Introduction
Метастазы приходится более 90% случаев смерти, вызванных солидных опухолей. Кость является наиболее распространенным органом, пострадавших от метастазов различных видов рака, особенно рака молочной железы и рака простаты. Когда поставлен диагноз в клинике, метастазы в кости, как правило, уже вошли в продвинутую стадию либо с остеолитических или остеобластов изменений в костной ткани, часто сопровождается неврологической симптоматикой.
Предыдущие исследования в основном сосредоточены на откровенных остеолитических костных метастазов 1-3, однако мы в настоящее время имеют ограниченное понимание микрометастаз в костях до начала процесса остеолитического. Это, по крайней мере, частично из-за отсутствия соответствующих экспериментальных моделей и подходов. Генетически сконструированные мышиные модели рака молочной железы часто метастазирует в легкие, но гораздо менее эффективно для костей 4. Аналогично, ортотопически пересаженные опухоли развиваются редко спонтанные метастазы в кости, с некоторыми кости тропических 4Т1 молочных желез carcinomсуб-клоны и MSP избыточно экспрессируется PyMT трансгенной мышиной модели как исключения 5-7. Intra-большеберцовый бурение может доставить раковые клетки до костей 8-10, но он также получает повреждения и воспаление местных тканей. В настоящее время внутри сердца инъекции линии клеток рака молочной железы был основным подходом к расследованию кости колонизацию 11-13. Тем не менее, после того, как раковые клетки вводят в левый желудочек лишь ограниченную часть, наконец, достигнет кости и костный мозг, что делает его трудно отслеживать микроскопические метастазы в измеримой моды.
В данном исследовании мы устанавливаем технику, а именно внутри подвздошной артерии (IIA) раствор для инъекций 14, чтобы передавать раковые клетки в ткани задней конечности, тем самым обогащая раковые клетки в кости и костного мозга , не причиняя ущерба местным тканям. Из-за специфичности кости, такой подход также позволяет достаточно времени для индолентными раковых клеток, чтобы в конечном счете колонизировать до ANimals поддаваться первичных опухолей или метастазов в других жизненно важных органов. В сочетании с различными другими способами, такими как биолюминесценции визуализации, иммунофлуоресцентного окрашивания и гистоморфометрии кости, IIА инъекции является потенциально полезным для широкого круга научных целей, связанных с костными метастазами, особенно для отслеживания прогресса в направлении от одиночных раковых клеток к многоканальному клетки микрометастазов. В частности, мы показали, что ИВР инъекции позволяет визуализировать взаимодействия между раковыми клетками и различными типами окружающих клеток в костном микросреды.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все для животных работа была проделана в соответствии с руководящими принципами по уходу за животными в Бейлор медицинского колледжа.
1. Подготовка сотового
Примечание: Различные линии раковых клеток могут быть использованы для МИС инъекции в зависимости от целей исследования. Мы использовали клеточные линии рака молочной железы MCF7, 4T1, 4T07, MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-436 и линия клеток рака простаты C4-2 в нашем исследовании. Обычно мы используем как GFP- и люциферазы светлячка меченных раковые клетки для нашего исследования и показать некоторые данные здесь из GFP-люциферазы-меченой клеточной линии MCF7.
- Поддержание клеток в среде DMEM , содержащей 10% FBS и 0,1 мг / мл пенициллина-стрептомицина , при 37 ° С в 5% CO 2.
- Перед IIA инъекции, Trypsinize клетки на 80 - 90% слияния с 0,25% -ным раствором / ЭДТА трипсина. Использование холодной PBS, чтобы промыть клетки дважды, и вновь приостановить клеток в 10 мл PBS для подсчета клеток. Для того, чтобы удалить PBS, центрифуга клетки при 800 мкг в течение 5 мин.
- Повторное приостановить клеткипри концентрации 5 × 10 6 клеток / мл в охлажденном льдом PBS.
- Используйте 100 мкл GFP- и люциферазы светляков-меченых раковые клетки для IIA инъекции одной мыши.
Примечание:. Таким образом, число клеток , полученных у каждого животного составляет 5 х 10 5 Это число , возможно , потребуется , чтобы быть изменен на основе агрессивностью клеточных линий. - Держите клеточные суспензии на льду.
Примечание: Вибрации могут быть необходимы для предотвращения агрегации клеток каждые несколько минут, пока он не будет готов к инъекции. Для некоторых клеточных линий (например, MDA-MB-231), более строгие процедуры (например, проходя через ячейки фильтра 45 мкм) могут быть необходимы для предотвращения агрегации. Обратите внимание, что забивают сосудов может вызвать некроз тканей, и, следовательно, не оправдав эксперименты.
2. Подготовка животных
- Для лечения боли на животных, дают 5 мг / кг / день карпрофен (или другой анальгетик) с биологически активной добавки к мышам не менее 24 ч до операции. администрироватьв дозе 0,1 мг / мл бупренорфин подкожно 60 мин до операции. Примечание: необязательная процедура имплантировать эстрадиола поддон в задней части животных, чтобы обеспечить дополнительное эстрадиол. Это ускорит выросшее от ER + раковых клеток (например, MCF-7 клеток) 9.
- Обезболить 4 - в возрасте 6 недель мышь (примерно 20 г) с кетамином (80 - 100 мг / кг) и ксилазина (10 -12,5 мг / мл) путем внутрибрюшинной инъекции.
- Подтвердить соответствующий уровень седации 20 г мыши по носке и щепоткой наблюдения снижения частоты дыхания на 50% и розовые слизистые оболочки (например, кожи мыши уха и лапа кожи). Держите мониторинг этих жизненно важных признаков каждые 15 минут во время операции. Примечание: Ни один движение животного не указывает на то, что животное достаточно наркозом и готов к операции.
- Используйте ветеринара мазь на глаз, чтобы предотвратить сухость кожи.
- Бритье мыши на нижней части живота, особенно правой паховой области, где хирургия и инъекции будетпроисходит.
Примечание: В этом нет необходимости, если используются бестимусных голых мышей. - Положите мышь на спине разведите ноги в своих естественных позиций и придерживаться пальцы на мобильный рассечение картона с лентой.
- Протрите правой паховой области с 70% изопропилового этанол смоченные стерильным ватным тампоном, а затем с бетадин хирургической скраб несколько раз.
3. Общие подвздошной вены и артерии Место и Разделение
- Сделать кожу надрезать 1,0 - 1,2 см длиной между 4 - м и 5 - м сосками в нижней правой части живота , используя стерильные, # 10 углерода лезвия стали скальпель удерживаемых в № 3 ручки. Затем используют стерильные хирургические драпировка для покрытия тела животного, за исключением участка разреза.
- Переместить животное на стандартный стенд сверху рассечение микроскопом. Используйте увеличение в 4 раза для инъекций.
- Под 4-кратным увеличением рассечение микроскопа, вставить тупые щипцов разделения между жировой тканью и peritoneuм, и раздвинуть ткани наружу с обеих сторон , чтобы выставить подвздошных сосудов и нервов (см рисунок 1).
Примечание: артерии между аортой от средней линии и нижней части ветвей артерии называется общей подвздошной артерии. Это где инъекции происходит. - Используйте одну пару прямых тонких щипцов прорвать соединительной ткани (например, мембраны) между судами и нерва, ближе к сосудам.
- Переключение прямых тонких щипцов в левую руку. Возьмите пару наклонных тонких щипцов, используя правую руку. Вставьте правую руку щипцов в текущем же положении, в котором были разбиты соединительной ткани. И затем придерживаться правильных щипцов руку через, под сосуды.
- В то же время, вставить левую руку щипцов в соединительной ткани на левой стороне сосудов для руководства правой руки пинцет, проходящие через.
- После того, как правая рука Щипцы получает под сосуды, пытаются отделить суда от окружающих тиСГУП немного больше, а затем держать их на вершине правой руки щипцов.
- Используйте левую щипцов для рук, чтобы доставить кончик 4-0 шелковой нити к правой руке пинцетом, а затем потяните нить осторожно и медленно через под сосуды. Примечание: В настоящее время обе общие вены и артерии сосуды вознесен швом (рисунок 2).
4. Инъекции и после инъекции Care
- Подготовка клетки для инъекций в 31 G инсулиновый шприц. С помощью 100 мкл суспензии клеток в PBS на инъекцию. Убедитесь в том, чтобы пипеткой вверх и вниз несколько раз, чтобы отделить клетки и избежать агрегации, так что введенные клетки не засоряют и блокируют кровоток.
- С помощью угловых пинцетом в левой руке, положить щипцов под судов по руководством шовного материала, а затем откройте две руки пинцета, имея сосуды проводятся осторожно пинцетом.
Примечание: Интервал между двумя рукавами пинцетом будет ясайт njection. - Держите 31 G иглу 100 мкл суспензии клеток в правой руке, со скосом иглы вверх, готовый для инъекций.
- Вставьте иглу в просвет артерии (кровь будет ввести кончик иглы). Затем надавите клеточную суспензию медленно вводить клетки. Суспензию клеток оттолкнет красной крови в сосуде. Постарайтесь, чтобы не сломать сосуды или утечки суспензии клеток вне.
- Когда впрыск закончен, осторожно потяните назад иглу и продолжайте удерживать сосуды вверх на левой руке пинцетом, чтобы остановить кровотечение. Затем отодвигать швом.
- Отодвигать левый пинцетом руки, и быстро использовать ватный тампон, чтобы нажать на область разреза артерии, чтобы остановить кровотечение.
Примечание: Как правило, 5 - 10 мин постоянное давление достаточно, чтобы остановить кровотечение. - Когда кровотечение останавливается, использовать клей кожи, чтобы закрыть кожу края области хирургии. Сделать ушной тег, и проверьте биолюминесценции сигнализации для изучения распределения инжектированных клеток. <бр /> Примечание: Успешная инъекция приведет к изображение , похожее на рисунок 3.
- Проверить сигнализацию биолюминесценции путем инъекции 100 мкл 15 мг / мл в PBS люциферин при 75 мг / кг концентрации мыши через внутри орбитального синуса.
- Для внутридневных-орбитальным инъекции, положил пальцы на обеих сторонах глаза мыши, использовать давление, чтобы сделать глаз мяч слегка выскочить из рамы глаза, вкладыш 28 G иглы инсулиновый шприц между глазного яблока и носа, а затем медленно толкать шприц, чтобы впрыснуть люциферин ,
Примечание: При правильном положении, игла должна быть в состоянии достигнуть глубину 2 - 3 мм до попадания твердых тканей (кости). - Поместите мышь в системе формирования изображения в естественных условиях для всего животного изображения в течение 10 - 60 секунд в течение 5 минут (смотрите рисунок 3).
Примечание: Необязательное процедура имплантировать эстрадиола гранул в заднюю часть животных, чтобы обеспечить дополнительное эстрадиол. Это позволит ускорить рост ER + раковых клеток (например, MCF-7клетки) 15.
- Для внутридневных-орбитальным инъекции, положил пальцы на обеих сторонах глаза мыши, использовать давление, чтобы сделать глаз мяч слегка выскочить из рамы глаза, вкладыш 28 G иглы инсулиновый шприц между глазного яблока и носа, а затем медленно толкать шприц, чтобы впрыснуть люциферин ,
- Проверить сигнализацию биолюминесценции путем инъекции 100 мкл 15 мг / мл в PBS люциферин при 75 мг / кг концентрации мыши через внутри орбитального синуса.
- Оставьте мышь на теплую грелку, пока он не просыпается. Монитор кровотечение, отек, признаки зияние и боли во время послеоперационного периода. Положите мышей обратно в клетку с покрытием болеутоляющего (carprofin диетическая добавка рекомендуется) не дается для лечения боли, пока никаких признаков боли. Обратите особое внимание и заботу к животным в течение 7 дней после операции.
5. Мониторинг роста Метастатическим
- Гистоморфометрия:
- Урожай несущих опухоль костной ткани, фиксируют кости в 4% параформальдегида в течение 24 ч, затем декальцинировать их в рН 7,0 14% раствор ЭДТА в течение 3 - 5 дней, и подвергать их в парафин , как описано выше 14.
- Раздел парафиновые-встраивать костные ткани при толщине 3 мкм и выполнить стандартный гистологический метод гематоксилин / эозином , как описано выше 14.
- Immunohistochemisпытаться:
- Тема парафин подшипник опухоль кости скользит по иммуногистохимии окрашивания для различных целей , как описано выше 14. Вкратце, immunostain раковых клеток MCF7 анти-GFP антитела и immunostain остеогенных клеток (пре-остеобластов и остеобластов) анти-Osterix антител и анти-щелочной фосфатазы (ALP) антител, соответственно.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
На рисунке 1 показана анатомическое расположение и взаимосвязь общей подвздошной артерии (красный) и вены (синий).
На рисунке 2 показано относительное положение подвздошных сосудов и нервов при рассечение микроскопии. Как показано на рисунке 2А, сосуды и нервы прямо под брюшной стенкой и может быть раскрыта после того , как разрез кожи и брюшины отталкивается. Общей подвздошной вены находится на левой стороне, а больше и темнее по сравнению с артерией. Артерия находится в середине, и выглядит розовым. Он тоньше, чем вены, но имеет более толстую мышечную стенку. Вены и артерии параллельны между собой и тесно связаны друг с другом. Еще дальше по праву является белый крестцового нерва. Рисунок 2B показывает общие подвздошные сосуды , отделенные от окружающих соединительной ткани, мышц и нервов, и вознесется на 4-0 шов шелковой нитью. Общей подвздошной вены, артерии и крестцового нерва также показаны.
Рисунок 3 показывает представителя в естественных условиях и бывших естественных изображений биолюминесценции животных после инъекции внутри подвздошной артерии. Пять х 10 5 GFP-люциферин-меченых клеток MCF7 в 100 мкл вводили в правую заднюю конечность мыши путем инъекции внутри подвздошной артерии. D-люциферин был затем вводили путем инъекции синусовый внутри орбиты, а затем виво целого животного биолюминесценции визуализации в. Инъецированные MCF7 клетки были обогащены в правой задней конечности мыши , как показано биолюминесценции сигналов (рис 3 , а ). В естественных условиях биолюминесценции сигналы целого животного отслеживались через каждые 3 дня или раз в неделю, а затем мышь костные ткани собирали на 14 день после инъекции , когда весь сигнал животное биолюминесценции достиг определенного порога (Фотон поток> 10 4). После того, как D-люциферин введения костные ткани из внутриотраслевой подвздошных артерий закачиваемой мыши были быстро собирали и погружали в PBS для бывших естественных изображений. Сильный биолюминесценции сигнал от внутри подвздошной артерии вводят правую заднюю кости , но не от левой кости контрольной показали специфическую локализацию инъецированных клеток (фигура 3В).
На рисунке 4 показаны репрезентативные изображения гистологических и иммунофлуоресцентного окрашивания. Когда опухоль кости подшипника собирали, они были подвергнуты фиксацией параформальдегидом, ЭДТА декальцинации, а затем парафином вложение. Три мкм кости слайды были подготовлены и стандарт H & E окрашивание были выполнены. Компактные булыжником-подобные клетки с более крупными ядрами были микроскопические MCF7 метастатических образований в костной ткани через 14 дней после инъекции внутри подвздошной артерии, как показано красными стрелками. Костный мозг (BM) И большие розовые плоские трабекулярные кости (ТБ) с редкими ядрами так помечены (рис 4А). Рисунок 4B показывает GFP-меченых клеток MCF7 (зеленый), ALP-меченые остеобласты (красный на левом изображении), и Osterix-меченых предварительно остеобласты (красный на правом изображении) после иммунофлуоресцентного окрашивания. Синий DAPI окрашивание указывает на ядро.
Рисунок 1:. Анатомия общей подвздошной артерии (красный) и вены (синий) у мышей брюшного отдела аорты, общей подвздошной артерии, наружной подвздошной артерии и бедренной артерии показаны как указано. Инъекции проводят при общей подвздошной артерии от аорты по отношению к направлению бедренной артерии. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рис . 2: подвздошных сосудов и нервов под стандартным микроскопом рассечение с 4 - кратным увеличением (а) Изображение неповрежденных сосудов и нервов. (Б) Изображение поднимаемых судов. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3: Представитель в естественных условиях и бывших естественных изображений биолюминесценции мыши после инъекции внутри подвздошной артерии. (А) в естественных условиях биолюминесценции сигнал всей правой животного после инъекции. (Б) ех естественных условиях биолюминесценции сигналаиз левой кости управления и правой впрыскиваемого кости из инъецированных животных, которые были собраны через 14 дней. Все биолюминесценции сигналы были измерены с помощью следующих рекомендуемых процедур и настроек производителя. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 4: Типичные изображения гистологических и иммунофлуоресцентного окрашивания. (А) представитель H & E окрашивание образ MCF7 опухоли подшипником костной ткани после инъекции внутри подвздошной артерии. Шкала бар = 25 мкм. Примечание: HE окрашивание не эффективный способ обнаружения опухолей. В меньшем увеличении, HE окрашивание недостаточно чувствителен, чтобы отличить опухоли. При большем увеличении, это не эффективно сканировать все аРиз. (Б) иммунофлуоресцентного окрашивания изображения опухоли MCF7 подшипника костной ткани. Зеленый: GFP-меченых MCF7 клетки, красный на левом изображении: ALP-меченые остеобласты, Красный на правом изображении: Osterix-меченых предварительные остеобласты. Синий DAPI окрашивание указывает на ядро. Шкала бар = 25 мкм. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Хотя только подвздошной артерии является мишенью для инъекций для раковых клеток, мы рекомендуем разделение обеих подвздошной вены и артерии от окружающих тканей, а также поднять их вместе в виде пучка. Это происходит потому, что вены и артерии широко контактируют друг с другом, и венозной стенки сосуда тонкая и легко сломать. Таким образом, для успешной инъекции, он экономит время и усилия, чтобы задержать два судна вместе, хотя раковые клетки вводят только в артерии. 4-0 шелковый шов используется , чтобы помочь этому процессу , как показано на рисунке 2. Нить может также помочь остановить кровотечение , если оно произойдет.
Большинство шагов МАИ инъекции должны быть выполнены под микроскопом рассечение. Сосуды мыши мягкие и маленькие, что делает процедуры сложной задачей. Тем не менее, после достаточной практики, вероятность успеха может достигать 90 - 100% в нашем опыте.
С помощью этого метода, исследователи могут бытьщие установить кости колонизацию модели своих любимых моделей раковых клеток, в том числе традиционно считается "неметастатической". MCF-7 клетки представляют собой такой пример. В самом деле, если вы прибываете в костном микросреды, MCF-7 клетки подвергаются короткий период покоя перед взлетом, чтобы колонизировать. Очень немногие спонтанные метастазы в кости были обнаружены у животных, несущих Ортотопическая MCF-7 ксенотрансплантаты. Тем не менее, отказ может также возникнуть в результате остаточного количества диссеминированных опухолевых клеток, медленное инициирование колонизации, и более агрессивный рост ортотопической опухолей (который убивает животных до повреждения кости могут установить). Таким образом, отсутствие обнаружения не может быть принято в качестве доказательства в отношении способности MCF-7 клеток к метастазированию. На самом деле, безболезненные или даже спящие кости микрометастазов может быть более распространенным у больных раком молочной железы человека, как это было предложено лет-до-десятилетий покоя, который часто встречается в клинике.
IIA инъекция может быть применен не только к луминал или базальные клетки рака молочной железы, но и к другим типам рака, таких как рак простаты. В сочетании с различными выборами мониторинга техники заболевания костей, инъекции внутри подвздошной артерии может внести значительный вклад в многих исследовательских целях. Мы обычно используют сигналы биолюминесценции для отслеживания прогрессирования костных метастазов после инъекции внутри подвздошной артерии, а затем урожай опухолью кости для флуоресцентного иммуногистохимии окрашивания для определения взаимодействия между раковыми клетками и окружающих костных микроокружения ниш. Кость Гистоморфометрия 16-17 и μCT 18-20 могут быть использованы для оценки структуры кости изменения и другие анатомические детали кости, которые вызваны инокуляции раковых клеток. Собственные соображения и комбинации должны определяться каждой группой для своей конкретной цели исследования.
Подобно внутрисетевого большеберцовой 8-10 и внутрибрюшного сердца прививки 11-13 предостережением внутри- Ироминъекции IAC артерии является то, что она не резюмировать первые шаги в метастатического процесса до эмболии и вступления опухолевых клеток в кровоток. В идеале, спонтанный процесс метастазирования, начиная с ортотопической опухолей было бы необходимо, чтобы полностью перепросматривать метастаз каскада. Тем не менее, этот процесс является крайне неэффективным в большинстве моделей, лишь за некоторыми исключениями , такими как некоторые кости трофических 4Т1 суб-клонов 5-6 и MSP суперэкспрессированный PyMT трансгенную модель мыши 7. Мы надеемся, что инъекции IIA обеспечит новый взгляд на процесс колонизации костей, что может, в свою очередь облегчают проектирование и разработку действительно эффективных спонтанных моделей костных метастазов для доклинических исследований.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Materials | |||
| DMEM | HyClone | SH30022.01 | |
| FBS | Gibco | 16000 | |
| Pen/Strep Amphatericin B | Lonza Biowhittaker | 17-745E | |
| PBS | Lonza Biowhittaker | 17-516F | |
| Trypsin/EDTA solution | HyClone | SH30042.01 | |
| 45 μM cell strainer | VWR International Laboratory | 195-2545 | |
| MediGel CPF with carprofen | Controlled item from veterinary care in BCM | For pain management | |
| Buprenorphine | Controlled item from veterinary care in BCM | For pain management | |
| Estradiol pellet | Innovative Research of America | SE-121 | |
| Ketamine and xylazine | Controlled item from veterinary care in BCM | ||
| Vet ointment | Controlled item from veterinary care in BCM | Avoid eye dryness | |
| Shaver | Oster | 78005-050 | For furred mice |
| Isopropyl ethanol | ACROS | 67-63-0 | |
| Betadine surgical scrub | Controlled item from veterinary care in BCM | ||
| #10 scalpel blades | Ted Pella, Inc | 549-3CS-10 | Multiple |
| No. 3 handle | Ted Pella, Inc | 541-31 | Need to be autoclaved |
| Sterile surgical drape | Sai Infusion Technology | PSS-SD1 | |
| Straight forceps | Roboz Surgical Instrument | RS-5132 | Need to be autoclaved |
| Straight fine forceps | Fine Science Tools | 11253-20 | Need to be autoclaved |
| Edged fine forceps | Fine Science Tools | 11253-25 | Need to be autoclaved |
| 4-0 Vicryl silk suture | Johnson & Johnson Health Care | J214H | |
| 31 G insuline syringes | BD | 328418 | Multiple |
| Q-tips cotton swabs (Sterile) | VWR International Laboratory | 89031-272 | |
| Skin glue | Henry Schein Animal Health | 31477 | For surgery site skin closure |
| Ear Tag Applicator | Fine Science Tools | 24220-00 | |
| Ear tags | Fine Science Tools | 24220-50 | |
| D-luciferin | Gold Biotechnology | LUCK | Avoid light and put on ice |
| 28 G insulin syringes | BD | 329410 | For intra-orbital injection |
| Paraformadehyde | Alfa Aesar | 30525-89-4 | For tissue fixation |
| EDTA | OmniPur | 4050 | For bone tissue decalficication |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Dissection microscope | Leica | Leica S6E stereo | |
| IVIS Lumina II imaging system | Advanced Molecular Vision | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Antibodies | |||
| Anti-GFP antibodies (JL-8) | Clontech | 632381 | |
| Anti-ALP antibodies | Abcam | ab108337 | |
| Anti-Osterix antibodies | Abcam | ab22552 |
References
- Kang, Y., et al. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer cell. 3 (6), 537-549 (2003).
- Lu, X., et al. VCAM-1 promotes osteolytic expansion of indolent bone micrometastasis of breast cancer by engaging alpha4beta1-positive osteoclast progenitors. Cancer cell. 20 (6), 701-714 (2011).
- Ell, B., Kang, Y.
- Kretschmann, K. L., Welm, A. L. Mouse models of breast cancer metastasis to bone. Cancer Metastasis Rev. 31 (3-4), 579-583 (2012).
- Lelekakis, M., et al. A novel orthotopic model of breast cancer metastasis to bone. Clin Exp Metastasis. 17 (2), 163-170 (1999).
- Rose, A. A., et al. Osteoactivin promotes breast cancer metastasis to bone. Mol Cancer Res. 5 (10), 1001-1014 (2007).
- Welm, A. L., et al. The macrophage-stimulating protein pathway promotes metastasis in a mouse model for breast cancer and predicts poor prognosis in humans. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (18), 7570-7575 (2007).
- Li, X., et al. Loss of TGF-beta Responsiveness in Prostate Stromal Cells Alters Chemokine Levels and Facilitates the Development of Mixed Osteoblastic/Osteolytic Bone Lessions. Mol. Cancer. Res. 10 (4), 494-503 (2012).
- Gregory, L. S., Choi, W., Burke, L., Clements, J. A. Breast Cancer Cells Induce Osteolytic Bone Lesions In vivo through a Reduction in Osteoblast Activity in Mice. PLoS ON. 8 (9), e68103 (2013).
- Waning, D. L., et al. Excess TGF-β mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice. Nat Med. 21 (11), 1262-1271 (2015).
- Simmons, J. K., et al.
- Werbeck, J. L., et al. Tumor microenvironment regulates metastasis and metastasis genes of mouse MMTV-PymT mammary cancer cells in vivo. Vet Pathol. 51 (4), 868-881 (2014).
- Xiang, J., et al. CXCR4 Protein Epitope Mimetic Antagonist, POL5551, Disrupts Metastasis and Enhances Chemotherapy Effect in Triple Negative Breast Cancer. Mol Cancer Ther. 14 (11), 2473-2485 (2015).
- Wang, H., et al. The osteogenic niche promotes early-stage bone colonization of disseminated breast cancer cells. Cancer Cell. 27 (2), 193-210 (2015).
- Hoffmann, J., et al. Characterization of new estrogen receptor destabilizing compounds: effects on estrogen-sensitive and tamoxifen-resistant breast cancer. J Natl Cancer Inst. 96 (3), 210-218 (2004).
- Tannehill-Gregg, S. H., Levine, A. L., Nadella, M. V., Iguchi, H., Rosol, T. J. The effect of zoledronic acid and osteoprotegerin on growth of human lung cancer in the tibias of nude mice. Clin Exp Metastasis. 23 (1), 19-31 (2006).
- Slyfield, C. R., Tkachenko, E. V., Wilson, D. L., Hernandez, C. J.
- Koba, W., Jelicks, L. A., Fine, E. J. MicroPET/SPECT/CT imaging of small animal models of disease. Am J Pathol. 182 (2), 319-324 (2013).
- Simmons, J. K., et al. Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo. Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).
- Amend, S. R., et al. Thrombospondin-1 regulates bone homeostasis through effects on bone matrix integrity and nitric oxide signaling in osteoclasts. J Bone Miner Res. 30 (1), 106-115 (2015).
