaktadır noktalar, ve NK hücreleri, makrofajlar ve projenitör hücreleri olarak bilinen yapılar içeren, omental adipoz olağan değildir. Sütlü noktalar periton homeostazı için gerekli olan omentum fizyolojik fonksiyonları, önemli bir rol oynamaktadır. Bu süt noktalar da periton adipoz yumurtalık kanseri, metastatik kolonizasyonunu periton metastaz gelişimini önemli bir adım teşvik göstermiştir. Burada yaklaşımlar biz değerlendirmek ve başına sütlü noktalar ölçmek için geliştirilen açıklamakadipoz itoneal ve in vivo ve ex vivo hem de omental doku yumurtalık kanseri hücresi metastatik kolonizasyon işlevsel katkı çalışma. Bu yaklaşımlar, böylece yaygın periton metastazı gelişimine sütlü nokta yapılarına hücrelerin ilk lokalizasyonu yumurtalık kanseri metastazı oluşumu çalışma sağlayan, fare modelleri ve hücre hatları ek genelleştirilebilir.
En katı tümörlerin aksine, yüksek dereceli seröz yumurtalık kanseri (HGSC) için metastazlar periton boşluğuna 1 ile sınırlıdır. Böylece, etkili periton tedaviler potansiyel kontrol etmek veya ortadan kaldırmak HGSC olabilir. Şu anda, standart bir tedavi yaklaşımı kemoterapi 1-3 ile kombine cerrahi sitoredüksiyon olduğunu. Ne yazık ki, hastaların büyük çoğunluğu deneyim ve hastalığın tekrarlama komplikasyonlara yenik. Bu kasvetli istatistikler metastatik kolonizasyon geliştirilmiş anlayış ihtiyacını göstermek, süreç hangi kanser hücreleri, kullanmak ve metastaz 2 oluşturmak için konak dokuları içinde çoğalmaya lokalize.
Omentum metastazı HGSC 4-7 tercih edilen erken bir sitedir. Diğer periton adipoz aksine, omentum yağ dokusu, periton homeos kilit rol oynayan B, T ve NK hücreleri ve makrofajlar bulunur sütlü noktalar, olarak bilinen sıradışı bağışıklık yapıları içeriyortasis 8,9. Fizyolojik fonksiyonlara ek olarak, süt noktalar, yumurtalık kanseri, metastatik kolonizasyon 4 aktif bir rol oynadığı bulunmuştur. Hızlı ana süt noktalar yumurtalık kanser hücreleri, salgılanan bir kemotaktik faktör doğru hareket ettiğini göstermektedir; deneysel metastaz tahlilleri, SKOV3ip.1, CaOV3 ve HeyA8 (insan) ve ID8 (C57BL / 6 fare) kullanılmaktadır. İlginçtir, kanser hücreleri sütlü noktalar (yani, gonad ve rahim yağ) 4 eksik periton adipoz kolonize yok.
Sütlü nokta kolonizasyonu düzenleyen mekanizmaları belirlemek amacıyla, biz metastatik kolonizasyon 4 süresi boyunca hücresel ve moleküler olayların sorgulama sağlayan ksenogref modellerini optimize ettik. Bu tarifnamede tarif edilen yaklaşımların özel bir avantajı, tam olarak, in vivo olarak entegre edilmiştir ve m ex vivo modeller kullanıcıların hipotezleri test sağlayan doku mimarisi ve işlevi üzerinde vurgulamasıdıretastatic kolonizasyon 4,10. Içeren veya sütlü noktalar eksikliği ya periton yağ depolarında kanser hücre lokalizasyonu ve büyümeyi karşılaştırarak, araştırmacılar arasında ve fizyolojik ilgili dokularda yumurtalık kanseri hücrelerinin ilerleyici büyüme için sütlü noktalar içinde adipositlerde ve hücrelerin göreceli katkısını (ler) test edebilirsiniz.
Development of therapies to target disseminated cells requires a mechanistic understanding of metastatic colonization, the critical first step in the development of peritoneal disease. To address these issues we report approaches that can be used to discern how the omentum’s unique tissue composition and architecture promote ovarian cancer metastatic colonization. Distinguishing features of our approach are: 1) the focus on early events in the colonization process; 2) comparison of milky spot-containing an…
The authors have nothing to disclose.
Supported by grants from the Department of Defense (W81XWH-09-1-0127), the NIH (2-R01-CA089569), the Elsa U. Pardee Foundation, a Marsha Rivkin Center for Ovarian Cancer Research Pilot Study Award, and generous philanthropic support from Section of Urology and Section of Research in the Department of Surgery, University of Chicago.
Dissection Tools | Fine Science Tools | NA | |
Geimsa | Fluka/Sigma Aldrich | 48900 | |
5% Formalin | Sigma | HT501320 | |
DMEM | Corning | 10-013-CV | |
Trypsin | Gibco | 25200-056 | |
PBS | Corning | 21-040-CV | Without calcium and Magnesium |
26 gauge needle | BD | 329652 | |
BSA | Sigma | A7906 | |
Collagenase | Worthington | LS004196 | |
Stomacher | Seward Labsystems | Stomacher 80 Biomaster | |
Microstomacher bag | Stomacher Lab Systems | BA6040/Micro | |
ACK Lysis Buffer | Gibco | A10492-01 | |
Millicell culture plate insert | Millipore | PICM01250 | |
Cell-Tak | BD | 354240 |