Abstract
باستخدام أجنة الدجاج فمن الممكن لاختبار مباشرة آثار إما عوامل النمو أو مثبطات محددة من مسارات إشارات على التعبير الجيني وتفعيل مسارات نقل الإشارة. هذه التقنية تتيح إيصال إشارات الجزيئات في مراحل نمو محددة بدقة لأوقات محددة. بعد هذه الأجنة يمكن حصاده ودراسة التعبير الجيني، على سبيل المثال عن طريق التهجين الموضعي، أو تفعيل مسارات نقل الإشارة لاحظ مع المناعية في.
في هذا الفيديو حبات الهيبارين غارقة في FGF18 أو AG الخرز 1-X2 غارقة في U0126، مثبط مجاهدي خلق، والمطعمة في برعم الطرف في البيضة. هذا يدل على أن FGF18 يدفع التعبير عن MyoD وERK الفسفرة وكلا الذاتية وFGF18 الناجم عن التعبير MyoD وتحول دون U0126. يمكن الخرز غارقة في خصم حمض الريتينويك تحفيز سابق لأوانه MyoD تحريض من قبل FGF18.
هذا النهج يمكن أن يكون لناإد مع مجموعة واسعة من عوامل النمو المختلفة، ومثبطات وتتكيف بسهولة إلى الأنسجة الأخرى في الجنين النامي.
Introduction
وقد وفرت أجنة الطيور أداة قوية لدراسة تطوير لسنوات عديدة 1. واحدة من خصائصها الأكثر فائدة هي أنها سهلة نسبيا للتلاعب. تنمية الخارجية يجعل من الممكن لفتح البيض للوصول إلى الجنين وأداء micromanipulations المختلفة بما في ذلك أمثلة مثل نظام الوهم السمان-فرخ الكلاسيكية لدراسة مصير خلية 2،3، وحقن الفيروسات القهقرية لoverexpression في أنسجة معينة أثناء نمو 4،5 والثقافة يزدرع لتحديد مصادر الإشارات التنموية 6. وفي الآونة الأخيرة الوهم ولدت بين المضيفين الخالي من الملصقات مع الطعوم من خط الدجاج المعدل وراثيا معربا عن GFP أظهرت أن الجمع بين التطعيم الكلاسيكية والتعديل الوراثي يمكن أن توفر معلومات هامة في التنمية 7،8.
جعلت السهولة التي يمكن التلاعب بها الجنين الطيور يجعلها نموذجا ممتازا لدراسة أطرافهمتنمية 9. وقد تم تطبيق عوامل النمو محددة لأطرافه النامية في الجسم الحي دورا أساسيا في تحديد العوامل التي تغير الطرف الزخرفة 10،11 ويستمر في تقديم رؤى في هذه العملية 12. كما تم استخدام هذا النهج لدراسة العوامل التي تنظم تنمية العضلات وكشفت عن العديد من الأدوار إشارات مثل Wnts 13، 14 أفضل الممارسات الإدارية وHGF 15.
مؤخرا تم استخدام هذه التقنية للتحقيق في إشارات التحكم عضلي التعبير الجيني في برعم الطرف، وأظهرت أن التفاعلات بين FGF18 وحمض الريتينويك يمكن السيطرة على توقيت MyoD التعبير 16. باستخدام مزيج من عوامل النمو والجزيئات الصغيرة التي يمكن تحميلها على حبات ثم المطعمة مباشرة إلى أنسجة معينة في مراحل نمو محددة يعطي فرصة للتدخل في أي وقت تقريبا والمنطقة خلال التنمية. وقد استخدم هذا إنفيstigate العديد من العمليات بما في ذلك الجسيدة الزخرفة 17،18، مواصفات العصبية 19، العصبية الهجرة قمة 20 و محور التمديد 21.
نحن هنا تصف طريقة لتطعيم حبات غارقة في أي عوامل النمو أو مثبطات في تطوير أطرافه الدجاج. وقد استخدم هذا لتحديد آثار هذه الإشارات على تكون العضل عن طريق تحليل العضلات التعبير جين معين مع التهجين في الموقع. وصفنا ترقيع باستخدام الهيبارين غارقة الخرز، والتي تستخدم لعوامل النمو، أو AG الخرز 1-X2 لجزيئات صغيرة مسعور مثل حمض الريتينويك أو مثبطات جزيء صغير من مسارات إشارات محددة. ومع ذلك الخرز الأخرى المتاحة والتي تم استخدامها لتقديم كل عوامل النمو FGFs 22 و Shh على 23 أيضا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
بيان الأخلاق: كل هذه التجارب تتبع رعاية الحيوان ومبادئ توجيهية أخلاقية من جامعة نوتنغهام.
1. إعداد الهيبارين الخرز للتطعيم
- تغسل حبات الهيبارين بدقة في برنامج تلفزيوني قبل الاستخدام. ملاحظة: يمكن تخزين حبات عند 4 درجة مئوية كما الطين في برنامج تلفزيوني.
- اختيار حبات لتطعيم عن طريق نقلهم من الأسهم مع ماصة 20 ميكرولتر إلى قطرة 1 مل من برنامج تلفزيوني. ثم استخدام micropipette معينة إلى 2 ميكرولتر لنقل الخرز إلى قطرة 20 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني في طبق بتري 3 سم. اختيار حبات استنادا إلى حجم و، وذلك باستخدام جهاز ستيريو تشريح المجهر، ونقل حبات المختارة مع طرف P2 ماصة. تلك حوالي 100 ميكرون قطرها مثالية.
- إزالة PBS من الخرز. إزالة معظم السائل مع 20 ميكرولتر ماصة والسائل المتبقي عن طريق عمل شعري مع الساعات غرامة ملقط. ملاحظة: من المهم لإزالة أكبر قدر ممكن حتى النمو الفعليلا المخفف ص عندما يتم إضافته إلى الخرز.
- ماصة عامل النمو مباشرة على الخرز. لFGF18 إضافة 0.5 ميكرولتر من FGF18 المؤتلف أعيد تشكيلها في 0.5 ملغ / مل في 0.1٪ BSA في برنامج تلفزيوني. ضع عدة قطرات من الماء حول حواف الطبق لمنع السائل من التبخر.
- احتضان حبات لمدة 1 ساعة على RT. إزالة قطرات من الماء من الطبق مع ماصة باستور ووضعها على الجليد جاهزة للتطعيم.
- إذا لزم الأمر (لحبات شفافة) نقل 4-5 حبات إلى 2٪ الفينول الأحمر قبل التطعيم للمساعدة في تصور لهم. شطف في برنامج تلفزيوني قبل ان ينتقل الى الجنين.
2. إعداد AG الخرز 1-X2 للتطعيم
- قبل استخدام derivatize الخرز مع 0.2 N حمض الفورميك.
- للقيام بذلك استخدام ملعقة لنقل الخرز لأنبوب microcentrifuge 1.5 مل. إضافة 1ml من 0.2 N حمض الفورميك وتغسل على منصة تهتز لمدة 1 ساعة.
- ثم إزالة حمض الفورميك مع ماصة P1000 واستبدالها مع 1مل من الماء. يغسل لمدة 1 ساعة وكرر ست مرات لإزالة ما تبقى من حمض الفورميك.
- إزالة السائل المتبقي مع ماصة P1000 وتخزين حبات عند 4 درجات مئوية. ملاحظة: ليس من الضروري إزالة جميع المياه المتبقية في هذه المرحلة.
- إزالة بيليه صغيرة من الخرز حوالي 5-10 حجم ميكرولتر من المخزون باستخدام ملعقة صغيرة في طبق بتري 3 سم وإضافة 1 مل من DMSO (أو أي مذيب يذوب الدواء في). ملاحظة: يجب أن توفر عدة مئات من الخرز من خلالها تحديد تلك من الحجم الصحيح.
- ثم استخدم ماصة P2 معينة إلى 2 ميكرولتر لنقل حبات من حوالي 100 ميكرون قطرها إلى انخفاض 20 ميكرولتر من المذيب في طبق بتري آخر 3 سم.
- إزالة المذيب مع 20 ميكرولتر ماصة وأي مذيب المتبقية مع ماصة 2 ميكرولتر. استبدال 20 ميكرولتر من المخدرات ليتم تطبيقها.
ملاحظة: للحصول على تناسق حل المخدرات في تركيز 100 ميكرومتر في DMSO (أو التي من أي وقت مضى تستخدم المذيبات)،قسامة 20 ميكرولتر وتخزينها في -80 ° C إلى بعض مثبطات جزيء صغير غير مستقرة وأنه من الأفضل لتجنب تكرار تجميد الذوبان. إذا لزم الأمر ثم تمييع المخدرات إلى التركيز المطلوب قبل تمرغ الخرز. قد تحتاج إلى أن تحدد تجريبيا لكل المخدرات تركيزات فعالة. - احتضان لمدة 1 ساعة. حماية من الضوء حيث أن العديد من هذه الجزيئات خفيفة حساسة.
- قبل التطعيم نقل 4-5 حبات مع ماصة P2 معينة إلى 2 ميكرولتر في 20 ميكرولتر من 2٪ أحمر الفينول يذوب في الماء. تنفيذ هذه الخطوة باستخدام مجهر تشريح ستيريو لتصور الخرز. إزالة حبة واحدة مع الساعات غرامة ملقط أو حلقة الأسلاك وشطف في برنامج تلفزيوني قبل ان ينتقل الى الجنين. لا تترك حبات في 2٪ الفينول الأحمر لأكثر من 15 دقيقة قبل الاستخدام وهذا يمكن أن يسبب فقدان النشاط.
3. إعداد إبر التنغستن
- قطع أسلاك التنجستن ناعم إلى 3-4 أطوال سم. أدخل قطعة واحدة من السلك في نهايةماصة باستير الزجاج وتذوب في موقد بنسن لإصلاح في الموقف. إعداد ما يصل إلى 10 الإبر لضمان عدم وجود قطع الغيار إذا كانت معطوبة أثناء الاستخدام.
- ضع نهاية السلك إلى لهب موقد اللحام والاحتفاظ بها هناك حتى يضيء التنغستن الأبيض وطرف حاد (حوالي 2-3 دقائق). ملاحظة: خلال استخدام الإبرة يمكن تنظيفها وإعادة شحذ في موقد اللحام حسب الحاجة.
ملاحظة: يمكن أيضا أن هذه الإبر يمكن استخدامها لجعل الحلقات لنقل الخرز. تلمس برفق الإبرة إلى مقاعد البدلاء، وسوف ينحني لتشكيل حلقة.
4. الأجنة التحضير لالخرزة الطعوم
- احتضان البيض مع نهاية حادة تصل حتى يصلوا إلى المرحلة المطلوبة (3-5 أيام لمعظم التلاعب برعم الطرف). باستخدام الملقط حادة الحنفية على نهاية حادة لكسر قذيفة ثم استخدام ملقط لإزالة القشرة وفضح الجنين. ضمان غشاء قشر البيض تتم إزالة أيضا.
ملاحظة: 1-2 مل من برنامج تلفزيوني ويمكن أن يضاف مع ماصة باستور للمساعدةهذا إذا العصي الغشاء إلى الصفار. بلطف ماصة PBS على سطح الصفار، فهم الغشاء مع ملقط، مع الحرص على عدم الإضرار صفار البيض، وسحب بلطف بعيدا عن البيض. - إزالة ما يصل إلى 5 مل من الزلال من البيضة مع حقنة 10 مل و إبرة 19 G. يستغرق سوى بقدر اللازمة لضمان الجنين لا يجعل الاتصال مع الشريط تستخدم لختم البيض عن إزالة كميات أكبر يمكن أن تقلل من معدلات البقاء على قيد الحياة الجنين.
- لتصور الجنين إضافة 5-6 قطرات من الفنانين الحبر الهند إلى 15 مل من PBS تحتوي على 100 U البنسلين و 0.1 ملغ الستربتوميسين / مل. حقن 0.5-1 مل مباشرة تحت الجنين مع حقنة 1 مل و إبرة 25 G.
- إضافة 2-3 مل من برنامج تلفزيوني مع 1٪ مصل العجل الجنين و 100 U البنسلين و 0.1 ملغ الستربتوميسين / مل داخل البويضة لضمان الجنين لا يذوى. عن طريق شحذ الساعات ملقط إزالة الغشاء المحي وفتح السلى على براعم الأطراف النامية. ضمان الجنين لا تجف و، إذا لزم الأمر، إضافة المزيد من PBS / FCS.
ملاحظة: براعم الأطراف يمكن رؤيتها بوضوح حيث الامتداد تقرن على الجناح الجنين. في هذه المراحل الجنين سوف تتحول مثل الجانب الأيمن عادة العلوي. ونتيجة لذلك فمن عادة أسهل في الكسب غير المشروع الخرز في أطرافه اليمنى واستخدام تلك اليسار والضوابط المقابل. - استخدام سلك التنغستن شحذ إلى إجراء شق في برعم الطرف حيث سيتم زرع حبة. تجنب قطع على طول الطريق من خلال برعم الطرف حيثما أمكن ذلك على الرغم من أن في مراحل الشابة وهذا أمر صعب.
ملاحظة: في الأجنة القديمة (HH المرحلة 22 وما فوق) فمن الممكن لتحديد مناطق معينة من برعم الطرف للتطعيم ولكن في المراحل الشابة وهذا هو أكثر صعوبة كما برعم الطرف نفسها صغيرة. ومن المهم أيضا أن نتذكر أن برعم الطرف سينمو الماضي حبة المطعمة ذلك، وخاصة في المراحل الشابة، سوف تبقى حبة في الطرف القريب. - التقاط حبة من أي عامل النمو أو المخدرات باستخدام إما إضافي وا على ما يرامtchmakers ملقط أو حلقة مصنوعة من إبرة التنغستن. إذا كان قد تم غارقة حبة في أي DMSO أو الفينول الأحمر، وشطف في برنامج تلفزيوني قبل التقدم إلى الجنين. نقل حبة إلى الجنين مع ملقط / سلك حلقة. ثم استخدم سلك التنغستن شحذ لإدراج حبة في شق.
- إضافة 1-2 مل من PBS / FCS إلى البويضة التأكد من أن الجنين يتم الاحتفاظ رطب ولكن تجنب تطبيق مباشرة على الجنين نفسه وهذا يمكن أن يضر الأجنة وتسبب حبة يتم إقصاؤه. ختم البيض مع الشريط والعودة إلى الحاضنة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
في مرحلة HH لم يتم أعرب 21 MyoD في تطوير myoblasts أطرافه على الرغم من تلطيخ يمكن أن ينظر إليه في بضعة عضلية من و somites النامية (الشكل 1A). ويبين الشكل 1B الموقع التهجين لMyoD 6 ساعات بعد الكسب غير المشروع FGF18 حبة. هو فعل MyoD في myoblasts قريبة من حبة في حين ليس هناك تعبير في الطرف المقابل. شارك في تطعيم حبة غارقة في U0126، مثبط محددة من مجاهدي خلق، وكتل FGF18 تحريض MyoD (الشكل 1C). تطعيم بالمثل حبة U0126 في سمو مرحلة 21 وتبحث عن MyoD التعبير بعد 24 ساعة يقلل من التعبير الذاتية للMyoD مقارنة مع الطرف المقابل غير المعالجة (الشكل 1D، E).
في براعم الأطراف في سمو مرحلة 19 FGF18 لا يسبب MyoD (الشكل 1F). ومع ذلك شارك في تطعيم حبات غارقة في FGF18 وخصم حمض الريتينويك BMS493 يمكن التغلب على هذا ويتم الكشف عن MyoD خارج الرحم (فيقوإعادة 1G)
للتأكد من أن FGF18 يتصرف من خلال أجنة الجماعة وكانت تحصد 1 ساعة بعد حبة الكسب غير المشروع وimmunostained لERK فسفرته، والهدف من مجاهدي خلق. الشكل 1H يظهر صورة brightfield من FGF18 حبة 1 ساعة بعد التطعيم بينما يبين الشكل 1I أن FGF18 يدفع الفسفرة السريع من ERK حول حبة المطعمة. ويبين الشكل 1J تراكب من هذه الصور. حبات السيطرة غارقة في 0.1٪ BSA لا لحث ERK الفسفرة (الشكل 1K، L، M)
وينظم الشكل 1. MyoD التعبير في أطرافه التي كتبها FGF18 وحمض الريتينويك من خلال ERK الفسفرة. أطرافه السيطرة Unmanipulated في سمو مرحلة 21 لا تعبر عن MyoD (A) ولكن تم الكشف عن التعبير السابق لأوانه 6 ساعة بعد التطعيم وحبة FGF18 (B). تطعيم-شارك FGF18 وU0126 الخرز بنات هذا الاستقراء (C). وينظر الذاتية التعبير MyoD في سمو مرحلة 21 (D) ولكن هذا يتم حظر عن طريق تطعيم حبات غارقة في U0126 (E). في براعم الأطراف السابقة لا يسببها MyoD من السابق لأوانه التعبير FGF18 (F) ولكن يسببها الخرز تطعيم شارك غارقة في FGF18 وخصم حمض الريتينويك BMS493 (G). حبات FGF18 المطعمة إلى أطرافه HH21 تحفز ERK الفسفرة بعد 1 ساعة: brightfield (H)، فلوري (I) واندمجت (J) وصور من الطرف HH21 immunostained للمكافحة phosphoERK. حبات السيطرة غارقة في BSA لا تحث على ERK الفسفرة: (K)، فلوري (L) ودمج (M) وصور من الطرف HH21 immunostained للمكافحة phosphoERK. تم تعديل هذا الرقم من موك وآخرون، 2014 (16). النجمة السوداء: الخرز الهيبارين. ASTE الأبيضالمخاطر: AG الخرز 1-X2. وتشير السهام خارج الرحم التعبير MyoD في براعم الأطراف. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
استخدام الطعوم حبة تطبيقها مباشرة على الأنسجة النامية في البيضة هو أداة قوية لتشريح دور عامل النمو الإشارات خلال تطوير يعطي سيطرة لا مثيل لها خلال المرحلة التنموية التي يتم تطبيقها ومدة التعرض.
اختيار حبة لكل نوع من جزيء مهم. الجزيئات الكارهة للماء صغيرة، مثل مثبطات الموصوفة هنا وحمض الريتينويك، وعادة ما تربط جيدا لAG derivatized الخرز 1-X2 على الرغم من أنه من الضروري لاختبار فعالية كل المانع على هذه الخرز تجريبيا. وبالمثل، لعوامل النمو قد يكون من الضروري لاختبار أنواع مختلفة من حبة. بعض حبات شفافة وهكذا يمكن أن يكون من الصعب تصور خلال التلاعب ولكن العلاج قصيرة مع الفينول الأحمر تليها شطف في برنامج تلفزيوني والتسمية لهم لفترة طويلة بما فيه الكفاية لأداء الكسب غير المشروع.
عند إعداد حبات، وخاصة تلك التي كانت غارقة مع المانعالصورة، فمن المهم لحمايتهم من ضوء إلى أقصى حد ممكن. أثناء علاجهم الأولية وخلال التلاعب التي يجب تغطيتها وإزالتها فقط عندما يتم نقله الخرز. فمن الأفضل لاستخدام قسامات إذابة طازجة حيث أن بعض هذه المواد الكيميائية غير مستقرة ويمكن أن تعطي نتائج سلبية مضللة إذا لم يتم تخزينها بشكل صحيح. ومن المهم أيضا عدم ترك لهم تمرغ في الفينول الأحمر لفترة طويلة جدا قبل التطعيم وهذا يمكن أن يقلل من فعالية حبة.
التركيزات المستخدمة لهذه الطعوم حبة، كل عوامل النمو والمخدرات، وغالبا ما تكون عالية جدا. تنقع حبات FGF18 في تركيز 0.5 ملغ / مل وحبات لمثبطات جزيء صغير غالبا ما غارقة في تركيز 100 ميكرومتر. على الرغم من أن هذا هو أعلى بكثير من التراكيز المستخدمة عادة لعلاج الخلايا في حل هذا أمر ضروري لأن المبالغ من عوامل النمو والمخدرات التي تمتصها حبات ثم أطلق سراحه يصعب قياس أجناس مباشرة ولكن يفترضالشركة المصرية للاتصالات مستويات أقل من ذلك في الجسم الحي. ونتيجة لذلك مجموعة من تركيزات يجب أن يتم اختبار لكل جزيء تستخدم لتحديد الجرعة الفعالة.
هذه التقنية هي تنطبق أيضا على مجموعة واسعة من الأنسجة الأخرى، مثل القطع البدنية النمطية 24، خلال التنمية ويمكن استخدامها على الأجنة في البيضة أو في الثقافات، مثل الثقافة EC 25. ومن الممكن أيضا أن تنمو الخلايا المستزرعة التي تفرز عوامل النمو محددة الكريات ومن ثم يمكن المطعمة في الأجنة النامية في نفس الطريق 26.
مزيج من الوصول، وسهولة التلاعب والتكلفة المنخفضة يجعل أجنة الدجاج نموذجا ممتازا للتنمية. كما يتم تطبيق التقنيات المعدلة وراثيا بشكل متزايد على أنواع الطيور وخطوط المعدلة وراثيا كل من الدجاج 7 والسمان 27 تصبح متاحة مزيج من الجنين الكلاسيكية التقنيات مع هذه الطيور تعديل تطعيم تقدم بالفعل رؤى جديدة في دياإلنمائية 8،28.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Heparin acrylic beads | Sigma | H5263 | The acrylic-heparin beads used have been discontinued. However a replacement product is available, Heparin agarose beads, cat no H6508. These are transparent so harder to work with but can be stained with phenol red in the same way as AG 1-X2 beads, |
| AG 1-X2 beads | Bio-Rad | 140-1231 | |
| Affi Gel blue beads | Bio-Rad | 153-7301; 153-7302 | These beads have been used with a range of growth factors including Shh and FGFs and can be used to replace heparin beads |
| FGF18 | Peprotech | 100-28 | Resuspend in PBS with 0/1% BSA, prepare single use aliquots of 0.5-1ul and store at -80°C. Batches and suppliers can vary so different concentrations should be tested to determine an effective dose. |
| U0126 | Cell Signalling | 9903 | Make to 20mM stock in DMSO and store in single use aliquots at -80°C. Protect from light. |
| BMS-493 | Tocris Biosciences | 3509 | Resuspend in DMSO and store in single use aliquots at -80°C. Protect from light. |
| Black Indian ink | Windsor and Newton | 5012572003384 (30 ml) | While alternatives to this product are available care should be taken as some inks are toxic to embryos |
| Tungsten wire, 0.1 mm dia. 99.95% | Alfa Aesar | 10404 | |
| Penicillin / streptomycin | Sigma | P0781 | Dilute 100X in PBS/ink and PBS/FCS |
References
- Davey, M. G., Tickle, C. The chicken as a model for embryonic development. Cytogenetic Genome Research. 117, 231-239 (2007).
- Le Douarin, N. The Nogent Institute--50 years of embryology. International Journal of Developmental Biology. 49, 85-103 (2005).
- Le Douarin, N. M. The avian embryo as a model to study the development of the neural crest: a long and still ongoing story. Mechanisms of Development. 121, 1089-1102 (2004).
- Bell, E., Brickell, P. Replication-competent retroviral vectors for expressing genes in avian cells in vitro and in vivo. Molecular Biotechnology. 7, 289-298 (1997).
- Abu-Elmagd, M., et al. Wnt/Lef1 signaling acts via Pitx2 to regulate somite myogenesis. Developmental Biology. 337, 211-219 (2010).
- Munsterberg, A. E., Lassar, A. B. Combinatorial signals from the neural tube, floor plate and notochord induce myogenic bHLH gene expression in the somite. Development. 121, 651-660 (1995).
- McGrew, M. J., et al. Efficient production of germline transgenic chickens using lentiviral vectors. EMBO Reports. 5, 728-733 (2004).
- Valasek, P., et al. Cellular and molecular investigations into the development of the pectoral girdle. Developmental Biology. 357, 108-116 (2011).
- Tickle, C. The contribution of chicken embryology to the understanding of vertebrate limb development. Mechanisms of Development. 121, 1019-1029 (2004).
- Riddle, R. D., Johnson, R. L., Laufer, E., Tabin, C. Sonic hedgehog mediates the polarizing activity of the ZPA. Cell. 75, 1401-1416 (1993).
- Tickle, C., Alberts, B., Wolpert, L., Lee, J. Local application of retinoic acid to the limb bond mimics the action of the polarizing region. Nature. 296, 564-566 (1982).
- Rosello-Diez, A., Torres, M. Regulative patterning in limb bud transplants is induced by distalizing activity of apical ectodermal ridge signals on host limb cells. Developmental Dynamics. 240, 1203-1211 (2011).
- Anakwe, K., et al. Wnt signalling regulates myogenic differentiation in the developing avian wing. Development. 130, 3503-3514 (2003).
- Amthor, H., Christ, B., Weil, M., Patel, K. The importance of timing differentiation during limb muscle development. Current Biology. 8, 642-652 (1998).
- Brand-Saberi, B., Muller, T. S., Wilting, J., Christ, B., Birchmeier, C. Scatter factor/hepatocyte growth factor (SF/HGF) induces emigration of myogenic cells at interlimb level in vivo. Developmental Biology. 179, 303-308 (1996).
- Mok, G. F., Cardenas, R., Anderton, H., Campbell, K. H. S., Sweetman, D. Interactions between FGF18 and retinoic acid regulate differentiation of chick embryo limb myoblasts. Developmental Biology. 396, 214-223 (2014).
- Abou-Elhamd, A., Cooper, O., Münsterberg, A. Klhl31 is associated with skeletal myogenesis and its expression is regulated by myogenic signals and Myf-5. Mechanisms of Development. , 126-852 (2009).
- Schmidt, M., Tanaka, M., Munsterberg, A. Expression of (beta)-catenin in the developing chick myotome is regulated by myogenic signals. Development. 127, 4105-4113 (2000).
- Stavridis, M. P., Lunn, J. S., Collins, B. J., Storey, K. G. A discrete period of FGF-induced Erk1/2 signalling is required for vertebrate neural specification. Development. 134, 2889-2894 (2007).
- Martinez-Morales, P. L., et al. FGF and retinoic acid activity gradients control the timing of neural crest cell emigration in the trunk. Journal of Cell Biology. 194, 489-503 (2011).
- Olivera-Martinez, I., Storey, K. G. Wnt signals provide a timing mechanism for the FGF-retinoid differentiation switch during vertebrate body axis extension. Development. 134, 2125-2135 (2007).
- Logan, M., Simon, H. G., Tabin, C. Differential regulation of T-box and homeobox transcription factors suggests roles in controlling chick limb-type identity. Development. 125, 2825-2835 (1998).
- Borycki, A. G., Mendham, L., Emerson, C. P. Jr Control of somite patterning by Sonic hedgehog and its downstream signal response genes. Development. 125, 777-790 (1998).
- Sweetman, D., et al. FGF-4 signaling is involved in mir-206 expression in developing somites of chicken embryos. Developmental Dynamics. 235, 2185-2191 (2006).
- Chapman, S. C., Collignon, J., Schoenwolf, G. C., Lumsden, A. Improved method for chick whole-embryo culture using a filter paper carrier. Developmental Dynamics. 220, 284-289 (2001).
- Sweetman, D., Wagstaff, L., Cooper, O., Weijer, C., Münsterberg, A. The migration of paraxial and lateral plate mesoderm cells emerging from the late primitive streak is controlled by different Wnt signals. BMC Developmental Biology. 8, 63 (2008).
- Scott, B. B., Lois, C. Generation of tissue-specific transgenic birds with lentiviral vectors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the U.S.A. 102, 16443-16447 (2005).
- Seidl, A. H., et al. Transgenic quail as a model for research in the avian nervous system: a comparative study of the auditory brainstem. Journal of Comparative Neurology. 521, 5-23 (2013).
