Drug Delivery intraluminal para o Rato Fístula Arteriovenosa endotélio
Summary
After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.
Abstract
A entrega de agentes terapêuticos para melhorar a fístula arteriovenosa (FAV) de maturação pode ser administrado quer por via intraluminal ou externos. O modelo murino FAV simples foi combinada com a administração intraluminal de solução de fármaco para o endotélio venoso ao mesmo tempo que a criação de fístula. são discutidos aspectos técnicos deste modelo. Sob anestesia geral, uma incisão é feita abdominal e a veia cava inferior e aorta (IVC) estão expostos. A aorta infra-renal e IVC são dissecados para fixação. Após o pinçamento proximal e distal, o local da punção é exposta e uma agulha G 25 é usado para perfurar ambas as paredes da aorta e para o IVC. Imediatamente após a punção, um gene repórter que expressa vector viral foi infundido na VCI através da mesma agulha, seguido por 15 min de incubação. O método de administração intraluminal activado de entrega de genes virais mais robusto ao endotélio venoso em comparação com a administração por via externa. este novel método de entrega vai facilitar estudos que explorar o papel do endotélio em FAV maturação e permitem uma entrega de drogas intraluminal no momento da operação cirúrgica.
Introduction
A fístula aortovenous murino (FAV) modelo de punção entre a aorta ea veia cava inferior (VCI) é agora uma técnica estabelecida. 1 Nesse modelo, ambas as paredes da aorta infra-renal são perfuradas com uma agulha G 25, sair para o adjacente infra-renal, veia cava; o orifício de entrada da aorta anterior é reparado com compressão simples, e não necessita de reparação de sutura. Serial exame de acompanhamento por ultra-som Doppler de alta resolução e análise histológica mostra a AVF ter uma fase de maturação e, em seguida, uma fase falhando, recapitulando a fisiopatologia conhecido da AVF humana. 2
Para explorar mecanismos que modulam FAV maturação, são necessários métodos melhorados para a administração de agentes terapêuticos para o amadurecimento endotélio FAV. A entrega de agentes terapêuticos para navios podem ser tanto via entrega endovascular para o lúmen, ou através de entrega externa à adventícia. Um exemplo de entrega externa é o commumente usado aplicação adventícia de gel Pluronic. Este copolímero é termo-reversível e transformado de líquido para gel sólido quando aquecida à temperatura corporal. Entrega da droga sustentada estudos anteriores mostraram é conseguido quando a droga misturada em gel 'Pluronic' é aplicada por via tópica in vivo. 3,4 aplicação adventícia de vectores virais ou ARNsi com gel 'Pluronic' tem sido relatada como sendo eficaz como um sistema de entrega perivascular. 5,6 Nós têm também relataram que o tratamento de veias safenas humanas explantados com estimulação adventícia por peptídeos resultou na fosforilação de proteínas receptoras endoteliais. 7
Por outro lado, os investigadores têm usado também entrega intraluminal de ambos os vectores virais e não virais em canino e coelho 8-10 11,12 modelos de enxertos de veia. Nesses relatórios, a transferência de genes foi realizada ex vivo após veia colheita. Eslami et ai. Relataram gene virai endovascular entregary a carótida veias in situ sem criar um bypass. 13 Gloverman et al. entrega intraluminal e adventícia relatado de DNA nu em ratos femoral fístulas veia epigástrica artéria-superficial. 14 O grupo Mayo relataram entrega da droga adventícia em fístulas rato artéria carótida-jugular. 15,16 No entanto, estes modelos previamente relatados necessária uma anastomose suturada para criar FAV. Neste relatório, a entrega de drogas intraluminal com a criação AVF simultânea em ratos é descrito, utilizando um modelo de sutura-less da criação FAV. Usando este modelo de murino modificado FAV um método simples para a entrega de drogas intraluminal para o membro da fístula venosa pode ser realizada.
Protocol
Representative Results
Discussion
Esta modificação do modelo murino incorpora FAV de administração de fármaco intraluminal ao endotélio venoso no momento da criação FAV. Uma FAV foi criado através de punção na aorta infra-renal com uma agulha G 25, e estendendo-se o furo através da parede aórtica em frente para a VCI, seguido de injecção de solução de fármaco através da mesma agulha. A solução é mantida intra-cava, isto é., No membro de FAV venosa, até que de-aperto. O que distingue este modelo a partir de outros modelos…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported in part by the United States Department of Veterans Affairs Biomedical Laboratory Research and Development Program Merit Review Award I01-BX002336, the National Institute of Health grant R56-HL095498, as well as with the resources and the use of facilities at the VA Connecticut Healthcare System, West Haven, CT.
Materials
| Pluronic F-127 | Sigma-Aldrich | P2443-250G | Used as 30% solution in d-water |
| GFP antibody | NOVUS BIOLOGICALS INC | NB100-1770 | |
| Ad-CMV-GFP | VECTOR BIOLABS | 1060 | |
| 0.9% Sodium Chloride Irrigation, USP | Baxter | 2F7122 | |
| BD PrecisionGlide Needle 25G x 5/8 | BD | 305122 | |
| BD 1ml Syringe Tuberculin Slip Tip | BD | 309659 | |
| Scarpel | Surgical Design Inc | 22079707 | |
| 6-0 ETHILON P-1 11mm 3/8c Reverse Cutting | ETHICON INC | 697G | |
| Vevo 770 ultrasound machine | Visualsonics | 20-60 Mhz scan head; RMV-704 | |
| Vascular clamp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5424 | |
| Clamp applying forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 |
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