Introduction
A parede de célula de planta é uma estrutura dinâmica. células em crescimento são cercadas por uma parede celular primária, cuja organização permite que as células a se expandir. As células que param de crescer depósito de uma parede secundário mais rígido que reforça o suporte mecânico da planta. Ambas as paredes celulares são compostas de microfibrilas de celulose embebidas numa matriz de polissacáridos de estruturas diferentes (por exemplo, hemicelulose e pectina) que variam entre o estágio de desenvolvimento diferentes e tecidos 1,2. A celulose é sintetizada na forma de cadeias de (1,4) -β-D-glucano que são fortemente alinhados para formar a micro fibrilas de uma estrutura cristalina. celulose amorfa refere-se às regiões onde as cadeias de glucano são menos ordenada. A relação entre o cristalino e os domínios amorfos é um parâmetro pensado para afectar as propriedades mecânicas da parede da célula, fornecendo resistência mecânica e característica viscoelástica, respectivamente 3. Vários métodos têm sidodesenvolvidas para detectar e quantificar as duas formas de arranjo de celulose, entre eles de difracção de raios-X e polarização cruzada / ângulo mágico girando RMN de estado sólido 4. Difracção de raios-X pode ser utilizada para determinar a proporção de cristalino contra domínios celulose amorfa na amostra 5. Um método alternativo usa fraccionamento de parede celular conteúdo em material insolúvel em ácido e solúvel em ácido, para distinguir entre a cristalina e a celulose amorfa, ou outros polímeros, respectivamente. Nesta abordagem, a incorporação de glicose marcada ([14 C] glucose) é utilizada para quantificar a 6,7 de celulose. Estes métodos necessitam de grandes volumes de material de planta para análises de órgãos inteiros, na melhor das hipóteses, e, portanto, são inadequadamente sensível à variação específica do tecido na estrutura da parede celular. A visualização das microfibrilas de celulose com uma resolução celular pode ser obtida em estudos de imagem ao vivo combinados com corantes fluorescentes 8,9, que podem identificar mudanças naa orientação das microfibrilas de celulose. No entanto, estes corantes não são utilizados para quantificação, eles não são específicos de celulose cristalina e pode interferir com a estrutura normal da parede celular 8. Polscope é uma técnica de imagiologia que se baseia na capacidade de celulose cristalina para dividir os feixes de luz e retardar a parte da luz 10. retardo de luz é mais forte para as microfibrilas que se situam perpendicularmente à direcção da propagação da luz. Para microfibrilas com orientação semelhante, quanto maior o grau de cristalinidade, quanto maior for o retardamento de luz 11. Assim, polscope é utilizado para estudar ambos os níveis relativos e orientação das microfibrilas de celulose.
Raízes exibem crescimento linear, durante o qual as células originárias no nicho de células-tronco, na ponta da raiz, são submetidos a uma série de divisões celulares, antes de se expandir rapidamente 12. As células compreendendo a raiz expandir numa unidireccional (anisotrópica)forma, como ditado por pequenos hormônios molécula de sinalização que impactam as propriedades da parede celular 13. Respostas diferenciadas aos hormônios, no tempo e no espaço, fornecer um meio de garantir o crescimento de órgãos equilibrada 14. Assim, a análise de alta resolução da estrutura da parede celular podem fornecer informações importantes necessários para melhor compreender a relação entre as respostas específicas do tipo de células para crescimento de órgão inteiro. Aqui, nós relatamos a implementação de polscope para estudar a acumulação específica de tecido de celulose cristalina em raízes de Arabidopsis, como observado em seções anatômicas alta qualidade. Este método recentemente descoberto de acumulação específico do tipo de célula de celulose cristalina, em resposta à perturbação espacial da actividade hormonal 15.
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Protocol
1. Crescimento de Plantas
- Superfície esterilizar as sementes.
- Esterilizar sementes (até 30 mg) por via húmida ou seca. Como um exemplo, para o método de esterilização a seco, adicionar 1 ml de HCl glacial a 37% em 50 ml de lixívia, num copo de vidro em um exsicador fechado durante pelo menos 4 horas e até durante a noite. Execute esta etapa em uma capa química.
- Espalhe as sementes estéreis em placas com agar vegetal 0,8% em 0,5x Murashige e Skoog (MS). Enrole placas com Parafilm ou fita porosa e cobrir com folha de alumínio.
- Armazenar as placas a 4 ° C durante 1 - 4 dias para promover a germinação uniforme.
- Transferir as placas para uma câmara de crescimento adequado para o cultivo de plântulas de Arabidopsis. Colocar as placas verticalmente para manter o crescimento da raiz na parte superior do meio de agar e para evitar a penetração.
- mudas de transferência para fixador 7 dias após a germinação (DAG).
2. Fixação
- Preparar 50 ml de Richardson Solution através da combinação de volumes iguais de 1% bórax (agente de buffer), 1% de azul de metileno e 1% Azure (corantes histológicos) em água destilada duas vezes. Filtrar através de uma seringa Impulsionada 0,22 PVDF Filtro Unidade antes do uso.
- Prepare 50 ml de fixador: 1,25% de glutaraldeído em 0,05 M de sódio cacodilato (agente tampão).
Nota: Estes materiais são tóxicos e devem ser manuseados em uma capa química. - Adicionar 100 uL de solução de Richardson (ver 2.1) para a solução de fixação (ver 2.2) para se obter a solução final fixação.
- Mark cada poço de uma placa de 6 poços com o nome da amostra correspondente.
- Coloque 2 - 3 ml de solução final de fixação (ver 2.3) nas cavidades, de modo que as mudas, uma vez transferidos, serão totalmente cobertos em líquido.
- transferir cuidadosamente, usando uma pinça, até 10 mudas para cada poço. Selar as placas usando Parafilm. Armazenar a 4 ° C, no escuro, durante pelo menos uma noite, e até uma semana.
3. desidratação
- <li> Desidratar mudas. Transferi-los entre poços de novas placas de 6 poços, contendo concentrações crescentes de etanol, como listados a seguir: 10% de etanol durante 15 min; Etanol a 30% durante 15 min; Etanol a 50% durante 15 min; Etanol a 70% durante 15 min; 85% de etanol durante 15 min; Etanol a 95% durante 15 min; 95% de etanol a 4 ° C, durante a noite, no mínimo. Lidar com mudas, segurando-os cuidadosamente por seus cotilédones, de preferência com uma pinça de plástico.
4. Infiltração
- Prepare meio de infiltração. Misture o conteúdo de um saco do ativador kit historesina com 50 ml kit líquido resina básica em uma pequena garrafa de vidro. Mexa com ímã para 20 min. forma de infiltração pode ser mantida a 4 ° C durante algumas semanas.
- Mark cada poço de uma nova placa de 6 poços com o nome da amostra correspondente e encher com 2 - 3 ml de meio de infiltração.
- Transferir as mudas de solução de etanol a 95% ao meio de infiltração com a pinça. Certifique-se de que as mudas são fully coberto pelo meio.
- Armazenar a 4 ° C durante pelo menos 4 dias, para assegurar o máximo de penetração nos tecidos da planta.
5. Preparação do bloco
- Coloque etiquetas pequenas, lápis-marcados com nome da amostra, dentro de cada poço de incorporação de moldes.
- Prepare a incorporação meio pela adição de 1 ml de endurecedor para 15 ml de meio de infiltração (ver 4.1). Não tente para preparar um volume menor do que 15 mL, para evitar problemas de polimerização.
- Encha metade de cada cavidade no molde com 200 ul de meio de fixação e cobrir com uma peça de película de sobrecarga cortadas com a forma do molde, mas a um tamanho de um milímetro maior em cada lado. Incubar à temperatura ambiente durante pelo menos 2 horas, para permitir que a polimerização. Não exceda 5 horas.
- Preparar um lote adicional de incorporação de forma (ver 5.2) e manter em gelo, para evitar a polimerização durante a pontas de raiz são dispostos no molde.
- Corte cada ponta da raiz sob um escopo de dissecação usando bisturi e posicionar i com muito cuidadot: verticalmente para seções transversais ou horizontalmente para o corte longitudinal, em cerca de 2-3 mm da periferia do molde. Encha o molde completamente com a solução e cobertura de bloqueio com um filme em cima. Note-se que a solução de bloqueamento vai encolher ligeiramente, uma vez que é polimerizada.
- Mantenha a temperatura ambiente durante 2 horas, no mínimo.
- Para secar os blocos, coloque em uma caixa com gel de sílica seca e deixar à temperatura ambiente durante a noite, no mínimo.
6. Seccionamento
- Prepare facas de vidro de bastões de vidro com uma máquina de faca. Use as facas de vidro para o seccionamento de tecidos. Corte o bastão de vidro em um quadrado e depois cortar o quadrado na diagonal para produzir duas facas, usando uma ferramenta de pontuação diamante.
- O bloqueio em 2 - 3 uM fatias de largura, utilizando uma máquina de corte. Coloque as fatias sobre uma lâmina de vidro, em cima de gotas de água destilada e coloque o slide em um bloco de aquecimento definido para fogo baixo (50 - 60 ° C), até que a água evapora.
- Diluir solução Richardson (ver 2.1) a 0,2% da solução original e utilizar 1 ml de ele para cobrir as fatias. Coloque no bloco de calor durante 5 segundos e depois lave com água destilada.
- Seque o slide em uma placa quente. Observar sob um escopo de dissecação e marcar a parte de trás da lâmina com um marcador, para indicar a posição das fatias de interesse, para facilitar a sua identificação mais tarde sob o microscópio.
- Adicione 100 ml de meio de montagem e cobrir com uma lamela.
8. Aquisição de Imagem
- Colocar a lâmina coberta contendo as secções de raiz com um microscópio óptico equipado com sistema Polscope adequado para se obter informação retardância e um filtro polarizador / interferência óptica (Figura 1 dC).
- Escolha de ampliação que permite a visualização clara de toda a amostra (por exemplo, 40X neste estudo) e concentrar a microscope em um campo vazio que contém seção do bloco, mas nenhuma raiz seção. Tente encontrar uma região limpa, sem manchas. Utilizar esta região para definir o fundo.
- Defina o sistema de imagem e parâmetros de software: Definir intervalo para 17 nm. Aplicar "Exposição Automática" e obter uma imagem de fundo do campo vazio (ver 8.2). Uma imagem de fundo é usado por experimento.
9. Análise Polscope de Celulose microfibrila Orientação
- Análise de secções longitudinais.
- Coloque uma lâmina contendo secções longitudinais sob o microscópio e obter uma imagem de retardamento que. Concentre-se o microscópio em uma seção de raiz de interesse. Fornecer um novo nome de arquivo.
- Capturar uma imagem abriu (imagem com informações retardo) através da janela "Viva abriu". Certifique-se de capturar uma secção que inclui a parede celular, que pode ser identificado por a celulose corada correndo ao longo da periferia da célula, tal como mostrado na Figura 2C.
- análise de imagem.
- Dê um duplo clique sobre a imagem relevante na pilha de imagens. Selecione "color Orientação Pseudo" na guia "Configurações de vídeo".
- Para estimar o ângulo de microfibrilas de celulose, combinar com a cor correspondente da parede da célula para que, na roda de cores.
NOTA: A roda de cores na Figura 2C reflecte o eixo lento da luz encontra-se ao longo da microfibrilas que indica a direcção ao longo do eixo das microfibrilas. O ângulo de microfibrilas de celulose é o ângulo indicado pela cor e o eixo longitudinal da célula. Por exemplo, a célula de alongamento na inserção mostra a cor ciano, inclinado por cerca de 90 ° em relação ao eixo longitudinal das células. - Para quantificar o ângulo médio microfibrilas na parede celular, use a ferramenta "retardance e Azimute Stamp" a partir da barra de ferramentas do software. Ao selecionar a ferramenta, aponte e clique sobre a região de interesse na imagem obtida.
NOTA: Este will resultado no visor dos ângulos (azimute) em graus (Figura 2C). - Em um acesso aberto na luz software análise alternativa polarizada, almoço "Pol-Analyzer" plug-in a partir do menu plugin. Na nova janela aberta, selecione a guia "Birefringence" e aberto e, em seguida, salve o arquivo de fundo e o arquivo de imagem.
- Na janela de imagem, selecione "Specs". e ajustar o "tamanho do pixel ROI '(use 5 pixels para este estudo). No "Specs". janela, selecione "Mostrar valores na tabela de resultados".
- Use a ferramenta Polígono para marcar a região de interesse na janela de imagem. Seleccionar "Linhas de orientação" para obter a orientação da microfibrilas de celulose.
Nota: Isto irá resultar na exibição dos ângulos (azimute) em graus.
NOTA: O ângulo médio calculado por um dos dois métodos deve ser em seguida normalizada para o posicionamento da secção de raiz ao longo da corrediça. Para corrigir desvio dao posicionamento horizontal de toda a secção de raiz ao longo da corrediça, quantificar o ângulo médio de micro fibrilas da parede celular que flanqueia a célula ao longo do seu eixo longitudinal (isto é, perpendicular à secção e ao longo do eixo de crescimento da raiz, a Figura 2C). Este ângulo é de 180 ° quando a seção de raiz é posicionada com precisão ao longo do slide. Para calcular o ângulo de microfibrilas, subtrair o ângulo microfibrila média medida da parede celular de flanco de 180 °. Adicionar a diferença resultou ao ângulo de microfibrilas médio medido da parede da célula que se encontra plana sobre a lâmina.
10. Análise de Polscope Celulose cristalina Acumulação
- Use as seções transversais (transversais). Note que a acumulação de celulose cristalina só pode ser comparada entre as células quando as microfibrilas de celulose, são alinhados em um ângulo semelhante (tal como determinado em 9).
- Dê um duplo clique sobre a imagem relevante na pilha de imagens. Selecione "Pseudo cor "no guia" Configurações de vídeo ".
- Para medir retardance. Zoom-in na imagem. Selecione "Região" e marque todas as regiões de interesse. Mover para a guia "medidas" e "Copiar para área de transferência" todos os valores.
- Transferir os dados para o Excel e extrair informações necessárias (região de retardance dizer). Normalizar os dados.
NOTA: Para explicar as diferenças de espessura entre fatias, expressar os valores relativos a uma borda da parede celular específico no slide. Para normalizar, dividir o retardância à média correspondente à parede da célula de interesse pela retardância média de uma parede celular diferente na mesma imagem. Por exemplo, a parede exterior da célula epidérmica foi normalizada para o interior da parede celular cortical no nosso estudo.
- Transferir os dados para o Excel e extrair informações necessárias (região de retardance dizer). Normalizar os dados.
- Repita as medições durante pelo menos 3 secções por raiz, com um mínimo de 3 raízes por amostra.
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Representative Results
Nós estudamos os efeitos de respostas específicas do tipo de células para brassinosteróides (BRS), usando a raiz de Arabidopsis como um modelo de órgão 15-17. Quando o receptor de BRI1 BR é orientada, no fundo do mutante BRI1, para um subconjunto de células epidérmicas, chamadas de células não-capilares (Figura 2A, B), que inibe a expansão das células unidireccional de células vizinhas, e todo o crescimento da raiz 15. Polscope análise foi realizada para revelar o mecanismo subjacente a esta inibição. Secções longitudinais da raiz obtido a partir do tipo selvagem e a partir de linhas que expressam BRI1 em células não-cabelo só, mostrou orientação semelhante das microfibrilas de celulose (Figura 2C, D, e tal como explicado em 9.2.3), permitindo uma comparação da acumulação relativa do cristalino celulose em células meristemáticas e alongamento, utilizando-se secções transversais tomadas a partir destas zonas (Figura 2E, F). Esta análise mostrou uma dependiamião entre BRI1 expressão em células não cabelo e a acumulação local de celulose cristalina. Segue-se experiências mostraram que a inibição da sintase de celulose leve por baixas concentrações de isoxabena reduzido o nível de celulose cristalina nestas células, o que, por sua vez, parcialmente restauradas de inibição de crescimento, através da promoção da expansão de células unidireccional e o comprimento da raiz 15.
Figura 1:. Microscopia de Luz Polarizada Sistema O sistema Polscope consiste de um microscópio de luz (A), equipado com uma câmara CCD digital de (B), um analisador e um cristal líquido verde localizado na parte superior da sua fonte de luz (C) (D). software abriu foi usado para a aquisição e análise de imagem. por favor clique aqui to visualizar uma versão maior desta figura.
Figura 2: Análise Polscope da parede celular Composição. (A) Secção transversal da raiz primária Arabidopsis mostrando organização radial de seus tecidos constituintes. Destes, as células não-cabelo epidérmico (N); células ciliadas (H) e no córtex (C) estão marcadas. Bar, a 10 ^ m. (B) As imagens de microscopia confocal de raízes que expressam GFP BRI1-direcionados para células não cabelo. Branco, coloração de PI que marca a células, verde, expressão BRI1-GFP. Bar, de 20 um. (C) Secções longitudinais de raízes obtidas a partir de tipo selvagem e de plantas que expressam BRI1 em células não cabelo. O ângulo de microfibrilas de celulose (isto é, o ângulo entre o eixo de cor e de comprimento de célula, o que reflecte o eixo longo da raiz) é semelhante entre as duas linhas. A parede celular de flanqueamento da célula ao longo do seu leixo ong é cercada; marca de ângulo representam a parede celular à sombra, que é medido. Bar, a 50 ^ m. (D) Quantificação do ângulo de microfibrilas de celulose na parede celular da epiderme. Note-se a elevada variabilidade dos ângulos presentes em células do meristema apical (isto é, zona de meristemático, MZ) em comparação com células da zona de transição (ZT), tal como reflectido pela caixa de bigodes. O ângulo de microfibrilas de celulose média semelhante entre o tipo selvagem e plantas expressando BRI1 em células não-cabelo permite a comparação de acumulação de celulose cristalina em células de sua zona de desenvolvimento correspondente. O ângulo médio de cada uma das amostras é indicado por uma linha vermelha. Secções (EF) transversal na raiz dos mesmos antecedentes da planta, mostrado no modo de retardamento de luz. escala de cores representa retardance luz dos 0-17 nm. Seções correspondentes ao meristema (E) e alongamento zonas (F) são mostrados. Bar, a 50 uM. A parede celular da epiderme externa e internaparede celular cortical são cercados. (G) A quantificação dos valores retardância, calculada a partir das imagens polscope. Os valores são expressos como a razão de retardamento entre a parede celular da epiderme externa e a parede celular cortical interior. Note-se que a elevada deposição de celulose cristalina em células não-cabelo em linhas que expressam BRI1 apenas nestas células. A média + SE; 40 <n <600; (**) P <0,01; (***) P <0,001 em um teste t de duas caudas. A figura foi adotada e modificada a partir de 15. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Aqui, apresentamos um método para determinação do acúmulo de celulose cristalina em diferentes tecidos que compõem as raízes de Arabidopsis, mantendo informações anatômicas. Como tal, ela fornece uma etapa adicional para a compreensão de processos de crescimento em plantas com uma resolução celular. Este método pode também ser aplicado para o estudo de espécies de plantas adicionais e órgãos.
Um número de pontos devem ser considerados quando se aplica o método. Em primeiro lugar, a acumulação de celulose cristalina em uma dada secção da raiz pode ser comparada entre os tecidos, entre secções de diferentes genótipos e entre os tratamentos, se a orientação dos seus microfibrilas de celulose é semelhante. Orientação microfibrilas de celulose é determinada em secção longitudinal, com uma face de parede da célula 18. Assim, a série de secções longitudinais, que abrange os tecidos distintos das raízes, a partir do exterior para o interior a maioria dos mais, permitir analysé a orientação de microfibrilas de celulose em diferentes tecidos, num determinado estádio de desenvolvimento. No exemplo mostrado aqui, as células meristemáticas da epiderme têm uma ampla gama de orientações microfibrilas de celulose com um ângulo médio de microfibrilas de celulose de 140 °, enquanto que as células alongamento da epiderme têm uma estrutura mais organizada, com um ângulo médio de microfibrilas de celulose de 120 °. Estas medidas foram semelhantes entre o tipo selvagem e o mutante de interesse, permitindo assim uma comparação confiante em sua acumulação celulose cristalina relativa, nos tipos de células correspondentes e zona de desenvolvimento.
Em segundo lugar, a variabilidade na largura das diferentes secções podem ter impacto nos níveis de retardamento de luz medidos. Isto é contornada aqui por normalizar as medições retardância em bruto do tecido de interesse (células epidérmicas) para a medição retardância de um tecido diferente (células do córtex). Os valores normalizados are, em seguida, em comparação (Ver Figura 2E-G).
Finalmente, as secções transversais ao longo da raiz, a captura de diferentes zonas de desenvolvimento. A identificação destas zonas da secção transversal é importante para a interpretação dos dados. Perda da camada de células mais exterior lateral do tampão de raiz na secção compreender um marcador fuso simples. Em geral, as células começam a sua rápida expansão quando a célula mais antiga da tampa de raízes laterais sofre morte celular programada, após o qual, a epiderme desprotegidos torna-se o tecido exterior 19.
Actualmente, os métodos que proporcionam uma medida de resolução celular de a razão entre o cristalino contra os domínios celulose amorfa faltam. Na verdade, esta é também uma limitação do método aqui apresentado. No entanto, a sua capacidade de comunicar a acumulação de celulose cristalina, por si só é um avanço significativo, níveis relativos tão elevadas de celulose cristalina torna provável uma maisparede celular robusto com o aumento da resistência à tracção. Desenvolvimento de ferramentas de alta resolução para determinar com precisão a composição da parede celular ao lado de suas propriedades mecânicas permanece um desafio futuro.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Murashige & Skoog (MS) | Duchefa | M0221 | |
| Borax | LOBA CHEMIE | 6038 | |
| Methylene blue | Sigma | M-9140 | |
| Azure | Sigma | 861065 | |
| Syringe Driven 0.22 mm PVDF Filter | MILLEX-GV | ||
| Glutaraldehyde | EMS | 16220 | |
| Sodium Cacodylate | Sigma | C-0250 | |
| Leica kit historesin | Leica | 7022 18 500 | |
| embedding molds | Agar Scientific | AGG3530 | |
| film 100 µ P.P.C. | www.Jolybar.com | overhead film | |
| Knivemaker | LKB | 7800 | |
| Ultratome III | LKB | 8800 | Ultratome |
| Shandon immumount | Thermo | 9990402 | mounting medium |
| light microscope | Nikon | Eclipse 80i | |
| Abrio imaging system | CRI | Abrio imaging system | |
| Abrio V2.2 software | CRI | Abrio V2.2 software | |
| Open access polarized light image analysis software | OPS | OpenPolScope | http://www.openpolscope.org/ |
References
- Cosgrove, D. J. Growth of the plant cell wall. Nat Rev Mol Cell Biol. 6, 850-861 (2005).
- Wolf, S., Hematy, K., Hofte, H. Growth control and cell wall signaling in plants. Annu Rev Plant Biol. 63, 381-407 (2012).
- Mazeau, K., Heux, L. Molecular Dynamics Simulations of Bulk Native Crystalline and Amorphous Structures of Cellulose. J. Phys. Chem. B. 107, 2394-2403 (2003).
- Zhao, H., et al. Studying cellulose fiber structure by SEM, XRD, NMR and acid hydrolysis. Carbohydr Polym. 68, 235-241 (2007).
- Fujita, M., et al. Cortical microtubules optimize cell-wall crystallinity to drive unidirectional growth in Arabidopsis. Plant J. 66, 915-928 (2011).
- Peng, F., et al. Fractional separation and structural features of hemicelluloses from sweet sorghum leaves. Bioresources. 7, (2012).
- Xu, S. L., Rahman, A., Baskin, T. I., Kieber, J. J. Two leucine-rich repeat receptor kinases mediate signaling, linking cell wall biosynthesis and ACC synthase in Arabidopsis. Plant Cell. 20, 3065-3079 (2008).
- Anderson, C. T., Carroll, A., Akhmetova, L., Somerville, C. Real-Time Imaging of Cellulose Reorientation during Cell Wall Expansion in Arabidopsis Roots. Plant Physiol. 152, 787-796 (2010).
- Baskin, T. I., Beemster, G. T., Judy-March, J. E., Marga, F. Disorganization of cortical microtubules stimulates tangential expansion and reduces the uniformity of cellulose microfibril alignment among cells in the root of Arabidopsis. Plant Physiol. 135, 2279-2290 (2004).
- Iyer, K. R. K., Neelakantan, P., Radhakrishnan, T. Birefringence of native cellulosic fibers. I. Untreated cotton and ramie. J. Polym. Sci. A-2: Polymer Physics. 6, 1747-1758 (1968).
- Abraham, Y., Elbaum, R. Quantification of microfibril angle in secondary cell walls at subcellular resolution by means of polarized light microscopy. New Phytol. 197, 1012-1019 (2013).
- Petricka, J. J., Winter, C. M., Benfey, P. N. Control of Arabidopsis root development. Annu Rev Plant Biol. 63, 563-590 (2012).
- Vanstraelen, M., Benkova, E. Hormonal Interactions in the Regulation of Plant Development. Annu Rev Cell Dev Biol. , (2012).
- Singh, A. P., Savaldi-Goldstein, S. Growth control: brassinosteroid activity gets context. J Exp Bot. 66, 1123-1132 (2015).
- Fridman, Y., et al. Root growth is modulated by differential hormonal sensitivity in neighboring cells. Genes Dev. 28, 912-920 (2014).
- Vragovic, K., et al. Translatome analyses capture of opposing tissue-specific brassinosteroid signals orchestrating root meristem differentiation. Proc Natl Acad Sci U S A. 112, 923-928 (2015).
- Hacham, Y., et al. Brassinosteroid perception in the epidermis controls root meristem size. Development. 138, 839-848 (2011).
- Gu, Y., et al. Identification of a cellulose synthase-associated protein required for cellulose biosynthesis. Proc Natl Acad Sci U S A. 107, 12866-12871 (2010).
- Fendrych, M., et al. Programmed cell death controlled by ANAC033/SOMBRERO determines root cap organ size in Arabidopsis. Curr Biol. 24, 931-940 (2014).
