Abstract
单核细胞是可通过与某些慢性炎性疾病相关的病原体和炎症被激活先天免疫细胞。单核细胞激活诱导效应职能和免受氧化糖酵解来代谢随之而来的转变，伴随增加葡萄糖转运蛋白表达。这增加了糖酵解代谢也为单核细胞经过培训免疫力，先天免疫记忆形式观察。虽然在体外单核细胞检查葡萄糖转运蛋白表达和葡萄糖摄取的协议进行了说明，没有已被多参数流式细胞仪在全血检测。我们描述了荧光葡萄糖类似物2-NBDG摄取全血中总单核细胞和经典（CD14 + CD16 - ）测定的多参数流式细胞协议，中间体（CD14 + CD16 +）和非经典（ CD14 + CD16 +）单核细胞亚群。该方法可用于检查稳态和炎症性疾病中总单核细胞和单核细胞亚群的葡萄糖转运蛋白表达和葡萄糖摄取，并且可以容易地修改，以检查血液中的其它白细胞和白细胞亚群的葡萄糖摄取。
Introduction
单核细胞是正在迅速动员到感染和炎症1的位点的人的先天免疫系统的重要组成部分。单核细胞的活化是限制由病原体产生急性损害的关键，也是中央对多种慢性疾病，包括动脉粥样硬化2，3癌症和HIV 4,5的发病机制。
静息和活化的单核细胞的代谢显着不同，以利用氧化代谢利用糖酵解代谢（ 即 ，葡萄糖发酵成乳酸）静息单核细胞和活化的单核6。单核细胞的活化诱导葡萄糖转运，可以增加葡萄糖摄取糖酵解代谢7的表达。单核细胞葡萄糖转运蛋白1（的Glut1）是激活期间上调一个这样的转运，其表达已显示导致生产v中促炎细胞因子的itro和在肥胖小鼠8的脂肪组织。由卡波西肉瘤相关疱疹病毒单核细胞系感染导致9的Glut1细胞上调，我们最近发现，慢性感染艾滋病毒期间的Glut1表达的单核细胞百分比增加是未经处理及联合抗逆转录病毒疗法治疗的感染10时在座。总而言之，这些研究表明，葡萄糖摄取和由单核细胞糖酵解代谢许多炎性疾病的重要方面。因此，一个简单的方法来测量稳态期间的单核细胞的Glut1表达和葡萄糖摄取和炎性疾病可能是使用了广泛的研究人员。
人单核细胞是异质的，正在由能够由细胞表面标记物CD14和CD16 11,12的差异表达进行检查三个不同的子集。经典单核细胞表达CD14的较高水平，但不表达CD16（CD14 + CD16 - ），中间的单核细胞表达CD14的高水平和CD16（CD14 + CD16 +）的中间电平，和非经典的单核细胞表达CD14的水平低和CD16高的水平（CD14 + CD16 +）。表达CD16的单核细胞被称为CD16 +单核细胞，这相比CD16 -单核细胞有炎性细胞因子的高表达和能力，更有效地呈递抗原13,14。单核细胞的大约10％与炎症15中观察到的更高的百分比的动态平衡期间表达CD16。单核细胞亚群与某些疾病状态相关联，并且可能是疾病和疾病进展16的有用的生物标志物。
我们的目标是确定可以测量通过在尽可能接近的phy条件人单核细胞和单核细胞亚群的葡萄糖转运蛋白表达和葡萄糖摄取的方法siological条件越好。以前的研究测量的单核细胞葡萄糖转运蛋白的表达和葡萄糖摄取17,18，虽然这些检测方法可以比较生理条件19已经改变蛋白表达分离的单核细胞，并没有以前的研究调查了人单核细胞亚群。使用多参数流式细胞术，我们描述的方法来检查该荧光葡萄糖类似物2-NBDG按总单核细胞和单核细胞亚群的葡萄糖转运蛋白表达和摄取（基于CD14和CD16的表达）全未经处理的血液内。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
注：艾滋病病毒感染者和艾滋病病毒感染者是从传染病股在阿尔弗雷德医院在墨尔本，澳大利亚招募，并从当地社区，分别为。从所有参与者获得知情同意书，研究批准了阿尔弗雷德医院研究伦理委员会。
在单核细胞和单核细胞亚群1.细胞的Glut1表面检测
- 收集血液柠檬酸ACD-B的抗凝管并开始实验在生物安全柜收集1小时之内。
- 加入100微升血液聚丙烯管。加2ml 1X的裂解液（见材料表 ）来管，而冰，移液轻轻混合。孵育在冰上15分钟。离心在220×g离心5分钟。
- 倒出并通过加入大约2-4毫升洗涤溶液（在1×PBS中的0.5％BSA）并在220 xg离心离心5分钟洗涤两次。
- 使用管道TTE要小心地取出尽可能多的洗涤液成为可能。在100微升洗涤液管放置在冰上重新挂起。
- 确定具体的单核细胞亚群染色细胞与步骤1.4制得每100抗体微升细胞悬浮液的以下量：5微升抗CD3-PE，5微升抗-CD14-APC，5微升抗CD16-PECy7，5微升的Glut1 -FITC或的IgG2b-FITC（同型对照管）。
- 在冰上放置在黑暗中30分钟。用洗涤液洗2次。 200-300微升在1X PBS在0.5％甲醛固定。
- 以下激发和发射波长在24小时之内流式细胞仪能够检测4种颜色流分析：FITC（488，530），PE（488，575），PECy7（488，780），APC（633，660），10。
2.葡萄糖摄取单核细胞
- 收集在步骤1.1中的聚丙烯管移液器90微升的血液。添加10微升14.60μM2 NBDG工作液来90微升的血液（1.46毫米终浓度），并轻轻一抖混合。这是非常关键的覆盖管用铝箔限制2 NBDG曝光。
- 孵育在37℃下在黑暗中15-30分钟，然后立即置于冰上。加4毫升1×FACS裂解解决管在冰冷。离心在4 220 XG °C为5分钟。
- 通过加入4毫升洗涤溶液（0.5％在1×PBS中的BSA）洗涤一次。离心在4 220 XG °C为5分钟。倒出并在冰上的地方。
- 染色细胞用抗体：5微升抗CD3-PE，5微升抗-CD14-APC和5μl抗CD16-PECy7。混合，并在冰上放置在黑暗中30分钟。
注：在此期间确保流式细胞仪已经准备好进行实时分析。获得以下几方面激发和发射波长范围内的单元格：2 NBDG（488，530），PE（488，575），PECy7（488，780），APC（633，660）。 - 4ml冰冷的洗涤缓冲液（在1×PBS中的0.5％BSA）添加到管中。离心220 XG洗一次在4 °C为5分钟。倒出并加入200-300微升冰旧的PBS，并保持在黑暗冰（用铝箔覆盖）。在流式细胞仪采用激发和发射波长设定在2.4步10分钟的流量进行分析。
3.数据采集与分析
注意：假设流式细胞仪和数据分析方面的知识。
- 用流式细胞仪能够至少4色分析的流，使用未染色和单独地染色样品设置的补偿。
注意：使用FITC标记的CD4和CD14单染色可用于的Glut1和2- NBDG补偿。 - 建立和采集取样前标注相应的窗口。绘制围绕单核细胞群体的栅极，并获得每个样品100,000-300,000事件在中等速率。每个样品赔偿50,000个事件就足够了。
注：补偿之前，可以进行采样采集或在单细胞分析软件，以下的标准程序。 - 出口和数据保存到一个适当的位置。打开的单细胞分析软件如的FlowJo或其他分析软件（ 参考图1）和拖放样品作为指定（ 参考图2）。
- 双击打开文件（ 参考图3）。画一个圆门了一种基于单核细胞和图1A和补充图4所示侧向散射特性。双击单核细胞的人口。观察周围画了一个CD3箱-人口（ 参考图4）。
- 双击CD3 -人口。观察单核细胞亚群上的“X”轴选择CD14-APC和CD16-PECy7上的“Y'-轴，并相应标签（ 参考图5）。
- 那里有没有明显阳性和阴性群，测量的Glut1在特定的单核细胞亚群表达或2-NBDG摄取。通过减去同种型和不2- NBDG背景（ 参考图6）确定的Glut1和2- NBDG的平均荧光强度（MFI）。
- 其中，定义种群存在，则使用的IgG2b-FITC来设置的栅极，并确定百分比阳性细胞（ 图3）。
注：使用此方法来分析总CD14 +单核细胞。由于2-NBDG摄取通常是由在荧光移位标记强度数据最好由MFI和直方图表示。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
补偿必须单独荧光染料，以防止荧光溢出来执行。单核细胞首先通过选通基于前向和侧向散射富集。给出的图是从六个或更多个参与者对全血进行至少六个独立实验的代表如先前报道10 图1A示出了由CD3内选通由细胞散射和T细胞的排斥的单核细胞的最初选通-人口。然后单核细胞被选通为单独或与CD16以确定总单核细胞或单核细胞亚群的组合CD14的表达分别如图1B和图1C，。 -应表示大约100倍以上CD经典的单核细胞（CD14 + CD16）：单核细胞亚群的分析，如先前所描述12以下命名法，应施加14 MFI大于同种型对照和CD16的MFI应类似于同种型对照;中间的单核细胞（CD14 + CD16 +）应该表达较同型对照约100倍，更大的CD14 MFI和大约10倍更大的CD16 MFI较同型对照;非经典的单核细胞（CD14 + CD16 +）应具有类似的MFI为CD14和同种型对照和比同种型对照大约100倍更大的CD16的MFI。无CD14和CD16的表达细胞是不被认为单核细胞，不应该被包括在门控。然后可检查葡萄糖转运蛋白表达门控单核细胞或单核细胞亚群。如图2中所示，CD14 +的Glut1 +单核细胞的不同群体可以从HIV感染的个体，其中，感染的特征在于炎症的慢性状态得到的细胞观察到的，最显着的。类似的，但难得的CD14 + +的Glut1细胞可能OBS在HIV感染的人（ 图3A）的特定的单核细胞亚群内erved，但在HIV +个体（ 图3B）更显着。值得注意的是，在不存在明显的种群，它可适当表示的结果以平均值或中位数荧光强度，这考虑到在的Glut1细胞表面表达的累积增加。
葡萄糖摄取可以通过比较全血与2- NBDG或用于选通单核细胞或单核细胞亚群的车辆控制孵育来评估。我们以前表明，单核细胞的大约50％是15分钟温育10之后2-NBDG阳性。这种吸收量可以检测2 NBDG无达到饱和，当单核细胞2 NBDG摄取的差异可能不再存在。由HIV感染和艾滋病的人+单核细胞分析2 NBDG摄取由HIV +者，细胞显示较高的摄取哪些是与所述的Glut1表达数据（ 图4 - 5）的协议。总的来说，这些结果表明，这里所描述的测定法可用于潜在地研究在引发炎症状态，例如糖尿病，心血管疾病，以及病毒和细菌感染的生物环境中的单核细胞的代谢活动。
图1：选通用来分析代表艾滋病毒和艾滋病病毒阳性的血液样本总量的单核细胞和单核细胞亚群战略的全血样品通过流式细胞仪收集的1小时内分析了单核细胞表面表达的Glut1。 （A）细胞基于前向和侧向散射特性和CD3表达门控。 （ 二 ）审查总单核细胞，CD3 -细胞，然后门控为CD14的表达。 （C 请点击此处查看该图的放大版本。
图2：从代表性的艾滋病毒和艾滋病病毒阳性血液样本总单核细胞表面的Glut1表达的分析 ，从HIV感染和艾滋病病毒感染初次接受治疗的人被染色用FITC标记的同型的控制或的Glut1抗体CD14 +单核细胞，请点击这里查看该图的放大版本。
图3：从代表性的艾滋病毒和艾滋病病毒阳性的血液样本的单核细胞亚群细胞表面的Glut1表达的分析单核细胞亚群用FITC标记的同型的控制或的Glut1抗体（A）HIV感染或（B）HIV感染治疗天真染色血液样本。 请点击此处查看该图的放大版本。
图4：按总CD14 +单核细胞从代表艾滋病毒和艾滋病病毒阳性血样 HIV感染或感染艾滋病毒的初次接受治疗的人血液2- NBDG的摄取在终浓度与车辆或2 NBDG培养1.46μM洗涤前15分钟，并在图1描述的与细胞表面的抗体门单核细胞培养请点击此处查看该图的放大版本。
图5：2 NBDG摄取单核细胞亚群的代表艾滋病毒和艾滋病病毒+全血样本 HIV感染或感染艾滋病毒的初次接受治疗的人的血液以1.46毫米的15终浓度与车辆或2 NBDG培养分洗涤前和在图1描述的细胞表面的抗体门单核细胞亚群的培育请点击此处查看该图的放大版本。
together.within页=“1”> 
参考图1：流式细胞仪细胞分析软件工作区窗口，请点击此处查看或下载本补充身影。
补充图2：范例数据被拖拽到这个工作区，请点击此处查看或下载本补充身影。
55 / Supp_Figure_3_Double_Click_to_open_file_Small.jpg“/>
补充图3：在工作区的样品，数据085被双点击，和一个第二窗口出现表示基于前向新鲜的全血样品（FSC）和侧向散射中的三个主要的细胞群（淋巴细胞，单核细胞和嗜中性粒细胞）（SSC） 。 请点击此处查看或下载本补充身影。
补充图4：单核细胞是基于前向（FSC）和侧向散射（SSC）进行门控。人口双击了这带来了一个新的窗口。 CD3上的“X”轴和CD3阴性人群选择（门控出淋巴细胞）呈S当选。 请点击此处查看或下载本补充身影。
参考图5：CD3 -单核细胞人口双击了该长大的，其中单核细胞亚群可根据CD16和CD14表达式定义一个新的窗口。 请点击此处查看或下载本补充身影。
补充图6：Monocyte亚群被选中，的Glut1细胞表面表达（平均荧光强度：MFI）由从“加统计”窗口中选择“统计”直方图窗口，“平均”，并从“参数”中选择的Glut1获得下拉菜单。 请点击此处查看或下载本补充身影。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
这里描述的协议细节的简单方法来检查在全血中的单核细胞和单核细胞亚群的葡萄糖转运蛋白表达和荧光葡萄糖类似物的摄取。通过在全血评估-2- NBDG摄取，此技术允许类似于在体内条件。先前的研究中通过密度离心17日全血中分离的单核细胞检测6 NBDG摄取。然而，这项研究并没有审查的单核细胞亚群，并从全血中单核细胞的分离可以潜在地改变某些细胞表面分子19的表达。放射性葡萄糖示踪剂也已用于测量的葡萄糖20,21单核细胞摄取，但是单核细胞必须为此方法和放射性的用途来预先分离需要显著安全预防措施。我们的协议采用常规的生物安全程序并且是最低限度地操纵，从而允许2-NBDG的流式细胞测量由单核细胞和单核细胞亚群在体内条件模仿吸收。
2-NBDG进入糖酵解途径和已经显示被细胞代谢成非荧光分子22。因此，重要的是通过保持在4℃下冷却的细胞，以限制后代谢-2- NBDG孵育。 6- NBDG是另一个荧光葡萄糖类似物，可使用，但因为它不进入糖酵解途径，因此，不能准确地反映了细胞23的生物能量状态是不太有用。
如果利用重叠光谱荧光，补偿变得至关重要，以防止荧光外溢。在这个协议中，我们使用与CD14和CD16逐个染色来设置补偿参数的单核细胞，但也可以使用补偿珠进行的细胞表面标记物的补偿。
粒细胞可表达CD16，但可以通过门控出被排除CD15表达细胞。然而，基于光散射性质可以限制粒的数量的单核细胞的严格选通包括在分析中。如果流式细胞仪是可用更多的通道，粒细胞标记物CD66b也可用于排除在分析粒细胞。
在这项研究中所用的的Glut1抗体结合至细胞表面的表位，因此，不结合于细胞内的Glut1。结合于细胞内的Glut1表位的抗体可被用于测量总的Glut1单核细胞的表达，但细胞必须染色10之前透。除了单核细胞，该技术可以用来检查在血液中发现的其它白细胞葡萄糖摄取和代谢。使用此处描述的方法，我们进行了广泛研究T细胞摄取2-NBDG的，并且还通过NK细胞24检测2-NBDG摄取。对于成功侦破表达的Glut1和2 NBDG摄取的当务之急是要限制红血细胞裂解液的痕迹洗涤细胞用根据本协议过量洗涤缓冲液，并且我们发现FITC或APC标记的Glut1抗体给予比PE或PerCP缀合物更好的信号。我们还没有研究这方面的原因。
因为细胞即使在低温下是代谢活性，这是至关重要的下面，在37 2-NBDG孵化 ℃，在4℃下该管被直接保持在冰上和离心进行。在缺乏强有力2 NBDG信号，检查是否使用了正确的集中，在适当的时候降低了房间，生物安全柜和覆盖管带箔曝光。优化可以通过设置一个时间过程-2- NBDG摄取实验5，15，20，30，60，和90分钟是必需的。通常情况下，最佳的时间应为10〜60分钟，这取决于细胞类型和它们的活化状态。
与2 NBDG摄取试验的主要限制是光SENSitivity与它正在由细胞所利用的事实一起。因此，它以限制的样本数，以确保最后的样品是在第一个30分钟内进行分析是很重要的。的生物限制在于，即使的Glut1表达非经典的单核细胞，和的Glut1表达对非经典的单核细胞的频率比传统的单核细胞显著越大，在两个亚群10之间-2- NBDG摄取不存在任何差异。这就提出了其他生产过剩，如GLUT3和GLUT4表达于单核细胞可能参与葡萄糖代谢在不同疾病的设置的可能性。它也可能是的Glut1的活性也可被翻译调控交。
我们的流式细胞葡萄糖摄取协议通过放射性同位素标记的主要优点是该技术与免疫分析相结合，以确定和研究中SMAL免疫细胞的特异性亚群的能力血升容积。除了在APC缀合的抗的Glut1可以应用于同时分析的Glut1细胞表面表达和2- NBDG摄取。由于2-NBDG摄取的Glut1表达的改变以前尚未证实，但这种可能性不能被排除。
增加的葡萄糖摄取和代谢的免疫细胞是活化的T细胞和单核细胞25-27的一个标志。这些细胞可以在响应中激活病原体感染28,29，及炎症信号的条件，例如自体免疫疾病，如狼疮30-32，以及肥胖和糖尿病8,33。还需要用于癌症细胞存活，生长和转移34增加的葡萄糖代谢。值得注意的是，在免疫细胞的代谢失调已成为HIV感染的标志，并与免疫激活24，炎症10，和感染CD4 + T细胞35-37相关联。因此，这种方法将是感兴趣的不同的观众，包括那些在炎症介导的疾病，癌症，感染性疾病，免疫学和immunometabolism 38的兴趣。
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
这项研究是由澳大利亚中心艾滋病毒和肝炎病毒研究从华盛顿艾滋病研究中心大学（CFAR），根据奖号AI027757美国国立卫生研究院资助的程序，它支持（ACH 2）和2010年的发展拨款（CNIHR）资助通过下面的NIH研究所和研究中心（NIAID，NCI，镍氢电池，NIDA，NICHD，NHLBI，NIA）。 CSP是CNIHR和ACH 的赠款获得者。 SMC是澳大利亚（NHMRC）主要研究奖学金的国家健康和医学研究理事会的收件人。作者非常感谢由伯纳特机构收到了维多利亚经营性基础设施项目的支持这项工作的贡献。我们承认格扎Paukovic和伊娃ORLOWSKI - 奥利弗从AMREP流式细胞仪核心设施流式细胞仪培训和技术咨询协助。我们感谢安格斯摩根媒体教练和视频拍摄的组织。我们的感激杰西马森和讨伐异教徒阿卜杜勒阿齐兹K. Alzahrani在视频拍摄过程中的实验室协助。我们感谢大卫博士SIMAR在医学科学，新南威尔士大学，澳大利亚谁提供关键的方法建议，学校的努力。 CSP想感谢www.nice-consultants.com用于图形磋商。
作者的贡献：
CSP构思项目，设计并进行了实验，分析和解释数据，并且写了稿子。 JJA解释数据和撰写文章。 TRB写的稿子。 JMM解释的数据，提出关键知识的建议，并审查了原稿。 SMC解释的数据，做出关键的智力建议并审查了原稿。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| VACUETT Tube 9 ml ACD-B anticoagulant tubes | Greiner Bio-One GmbH | 455094 | |
| 5 ml sterile polypropylene tubes | BD Biosciences | 352063 | |
| Albumin from Bovine Serum (BSA) | Sigma-Aldrich | A7906 | |
| 16% formaldehyde solution | Electron Microscopy Science | 15710 | |
| BD FACS lysing solution (10x) | BD Biosciences | 349202 | Dilute BD FACS lysing solution 1/10 with deionized water for working concentration (store for up to 1 week at 4 °C) |
| anti-CD3-PE | BD Biosciences | 555340 | |
| anti CD14-APC | BD Biosciences | 555399 | |
| anti-CD16-PECy7 | BD Biosciences | 557744 | |
| anti-Glut1-FITC | R & D Systems | FAB1418F | |
| IgG2b-FITC | R & D Systems | IC0041F | |
| 2-NBDG | Life technologies | N13195 | Suspend 5 mg of 2-NBDG into 1 ml of deionized water to make a 14.60 mM stock solution (keep for up to 6 months at 4 °C). To make the working 2-NBDG concentration, dilute stock 1/100 with 1x DPBS. Cover with foil. (store for up to 1 week at 4 °C) |
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline (1x) | Life technologies | 14190-144 | To make wash solution, add 0.5 g BSA per 100 ml DPBS (store for up to 2 weeks at 4 °C) |
References
- Shi, C., Pamer, E. G. Monocyte recruitment during infection and inflammation. Nat Rev Immunol. 11, 762-774 (2011).
- Woollard, K. J., Geissmann, F. Monocytes in atherosclerosis: subsets and functions. Nat Rev Cardiol. 7, 77-86 (2010).
- Richards, D. M., Hettinger, J., Feuerer, M. Monocytes and macrophages in cancer: development and functions. Cancer Microenviron. 6, 179-191 (2013).
- Anzinger, J. J., Butterfield, T. R., Angelovich, T. A., Crowe, S. M., Palmer, C. S. Monocytes as regulators of inflammation and HIV-related comorbidities during cART. J Immunol Res. 2014, 569819 (2014).
- Palmer, C., Cherry, C. L., Sada-Ovalle, I. Glucose Metabolism in T Cells and Monocytes: New Perspectives in HIV Pathogenesis. EBioMedicine. , (2016).
- Cheng, S. C., et al. mTOR- and HIF-1alpha-mediated aerobic glycolysis as metabolic basis for trained immunity. Science. 345, 1250684 (2014).
- Maratou, E., et al. Glucose transporter expression on the plasma membrane of resting and activated white blood cells. Eur J Clin Invest. 37, 282-290 (2007).
- Freemerman, A. J., et al. Metabolic reprogramming of macrophages: glucose transporter 1 (GLUT1)-mediated glucose metabolism drives a proinflammatory phenotype. J Biol Chem. 289, 7884-7896 (2014).
- Gonnella, R., et al. Kaposi sarcoma associated herpesvirus (KSHV) induces AKT hyperphosphorylation, bortezomib-resistance and GLUT-1 plasma membrane exposure in THP-1 monocytic cell line. J Exp Clin Cancer Res. 32, 79 (2013).
- Palmer, C. S., et al. Glucose transporter 1-expressing proinflammatory monocytes are elevated in combination antiretroviral therapy-treated and untreated HIV+ subjects. J Immunol. 193, 5595-5603 (2014).
- Wong, K. L., et al. Gene expression profiling reveals the defining features of the classical, intermediate, and nonclassical human monocyte subsets. Blood. 118, e16-e31 (2011).
- Ziegler-Heitbrock, L., et al. Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood. Blood. 116, e74-e80 (2010).
- Belge, K. U., et al. The proinflammatory CD14+CD16+DR++ monocytes are a major source of TNF. J Immunol. 168, 3536-3542 (2002).
- Frankenberger, M., Sternsdorf, T., Pechumer, H., Pforte, A., Ziegler-Heitbrock, H. W. Differential cytokine expression in human blood monocyte subpopulations: a polymerase chain reaction analysis. Blood. 87, 373-377 (1996).
- Ziegler-Heitbrock, L. The CD14+ CD16+ blood monocytes: their role in infection and inflammation. J Leukoc Biol. 81, 584-592 (2007).
- Ziegler-Heitbrock, L. Macrophages: Biology and Role in the Pathology of Diseases. , Springer. 3-36 (2014).
- Dimitriadis, G., et al. Evaluation of glucose transport and its regulation by insulin in human monocytes using flow cytometry. Cytometry A. 64, 27-33 (2005).
- Fu, Y., Maianu, L., Melbert, B. R., Garvey, W. T. Facilitative glucose transporter gene expression in human lymphocytes, monocytes, and macrophages: a role for GLUT isoforms 1, 3, and 5 in the immune response and foam cell formation. Blood Cells Mol Dis. 32, 182-190 (2004).
- Stibenz, D., Buhrer, C. Down-regulation of L-selectin surface expression by various leukocyte isolation procedures. Scand J Immunol. 39, 59-63 (1994).
- Ahmed, N., Kansara, M., Berridge, M. V. Acute regulation of glucose transport in a monocyte-macrophage cell line: Glut-3 affinity for glucose is enhanced during the respiratory burst. Biochem J. 327 (Pt 2), 369-375 (1997).
- Cutfield, W. S., Luk, W., Skinner, S. J., Robinson, E. M. Impaired insulin-mediated glucose uptake in monocytes of short children with intrauterine growth retardation). Pediatr Diabetes. 1, 186-192 (2000).
- Yoshioka, K., et al. A novel fluorescent derivative of glucose applicable to the assessment of glucose uptake activity of Escherichia coli. Biochim Biophys Acta. 1289, 5-9 (1996).
- Speizer, L., Haugland, R., Kutchai, H. Asymmetric transport of a fluorescent glucose analogue by human erythrocytes. Biochim Biophys Acta. 815, 75-84 (1985).
- Palmer, C. S., et al. Increased glucose metabolic activity is associated with CD4+ T-cell activation and depletion during chronic HIV infection. AIDS. 28, 297-309 (2014).
- Palmer, C. S., Ostrowski, M., Balderson, B., Christian, N., Crowe, S. M. Glucose metabolism regulates T cell activation, differentiation, and functions. Frontiers in immunology. 6, (2015).
- Palmer, C. S., et al. Regulators of glucose metabolism in CD4 and CD8 T cells. International reviews of immunology. , 1-12 (2015).
- Palmer, C. S., Crowe, S. M. How does monocyte metabolism impact inflammation and aging during chronic HIV infection? AIDS research and human retroviruses. 30, 335-336 (2014).
- McFadden, K., et al. Metabolic stress is a barrier to Epstein-Barr virus-mediated B-cell immortalization. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113, E782-E790 (2016).
- Gamelli, R. L., Liu, H., He, L. K., Hofmann, C. A. Augmentations of glucose uptake and glucose transporter-1 in macrophages following thermal injury and sepsis in mice. Journal of leukocyte biology. 59, 639-647 (1996).
- Yin, Y., et al. Glucose Oxidation Is Critical for CD4+ T Cell Activation in a Mouse Model of Systemic Lupus Erythematosus. Journal of immunology. , 80-90 (2016).
- Yang, Z., Matteson, E. L., Goronzy, J. J., Weyand, C. M. T-cell metabolism in autoimmune disease. Arthritis research & therapy. 17, 29 (2015).
- Yin, Y., et al. Normalization of CD4+ T cell metabolism reverses lupus. Science translational medicine. 7, 274ra218 (2015).
- Barbera Betancourt, A., et al. Inhibition of Phosphoinositide 3-Kinase p110delta Does Not Affect T Cell Driven Development of Type 1 Diabetes Despite Significant Effects on Cytokine Production. PloS one. 11, e0146516 (2016).
- Barron, C. C., Bilan, P. J., Tsakiridis, T., Tsiani, E. Facilitative glucose transporters: Implications for cancer detection, prognosis and treatment. Metabolism: clinical and experimental. 65, 124-139 (2016).
- Hegedus, A., Kavanagh Williamson, M., Huthoff, H. HIV-1 pathogenicity and virion production are dependent on the metabolic phenotype of activated CD4+ T cells. Retrovirology. 11, 98 (2014).
- Taylor, H. E., et al. Phospholipase D1 Couples CD4+ T Cell Activation to c-Myc-Dependent Deoxyribonucleotide Pool Expansion and HIV-1 Replication. PLoS Pathog. 11, e1004864 (2015).
- Loisel-Meyer, S., et al. Glut1-mediated glucose transport regulates HIV infection. Proc Natl Acad Sci U S A. 109, 2549-2554 (2012).
- Palmer, C. S., et al. Emerging Role and Characterization of Immunometabolism: Relevance to HIV Pathogenesis, Serious Non-AIDS Events, and a Cure. J Immunol. 196 (11), 4437-4444 (2016).
