Summary
EOB-DTPA의 분리 및 후속 착화 천연의 Ga (III) 및 (68)의 Ga 명세서 제시뿐만 아니라 표지 효율 모든 화합물 및 조사의 철저한 분석 시험 관내 안정성 및 N- 옥탄 올 / 물하는 수순 방사성 표지 복합체의 분배비.
Abstract
우리는 EOB-DTPA (-3,6,9- 트리 아자 -3,6,9- 트리스 (카르복시 메틸) -4- (에 톡시) -undecanedioic 산)의 하나님 (III)에서 복잡한 프로토콜의 분리 방법을 보여 그 소설 비 방사성, 즉, 자연 조지아 (III)뿐만 아니라 방사성 68 조지아 복합체의 제조. 착물 리간드뿐만 아니라의 Ga (III)는 핵 자기 공명 (NMR) 분광법, 질량 분석 및 원소 분석을 특징으로 하였다. 68 조지아 68의 Ge / 68 조지아 발생기로부터 표준 용출 방법으로 얻었다. 실험은 3.8-4.0를 실시했다 pH에서 EOB-DTPA의 68 조지아 - 라벨의 효율성을 평가한다. 설립 분석 기술 무선 TLC (박층 크로마토 그래피) 및 라디오 HPLC (고성능 액체 크로마토 그래피)는 탐침의 방사 화학적 순도를 결정 하였다. 68 조지아의 추적자 '친 유성 n 옥탄 올 / 물 소소의 첫 번째 조사로는 pH 7.4 용액에 존재하는 68 종의 Ga N 계수 추출 방법에 의해 측정 하였다. 실시 하였다 생리적 pH에서 각종 미디어의 추적자 시험 관내 안정성의 측정, 다른 분해 속도를 드러내는.
Introduction
Gadoxetic 산, EOB-DTPA 한 리간드 Gd의 (III) 착물에 대한 일반적인 이름 인해 간 간세포 높은 퍼센티지는 특정 흡수에 간담 자기 공명 영상 (MRI). 2,3-에서 자주 사용되는 조영제 인 간담 배설의이 초점 병변 및 간 종양의 위치 파악을 가능하게한다. 2-5 그러나 MRI 기술의 특정 제한 사항 (예를 들면, 조영제의 독성, 밀실 공포증 또는 금속 임플란트 환자에서 제한 적용) 다른 진단 도구를 요구 .
양전자 방출 단층 촬영 (PET)는 본문에 그 분포는 PET 스캐너로 기록되는 때 방사성 물질 (추적)을 소량 투여하는 것을 특징 분자 이미징 법을한다. 6 PET 높은 허용 동적 방법 않고도 시공간 이미지 해상도뿐만 아니라 결과를 정량화MRI 조영제의 부작용 다룬다. 얻어진 메타 정보의 정보 값이 상기와 같은 가장 일반적으로 PET / CT 스캐너의 전산화 단층 촬영 (CT)과 하이브리드 이미징 달성 추가 촬상 수단으로부터 수신 된 데이터와 해부학 적 조합에 의해 증가 될 수있다.
PET 적합한 트레이서의 화학 구조는 양전자 방출로서 방사성 동위 원소를 포함한다. 양전자는 즉시 주변 조직의 원자 껍질의 전자를 몰살하기 때문에 짧은 수명을 가지고있다. 소멸함으로써 움직임 반대 방향으로 두 511 keV의 감마 광자는 PET 스캐너에 의해 기록되는, 방출된다. 7,8, PET 핵종은 분자에 공유 결합 될 수있는 탐침을 형성하는 2- 데 옥시의 경우처럼 2- [F 18] fluoroglucose (FDG)는 가장 널리 사용되는 PET 추적자. 7 그러나 핵종는 하나 이상의 리간드에 배위 결합을 형성 할 수있다 (예를 들면[68 조지아] -DOTATOC 9,10) 나)는 (용해 된 무기 염으로 예컨대, [F 18] (11), 불화 나트륨을 적용. 그것의 생체 내 분포, 대사 및 배설 동작을 결정으로서 전체적으로 트레이서의 구조가 중요하다.
적합한 애완 동물 핵종 편리 양전자 에너지 및 가용성뿐만 아니라 의도 된 조사에 적합한 반감기 같은 유리한 특성을 결합해야합니다. 68 조지아 핵종은 지난 20 년간 PET 분야에서 필수적인 힘이되었다. 12,13이 때문에 사이클로트론 부근으로부터 독립적 현장 라벨링 할 수있는 발전기 시스템으로의 가용성을 주로한다. 발전기에서 어머니 (68) 창은 딸 핵종 (68) 가인이 적당한 킬레이트로 용출하고 이후에 표시되는 열을 흡수 핵종. 6,14 68 조지아의 핵종은 trival로 존재하기 때문에gadoxetic 산 같은 전반적인 음전하와 복합체를 얻을 것 대신에 68 조지아와 EOB-DTPA를 킬레이트 단지 하나님 (III) 10, 13와 같은 엔트 양이온. 따라서, 그 68 조지아의 추적은 PET 영상에 대한 적합성과 유사한 특성 간 특이성을 결합 할 수 있습니다. gadoxetic 산 다음과 같은 맥락에서 구입하고, 나트륨 염으로 관리하고 있지만 우리는 하나님 [EOB-DTPA]과 같이 참조됩니다 조지아 [EOB-DTPA, 또는 68 조지아 [같은 비 방사성 조지아 (III) 복잡한 편의상 방사성 표지 된 성분의 경우 EOB-DTPA].
PET에 대한 추적자는, 방사성 금속 착물 먼저 생체 내 또는 생체 외 실험에서, 체외에서 광범위하게 조사 할 필요가 그들의 적용 가능성을 알아보고자 하였다. 각각의 의료 문제에 대한 적합성을 확인하려면, 생체 분포 행동과 통관 프로필, 안정성, 장기 특이 세포 또는 tissu 같은 다양한 추적 특성전자 흡수를 조사 할 필요가있다. 그들의 비 침습적 문자, 체외 결정은 종종 생체 실험 이전에 수행된다. 일반적으로 생체 내에서 투여시 DTPA 및 그 유도체가 비교적 빨리 분해의 결과로 운동 불활성 결여로 인해이 단지 68 조지아에 대한 킬레이트, 제한된 적합성의 것으로 인정된다. 14-20 이것은 주로 역할을 apo- 트랜스페린에 의해 발생 플라즈마에서 68 조지아에 대한 경쟁. 그럼에도 불구하고, 우리는 진단 정보함으로써 반드시 장기 추적 안정성을 필요로하지 않는, 분 이내에 포스트 분사 3,4,21-23를 제공 할 수있다 특징으로 간담 영상에서의 가능한 적용에 관한 새로운 추적을 조사 하였다. 이를 위해 우리는 gadoxetic 산에서 EOB-DTPA를 분리하고 처음 두 개의 안정 동위 원소, 69 Ga 및 (71)의 혼합물로서 존재하는 자연 조지아 (III)와 착물을 수행 68 조지아의 다음 킬레이트 비 방사성 표준을 역임 얻을. 우리는 방법을 확립 함과 동시에 EOB-DTPA의 68 Galabeling 효율을 결정하고 새로운 68 조지아 트레이서의 친 유성 및 다른 매체에서의 안정성을 조사하기 위해 자신의 적합성을 평가 사용했다.
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Protocol
EOB-DTPA와 조지아 1. 준비 [EOB-DTPA]
주의 : 사용하기 전에 사용되는 유기 용매, 산 및 알카라인의 모든 관련 물질 안전 보건 자료 (MSDS)를 참조하십시오. 흄 후드에서 모든 단계를 수행하고 개인 보호 장비 (안전 안경, 장갑, 실험실 코트)를 사용합니다.
- gadoxetic 산에서 EOB-DTPA의 분리
- 플라스크에 0.25 M gadoxetic 산 주사 용액 3 ㎖를 넣습니다. 교반 된 용액에 옥살산 500 밀리그램 (5.6 밀리몰)를 추가합니다.
- 1 시간 동안 교반 한 후, 감압을 사용하여 프릿을 통해 현탁액을 필터. 각각 물 3 ㎖로 잔류 물을 세 번 씻으십시오.
- 수성 여액을 결합하고 pH 전극과 솔루션을 장비. pH가 약 -0.1가 될 때까지 여액에 12 M 염산.
- 무색의 잔류 물을 수득하는 용매를 진공하에 제거한다. 불활성 기체에서 보관하십시오.
- 충분히 잔류 워시 (적어도 세에틸 아세테이트 시간) 옥살산의 과잉을 제거한다. 진공 잔류 물을 건조.
- 실온에서 물 2 ㎖에 재용 해 잔류하고 얼음 용기에 용액을 냉각. 빙욕을 제거하지 않고 형성 될 때까지 0.5 M 수산화 나트륨 수용액을 적가하여 무색 고체를 관찰 끈끈한.
- 경사에 의해 물을 제거합니다. 차가운 물 1 mL로 고체 두 번 더 씻는다. 제 생성물 분획을 수득 진공하에 고체를 건조.
- 칼럼 크로마토 그래피 (실리카, 메탄올 / 물 4/1)를 통해 경사 물의 결합 분획 제 생성물 분획을 분리. 24, 진공에서 용매를 제거한다.
- 얻어진 고체는 순수한 흰색이 아닌 경우, 물 1 ㎖에 재용 해하여 생성물을 침전 10 ml의 에탄올 및이어서 10 ㎖의 디 에틸 에테르를 추가한다. 감압하고, 진공에서 건조하여 프릿을 통해 필터.
- 콤바인고체 EOB-DTPA의 분수 및 NMR 분광, 25 질량 분석 (26)와 원소 (27) 분석을 수행 둘.
- 가인의 합성 EOB-DTPA]
주의 : 건조한 불활성 분위기 하에서 스토어 고체 조지아 (III) 클로라이드, 이후 공기, 수분이나 기름 분해와 접촉시 부식성 가스 및 노란색, 갈색 또는 검은 색 불순물의 형성의 결과로 발생한다.- 물 100 ㎖에서의 Ga (III) 클로라이드 1.94 g (11.0 밀리몰)을 용해하여 0.11 M 스톡 용액을 제조 하였다. 물 4 ml의 25 % 암모니아 수용액 1 mL로 희석.
- 물 10 ㎖의 플라스크에 EOB-DTPA 80 밀리그램 (0.15 밀리몰)을 녹인다. 필요한 경우, 완전한 용해를 달성하기 위해, 용매를 가열한다.
- 조지아 (III) 클로라이드 원액 1.4 ㎖ (0.15 밀리몰)를 추가합니다. 교반하여 pH 전극과 플라스크를 착용. 용액의 pH가 약 4.1이 될 때까지 묽은 암모니아수 용액을 적하하여 추가한다. RO에서 교반30 분 톰 온도.
- 진공에서 용매를 제거한다. 중앙 및 병렬 측 경부와 stillhead가 장착 된 플라스크의 잔류 물을 넣습니다. 진공 펌프 출구와 냉각 손가락 측면 목 중심 목에 착용
- 감압 (125 ° C, 0.6 밀리바)에서 잔류 물을 가열한다. 주기적 냉각 핑거 여전히 헤드로부터 (유리 표면의 백색 코팅과 같은 표시) 승화 염화 암모늄을 제거 할뿐만 아니라, 약간 젖은 천으로 플라스크의 상부 부분에서. 새로운 승 화성의 가시적 형성이 없을 때까지 프로세스를 계속한다.
- 각각 뜨거운 메탄올 0.5 ㎖로 잔류 물을 세 번 씻어 염화 암모늄의 마지막 흔적을 제거합니다. 진공에서 무색 잔류 물을 건조. NMR 분광, 25 질량 분석 (26)와 원소 (27) 분석을 수행합니다.
2. 일반 라벨 절차
주의 : 모든 전방사성 물질에 직접 또는 간접 접촉을 포함위한 실험은 숙련 된 기술자가 수행해야합니다. 적절한 차폐 장치를 사용하십시오. 개별적으로 방사성 폐기물을 수집하고 저장하고 유효한 규정에 따라 폐기 할 것.
- 발전기 용출
참고 : 도데 실-3,4,5-trihydroxybenzoate 실리카 산화물 결합 된 어머니 핵종과 40 mCi의 68 창 / 68 조지아 발생하는 사용되었다. 이 절차의 경우이었던 것에 용출 및 정제는 연동 펌프 및 디스펜서 장치를 사용하여 결합 된 자동화 된 프로세스로, 수동으로 수행하거나 할 수있다.- 5.5 M의 1.0 M 및 0.05 M 염산 용액을 준비합니다. mL의 5.5 M 염산 25 μl를 함유하는 5.0 M 염화나트륨의 용액을 제조 하였다. 4.1 g의 나트륨 아세테이트, 1 mL의 염산 (30 %) 및 2.5 ml의 빙초산과 함께, 50 ml의 물을 혼합물을 희석하여 pH가 4.6의 완충 용액을 제조 하였다.
- PREC1 1.0 M 염산 mL 및 이후 5 ml의 물과 함께 천천히 세척하여 PS-H + 카트리지 ondition.
- 4 ml의 0.05 M HCl로 발전기의 실리카 컬럼을 용출. (12)로드 PS-H + 카트리지 상에 68 조지아의 용출액.
- 물 5ml와 카트리지를 세척하고이어서 공기 5 ㎖로 건조. 1 ㎖의 5.0 M로 산성화 식염수로 카트리지로부터 용리 68 조지아. 28
- 68 조지아와 EOB-DTPA의 라벨링
- 물 1 ㎖에 EOB-DTPA 1 밀리그램 (1.9 μmol)을 녹인다. 이 솔루션에서 100 μL (0.19 μmol)를 타고 19 μM (10 μg의 / ㎖) EOB-DTPA의 원액을 준비하기 위해 물 9.9 ml의로 희석.
- 68 조지아를 포함하는 용액 (22 ~ 29 MBq의 같게) 50 μl를 제거하고 유리 병에 넣어. EOB-DTPA의 19 mM의 주식 솔루션의 50 μL (0.5 μg의) 300 ㎕를 O를 추가F 4.0으로 pH를 높이기 위해 버퍼. 간단히 흔들어 5 분 동안 실온에서 용액을 배양한다. 1-5 μL의 분취 량을 제거하고 HPLC 또는 TLC 분석했습니다.
- . 물 / 트리 플루오로 아세트산 (99.9 % / 0.1 %), B - - 트리 플루오 / 아세토 니트릴로 아세트산 (99.9 % / 0.1 %), 그라데이션 A : 역상 (RP) C18 컬럼 (29)를 사용하여 다음 이동상에 무선 HPLC 분석을 수행 06 분 80 % A를 0 % → A (0.5 ㎖ / 분), 610 분 0 % A (0.5 ㎖ / 분).
- 곡선 아래의 영역으로서 무선 HPLC 신호의 피크 강도를 결정한다. 다음과 같이 추적의 방사 화학적 순도 (RCP)와 라벨 수율을 계산한다 :
RCP = A 조지아-EOB-DTPA / (A 조지아 + A 조지아-EOB-DTPA)은 100 % ∙
조지아-EOB-DTPA : 68 조지아 [EOB-DTPA]의 곡선 아래 영역
조지아 : 무료 68 조지아의 곡선 아래 영역
3. 라벨 효율성
- 설명으로 라벨링 절차를 수행섹션 2.에 D (용출액의 신선도에 따라 40-140 μL) 68 조지아의 용출액의 활동을 시작하는 일관된 범위, 예를 들어, 22 ~ 29 MBq의.
- (68 조지아 용출액의 부피에 따라 40-190 μL) 3.8-4.0로 pH를 조정하기 위해 완충액의 요구량을 추가한다. 리간드 모액의 요구량 (19 mM의 용액을 10 내지 70 μL)을 추가한다.
- 1.75 mL의 각 라벨 프로브의 전체 볼륨을 조정하는 물을 필요한 양의 추가. 잘 혼합하고, 샘플을 실온에서 5 분간 방치하자. 라벨 수율을 결정하기 위해 2 절에 설명 된대로 HPLC 분석을 수행합니다.
- 0.1 μg의 단계에서 리간드의 양 μg의 μg의 0.1 내지 0.7와 라벨링 절차를 수행합니다. 각 리간드 농도 3 회 반복 실험을 수행합니다. 평균 수익률과 표준 편차를 계산합니다.
4. 체외 안정성
- 일반 페이지rocedure 및 준비
- 10 mm의 포스페이트 농도와 PBS 원액을 제조 탈 이온수 200 ml의 인산염 완충 염수 정제 (PBS)를 녹인다.
- 섹션 3. 샘플 인출에 기재된 바와 같이, 제 2 항에 기재된 바와 같이, 68 조지아 용출액의 부피에 따라 EOB-DTPA 원액 0.5 μL와 22 ~ 29 MBq 내지 68의 Ga의 표시를 수행 버퍼의 양을 조절 안정성 측정을 수행하는 추적의 6 ~ 12 MBq의를 포함하는 라벨 솔루션입니다.
- 용리액으로서 0.1 M 수성 시트르산 나트륨을 사용하여 80mm 실리카겔 피복 알루미늄 판에 무선 TLC 분석을 수행하고 TLC 방사능 스캐너 판을 분석한다. (30)은 곡선 아래의 영역으로서 TLC 신호의 강도를 결정한다. 다음과 같이 추적의 RCP 계산 :
RCP = A 조지아-EOB-DTPA / (A 조지아 무료 + A 조지아-EOB-DTPA + A 조지아 콜로이드) ∙ 100 %
조지아-EOB-DTPA : 68 조지아 [EOB-DTPA]의 곡선 아래 영역
조지아 무료 : 무료 68 조지아의 곡선 아래 영역
콜로이드 (68) 조지아의 곡선 하 면적 : 조지아 콜로이드 - 때마다 포인트 RCP의 t / RCP 0을 계산합니다. 기점 t = 0 분부터 시간차 대 따라서 표준화 RCP 플롯.
시점 t에서 68 조지아 [EOB-DTPA]의 RCP의 t는 = RCP.
t에서 68 조지아 [EOB-DTPA] = 0 분의 RCP 0 = RCP.
- 인산염 완충 염수 중 안정성 (A)
- 라벨 용액 65 ㎕를 7.4로 pH가 상승하는 PBS 스톡 용액 150 μL 및 수산화 나트륨 용액 (0.1 M)의 60 μL를 추가한다. 철저하게 섞는다.
- ( '출발점') TLC 분석을 수행 1-5 μL의 분취 량을 제거합니다. 즉시 37 ℃에서 항온 용액을 저장하고, 대표에서 TLC 분석을 수행 분취 삭제3 시간에 걸쳐 시점을 극상.
- PBS에서 아포 -transferrin의 과잉으로 안정성 (B)
- 라벨 용액 120 ㎕를 7.4로 pH가 상승하는 PBS 스톡 용액 50 μL 및 수산화 나트륨 용액 (0.1 M) 430 μL를 추가한다. 아포 -transferrin (25 ㎎ / ㎖)의 용액 40 μl를 추가합니다. 철저하게 섞는다.
- ( '출발점') TLC 분석을 수행 1-5 μL의 분취 량을 제거합니다. 즉시 37 ℃에서 항온 용액을 저장하고, 3 시간에 걸쳐 대표적인 시점에서 TLC 분석을 수행 분취 량을 제거한다.
- 인간 혈청의 안정성 (C)
- 인간 혈청 500 ㎕를 7.4로 pH를 높이기 위해 라벨링 용액 25 μL 및 수산화 나트륨 용액 (0.1 M)의 45 μL를 추가한다. 철저하게 섞는다.
- ( '출발점') TLC 분석을 수행 1-5 μL의 분취 량을 제거합니다. 즉시 인큐에서 솔루션을 저장37 ° C에서 울란바토르 분취 량을 제거는 3 시간에 걸쳐 대표적인 시점에서 TLC 분석을 수행한다.
분배 계수 5. 결정 (L) 접속자
- 7.4 pH를 올리는 PBS 스톡 용액 20 μL 및 수산화 나트륨 용액 (0.1 M) 170 ㎕를 추가 라벨 용액 50 μL에 제 2 항에 기재된 표시 절차를 수행한다.
- 해당 솔루션에서 200 μl를 철회 및 플라스틱 V-유리 병에 넣어. n 옥탄 올의 200 μl를 추가합니다. 2 분 동안 유리 병 및 소용돌이를 닫습니다. 그런 다음 5 분 동안 1,600 XG에서 샘플을 원심 분리기.
- n 개의 -octanol 상과 각 성상에서 40 μL의 삼중를 제거하고 별도의 V-유리 병에 넣어. 레이어를 혼합하지 않도록주의하십시오.
- 30 초 동안 잘 감마 카운터로 각 시료의 활성을 측정한다. 각 시료는 즉시 회 측정을 반복하고, 그 평균 활동 Ᾱ의 t를 계산 들어 서브> 분 (CPM)에 따라 계산한다. 이렇게 얻은 Ᾱ의 t을 나열, 각과 함께 W1, Ᾱ의 t, W2 및 Ᾱ의 t, W3 (수성 샘플 활동) 및 Ᾱ의 t, O1, Ᾱ의 t, O2, Ᾱ의 t, O3 (n 옥탄 올 활동) 그 판정 시점 t.
- t를 0으로 마지막 샘플의 측정 시점을 정의한다. 결정의 Δt = TT 0을 계산하여 분에서의 Δt를 나열합니다. 다음 식을 사용 Ᾱ (T)의 감쇠 보정을 수행
Ᾱ 0 = Ᾱ의 t · 2 (의 Δt / 68 분). - 의 평균으로 W Ᾱ 0을 계산 Ᾱ 0, W1, Ᾱ 0, W2 및 Ᾱ 0, W3뿐만 아니라 Ᾱ 0, O의 평균으로 Ᾱ 0, O1, Ᾱ 0, O2 및 Ᾱ 0, O3. 다음 식을 사용하여 계산 (L) 접속자 :
(L) 접속자 = 로그 [(Ᾱ 0, W · 33 μg의)]. - 삼중의 전체 실험을 수행하고 그 표준 편차와 함께 평균 (L) 접속자을 계산합니다.
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Representative Results
리간드 EOB-DTPA와 비 방사성의 Ga (III) 1 H, 13 C} {1 H NMR 스펙트럼, 질량 분석 및 원소 분석을 통해 분석 하였다 복합체. 도 1-6에 표 1에 도시하고 그 결과는 물질의 순도를 확인.
68 창 / 68 조지아 발생기의 용출은 400-600 MBq의 68 조지아의 솔루션을 얻었다. 원하는 트레이서 68 가인 [EOB-DTPA]의 형성에 기재된 라벨 절차 결과, 2.8 분 (도 7)의 체류 시간을 나타내는 전파 HPLC 피크로서 나타났다. 220 나노 미터 (2.7 분,도 8)의 UV-힘 검출기 조지아 [EOB-DTPA] 표준의 유지 시간과의 비교는 성공 표시를 확인한다. 배위 68의 Ga 2.1 분에서 단일 피크로서 검출된다 (도7). EO-BDTPA의 68의 Ga 표지 효율을 HPLC를 통해 리간드 농도의 함수로서 표시 수율 (도 9)를 결정하여 조사 하였다. 수율은 세중 결정하고, 표준 편차를 계산 하였다.
pH를하고, 용액에 존재하는 비 배위 음이온의 농도에 따라 68 가인 다양한 종, 예를 들면 갈 레이트 또는 불용성 하이드 록 사이드로 존재할 수있는 비 - 표지. (31)은 일반화 된 용어 "자유 68 가인 '(32)는 모든 비 - 표지에 사용 일반적으로 "콜로이드 (68) 조지아"라고 수산화물 제외 솔루션 종. 설명 된 분석 조건 하에서, 프리 68 조지아는 TLC 플레이트에서 용매 전방 (R의 F = 1.0)로 이동한다. TLC 판에 활동으로 나타납니다 동안 콜로이드 (68) 조지아는 HPLC를 통해 검출 할 수 없다원점에서 (R f를 = 0). TLC 방사능 스캐너로 분석 TLC 판의 대표적인 크로마토 그램.도 10에 도시되어 추적기에 따라 다른 보존 동작을 나타낸다 여부 라벨링 용액 시료 (pH가 3.8-4.0, R의 F = 0.3) 또는 생체 샘플 산도 (R의 F = 0.5)을 분석 하였다.
희석 PBS에서 갓 생리적 산도의 샘플에 추가 된 68 조지아 [EOB-DTPA] 표시된 추적의 안정성, 희석 함유 PBS (인산 농도 5.5 mM의, A), apo- 트랜스페린 초과 (1.6 ㎎ / ㎖를 조사하려면 각각 0.8 mM의 포스페이트 농도, B) 및 인간 혈청 (C)와. 시간이 지남에 따라 샘플 추적의 방사 화학적 순도 (RCP의 t)는 TLC를 통해 결정되었다. 그대로 트레이서의 비율이 RCP (T)의 비율로서 계산 하였다시작점에서의 각 시점 및 RCP 0 (표 2). 이는 RCP 0 (93~96%)를 상이한 트레이서를 함유하는 라벨 솔루션 필요가 있었다. 그대로 추적자 이렇게 표준화 된 비율은도 11에서 시간의 함수로서 도시되어있다.
희석 된 PBS 용액에서 추적자 (L) 접속자 수성 샘플의 결정을 위해 준비 하였다. 샘플은, n 옥탄 올과 혼합하여 원심 분리하고이어서 분취 모두 상에 활성 농도를 결정 하였다 제거 하였다. 활동 값 (L) 접속자의 후속 계산을 표 3에 나타내었다. (L) 접속자의 평균 값은 3.54 ± 0.08이다.
도 1 1 EOB-DTPA의 H-NMR 스펙트럼을 나타낸다. < / strong>을 스펙트럼은 400.1 MHz에서 D 2 O에 기록되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2. 13 C {1} H EOB-DTPA의-NMR 스펙트럼. 스펙트럼은 100.6 MHz에서 D 2 O에 기록되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
EOB-DTPA 그림 3. MS (전기 이온화 (ESI), 메탄올, 부정적인 모드).54334fig3large.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
조지아 [EOB-DTPA] 그림 4. 1 H-NMR 스펙트럼. 스펙트럼은 400.1 MHz에서 D 2 O에 기록되었다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 5. 13 C {1} H 조지아 [EOB-DTPA]의-NMR 스펙트럼. 스펙트럼은 100.6 MHz에서 D 2 O에 기록되었다. 그녀를 클릭하세요 전자는이 그림의 더 큰 버전을 볼 수 있습니다.
조지아 [EOB-DTPA (ESI, 메탄올, 부정적인 모드) 그림 6. MS, 분자 피크의 동위 원소 패턴의 상세한 묘사와 함께. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
가가 [EOB-DTPA]가 부에 함유 배위 68 조지아는 방사능 검출기에 의해 기록 된대로. 조화롭지 68의 Ga 2.1 분의 체류 시간을 나타낸다 (68)의 시료도 7 대표적인 HPLC 크로마토 그램, 트레이서 2.8 분에서 감지되고있는 채로 .대상 = "_ 빈">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
표준 물질 조지아 [EOB-DTPA] 그림 8. 대표 HPLC 크로마토 그램, 220 nm에서 UV - 마주 채널에서 검출있다. 추위 표준의 체류 시간은 2.7 분이다. 이의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오 그림.
EOB-DTPA의 68 조지아 - 라벨 효율의 그림 9. 묘사. HPLC를 통해 결정되는 라벨 수율은 EOB-DTPA의 농도의 함수 (22 ~ 29 MBq의 시작 활동의 pH 3.8-4로 그려집니다0.0, 5 분간 RT). 표준 편차가 오차 막대로 묘사되어있다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
다른 68 조지아 종을 공개 그림 10. 대표 TLC 크로마토 그램. 희석 PBS에서 68 조지아 [EOB-DTPA (인산 농도 5.5 mM의, 산도 = 7.4)의 샘플을 배양 110 분 분석 하였다. 콜로이드 (68) 조지아의 예시 분포 (R f를 = 0), (68) 조지아 [EOB-DTPA (R f를 = 0.5) 및 (68)는 조지아 TLC 방사능 스캐너에 의해 검출로 70mm TLC 판에 (R f를 = 1.0) 무료 발표했다. 카운트가 붕괴 수정합니다. 더 큰 보려면 여기를 클릭하십시오이 그림의 버전입니다.
다른 매체에서 68 조지아 [EOB-DTPA] 그림 11. 안정성 결정. 감쇠 보정, TLC를 통해 결정된 그대로 추적의 표준화 된 비율은 시간의 함수로 묘사되어있다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오 .
피크 NMR 분광, MS와 EOB-DTPA와 조지아 [EOB-DTPA]에 대해 수행 원소 분석. 상대 MS의 피크 강도가 %에 제시되어, 할당 표 1. 결과는 대괄호로 제공됩니다. CHN 원소 값 calcu 있었다C 23 lated H 33 N 3 O 11 · H 2 O (EOB-DTPA) 및 (NH 4) 0.75 H 1.25 [C (23) H (28)의 GaN (3) O (11)] · 2H 2 O (GA [EOB-DTPA).
다른 매체에서 68 조지아 [EOB-DTPA] 표 2. 안정성 결정. 미디어 A, B 및 C에서 68 조지아 [EOB-DTPA]의 RCP는 주어진 시점에서 TLC를 통해 결정되었다. 샘플의 조성물은 추적 / 무료 68 조지아 /의 %의 비율 콜로이드 (68) 조지아로 제공됩니다. 그대로 추적의 비율은 RCP의 t / RCP 0의 비율로 표준화된다. RCP 0 t = 0 분에서 추적의 각 RCP이다.
. 시료 (L) 접속자 붕괴 표 3. 결정은, 값이 0 α 세 분취 량 (X = 1, 2, 3) 각 단계에서 제거 (: 수성, O, N -octanol W)의 X 수정. 모든 활동은 노출 당 비용 (CPM)에 제시되어있다. 프로토콜의 섹션 5에 기술 된 바와 같이 (L) 접속자가 계산된다. 실험은 두번 반복되었다.
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Discussion
EOB-DTPA 다단계 합성 (33)를 통해 액세스 할 수 있지만 단지 또 gadoxetic 아세트산 함유 사용할 조영제로부터 분리 될 수있다. 이를 위해, 중앙 하나님 (III) 이온은 옥살산의 과잉으로 석출 할 수있다. 하나님 (III), 옥살산 및 옥살산을 제거한 후 리간드을 pH 1.5에서 냉수 침전에 의해 단리 될 수있다. 그러나, 여액 수율 칼럼 크로마토 향상시키기 위해서 대신에 또는 후속 절차로 수행 될 수있다. 두 방법은 70 %의 총 수익률에서 분석적으로 순수한 리간드 (그림 1-3, 표 1)를 산출한다.
우리의 Ga를 분리하기 위해 [EOB-DTPA]가 부산물 염화 암모늄의 승화를 통해 매우 친수성 잔기로부터 제거 될 수 있기 때문에, 수산화 나트륨의 사용에 유리한 비교 암모니아수로 pH를 조절하는 것으로 나타났다. 상기 조건이 과정은 천천히 일어난다LY. 염화 무시할 수없는 양이 5 일 후에도 검출 된 이후, 나머지 염은, 메탄올로 세척 하였다. 조지아 [EOB-DTPA]의 부분적인 손실이 작업 업 절차의 결과는, 제품은 46 %의 전체 수율 분석 순도를 얻었다 (4-6, 표 1도).하지만 EOB-DTPA 및 조지아 양자의 분리를위한 (III) 착체는 역상 크로마토 그래피는 극성이 높은 용매를 사용할 경우 실리카 겔 분해 가능성 특히 이후 정제의 대안으로 이용 될 수있다.
EOB-DTPA의 라벨링 처리는 175 mL의 샘플 (68)의 Ga 2 MBq의 (나노 몰의 양으로 존재로 인해 68 조지아에 경쟁 금속 이온의 존재를 피하기 위해 용매 화학 무 금속 장비 고순도의 사용을 필요 ) 0.14 nm의 핵종의 농도와 동일. 68 조지아에 EOB-DTPA의 라벨은 다섯 분 이내의 pH 3.8-4.0에서 발생실온에서 백인 군대. 반응 조건의 pH, 온도 및 반응 시간을 유지뿐만 아니라 68 조지아 상수 또는 정당한 범위 내에서 활동을 시작하면서 68 조지아 - 라벨 효율에 조사가 표시 수율의 결정을 필요로한다. 각 데이터 포인트에 대한 (즉, 리간드 농도) 실험은 리간드와 68의 Ga 모두의 농도 때문에, 합리적인 신뢰도를 제공하기 위해 매우 낮은 적어도 세 번되어 수행되어야 심지어 약간의 편차 표지 수율 따라서 민감한 반응 조건. 예를 들어, 68의 Ga 용출 연령으로, 볼륨 증가 분취하여 버퍼 증가량 필요한 일정한 시작 활동을 제공하기 위해 회수 할 필요가있다. 또한, 음 따라서, 그 자체가 68 가인위한 경쟁자로서 작용할 수있는 붕괴 생성물 68 아연의 농도 증가에 영향을 미치는 labelin 용출액 결과 노화22 ~ 29 MBq의 68 조지아의 g 효율성. 13,34,35 실제로 양적 라벨은 무료 (68)의 내용 조지아 ≤ 2 %와 약 5, EOB-DTPA의 양 ≥ 0.7 μg의 (그림 9)와, 상기 조건 하에서 달성 샘플 콜로이드 (68) 조지아 존재 %.
HPLC 무료 68 Ga 및 68 조지아 [EOB-DTPA]의 뛰어난베이스 라인 분리를 제공하지만,이 콜로이드 (68) 조지아를 검출하기 위해 적합하지 않습니다. 따라서 우리는 트랜스페린 또는 단백질 바인딩의 정량화가 68 가인이 요구 한 것을 특징으로 안정성을 측정하는 동안 RCP를 결정하기 위해 TLC를 선택했다. 우리는이 목적 (그림 10)에 대한 허용 기준 분리를 발견; 그러나, 크기 배제 크로마토 그래피 또는 여과 방법 15,36의 사용은 HPLC 분석 하였다 콜로이드 분획, 대안으로 고려 될 수있는 제거한다. 68 가인 단지는 강한 RET 전시TLC 플레이트상에서 ention 생리적 pH를 (R의 F = 0.5)에서 시료와 달리 시료 라벨링 용액으로부터 직접 인출되는 경우 (R의 F = 0.3). 우리는 이러한 관찰은 복잡한 다른 양성자 상태에 의해 설명 될 수 있습니다 제안합니다.
68 조지아 추적기의 생체 안정성 결정은 일반적으로뿐만 아니라 혈액의 68 조지아의 주요 경쟁자, 또는에있는 apo- 트랜스페린 (37)를 포함하는 솔루션 PBS 15,17 또는 생리 학적 pH가 37을 흉내 낸 다른 버퍼 시스템에서 수행에 인간 혈청 15,17. 실험에서 PBS에 0.1 M 수산화 나트륨 용액의 첨가는 7.4 샘플의 pH를 조정하기 위해 필요 하였다. 포스페이트 농도가 저하 속도에 영향을 미치는 것을 우리는 포스페이트 농도 (0.8 mM 내지 5.5 mM의이 (A))을 수득 비 reprodu 다양한 용액 안정성 실험 이후 주장 없었다cible 결과. 그러나 용액 B가 함유가 APO -transferrin 0.8 mM의 인산 (통상 플라즈마 콘텐츠 (38)의 범위 내에서 1.6 ㎎ / ㎖가) (인간의 혈액은 보통 0.8 ~ 1.5의 인산염 수준 밀리미터 (39, 40)을 나타내는 것을 발견 ), 인간 혈청 (C)에서 해당 관측에 필적하는 속도로 분해됩니다. 무료 68 조지아의 함유량이 용액 A에서 11 %로 증가 하였다 동안 솔루션 AC는 185 분 콜로이드 (68)의 콘텐츠 이후의 Ga, 약 24 % 용액 C의 용액 B 17 % 및 27 % (표 2 증가했다 ). 콜로이드 반대 또는 B 단백질 바인딩 68 Ga 및 C 인해 트랜스페린 포화도 또는 비교적 느린 트랜스페린 결합 요금에있을 68 가인이 추적 분해에 의해 형성된다는 사실은 무료 68 조지아로 주로 존재한다. (68) 조지아 [EOB-DTPA]의 (그림 11)과 유사한 DTPA 파생 킬레이트을 갖춘 추적자 비교입니다. 15, 16, 18 일반적으로 간의 초기 동맥과 정맥 관류 단계에 대한 자세한 내용은 투여 후 처음 삼분 4,21 내에 MRI 스캔을 수행하여 얻은 하나님 [EOB-DTPA, 간세포 존재하에 20 분간 3,4,23까지 몇 시간이 주사 후 21, 22에 지연된 위상 검출된다. 인간 혈청 20 분 후 68 조지아 [EOB-DTPA]의 93 %는 그대로 유지됩니다. 예상대로, 즉 시간에 따라 신호 대 잡음비로 인해 플라즈마 및 조직 발현 트랜스페린 수용체에 존재할뿐만 아니라, 68 조지아 몰식자산 무료 68의 Ga 트랜스페린의 양이 증가 악화 것이다. (41, 42)
계수 로그 추적자의 조직 분포 n 옥탄 올 / 물 분배를 예측P 또는 분배 계수는 두 단계로 방사능 농도의 비로서 결정될 수 (L) 접속자. 정의에 의해, (L) 접속자 파라미터 인해 다른 양성자 트레이서의 상태뿐만 아니라, 성상에서의 분해의 가능성을 실험에 적합하게하는 매체로서, 복수 종 존재를 구별하지 않는다. 추출 (L) 접속자를 결정하는 수성 매질은 일반적으로 0.8 mM 내지 생리 학적 pH를 인산 농도를 나타내는, 혈액 조건. 우리는 PBS로 희석 사용될 상기 이유로 17,43-45을 모방하는 PBS로 버퍼링된다. N 개의 -octanol 원심 추출에 이어, 동일한 위상에서 여러 분취의 제거 피펫으로 인한 부정확성을 가능하게 감소된다. 때문에 n 옥탄 올의 매우 낮은 방사능 농도 하나는 수상과 교차 오염되지 않도록주의해야하며, 별도의 유리 병에 양적 전송을 보장하기 위해. DISTRIB이 절차에 의해 결정의 ution 계수 재현이었고, 그들은 지용성의 대략적인 추정을 허용하면서 하나님의적인 log P [EOB-DTPA]에 직접적인 비교는 불가능하다. 때문에 하나님 [EOB-DTPA]를 친 유성에서 오히려 살아있는 주제 또는 세포에서의 간담 흡수 추가 실험은 68 조지아 [EOB의 생체 내에서보다 광범위한 생체 분포에 대한 정보뿐만 아니라 안정성을 제공해야 할 것하지 주로 결과의 특이성에 -DTPA]. 전부, 영상 관류에 대한 에이전트와 초기 간담 위상 응용 프로그램이 상상할 수있는 것입니다.
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Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
primovist | Bayer | - | 0.25 M |
gallium(III) chloride | Sigma-Aldrich Co. | 450898 | |
water (deionized) | - | - | tap water deionizing equipment by Auma-Tec GmbH |
hydrochloric acid 12 M | VWR | 20252.29 | |
sodium hydroxide | Polskie Odczynniki Chemiczne S.A. | 810925429 | |
oxalic acid | Sigma-Aldrich Co. | 75688 | |
ethyl acetate | Brenntag GmbH | 10010447 | |
silica gel | Merck KGaA | 1.10832.9025 | Geduran Si 60 0.063-0.2 mm |
TLC silica gel 60 F254 | Merck KGaA | 1.16834.0001 | |
methanol | VWR | 20903.55 | |
ethanol | Brenntag GmbH | 10018366 | |
eiethylether | VWR | 23807.468 | stored over KOH plates |
ammonia solution (25%) | VWR | 1133.1 | |
pH electrode | VWR | 662-1657 | |
stirring and heating unit | Heidolph | 505-20000-00 | |
pump | Ilmvac GmbH | 322002 | |
frit | - | custom design | |
NMR spectrometer | Bruker Coorporation | - | Ultra Shield 400 |
mass spectrometer | Thermo Fisher Scientific Inc. | - | |
elemental analyser | Hekatech GmbH Analysentechnik | - | EuroVector EA 3000 CHNS |
deuterated water D2O | euriso-top | D214 | 99.90% D |
Material/Equipment required for labeling procedures | |||
68Ge/68Ga generator | ITG Isotope Technologies Garching GmbH | A150 | |
pump and dispenser system | Scintomics GmbH | - | Variosystem |
hydrochloric acid 30% (suprapur) | Merck KGaA | 1.00318.1000 | |
water (ultrapur) | Merck KGaA | 1.01262.1000 | |
sodium chloride (suprapur) | Merck KGaA | 1.06406.0500 | |
sodium acetate (suprapur) | Merck KGaA | 1.06264.0050 | |
glacial acetic acid (suprapur) | Merck KGaA | 1.00066.0250 | |
sodium citrate dihydrate | VEB Laborchemie Apolda | 10782 | >98.5% |
PS-H+ Cartridge (S) | Macherey-Nagel | 731867 | Chromafix |
apo-Transferrin | Sigma-Aldrich Co. | T2036 | |
PBS buffer (tablets) | Sigma-Aldrich Co. | 79382 | |
human serum | Sigma-Aldrich Co. | H4522 | from human male AB plasma |
flasks, columns, etc. | custom design | ||
pH electrode | Knick Elektronische Messgeräte GmbH & Co. KG | 765-Set | |
binary pump (HPLC) | Hewlett-Packard | G1312A (HP 1100) | |
UV Vis detector (HPLC) | Hewlett-Packard | G1315A (HP 1100) | |
radioactive detector (HPLC) | EGRC Berthold | ||
HPLC C-18-PFP column | Advanced Chromatography Technologies Ltd. | ACE-1110-1503/A100528 | |
HPLC glass vials | GTG Glastechnik Graefenroda GmbH | 8004-HP-H/i3µ | |
pipette | Eppendorf | - | |
plastic vials | Sarstedt AG & Co. | 6542.007 | |
plastic vials | Greiner Bio-One International GmbH | 717201 | |
activimeter | MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH | - | Isomed 2010 |
tweezers | custom design | ||
incubator | Heraeus Instruments GmbH | 51008815 | |
vortex mixer | Fisons | - | Whirlimixer |
centrifuge | Heraeus Instruments GmbH | 75003360 | |
gamma well counter | MED Nuklear-Medizintechnik Dresden GmbH | - | Isomed 2100 |
water for chromatography | Merck KGaA | 1.15333.2500 | |
acetonitrile for chromatography | Merck KGaA | 1.00030.2500 | |
trifluoroacetic acid | Sigma-Aldrich | 91707 | |
TLC radioactivity scanner | raytest Isotopenmessgeräte GmbH | B00003875 | equipped with beta plastic detector |
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