Intraluminal entrega de la droga a la fístula arteriovenosa ratón endotelio
Summary
After puncturing the aorta through the inferior vena cava (IVC) to create an aorto-caval fistula in the mouse, solution containing a drug is infused into the IVC via the same needle, followed by incubation. This method enables more robust drug delivery to the venous endothelium compared to the external route.
Abstract
El suministro de agentes terapéuticos para mejorar la fístula arteriovenosa (AVF) maduración se puede administrar ya sea a través de rutas intraluminales o externos. El modelo simple de AVF murina se combinó con la administración intraluminal de solución de fármaco al endotelio venoso al mismo tiempo como la creación de la fístula. Se discuten los aspectos técnicos de este modelo. Bajo anestesia general, una incisión abdominal y se hace la aorta y la vena cava inferior (IVC) están expuestos. La aorta infra-renal y la vena cava inferior se disecan para la sujeción. Después de sujeción proximal y distal, el sitio de punción está expuesto y una aguja de 25 G se utiliza para punzar ambas paredes de la aorta y en la vena cava inferior. Inmediatamente después de la punción, un gen que expresa reportero vector viral se infundió en la vena cava inferior a través de la misma aguja, seguido de 15 min de incubación. El método de administración intraluminal activar más robusto de suministro de genes viral al endotelio venoso en comparación con la administración por vía externa. esta Novel método de administración facilitará estudios que exploran el papel del endotelio en AVF maduración y permiten la administración de fármacos intraluminal en el momento de la operación quirúrgica.
Introduction
La fístula aortovenous murino (FAV) modelo de punción entre la aorta y la vena cava inferior (VCI) es ahora una técnica establecida. 1 En este modelo, las dos paredes de la aorta infra-renal se punza con una aguja de 25 G, que sale a la contigua infra-renal vena cava; el orificio de entrada de la aorta anterior se repara con compresión simple, y no requiere la reparación de sutura. Serial examen de seguimiento mediante ecografía Doppler de alta resolución y el análisis histológico muestra la FAV para tener una fase de maduración y luego una fase en su defecto, la recapitulación de la fisiopatología conocida de FAV humano. 2
Para explorar los mecanismos que modulan AVF maduración, se necesitan métodos mejorados para el suministro de agentes terapéuticos a la maduración endotelio AVF. El suministro de agentes terapéuticos a los vasos puede ser vía la entrega endovascular para el lumen, o por medio de entrega externa a la adventicia. Un ejemplo de entrega externa es la comcomúnmente utilizado aplicación de la adventicia de Pluronic gel. Este copolímero es termo-reversible y se transforma de líquido a gel sólido cuando se calienta a la temperatura corporal. Administración de fármacos sostenida Estudios anteriores han mostrado se logra cuando fármaco mezclado en gel Pluronic se aplica tópicamente in vivo. 3,4 aplicación adventicia de vectores virales o siRNA con gel Pluronic ha informado para ser eficaz como sistema de administración perivascular. 5,6 Nos tiene también informó de que el tratamiento de las venas safena humanos explantados con la estimulación de la adventicia por péptidos resultó en la fosforilación de proteínas receptoras endoteliales. 7
Por otro lado, los investigadores también han utilizado el suministro intraluminal de ambos vectores virales y no virales en caninos 8-10 y conejo 11,12 modelos de injertos venosos. En estos informes, la transferencia de genes se realizó ex vivo después de la vena de la cosecha. Eslami et al. Informó gen viral endovascular entregarY para carótidas venas in situ sin necesidad de crear un bypass. 13 Gloverman et al. informaron el suministro intraluminal y la adventicia de ADN desnudo, en la rata femoral fístulas vena epigástrica superficial arterias. 14 Mayo El grupo informó de administración de fármacos de la adventicia en fístulas carótida ratón arteria-vena yugular. 15,16 Sin embargo, estos modelos se informó anteriormente requiere una anastomosis suturada para crear la FAV. En este informe, se describe la administración de fármacos intraluminal con la creación simultánea FAV en ratones, utilizando un modelo de sutura-less de la creación de FAV. Mediante el uso de este modelo murino AVF modificado un método sencillo para la administración de fármacos intraluminal a la extremidad venosa de la fístula se puede realizar.
Protocol
Representative Results
Discussion
Esta modificación del modelo murino AVF incorpora la administración de fármacos intraluminal al endotelio venoso en el momento de la creación AVF. Un AVF fue creado por punción de la aorta infra-renal con una aguja 25 G y se amplía la punción a través de la pared aórtica opuesto en el IVC, seguido de la inyección de la solución de fármaco a través de la misma aguja. La solución se mantiene dentro de la vena cava, es decir., En el miembro venosa de AVF, hasta que de-sujeción. Lo que distingue a es…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This work was supported in part by the United States Department of Veterans Affairs Biomedical Laboratory Research and Development Program Merit Review Award I01-BX002336, the National Institute of Health grant R56-HL095498, as well as with the resources and the use of facilities at the VA Connecticut Healthcare System, West Haven, CT.
Materials
| Pluronic F-127 | Sigma-Aldrich | P2443-250G | Used as 30% solution in d-water |
| GFP antibody | NOVUS BIOLOGICALS INC | NB100-1770 | |
| Ad-CMV-GFP | VECTOR BIOLABS | 1060 | |
| 0.9% Sodium Chloride Irrigation, USP | Baxter | 2F7122 | |
| BD PrecisionGlide Needle 25G x 5/8 | BD | 305122 | |
| BD 1ml Syringe Tuberculin Slip Tip | BD | 309659 | |
| Scarpel | Surgical Design Inc | 22079707 | |
| 6-0 ETHILON P-1 11mm 3/8c Reverse Cutting | ETHICON INC | 697G | |
| Vevo 770 ultrasound machine | Visualsonics | 20-60 Mhz scan head; RMV-704 | |
| Vascular clamp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5424 | |
| Clamp applying forceps | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5410 |
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