Introduction
Metastaser står for over 90% av dødsfall forårsaket av solide tumorer. Ben er den vanligste organ påvirket av metastaser av forskjellige typer kreft, spesielt brystkreft og prostatakreft. Når diagnostisert i klinikken, benmetastaser vanligvis har allerede lagt inn avanserte stadier med enten osteolytiske eller osteoblastiske endringer i bein, ofte ledsaget med nevrologiske symptomer.
Tidligere studier hovedsakelig fokusert på overt osteolytiske benmetastaser 1-3, men vi i dag har begrenset forståelse av mikrometastaser i skjelettet før utbruddet av osteolytic prosessen. Dette er i det minste delvis på grunn av mangel på egnede eksperimentelle modeller og tilnærminger. Genmanipulerte musemodeller av brystkreft ofte metastaserer til lungene, men mye mindre effektivt til bein 4. Likeledes orthotopically transplanterte svulster sjelden utvikle spontane benmetastaser, med noen bein-tropisk 4T1 mammary carcinomen sub-kloner og MSP overexpressed PyMT transgen musemodell som unntak 5-7. Intra-tibial boring kan levere kreftceller til beinet 8-10, men det medfører også skader og betennelser til lokale vev. Foreløpig intra-kardial injeksjon av brystkreftcellelinjer har vært den store tilnærming for å undersøke bein kolonisering 11-13. Men etter kreftceller blir innført i venstre hjertekammer kun en begrenset andel vil til slutt nå ben og benmarg, noe som gjør det vanskelig å spore mikroskopiske metastaser på en kvantifiserbar måte.
I denne studien, etablerer vi en teknikk, nemlig intra bekkenarterie (IIA) injeksjon 14, for selektivt å levere kreftceller i bakben vev, for derved å anrike kreftceller i ben og benmarg uten å forårsake skade på lokale vev. På grunn av benet spesifisitet, kan denne fremgangsmåten også nok tid for lat kreftceller til slutt å kolonisere før enimals bukke til primære svulster eller metastaser i andre vitale organer. Når det kombineres med en rekke andre teknikker, for eksempel bioluminescence bildebehandling, immunfluorescens farging og benhistomorfometri, er IIA injeksjon potensielt nyttig for et bredt omfang av forskningsformål knyttet til skjelettmetastaser, særlig for å spore utviklingen fra enkeltkreftceller til multi-celle mikrometastaser. Spesielt viste vi at IIA injeksjon gjør oss i stand til å visualisere samspillet mellom kreftceller og ulike typer omgir cellene i beinet mikromiljøet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyr arbeidet ble utført i henhold til retningslinjene fra Baylor College of Medicine dyr omsorg.
1. Cell Forberedelse
Merknad: Forskjellige kreftcellelinjer kan brukes til IIA injeksjon, avhengig av forskningsformål. Vi har brukt brystkreft cellelinjer MCF7, 4T1, 4T07, MDA-MB-361, MDA-MB-231, MDA-MB-436 og prostatakreft cellelinje c4-2 i vår forskning. Vi bruker vanligvis både GFP- og ildflueluciferase merkede kreftceller for vår studie og viser noen data her fra GFP-Luciferase-merket MCF7- cellelinje.
- Opprettholde celler i DMEM inneholdende 10% FBS og 0,1 mg / ml penicillin-streptomycin ved 37 ° C i 5% CO2.
- Før IIA injeksjon trypsineres cellene ved 80 - 90% konfluens med 0,25% Trypsin / EDTA-løsning. Bruk kaldt PBS for å vaske cellene to ganger, og re-suspendere celler i 10 ml PBS for celletelling. For å fjerne PBS, sentrifuger cellene ved 800 xg i 5 min.
- Re-suspendere cellerved en konsentrasjon på 5 x 10 6 celler / ml i iskald PBS.
- Bruk 100 mL GFP- og Firefly luciferase-merket kreftceller for IIA injeksjon av en mus.
Merk:. Derfor er 5 x 10 5 antall celler mottatt av hvert enkelt dyr Dette antallet kan måtte endres basert på aggressivitet av cellelinjer. - Hold cellesuspensjoner på is.
Note: Vibrasjoner kan være nødvendig for å forebygge celle aggregering noen få minutter før den er klar for injeksjon. For noen cellelinjer (som MDA-MB-231), kan strengere prosedyrer (f.eks, passerer gjennom 45 mikrometer celle sil) være nødvendig for å hindre aggregering. Vær oppmerksom på at den tette av fartøy kan forårsake vevsnekrose, og derfor blander sammen eksperimenter.
2. Animal Forberedelse
- For dyr smertebehandling, dannelse av 5 mg / kg / dag karprofen (eller andre smertestillende) med kosttilskudd til musene ikke mindre enn 24 timer før kirurgi. Administrereen dose på 0,1 mg / ml buprenorfin subkutant 60 minutter før operasjonen. Merk: en valgfri prosedyren er å implantere østradiol pall inn på baksiden av dyr for å gi ekstra østradiol. Dette vil akselerere vokse i ER + kreftceller (f.eks, MCF-7 celler) 9.
- Bedøve 4 - 6 uke gamle mus (ca. 20 g) med ketamin (80-100 mg / kg) og xylazin (10 -12,5 mg / ml) ved intraperitoneal injeksjon.
- Bekreft riktig nivå av sedasjon av en 20 g mus ved tå klype og observasjon av en 50% reduksjon i lufthastighet og rosa slimhinner (f.eks mus øre hud og pote hud). Hold overvåke disse vitale hvert 15 min under operasjonen. Bemerk: Ingen bevegelse av dyret indikerer at dyret er tilstrekkelig bedøvet og klar for operasjon.
- Bruk veterinær salve på øynene for å forhindre tørrhet.
- Barbere musen på nedre del av magen, spesielt høyre lyske området der kirurgi og injeksjon vilta plass.
Merk: Det er ikke nødvendig hvis atymiske nakne mus blir brukt. - Sett musen på ryggen, spre bena i sine naturlige posisjoner og hold tærne til mobil disseksjon papp med tape.
- Tørk høyre lyske området med 70% isopropyl etanol dynket sterile bomullspinner, fulgt med Betadine kirurgisk kratt flere ganger.
3. felles bekken Vein og arteria Plassering og separasjon
- Lag en hud snitt på 1,0 - 1,2 cm lang mellom den 4. og 5 th brystvorter i nedre høyre del av magen ved hjelp av sterile, # 10 karbonstål skalpellblader holdt i en nr tre håndtak. Deretter bruker en steril kirurgisk drapere å dekke dyret kroppen unntatt innsnitt området.
- Flytt dyret til standard benk toppen disseksjon mikroskop. Bruk en forstørrelse på 4X for injeksjon.
- Under 4X forstørrelse av disseksjon mikroskop, setter sløv separasjons pinsett mellom fettvev og peritoneum, og skyv vev utover på begge sider for å avsløre bekkenårer og nerver (se figur 1).
Merk: arterien mellom aorta fra midtlinjen og den nedre delen av arterien grener kalles felles bekkenarterie. Det er der injeksjonen foregår. - Bruk ett par av rette fine tang til å bryte gjennom bindevev (som en membran) mellom fartøy og nerve, nærmere skipene.
- Slå de rette fin pinsett til venstre. Grab et par vinklede fin pinsett ved hjelp av høyre hånd. Sett høyre hånd tang i samme posisjon hvor bindevev har blitt brutt. Og så stikke høyre hånd tang gjennom, under fartøyene.
- Samtidig, sett venstre hånd tang i bindevev på venstre side av skipene for å veilede de rette hånd tang går gjennom.
- Når høyre hånd tang får under fartøyene, prøv å skille fartøy fra den omkringliggende tissue litt mer, og deretter holde dem på toppen av høyre hånd tang.
- Bruk venstre hånd pinsett til å levere spissen av en 4-0 silke sutur til høyre tang, og trekk deretter sutur forsiktig og langsomt gjennom under fartøyene. Merk: Nå både felles vene og blodårene blir løftet opp av sutur (se figur 2).
4. Injeksjon og Post-injeksjon Care
- Forbered cellene for injeksjon i en 31 G insulinsprøyte. Bruk 100 mL av cellesuspensjonen, i PBS per injeksjon. Sørg for å pipettere opp og ned flere ganger for å skille cellene og unngå aggregering slik at de injiserte cellene ikke vil tette og blokkere blodstrømmen.
- Med den vinklede tang i venstre hånd, sette tang under båtene langs veiledning av sutur, og deretter åpne de to armene av tang, har fartøyene holdt forsiktig på tang.
Merk: Intervallet mellom de to armene av tang blir jegnjection nettstedet. - Hold 31 G nål med 100 ul cellesuspensjoner i den høyre hånd, med skråkant av nålen oppover, klar for injeksjon.
- Sett nålen inn i arterien lumen (blod vil gå inn nålespissen). Deretter skyver cellesuspensjon langsomt i å injisere cellene. Cellesuspensjonen vil skyve bort de røde blod i beholderen. Prøv ikke å bryte fartøyene eller lekke cellesuspensjonen ut.
- Når injeksjonen er ferdig, forsiktig trekke tilbake nål og holde holde skipene opp på venstre tang for å stoppe blødninger. Deretter trekker bort sutur.
- Trekk bort venstre hånd tang, og raskt bruke en bomullspinne for å trykke arterien innsnitt området for å stoppe blødninger.
Merk: Vanligvis 5-10 min kontinuerlig press er tilstrekkelig for å stoppe blødningen. - Når blødningen stopper, bruke hud lim for å lukke huden kantene av kirurgi området. Lag en øre-tag, og se etter bioluminescence signale å undersøke fordelingen av injiserte celler. <br /> Merk: En vellykket injeksjon vil resultere i et bilde som ligner på figur 3.
- Sjekk Bioluminescens signalering ved injeksjon av 100 pl 15 mg / ml luciferin i PBS ved 75 mg / kg mus konsentrasjon via den intra-orbital sinus.
- For intra-orbital injeksjon, sette fingrene på begge sider av mus øyet, bruke press for å gjøre øyet ballen litt pop ut fra øyet ramme, setter 28 G insulin sprøyte nåler mellom øye ball og nese, og deretter sakte presse sprøyte for å injisere luciferin .
Merk: Ved riktig posisjon, bør nålen være i stand til å nå en dybde på 2 - 3 mm før den treffer hardt vev (bein). - Plassere musen i avbildningssystem for in vivo avbildning hele dyr for 10 - 60 sek løpet av 5 min (se figur 3).
Merk: En valgfri prosedyren er å implantere østradiol pellet inn på baksiden av dyr for å gi ekstra østradiol. Dette vil akselerere veksten av ER + kreftceller (for eksempel, MCF-7celler) 15.
- For intra-orbital injeksjon, sette fingrene på begge sider av mus øyet, bruke press for å gjøre øyet ballen litt pop ut fra øyet ramme, setter 28 G insulin sprøyte nåler mellom øye ball og nese, og deretter sakte presse sprøyte for å injisere luciferin .
- Sjekk Bioluminescens signalering ved injeksjon av 100 pl 15 mg / ml luciferin i PBS ved 75 mg / kg mus konsentrasjon via den intra-orbital sinus.
- La musen på en varm oppvarming puten før det våkner. Overvåk blødning, hevelse, tegn på dehiscence og smerter under den postoperative perioden. Sett musene tilbake til buret med smertestillende dekning (carprofin kosttilskudd foreslått) gitt for smertebehandling inntil ingen tegn til smerte. Følg nøye med og omsorg for dyrene i løpet av 7 dager etter operasjonen.
5. Overvåking metastatisk Vekst
- histomorfometri:
- Harvest-tumor bærende bein vev, fikse bein i 4% paraformaldehyde i 24 timer, deretter avkalk dem i pH 7,0 14% EDTA løsning for 3 - 5 dager, og utsett dem til parafin innebygging som tidligere beskrevet 14.
- § parafin-embed benvev på tykkelsen av tre mikrometer og utføre standard histologisk metode for Hematoxylin / eosin farging som tidligere beskrevet 14.
- Immunohistochemisprøve:
- Subject parafin-embedded tumor bærende bein skyves til immunhistokjemi flekker til ulike formål som tidligere beskrevet 14. I korthet immunfarging av MCF7 kreftceller hos anti-GFP-antistoffer, og immunfarging av osteogene celler (pre-osteoblaster og osteoblaster) av anti-Osterix antistoffer og anti-alkalisk fosfatase (ALP) antistoffer, henholdsvis.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1 illustrerer den anatomiske plassering og forhold av felles bekkenarterie (rød) og vene (blå).
Figur 2 viser relative stilling av iliac årer og nerver i henhold til disseksjon mikroskopi. Som vist i figur 2A, kar og nerver er rett under peritoneal vegg og kan bli avdekket etter at huden innsnitt er gjort, og peritoneum skyves bort. Den felles iliaca vene ligger på venstre side, og er større og mørkere enn arterien. Arterien er i midten, og ser rosa. Det er tynnere enn vene, men har tykkere muskelveggen. Den vene og arterie er parallelle og tett forbundet med hverandre. Lenger til høyre er den hvite lumbosacral nerve. Figur 2B viser vanlige bekken fartøy adskilt fra de omkringliggende bindevev, muskler og nerver, og løftet opp av en 4-0 silke sutur. Den felles bekkenarterie vene, arterie, og lumbosakrale nerve er også indikert.
Figur 3 viser representative in vivo og ex vivo Bioluminescens bilder av dyr etter intra-iliaca injeksjon. Fem 10 x 5 GFP-luciferin-merkede MCF7-celler i 100 ul ble administrert til høyre bakbenet av musen ved intra-arteria iliaca injeksjon. D-luciferin ble deretter administrert ved intra bane sinus injeksjon, etterfulgt av in vivo hele dyr bioluminescens avbildning. De injiserte MCF7-celler ble anriket ved den høyre bakbenet av musen som angitt ved Bioluminescens signaler (figur 3A). In vivo Bioluminescens signaler av den hele dyret ble sporet hver 3. dag eller hver uke, og deretter muse benvev ble høstet på dag 14 etter injeksjon når hele dyret Bioluminescens signal nådd en viss terskel (Photon flux> 10 4). Etter D-luciferin administrasjon, ble beinet vev fra intra-iliacusarterie injisert mus raskt høstet og nedsenket i PBS for ex vivo imaging. Den sterke Bioluminescens signal fra den intra-bekkenarterie injiserte høyre bakben benet, men ikke fra den venstre styre benet viste den spesifikke lokalisering av injiserte celler (figur 3B).
Figur 4 viser representative bilder av histologiske og immunfluorescens farging. Når tumorbærende ben ble høstet, ble de utsatt for paraformaldehydfiksering, EDTA avkalking, og deretter parafin-innebygging. Tre mikrometer bein lysbildene var forberedt og standard H & E farging ble utført. De kompakte brostein-lignende celler med større kjerner var mikroskopiske MCF7 metastatiske lesjoner i benvevet 14 dager etter intra-bekkenarterie injeksjon, som antydet med de røde pilene. Benmargs (BM) Og de store rosa flate trabekulære bein (TB) med glissen kjerner er så merket (figur 4A). 4B viser GFP-merket MCF7 celler (grønn), ALP-merket osteoblaster (røde i det venstre bildet), og Osterix-merket pre-osteoblaster (røde i det rette bildet) etter immunfluorescens farging. Blå DAPI farging indikerer kjernen.
Fig. 1: Anatomy of felles bekkenarterie (rød) og vene (blå) i mus Abdominal aorta, felles bekkenarterie, ytre bekkenarterie, og lårarterien er vist som angitt. Injeksjon utføres på vanlig iliacusarterie fra aorta mot lårarterie retning. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2:. Iliaca årer og nerver i henhold til standard disseksjon mikroskop med 4X forstørrelse (a) Bilde av de intakte årer og nerver. (B) Bilde av løftet fartøy. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: Representant in vivo og ex vivo Bioluminescens bilder av mus etter intra-iliaca injeksjon. (A) Et in vivo bioluminescens signal av hele dyret rett etter injeksjon. (B) ex vivo bioluminesens signalfra venstre kontroll bein og riktig injisert bein fra injisert dyr som ble høstet 14 dager senere. Alle bioluminescence signalene ble målt ved å følge produsentens anbefalte prosedyre og innstillinger. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: Representative bilder av histologiske og immunfluorescens farging. (A) Representant H & E farging bilde av MCF7- tumorbærende benvev etter intra-iliaca injeksjon. Scale bar = 25 mikrometer. Merk: HE farging er ikke en effektiv måte å oppdage svulster. I lavere forstørrelse, er HE flekker ikke er følsom nok til å skille svulster. I høyere forstørrelse, er det ikke effektivt å skanne alle aReas. (B) immunofluorescerende flekker bilder av MCF7 tumorbærende benvev. Green: GFP-merket MCF7 celler, røde i det venstre bildet: ALP-merket osteoblaster, Red i riktig bilde: Osterix merkede forhånds osteoblaster. Blå DAPI farging indikerer kjernen. Scale bar = 25 mikrometer. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Selv om bare den bekkenarterien er målet for injeksjon for kreftceller, anbefaler vi separasjon av både hofte venen og arterien fra omkringliggende vev, og å løfte dem sammen som en pakke. Dette er fordi den vene og arterie utstrakt kontakt med hverandre, og den venøse beholderveggen er tynn, og er lett å bryte. Derfor, for en vellykket injeksjon, det sparer tid og krefter på å holde opp de to skipene sammen, selv om kreftceller blir injisert kun til arterien. En 4-0 silke sutur brukes til å hjelpe denne prosessen som vist i figur 2. Den sutur kan også bidra til å stoppe blødning bør det skje.
De fleste trinnene IIA injeksjon må utføres under disseksjon mikroskop. Muse fartøyene er myke og små, noe som gjør prosedyrene utfordrende. Imidlertid, etter tilstrekkelig praksis kan suksessraten når 90 - 100% i vår erfaring.
Med denne teknikken, kan forskere være enbart å etablere bein kolonisering modeller av sine favorittkreftcellemodeller, inkludert de som tradisjonelt sett "ikke-metastatisk". MCF-7-celler representerer et slikt eksempel. Faktisk, når du ankommer i benet mikromiljøet, MCF-7 celler gjennomgå en kort dvalen før du tar av til å kolonisere. Svært få spontane skjelettmetastaser er påvist hos dyr bærer ortotopiske MCF-7 xenografter. Imidlertid kan svikt også skyldes den gjenværende mengde av disseminerte tumorceller, den langsomme initiering av kolonisering, og den mer aggressive veksten av ortotopiske tumorer (som dreper dyrene før benlesjoner kan etablere). Således kan mangelen på deteksjon ikke tas som bevis mot MCF-7 celler evne til å metastasere. Faktisk kan lat eller sovende bein mikrometastaser være mer utbredt i menneskelige brystkreftpasienter, som foreslått av år-til-tiår dvalen som er ofte sett i klinikken.
IIA injeksjon kan brukes ikke bare til luminal eller basal brystkreftceller, men også til andre krefttyper, for eksempel prostatakreft. Når det kombineres med ulike valg av teknikker overvåking skjelettsykdommer, kan intra-iliacusarterie injeksjon gi et betydelig bidrag til mange forskningsformål. Vi vanligvis bruker bioluminescence signale å spore bein metastase progresjon etter intra-iliacusarterie injeksjon, og deretter høste tumorbærende bein for fluorescerende immunhistokjemi flekker å definere samspillet mellom kreftceller og omkringliggende bein mikromiljøet nisjer. Benhistomorfometri 16-17 og μCT 18-20 kan brukes til å evaluere benbygning endringer og andre anatomiske detaljer om bein som er forårsaket av vaksinen av kreftceller. Riktig betraktninger og kombinasjoner bør bestemmes av hver gruppe for deres spesifikke forskningsformål.
I likhet med intra-tibial 8-10 og intra-hjerte inokulasjon 11-13, en påminnelse av intra-ilIAC arterie injeksjon er at den ikke rekapitulere tidlige stadier i metastatisk prosess forut for emboli og oppføring av tumorceller inn i sirkulasjonen. Ideelt sett ville en spontan metastase prosess som starter fra ortotopiske svulster være nødvendig for å full rekapitulere metastase kaskade. Imidlertid er denne prosessen svært ineffektive i de fleste modeller, med noen få unntak, slik som noen bein-tropisk 4T1 under kloner 5-6 og MSP overuttrykt PyMT transgen musemodell 7. Vi håper IIA injeksjon vil gi ny innsikt i benet koloniseringen prosessen, som igjen kan lette design og utvikling av virkelig effektive spontane bein metastase modeller for pre-kliniske studier.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Materials | |||
| DMEM | HyClone | SH30022.01 | |
| FBS | Gibco | 16000 | |
| Pen/Strep Amphatericin B | Lonza Biowhittaker | 17-745E | |
| PBS | Lonza Biowhittaker | 17-516F | |
| Trypsin/EDTA solution | HyClone | SH30042.01 | |
| 45 μM cell strainer | VWR International Laboratory | 195-2545 | |
| MediGel CPF with carprofen | Controlled item from veterinary care in BCM | For pain management | |
| Buprenorphine | Controlled item from veterinary care in BCM | For pain management | |
| Estradiol pellet | Innovative Research of America | SE-121 | |
| Ketamine and xylazine | Controlled item from veterinary care in BCM | ||
| Vet ointment | Controlled item from veterinary care in BCM | Avoid eye dryness | |
| Shaver | Oster | 78005-050 | For furred mice |
| Isopropyl ethanol | ACROS | 67-63-0 | |
| Betadine surgical scrub | Controlled item from veterinary care in BCM | ||
| #10 scalpel blades | Ted Pella, Inc | 549-3CS-10 | Multiple |
| No. 3 handle | Ted Pella, Inc | 541-31 | Need to be autoclaved |
| Sterile surgical drape | Sai Infusion Technology | PSS-SD1 | |
| Straight forceps | Roboz Surgical Instrument | RS-5132 | Need to be autoclaved |
| Straight fine forceps | Fine Science Tools | 11253-20 | Need to be autoclaved |
| Edged fine forceps | Fine Science Tools | 11253-25 | Need to be autoclaved |
| 4-0 Vicryl silk suture | Johnson & Johnson Health Care | J214H | |
| 31 G insuline syringes | BD | 328418 | Multiple |
| Q-tips cotton swabs (Sterile) | VWR International Laboratory | 89031-272 | |
| Skin glue | Henry Schein Animal Health | 31477 | For surgery site skin closure |
| Ear Tag Applicator | Fine Science Tools | 24220-00 | |
| Ear tags | Fine Science Tools | 24220-50 | |
| D-luciferin | Gold Biotechnology | LUCK | Avoid light and put on ice |
| 28 G insulin syringes | BD | 329410 | For intra-orbital injection |
| Paraformadehyde | Alfa Aesar | 30525-89-4 | For tissue fixation |
| EDTA | OmniPur | 4050 | For bone tissue decalficication |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| Dissection microscope | Leica | Leica S6E stereo | |
| IVIS Lumina II imaging system | Advanced Molecular Vision | ||
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Antibodies | |||
| Anti-GFP antibodies (JL-8) | Clontech | 632381 | |
| Anti-ALP antibodies | Abcam | ab108337 | |
| Anti-Osterix antibodies | Abcam | ab22552 |
References
- Kang, Y., et al. A multigenic program mediating breast cancer metastasis to bone. Cancer cell. 3 (6), 537-549 (2003).
- Lu, X., et al. VCAM-1 promotes osteolytic expansion of indolent bone micrometastasis of breast cancer by engaging alpha4beta1-positive osteoclast progenitors. Cancer cell. 20 (6), 701-714 (2011).
- Ell, B., Kang, Y.
- Kretschmann, K. L., Welm, A. L. Mouse models of breast cancer metastasis to bone. Cancer Metastasis Rev. 31 (3-4), 579-583 (2012).
- Lelekakis, M., et al. A novel orthotopic model of breast cancer metastasis to bone. Clin Exp Metastasis. 17 (2), 163-170 (1999).
- Rose, A. A., et al. Osteoactivin promotes breast cancer metastasis to bone. Mol Cancer Res. 5 (10), 1001-1014 (2007).
- Welm, A. L., et al. The macrophage-stimulating protein pathway promotes metastasis in a mouse model for breast cancer and predicts poor prognosis in humans. Proc Natl Acad Sci U S A. 104 (18), 7570-7575 (2007).
- Li, X., et al. Loss of TGF-beta Responsiveness in Prostate Stromal Cells Alters Chemokine Levels and Facilitates the Development of Mixed Osteoblastic/Osteolytic Bone Lessions. Mol. Cancer. Res. 10 (4), 494-503 (2012).
- Gregory, L. S., Choi, W., Burke, L., Clements, J. A. Breast Cancer Cells Induce Osteolytic Bone Lesions In vivo through a Reduction in Osteoblast Activity in Mice. PLoS ON. 8 (9), e68103 (2013).
- Waning, D. L., et al. Excess TGF-β mediates muscle weakness associated with bone metastases in mice. Nat Med. 21 (11), 1262-1271 (2015).
- Simmons, J. K., et al.
- Werbeck, J. L., et al. Tumor microenvironment regulates metastasis and metastasis genes of mouse MMTV-PymT mammary cancer cells in vivo. Vet Pathol. 51 (4), 868-881 (2014).
- Xiang, J., et al. CXCR4 Protein Epitope Mimetic Antagonist, POL5551, Disrupts Metastasis and Enhances Chemotherapy Effect in Triple Negative Breast Cancer. Mol Cancer Ther. 14 (11), 2473-2485 (2015).
- Wang, H., et al. The osteogenic niche promotes early-stage bone colonization of disseminated breast cancer cells. Cancer Cell. 27 (2), 193-210 (2015).
- Hoffmann, J., et al. Characterization of new estrogen receptor destabilizing compounds: effects on estrogen-sensitive and tamoxifen-resistant breast cancer. J Natl Cancer Inst. 96 (3), 210-218 (2004).
- Tannehill-Gregg, S. H., Levine, A. L., Nadella, M. V., Iguchi, H., Rosol, T. J. The effect of zoledronic acid and osteoprotegerin on growth of human lung cancer in the tibias of nude mice. Clin Exp Metastasis. 23 (1), 19-31 (2006).
- Slyfield, C. R., Tkachenko, E. V., Wilson, D. L., Hernandez, C. J.
- Koba, W., Jelicks, L. A., Fine, E. J. MicroPET/SPECT/CT imaging of small animal models of disease. Am J Pathol. 182 (2), 319-324 (2013).
- Simmons, J. K., et al. Canine prostate cancer cell line (Probasco) produces osteoblastic metastases in vivo. Prostate. 74 (13), 1251-1265 (2014).
- Amend, S. R., et al. Thrombospondin-1 regulates bone homeostasis through effects on bone matrix integrity and nitric oxide signaling in osteoclasts. J Bone Miner Res. 30 (1), 106-115 (2015).
