Vi beskriver en hurtig, molekylær-baserede Influenza A og B-assay. Den Influenza-analysen registrerer hvert mål inden for 15 minutter ved at ansætte isoterm forstærkning med influenza-specifikke primere efterfulgt af måldetektering med molekylære beaconprober. Den Influenza A og B-analysen er brugervenlig og krævede minimale hands-on tid til at udføre.
Influenza er en smitsom luftvejssygdom forårsaget af influenzavirus A og B hos mennesker og forårsager en betydelig mængde af sygelighed og dødelighed hvert år. Influenza A og B assay var den første CLIA-frafaldes molekylær hurtige influenza test til rådighed. Den Influenza A og B-test virker ved at ansætte isoterm forstærkning med influenza-specifikke primere efterfulgt af måldetektering med molekylære beaconprober. Her, udførelsen af influenza A og B assay på frosne, arkiverede nasopharyngeal podepind (NPS) prøver opbevaret i viral transportmedium (VTM) blev sammenlignet med en respiratorisk panel assay.
Udførelsen af Influenza A og B-assay blev evalueret ved sammenligning af resultaterne for luftvejene panel referencemetoden. Følsomheden for total influenzavirus A var 67,5% (95% CI (CI), 56,6-78,5), og specificiteten var 86,9% (CI, 71,0-100). For influenzavirus B-test, sensitivitet og specificitet var 90,2% (CI, 68,5-100) Og 98,8% (CI, 68,5-100), hhv.
Dette system har den fordel, at en væsentlig kortere test tid end nogen anden i øjeblikket tilgængelige molekylære assay og den enkle, pipette-free procedure kører på en fuldt integreret, lukkede, små-fodaftryk system. Samlet, influenza A og B-assay evalueret i denne undersøgelse har potentiale til at tjene som en point-of-care hurtige influenza diagnostisk test.
Influenzavirusinfektioner resultere i en betydelig mængde af sygelighed og dødelighed hvert år 1, 2, 3. Ukompliceret influenza er præget af forfatningsmæssige og respiratoriske symptomer som feber, muskelsmerter, hovedpine, og ikke-produktiv hoste 4, 5. Ældre individer, unge børn, immunsvækkede patienter og patienter med underliggende co-morbiditet er på et højere risiko for alvorlige komplikationer som lungebetændelse, myocarditis, sygdom i centralnervesystemet, eller død 6, 7.
Influenza-infektion er unik fra andre respiratoriske virus i at hurtig administration af antiviral behandling inden for 48 timer fra symptomdebut kan reducere sygdommens sværhedsgrad og længde 8. Hurtig identifikation af influenza har også væretvist sig at reducere brugen af unødvendige antibiotika 9, 10. Endvidere skal hospitalsindlagte patienter med influenza-infektioner placeres i isolerede rum med passende infektionskontrol forholdsregler. respiratoriske sygdomme forårsaget af ikke-influenzavirus, kan dog være svært at klinisk skelne fra influenza. Af denne grund, hurtig og nøjagtig diagnostisk test for influenza er meget vigtigt for den kliniske behandling patient.
Flere analyser er tilgængelige til påvisning og identifikation af influenzavirus. Rapid influenza antigen test til påvisning (RIDTs) er meget udbredt i klinisk praksis som point-of-care test, fordi de er enkle at bruge og giver resultater inden for 15 til 30 minutter 11, 12; Men deres følsomheder varierer meget (10-80%), afhængigt af producenten, og befolkningen bliver testet, og den type influenza og subtype 13, 14, 15. Direkte fluorescens assays (DFAs) giver overlegne følsomhed end RIDTs, men behandlingstiden er større (~ 3 timer), og skal være afsluttet af dygtige teknologer 16, 17. Viral kultur har været den gyldne standard for diagnostik influenza og har forbedret følsomhed over begge RIDTs og DFAs 18. Dog kan influenza viral kultur tage alt fra 2-14 d til at fuldføre, faldende dens anvendelighed i medvirken patientbehandlingen 19. Endelig har nukleinsyreamplifikationsmetoder tests (NAAT) erstattet dyrkningsteknikker som den nye guldstandard i diagnostik influenza. NAAT anses for at have den største sensitivitet til detektering influenza i et par timer. Imidlertid NAAT er de dyreste assays og kræver specialiseret udstyr og teknikere til at udføre 5 <sop>, 20, 21, 22, 23, 24, 25.
Influenza A og B assayet beskrevet her er den første CLIA-frafaldes molekylær hurtige influenza test, der er let tilgængelige. Denne analyse fungerer ved at ansætte en nicking endonuklease Amplification Reaktion (NÆR), der bruger isoterm forstærkning med influenza-specifikke primere efterfulgt af måldetektering med molekylære beaconprober. Dette assay skelner influenza A fra B, kræver 2 min at oprette og behandle en prøve, og kræver i alt 15 min at fuldføre.
Her præsenteres protokollen for Influenza A & B-analysen. Derudover giver vi en prøve datasæt sammenligner ydeevnen af influenza A og B assay på arkiveret nasopharyngeal vatpind (NPS) enheder, lagret i viral transportmedium (VTM) til en anden respiratorisk patogen panel assay.
Influenzavirus er betydelige verdensomspændende årsager til sygelighed og dødelighed. Hurtig og nøjagtig diagnose af influenza er en af de vigtigste nøgler til at styre influenza udbrud i løbet af respiratorisk sæson. Andre antigen-baserede tests er hurtige og lette at udføre; men de har lave følsomheder 13. På den anden side har de traditionelle molekylære test forbedret følsomhed, men kræver mere erfarne laboratorie teknologer at udføre og er dyrere. Influenza A og B-assay b…
The authors have nothing to disclose.
We thank the Clinical Microbiology Service staff of the Memorial Sloan-Kettering Cancer Center for help in collecting clinical specimens. This study was supported in part by a research agreement between MSKCC and Alere Scarborough (SK2013-0262).
Alere i Instrument | Alere | NAT-000 (Global), NAT-024 (US) | |
Alere i Influenza A & B 24 Test Kit | Alere | 425-000 (Global), 425-024 (US) | |
Alere i Barcode Scanner | Alere | EQ001001 | |
Alere Universal Printer | Alere | 55115 (Global), alereiprinter (US) | |
200 µL precision pipette | |||
200 µL disposable pipette tips | |||
Viral transport medium | Remel | M4-RT |