A method is described herein for the determination of inter-Kingdom association and competition (bacterial and fungal) for adherence to virus-infected HeLa cell monolayers. This protocol can be extended to multiple combinations of prokaryotes, eukaryotes, and viruses.
वर्गीकरण राज्यों है कि कवक, बैक्टीरिया और वायरस शामिल भर polymicrobial बातचीत का अध्ययन पहले से कैसे Microbiome के वायरल सदस्यों को इन वायरस से संक्रमित मेजबान कोशिकाओं के साथ बाद में सूक्ष्म जीव संबंधों को प्रभावित करने के लिए सम्मान के साथ जांच नहीं की गई है। बैक्टीरिया और कवक के साथ वायरस के सह बस्ती मुख्यतः मौखिक गुहा और जननांग पथ की श्लैष्मिक सतहों पर मौजूद है। श्लैष्मिक कोशिकाओं, विशेष रूप से लगातार क्रोनिक या लगातार अव्यक्त वायरल संक्रमण के साथ उन लोगों के लिए, एक महत्वपूर्ण संख्या में वायरस परिवर्तन के माध्यम से Microbiome के सदस्यों पर प्रभाव और व्यक्त रिसेप्टर्स के प्रकार हो सकता था। मेजबान कोशिका झिल्ली वास्तुकला में संशोधन biofilm गठन, यानी, पालन करने में पहला कदम आरंभ करने के लिए सामान्य वनस्पति और अवसरवादी रोगजनकों के बाद सदस्यों की बदल क्षमता पर नतीजा होगा। इस अध्ययन बायोफिल की दीक्षा पर quantitation और एचएसवी के प्रभाव के दृश्य परीक्षा के लिए एक विधि का वर्णनएम गठन (पालन) एस के ऑरियस और सी सफेद।
मानव शरीर में Microbiome का हिस्सा है कि भौगोलिक क्षेत्रों के कई वर्गीकरण राज्यों से विविध जीवों भी शामिल है। सेल सतहों का पालन biofilm गठन, जो Microbiome उपनिवेशन प्रक्रिया का हिस्सा है में एक आवश्यक पहला कदम है। Microbiome में शामिल वायरस है कि पुरानी और लगातार संक्रमण का कारण हो सकता है। इन वायरस से पुरानी सेल संक्रमण ख्यात रिसेप्टर उपलब्धता में एक परिवर्तन का कारण बन सकता है। 1,2 इसके अलावा, intracellular रोगजनकों द्वारा सेल प्रविष्टि भी मेजबान झिल्ली तरलता / hydrophobicity जो बदले में अन्य Microbiome सदस्यों की कुर्की, बैक्टीरिया और कवक सहित बदल सकता है प्रभावित कर सकता है । आदेश बातचीत है कि इन कई रोगजनकों मानव मेजबान का एक ही भौगोलिक क्षेत्रों में है कि सह स्थानीय बनाना बीच हो सकता है समझने के लिए, हम रोगज़नक़ों कि mucosal सतह पर उपस्थित वर्गीकरण राज्यों के स्पेक्ट्रम का प्रतिनिधित्व करने का बातचीत का अध्ययन करने के लिए सक्षम होना चाहिए।
टी "> Herpesviridae Microbiome के स्थायी सदस्य के रूप में मनुष्य की 100% में मौजूद रोगाणुओं के एक परिवार के हैं 3,4। इसके अलावा वे भी लगातार दोनों की उपस्थिति और लक्षण के अभाव में बहाया जा सकता है। विशेष रूप से, दाद सिंप्लेक्स वायरस -1 और दाद सिंप्लेक्स वायरस -2 (एचएसवी -1 और एचएसवी -2, क्रमशः) oronasopharynx और जननांग पथ में Microbiome के स्थायी सदस्य हैं। प्रतिरक्षा सक्षम व्यक्तियों में, दोनों एचएसवी -1 और एचएसवी -2 कारण gingivostomatitis, साथ ही जननांग दाद 5-8। इन साइटों पर, एचएसवी पुरानी लगातार स्पर्शोन्मुख वायरल nectins, Heparan सल्फेट, लिपिड राफ्ट और herpesvirus प्रवेश मध्यस्थ की सतह अभिव्यक्ति में परिवर्तन में कोशिकाओं परिणामों में बहा 9। एचएसवी की एंट्री / ट्यूमर नेक्रोसिस की विशेषता एक अव्यक्त संक्रमण का कारण बनता है कारक रिसेप्टर (HVEM / TNFR) 10-25। कुछ बैक्टीरिया और कवक, जैसे एस ऑरियस और सी albicans के लिए ये संभावित साझा प्रतिनिधित्व रिसेप्टर्स, जबकि जो अवसरवादी रोगजनकों,यह भी oronasopharynx 26,27 की श्लैष्मिक Microbiome के सदस्यों के रूप में निवास कर सकते हैं। Oronasopharynx एस के भीतर ऑरियस और सी सफेद उपनिवेशवाद की दो अलग-अलग साइटों पर कब्जा। प्राकृतिक दांत के साथ होस्ट में, मौखिक mucosa एचएसवी -1 और सी द्वारा साझा किया जाता है सफेद, पूर्वकाल नाक nares एस के कब्जे में हैं, जबकि ऑरियस 28। हालांकि, के बावजूद इन विट्रो निष्कर्ष है कि एस ऑरियस मुंह उपकला कोशिकाओं का पालन करता है, 29,30 एस ऑरियस बार बार मौखिक नमूनों से अलग है जब सामान्य ऊतक वर्तमान 29,30 है। लिटिल नैदानिक निष्कर्षों से परे है कि जननांग पथ सह-उपनिवेशवाद आलों के विषय में जाना जाता है एस ऑरियस एरोबिक योनिशोथ साथ जुड़ा हुआ है, जननांग सूजन, मुक्ति और dyspareunia के द्वारा होती है, जबकि सी सफेद मौखिक गुहा 31-35 में मनाया समान श्लैष्मिक घावों पैदा करता है। इस प्रकार, हालांकि मौखिक और जननांग microbi के इन सदस्योंome पार वर्गीकरण थोड़ा उनकी बातचीत के विषय में जाना जाता है राज्यों के रूप में यह प्रभावों मेजबान कोशिका की सतह से 5 पालन के माध्यम से biofilm गठन आरंभ करने की क्षमता। इस प्रोटोकॉल को प्रभावी ढंग से सह-उपनिवेशवाद / संक्रमण के कार्यात्मक परिणाम निर्धारित करने के लिए लागू किया गया है।वर्तमान में कोई जानकारी होस्ट Microbiome की अर्द्ध स्थायी सदस्यों को बताया कि कई वर्गीकरण डोमेन, यानी, प्रोकार्योटिक यूकेरियोटिक और वायरल पार करने के लिए स्थायी बीच जटिल संबंधों पर उपलब्ध है। इसलिए हम ?…
The authors have nothing to disclose.
This project was supported by Midwestern University, IL Office of Research and Sponsored Programs (ORSP) and Midwestern University College of Dental Medicine-Illinois (CDMI).
C.albicans | |||
BBL Sabouraud Dextrose | BD | 211584 | |
Fungisel Agar | Dot Scientific | 7205A | |
S.aureus | |||
Mannitol Salt Agar | Troy Biologicals | 7143B | |
Sheep blood agar | Troy Biologicals | 221239 | |
Hela cells | |||
1xDMEM (Dubelcco's Modified Eagle Medium, with 4.5 g/L glucose and L-glutamine, without sodium pyruvate | Corning | 10-017-CM | |
Gentamicin 50mg/ml | Sigma | 1397 | 50µg/ml final concentration in the complete DMEM |
Trypsin EDTA (0.05% Trypsin, 0.53M EDTA)Solution 1X | Corning | 25-052-CI | |
Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11150 | 10% final concentration in the complete DMEM |
Other medium and reagents | |||
ONPG | Thermo Scientific | 34055 | |
Ultra-Pure X gal | Invitrogen | 15520-018 | |
1x HBSS (Hanks' Balanced Salt Solution) | Corning | 20-021-CV | |
1XPBS | Dot Scientific | 30042-500 | |
RIPA Lysis | Life Technologies | 89901 | |
Staining | |||
Methanol | Fisher Scientific | A433P-4 | |
HSV 1&2, specific for gD | ViroStat | 196 | |
DAPI | SIGMA | D8417-5MG | |
Gram Crystal Violet | Troy Biologicals | 212527 | |
Supplies | |||
Petri dish 100X15 | Dot Scientific | 229693 | |
Petri dish 150X15 | Kord Valmark | 2902 | |
96-Well plates | Evergreen Scientific | 222-8030-01F | |
24-well plates | Evergreen Scientific | 222-8044-01F | |
Culture tubes 100×13 | Thomas Scientific | 9187L61 | |
Cover slip circles, 12mm | Deckglaser | CB00120RA1 |