We outline a protocol that implements both in vivo and ex vivo approaches to study ovarian cancer colonization of peritoneal adipose tissues, particularly the omentum. Furthermore, we present a protocol to quantitate and analyze immune cell-structures in the omentum known as milky spots, which promote metastases of peritoneal adipose.
عالية الجودة سرطان المبيض المصلي (HGSC)، وسبب الانبثاث البريتوني واسعة النطاق، لا يزال لديهم التكهن سيئة للغاية؛ أقل من 30٪ من النساء على قيد الحياة بعد 5 سنوات من التشخيص. الثرب هو الموقع المفضل لتكوين ورم خبيث HGSC. وعلى الرغم من أهمية السريرية لهذا المكروية، ومساهمة من الثرب الأنسجة الدهنية لتطور سرطان المبيض لا تزال الكافي في. الدهنية ثربية غير عادي لأنه يحتوي على هياكل تعرف باسم البقع حليبي، والتي تتألف من B، T، والخلايا القاتلة الطبيعية، الضامة، والخلايا الاصلية المحيطة أعشاش كثيفة من الأوعية الدموية. البقع حليبي تلعب دورا رئيسيا في وظائف فيزيولوجية من الثرب، وهي مطلوبة من أجل التوازن البريتوني. لقد أثبتنا أن البقع حليبي أيضا تعزيز المبيض سرطان الاستعمار النقيلي من الدهنية البريتوني، خطوة رئيسية في تطوير الانبثاث البريتوني. نحن هنا وصف نهج ضعنا لتقييم وتحديد المواقع حليبي في نصيبitoneal الدهنية ودراسة مساهمة الوظيفية للخلية سرطانية في المبيض الاستعمار النقيلي من الأنسجة الثرب على حد سواء في الجسم الحي وخارج الحي. هذه الأساليب قابلة للتعميم على نماذج الماوس وخطوط الخلايا إضافي، مما يمكن دراسة المبيض تشكيل الانبثاث سرطان من توطين الأولي من الخلايا لهياكل بقعة حليبي لتطوير الانبثاث البريتوني واسعة النطاق.
وخلافا لمعظم الأورام الصلبة، الانبثاث من الدرجة العالية سرطان المبيض المصلي (HGSC) تقتصر على التجويف البريتوني 1. وبالتالي، يمكن أن العلاجات البريتوني فعالة يحتمل أن تكون مراقبة أو استئصال HGSC. حاليا، وهو النهج العلاجي هو معيار cytoreduction الجراحية جنبا إلى جنب مع العلاج الكيميائي 1-3. للأسف، فإن الغالبية العظمى من المرضى تجربة وتستسلم لمضاعفات تكرار المرض. وتشير هذه الإحصاءات الكئيبة على الحاجة إلى تحسين فهم الاستعمار النقيلي، العملية التي الخلايا السرطانية توطين ل، والاستفادة، وتتكاثر داخل أنسجة المضيف لتشكيل النقائل 2.
الثرب هو موقع أوائل فضل من HGSC ورم خبيث 4-7. خلافا لغيرها الدهنية البريتوني، الأنسجة الدهنية الثرب تحتوي هياكل المناعي غير العادية المعروفة باسم البقع حليبي، والتي تحتوي على B، T، والخلايا القاتلة الطبيعية والضامة، والتي تلعب دورا رئيسيا في homeos البريتونيtasis 8،9. بالإضافة إلى وظائفها الفسيولوجية، وجدنا أن البقع حليبي تلعب دورا نشطا في سرطان المبيض الاستعمار المنتشر 4. في المقايسات الانبثاث التجريبية، SKOV3ip.1، CaOV3، وHeyA8 (الإنسان) وID8 (الفئران، C57BL / 6) خلايا سرطان المبيض بسرعة موطن البقع حليبي، مما يشير إلى أن الخلايا تتجه نحو عاملا الكيميائي تفرز. ومن المثير للاهتمام، وسرطان الخلايا لا يستعمر الدهنية البريتوني تفتقر البقع حليبي (أي الغدد التناسلية والدهون الرحم) 4.
من أجل تحديد الآليات التي تنظم حليبي بقعة الاستعمار، قمنا الأمثل نماذج طعم أجنبي التي تمكن من استجواب الأحداث الخلوية والجزيئية على مدار الساعة من الاستعمار المنتشر 4. وهناك ميزة معينة من النهج الموصوفة هنا هو التركيز على بنية الأنسجة وظيفة، والتي تمكن المستخدمين لاختبار الفرضيات في متكاملة في الجسم الحي وخارج الحي نماذج مetastatic (4،10) الاستعمار. بمقارنة توطين الخلايا السرطانية ونمو في مستودعات الدهون البريتوني التي تحتوي على أي أو تفتقر إلى البقع حليبي، تمكن الباحثون من اختبار المساهمة النسبية (ق) من الخلايا الشحمية والخلايا داخل البقع حليبي إلى السكن والنمو التدريجي للخلايا سرطان المبيض في الأنسجة ذات الصلة من الناحية الفسيولوجية.
تطوير علاجات لاستهداف خلايا منتثرة يتطلب فهم الآلية الاستعمار المنتشر، فإن الخطوة الأولى الحاسمة في تطور مرض البريتوني. لمعالجة هذه القضايا ونحن التقرير النهج التي يمكن استخدامها لتبين كيف تكوين الأنسجة فريد الثرب والهندسة المعمارية تعزيز المبيض سرطان ا…
The authors have nothing to disclose.
Supported by grants from the Department of Defense (W81XWH-09-1-0127), the NIH (2-R01-CA089569), the Elsa U. Pardee Foundation, a Marsha Rivkin Center for Ovarian Cancer Research Pilot Study Award, and generous philanthropic support from Section of Urology and Section of Research in the Department of Surgery, University of Chicago.
Dissection Tools | Fine Science Tools | NA | |
Geimsa | Fluka/Sigma Aldrich | 48900 | |
5% Formalin | Sigma | HT501320 | |
DMEM | Corning | 10-013-CV | |
Trypsin | Gibco | 25200-056 | |
PBS | Corning | 21-040-CV | Without calcium and Magnesium |
26 gauge needle | BD | 329652 | |
BSA | Sigma | A7906 | |
Collagenase | Worthington | LS004196 | |
Stomacher | Seward Labsystems | Stomacher 80 Biomaster | |
Microstomacher bag | Stomacher Lab Systems | BA6040/Micro | |
ACK Lysis Buffer | Gibco | A10492-01 | |
Millicell culture plate insert | Millipore | PICM01250 | |
Cell-Tak | BD | 354240 |